尿道下裂大鼠与正常大鼠睾丸蛋白质二维电泳图谱分析

目的:探讨二维电泳技术在尿道下裂大鼠与正常大鼠睾丸差异表达蛋白研究中的应用.方法:孕SD大鼠10只,随机分为2组,妊娠12～19天,实验组和对照组分别予邻苯二甲酸二丁酯(DBP)500mg/(kg·d)、大豆油5 ml/d灌胃,第2l天取出仔鼠睾丸,提取总蛋白,进行二维凝胶电泳分离和图像分析.结果:按照5倍的表达量计算,发现有差异表达的蛋白质点9个,5个点在尿道下裂大鼠睾丸中高表达,而在正常大鼠睾丸为低表达;相反,在正常大鼠睾丸中高表达的4个点,在尿道下裂者为低表达.结论:初步建立了正常和尿道下裂大鼠睾丸的二维电泳图谱,并发现两者之间存在一些差异表达蛋白,为进一步进行尿道下裂大鼠睾丸差异表达蛋白的分离及鉴定奠定了良好基础.     

GSFs细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立

目的：建立GSF细胞蛋白质组双向电泳图谱。方法：用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养GSF细胞，胰酶消化后收集细胞，加入细胞裂解液使细胞充分裂解，离心后取上清液进行第一向等电聚焦电泳和平衡，再进行第二向SDS-PAGE（十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）和银染显色及图像扫描与分析。结果：通过对GSF细胞蛋白提取液进行双向电泳，在17cm pH5～8IPG胶条上可得到重复性及分辨率均较好的蛋白位点。结论：GSF细胞蛋白质组双向电泳图谱的建立。为其蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。     

人骨肉瘤蛋白质组双向凝胶电泳图像分析方法的建立与应用

目的： 建立人骨肉瘤蛋白质组双向电泳图像分析方法。方法： 组织标本分为骨肉瘤组和肿瘤旁组。对第一向双向电泳的关键因素与环节进行一系列优化。分离骨肉瘤总蛋白，银染，用ImageMasLer 2D Elite 3.01分析软件分析图谱，使用基质辅助电离解析飞行时间质谱仪主要高丰度部分差异蛋白质进行鉴定。结果：获得分辨率和重复性好的双向电泳图谱。变异系数平均值（%）和变异系数范围（%）：骨肉瘤组为23.00±10.11和3.80～6.89，肿瘤旁组为20.33±9.90和2.70～6.89。同一蛋白质斑点在3次实验中等电点、分子量的相对标准差分别为（8.93±1.17）%、（10.16±2.02）%和（10.87±3.86）%。初步鉴定11个蛋白，其中9个蛋白质只在骨肉瘤中特异高峰度上调表达，分别为转甲状腺素蛋白、磷酸甘油醛异构酶、慢收缩骨骼肌钙蛋白T、心肌钙蛋白、肌动蛋白、肌球蛋白、膜联蛋白-5、 热休克蛋白-1及Fanconi anemia groupD2蛋白；鉴定2个蛋白，锰超氧化物歧化酶、碳酸酐酶蛋白质下调表达。结论：成功构建了用于研究骨肉瘤蛋白质组双向凝胶图谱分析方法，认为初步鉴定的部分差异蛋白可能为骨肉瘤的关联蛋白，其在骨肉瘤发生和进展的病理过程中具有重要作用。     

人肾组织磷酸化蛋白质组二维凝胶电泳的建立与优化

目的:利用二维凝胶电泳法分离人肾组织磷酸化蛋白质组.方法:利用金属磷酸盐亲和层析树脂富集人肾组织磷酸化蛋白.样品浓缩除盐后,进行一维等电聚焦分离和二维SDS电泳分离提取人肾组织磷酸化蛋白.结果:成功提取了人肾组织磷酸化蛋白,并得到了磷酸化蛋白的双向凝胶电泳图谱.结论:磷酸化蛋白富集技术与二维凝胶电泳技术的结合是研究磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步研究人肾组织磷酸化蛋白奠定基础.     

