周围神经65KD蛋白对培养鼠胚脊髓运动神经元的影响

目的：为了解周围神经损伤后期远侧端特异性表达的６５ＫＤ蛋白对鼠胚脊髓神经元的影响。方法：选用ＳＤ大鼠坐骨神经横断后２周的动物模型，自然凝胶系统电泳分析损务后神经远侧端中的蛋白组分，将６５ＫＤ蛋白区带胶条与１４天鼠胚脊髓运动神经元联合培养，结果：损伤后２周的坐骨神经元侧端中特异性地出现表达增强的６５ＫＤ蛋白；与含６５ＫＤ蛋白区带胶条联合培养的脊髓运动神经元细胞存活数量多，突起生长旺盛，结论：坐骨神经     

周围神经43kD蛋白单克隆抗体的制备

目的：制备周围神经43kD蛋白单克隆抗体。方法：通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶系统,从周围神经组织中分离回收43kD蛋白作为抗原,免疫BALB／C小鼠,通过杂交瘤技术,点膜印迹法检测,获得相应的分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并以Western blot方法检测抗体的特异性。结果：阳性克隆可持续稳定分泌抗43kD蛋白抗体,Western Blot显示在43kD处出现特异的阳性反应条带。结论：建立了分泌抗43kD蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,获得了43kD蛋白单克隆抗体。     

抗人精子膜80KD蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的：探索避孕疫苗的制作并为不育病人提供抗精子抗体的诊断方法。方法：用0．5％NP－40提取经SDS－PAGE电泳分离纯化获得的人精子膜80KD蛋白免疫BALB／C小鼠,取其脾细胞与SP2／0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得12株阳性单克隆细胞株,并对其中4株进行了初步鉴定。结果：免疫双散法结果显示,3株为IgG型,1株为IgM型;免疫荧光定位试验显示4株单克隆抗体主要与人精子顶体后、颈和尾中段结合;Western blot试验结果显示,4株单克隆抗体均识别人精子80KD蛋白。结论：4株单克隆抗体对人精子膜80KD蛋白是特异的。     

大鼠海马中56KD、83KD蛋白诱导神经干细胞向神经元分化的协同作用研究

目的:探讨切割海马伞大鼠海马中56KD、83KD蛋白在诱导神经干细胞向神经元分化方面是否具有协同作用.方法:切割海马伞后的海马进行非变件聚丙烯酰胺凝胶电泳,墩低分子量区的56KD、65KD和83KD 3条差异蛋白条带电洗脱后以不同的组合加入鼠胚神经干细胞的分化培养液中诱导神经干细胞分化,12天后行MAP-2免疫荧光染色,记数其中MAP-2阳性神经元数,胞体面积和细胞周长.用STATA7.0软件进行方差分析和两两比较.结果:56KD 65KD 83KD组和56KD 83KD组MAP-2神经元的数量是47.1±9.64,43.7±8.41,胞体大,突起丰富:65KD 83KD组、56KD 65KD组、56KD组和83KD组MAP-2神经元的胞体较小,突起较矩:65KD组和对照组的神经元胞体最小,突起最短.MAP-2神经元的数量、面积和周长统计分析结果显示:56KD 65KD 83KD组和56KD 83KD组与其他6组均有显著性差异.56KD 65KD 83KD组和56KD 83KD组之间没有显著性差异:65KD 83KD组、56KD 65KD组、56KD组和83KD组四组之间没有显著性差异,但是它们与65KD组和对照组均有显著性差异,65KD组和对照组之间没有显著性差异.结论:56KD、83KD蛋白在诱导神经干细胞向神经元分化方面具有协同作用.     

周围神经18KD诱向因子的生化分析

神经诱向生长是神经科学前沿中一个重要研究方向；提取与纯化诱向生长因子更是神经生物化学研究中的一个重要技术课题，本研究采用自然系统凝胶电泳，分离周围神经损伤过程中产生的具有诱向生长活性作用的１８ＫＤ蛋白，再以等电点聚焦凝胶电泳与神经组织联合培养，揭示了ＰＩＯ ５．２的１８ＫＤ蛋白具有诱导神经生长的作用，高效液相色谱仪分析显示。通过以上方法可获得较纯的１８ＫＤ诱向因子。本研究为神经诱向因子的分离，纯化     