关节滑液双向凝胶电泳预处理方案的评估

摘要：目的评估膝关节骨性关节炎（kneeosteoarthritis,KOA）患者关节滑液双向凝胶电泳几种预处理方案的优劣。方法收集2012年1月--2012年3月在解放军总医院行关节镜诊治KOA患者关节滑液样本8例,混合均匀并等分为36份。9份不进行任何处理,9份用透明质酸酶处理,9份采用亲和层析法除高丰度蛋白,9份用透明质酸酶联合亲和层析法进行处理,对36份滑液进行双向凝胶电泳,比较未处理组与处理组以及处理组之间电泳图谱的差异并确定最佳预处理方案,采用最佳方案对12例不同严重程度KOA患者关节滑液进行预处理,分析寻找差异蛋白点并用质谱定性。结果采用透明质酸酶联合亲和层析法对样本进行预处理后获得的电泳图谱质量最佳。用此法进行预处理的12例不同严重程度KOA患者滑液,鉴定出了载脂蛋白、纤维蛋白原D片段等与关节疾病相关的蛋白因子。结论透明质酸酶联合亲和层析预处理方案能获得高质量的电泳图谱,可作为蛋白质组学研究中优先选取的样本预处理方案。     

白念珠菌总蛋白质组二维电泳条件的建立和优化

目的:建立并优化白念珠菌总蛋白质组分析的二维电泳条件.方法:以白念珠菌国际标准菌株SC5314为材料,制备其总蛋白质组样品.以真菌细胞破碎方法、裂解液成分、上样量、固相pH梯度胶条的选择为侧重点,通过不同条件下电泳图谱的比较建立最佳二维电泳技术条件.结果:成功建立白念珠菌总蛋白质制备方法,优化了白念珠菌蛋白质组分析的二维凝胶电泳技术,获得重复性和分辨率都较理想的白念珠菌总蛋白质二维电泳图谱.结论:优化后的二维电泳条件符合白念珠菌的特点,为白念珠菌蛋白质组分析奠定基础.     

肺癌组织蛋白质组双向凝胶电泳方法的建立和优化

目的建立和优化肺癌组织蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术,获取高分辨率、重复性好的蛋白质2-DE图谱。方法提取肺癌组织蛋白,以固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦电泳,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)为第二向,在上述过程中分别对蛋白提取、等电聚焦电泳和凝胶染色进行控制和优化,利用ImageMaster 2Dplatinum 6.0分析软件获得二维凝胶图像。结果实验重复3次,共获15幅二维凝胶图像,平均蛋白质点数为1 137±57;随机选取1例标本的2幅图像,利用软件对2幅图像中蛋白点进行匹配,匹配率为90.4%。结论优化肺癌组织蛋白质组2-DE技术可获得高分辨率、重复性好的蛋白质2-DE图谱,为开展肺癌组织蛋白质组学研究打下基础。     

短穗鱼尾葵花粉总蛋白的双向电泳及分析

目的对短穗鱼尾葵花粉过敏原蛋白质组分进行双向电泳及其结果分析,构建短穗鱼尾葵花粉蛋白双向电泳图谱,明确短穗鱼尾葵花粉的过敏原蛋白组分的分布和构建蛋白质组学数据库。方法提取短穗鱼尾葵花粉的总蛋白,取上清液进行Bradford法定量总蛋白浓度,采用13 cm IPG胶条(p H 3~10)和12%的SDS-PAGE凝胶作为二项分离胶进行双向电泳(2D)分离,银染法分析其总蛋白组成,利用Image Master2D软件对2D胶进行检测和图像分析。结果双向电泳图谱共检测到516个短穗鱼尾葵花粉蛋白点,其蛋白相对分子质量在12~174 k D,主要在10~50 k D;等电点在p H 3~10,主要分布在p H 5~8。含量最多的蛋白质其相对分子质量和等电点分别为13 k D和p H 6.258 37。含量最低的蛋白质其相对分子质量和等电点分别为29 k D和p H 3.615 79。结论成功构建较为完整的短穗鱼尾葵花粉蛋白双向电泳图谱,为建立短穗鱼尾葵花粉蛋白质组学数据库及其过敏的诊断和治疗提供了依据。     

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立

目的建立血清蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术.方法对血清蛋白质2-DE的各种条件进行调整、优化.结果建立了稳定的2-DE技术.结论已建立的血清蛋白质2-DE技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.     