运动神经元190KD蛋白的免疫细胞化学研究

采用ＳＤＳ凝胶电泳方法从人脊神经前根中分离出运动神经元特有的蛋白组份１９０ＫＤ。将该蛋白作为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，经杂交瘤技术，获得抗１９０ＫＤ蛋白的单克隆抗体。     

识别人脊神经感觉特异蛋白单克隆抗体的抗制备及临床应用

观察快速免疫染色法鉴别人周围神经束性质的临床应用可行性。从新鲜人尸脊神经后根中分离，提取了脊神经节感觉神经元特异蛋白，将该蛋白作为抗原以杂交瘤技术制备了识别感觉神经元特异蛋白的单克隆抗体。     

结核分枝杆菌16KD蛋白的基因克隆及表达与纯化

目的:通过构建结核分枝杆菌(MTB)16KD蛋白的表达载体,在大肠杆菌(E.coli)中表达MTB16KD蛋白,并获得大量纯化的16KD蛋白。方法:采用聚合酶链反应(PCR)从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出16KD蛋白的编码基因,用限制性内切酶消化后插入载体pGEX-4T-2中,测序结果证实后,将重组质粒转化E.coli DH5α,经IPTG诱导表达GST-16融合蛋白。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析融合蛋白的相对分子质量及表达形式。Western blot鉴定16KD蛋白活性。经GST亲和层析柱过柱,得到纯化的16KD蛋白。结果:构建了具有正确基因序列的表达载体,在E.coli DH5α中诱导表达的融合蛋白GST-16占菌体总蛋白的42%。Wstern Blot结果证明:融合蛋白GST-16能与抗结核分枝杆菌的抗体发生特异性结合。紫外分光光度仪测量纯化16KD蛋白的浓度为688mg/L。结论:结核分枝杆菌16KD蛋白在E.coli DH5α能高效表达,该蛋白具有特异的免疫学活性。     

重组汉坦病毒核壳蛋白的制备及其单克隆抗体的研制

将ＰＣＲ扩增的ＨＴＶ７６－１１８ＲＮＡ小片段的ｃＤＮＡ克隆插入到ｐＤＳ ５６／ＲＢＳⅡ－（Ｏ）－６Ｈｉｓ中,通过ＩＰＴＧ诱导表达以及镍螯合层析纯化重组ＮＰ,经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,免疫转印和ＥＬＩＳＡ方法分析其蛋白特征,证实该重组ＮＰ与毒粒ＮＰ相同,均为４９．６ｋｕ,能与肾综合征血热（ＨＦＲＳ）患者血清产生特异性反应,以此重组ＮＰ作为抗原制备抗ＮＰ单克隆抗体,获得两株持续稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细     

糖尿病周围神经病变大鼠金属硫蛋白表达意义

目的:探讨糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经中金属硫蛋白(metallothionein,MT)的表达意义。方法:测定糖尿病大鼠坐骨神经MT含量及MT亚型(MT-1和MT-3)mRNA的表达。结果:随着糖尿病病程进展,大鼠表现血糖、坐骨神经MT含量逐渐增高。RT-PCR结果显示,4周、8周和16周糖尿病大鼠坐骨神经MT-1及MT-3mRNA表达均出现明显上调(P<0.05)。结论:糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经MT表达增高,可能与抗氧化应激、神经修复有关。     

识别人脊神经感觉特异蛋白单克隆抗体的制备及临床应用

观察快速免疫染色法鉴别人周围神经束性质的临床应用可行性。从新鲜人尸脊神经后根中分离、提取了脊神经节感觉神经元特异蛋白，将该蛋白作为抗原以杂交瘤技术制备了识别感觉神经元特异蛋白的单克隆抗体。用食用亮蓝标记该单抗后，直接为临床６例周围神经损伤患者术中染色。经３０分钟能清晰分辨出感觉及运动束，取得了预期效果。采用此技术染色步骤简单，能在肉眼和手术显微镜下观察，对周围神经断伤能够快速、准确、特异性的鉴别出功能神经束，提高了手术效果     

应用卵巢癌单抗放免显像的临床意义

应用我室制备卵巢上皮癌单抗 COC 183 B_2经~(131)Ⅱ标记后进行45例 RⅡ,30例为术前诊为卵巢癌或可疑者,15例为卵巢上皮癌手术化疗后追踪患者,RII结果与手术病理对照,敏感性达87.5％,特异性达93.1％;如按单抗与癌组织免疫组化染色衡量,则分别为100％及96.7％。追踪治疗后患者,先作第一次手术癌组织与COC183 B_2、PAP染色,RII均与此结果符合。合并有腹水患者先取腹水,用多种单抗进行免疫细胞化学染色,选其阳性反应强的单抗作RII,可提高显像率及准确性。本文提示选择与腹水中癌细胞免疫细胞化学染色,及与癌组织免疫组化染色的单抗来作RII是成功的关键。为临床分期、鉴别诊断及追踪检测等,提供有力的手段。     

抗HLA-B27单克隆抗体的制备鉴定及初步应用

目的：制备HLA－B27单克隆抗体。方法：用HLA－B27抗原免疫小鼠，取脾细胞与骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞，用ELISA法筛选分泌该单抗的细胞株。结果：建立了分泌该单抗的细胞系3B3和4F2，抗体均为IgG2b,3B3细胞分泌的单抗只与B27反应，而4F2细胞分泌的单抗与B7有交叉反应。结论：建立了高特异性分泌抗B27单抗的细胞株，具有潜在的应用价值。     

大鼠周围神经组织cDNA文库的构建

为了克隆周围神经组织中新近发现的营养因子、生长因子和诱向因子的基因，本研究以ＳＤ大鼠坐骨神经为材料，提取和纯化ｍＲＮＡ，逆转录合成ｃＤＮＡ双链，与Ａｄａｐｔｅｒ连接后，再与脱磷酸化处理的λｇｔ１１臂相连，体外包装，构建了大鼠周围神经组织的ｃＤＮＡ文库。经测定，该文库的容量＞１．５×１０６，重组百分比为９６．７％，ｃＤＮＡ片段为０．５～８Ｋｂ。经扩增后的滴度达１．４×１０１３ｐｆｕ／ｍｌ。该文库的建立为筛选和分离目的基因，为从基因水平深入研究神经系统发育、再生、衰老与退行性变的机制奠定了基础     

人白细胞介素4单克隆抗体的研制及其鉴定

应用脾内免疫法免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合,获得两株分泌IgG型抗人白细胞介素4单克隆抗体的杂交瘤细胞。用间接ELISA法可测出的抗原量100pg/ml;抗体的效价细胞培养基上清达1:16,腹水达1:1×10~(-5)。对E.coli表达的重组IL_4、商品化的IL_4及天然IL_4呈阳性反应,与E.coli蛋白及重组IL_1、IL_2、IL_3、IFNa及TNFa无交叉反应。     

PREPARATION AND CHARACTERIZATION OF MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST HUMAN TELOME RASE REVERSE TRANSCRIPTASE

INTRODUCTIONTelomerasemaycontributetocellreplicationbymaintainingthelengthofcellulartelomeres.Normaltelomeraseactivityisrequiredtomaintainprolifera-tionofgermlineandstemcells,lackingofwhichisimportanttothesenescenceandagingofmostsomat-iccells.Reactivationoftelomeraseisessentialforcelltransformation.Telomeraseactivityhasbeende-tectedinmosthumancancers,whileinhibitionoftelomeraseactivityincancercellsleadstocancersuppression(1,2).Consequentlytelomerasemaybeanewdiagnosticmarkeroftumorsandtarg…     

抗人精浆蛋白McAb的制备及其特性研究

本文报道用杂交瘤技术建立了２株分泌抗人精浆蛋白单克隆抗体的细胞株Ｄ１和Ｃ１２。Ｄ１株分泌的抗体为ＩｇＭ，Ｃ１２株为ＩｇＧ３。这两株均能与正常人精浆和无精子症患者的精浆产生特异性免疫反应。Ｄ１株单抗具有补体依赖性制动人精子的作用，间接免疫荧光试验表明，它能结合到人精子颈部和顶体后区。这充分说明２株单抗是特异性抗人精浆的，Ｄ１是精子制动抗体，其相应的精子抗原属于精子外套抗原成分之一。     

抗人TPO单克隆抗体的制备

目的：制备抗人血小板生成素（hTPO）单克隆抗体，用于建立ELISA方法和检测TPO的表达。方法：用基因重组的hTPO免疫Balb／c小鼠，常规法做细胞融合，用ELISA法筛选出阳性杂交瘤细胞株。结果：获得一杂交瘤细胞株（46-6），其免疫球蛋白亚类为IgG1经ELISA和免疫印迹技术证明，此单抗能特异识别TPO。结论：46－6单克隆抗体（McAb）特异性强。用其建立的夹心ELISA检测TPO的方法线性好，灵敏度可达50ng／L。