人类精子蛋白质组分析的双向蛋白电泳技术研究

目的 :利用人类精子蛋白质组分析的双向蛋白电泳技术 (2 DE)建立正常精子的蛋白质图谱。方法 :比较不同蛋白质提取方法和上样量、不同的第一向等点聚焦方法所得图谱的差别 ,并初步建立人类正常精子的蛋白质图谱。结果 :用蛋白质提取方法一制得的样本电泳后有 6 70～ 70 3个蛋白质斑点 ;方法二所得样本电泳后仅有 194～ 2 10个蛋白质斑点。蛋白质提取方法一所制样本进行载体两性电解质pH梯度 SDS电泳技术 (ISO DALT)得到约 2 80～ 30 0个蛋白质斑点 ,用固相pH梯度 SDS电泳技术 (IPG DALT)得到多达 70 0个蛋白质斑点。结论 :采用蛋白质提取方法一制备精子蛋白质进行IPG DALT电泳的方法适用于建立精子全细胞蛋白质谱。     

运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和图像软件分析TPA处理NIH3T3细胞前后的蛋白质表达谱差异

目的建立及优化聚丙烯酰胺双向凝胶电泳技术,并应用图像软件分析伏波醇酯(TPA)刺激前后小鼠成纤维细胞NIH3T3系的蛋白质差异表达,为进一步鉴定与TPA生物学作用有关的蛋白质奠定基础。方法分别提取TPA处理前后的NIH3T3细胞总蛋白质,经双向电泳,硝酸银染色后用软件分析显示两者蛋白质的差异表达。结果软件分析显示TPA刺激前后的细胞蛋白质有明显的差异表达。结论高质量的双向电泳设备、熟练的电泳操作和图像处理技能是寻找稳定可信的功能蛋白质的必要条件。     

腹水前期处理满足双向凝胶电泳技术的探索

目的用双向凝胶电泳方法分析不同腹水中的蛋白质谱。方法用防止腹水蛋白质降解、去细胞成分、浓缩、去脂、脱盐及去干扰大的白蛋白等腹水的前期处理以满足双向凝胶电泳的条件。结果经2次离心可基本去除腹水细胞成分;用分子量5000的膜包超滤浓缩腹水,可消减腹水蛋白质的浓度差异;去白蛋白前,0.3mg上样量双向电泳图中可检出(421±20)个蛋白质点,去白蛋白后可检出(483±24)个蛋白质点。经上述腹水前期处理后得到较为清晰的双向凝胶电泳图谱。结论腹水前期处理能满足双向凝胶电泳技术的要求,已建立的腹水蛋白双向凝胶电泳技术将为进一步的腹水蛋白质成分研究奠定基础。     

肺癌组织中蛋白质组双向电泳图谱分析方法的建立

目的：建立一套双向凝胶电泳图像的分析方法,为进一步分析和鉴定差异蛋白奠定基础。方法：提取肺癌组织和癌旁组织中的可溶性总蛋白,进行双向凝胶电泳,电泳图片由专用扫描仪获取后,应用图像分析软件(PDQuest 7.1)进行蛋白差异点的表达情况分析。结果：二维电泳图片经过背景消减、点检测、点匹配等一系列分析后,得出了差异点。结论：PDQuest 7．1软件可以用来快速有效地对生物样品之间蛋白质的差异进行分析。     

血清双向凝胶电泳技术的建立和优化

目的建立起较好及较稳定的的血清双向凝胶电泳技术。方法对血清双向凝胶电泳中血清标本的收集、保存,血清高丰度蛋白的去除,电泳条件,上样量,IPG干胶条的选择及缓冲液的配制等多种条件和技术方法进行调整和优化。结果建立了较稳定和较好重复性的血清双向凝胶电泳技术,分辨率得到一定的提高,有效分离的蛋白质点明显增多,许多低丰度蛋白被分离出来。结论通过不断的摸索和验证,可以建立起较好的血清双向凝胶电泳技术,为进一步的分析、鉴定和寻找与疾病相关的血清蛋白质奠定一定基础。     

大肠侧向发育型肿瘤细胞株双向电泳技术成功建立

目的:建立侧向发育型肿瘤细胞(LST)株双向电泳技术.方法:提取LST细胞株总蛋白质,采用不同pH范围IPG胶条进行LST细胞株总蛋白质双向电泳,并对实验步骤进行一系列的调整优化.结果:获得了较为清晰的LST细胞株双向电泳图谱,采用pH 3～10线性IPG胶条分离出1356±43个蛋白质斑点;pH 4～7 IPG胶条两种上样量(250μg和150μg)分别分离出了1285±51和989个蛋白质斑点.结论:通过相关条件的调整优化,成功建立了双向电泳技术,为研究LST特殊性生物学行为相关蛋白质奠定了坚实的基础.     

应用二维电泳和质谱技术筛选乳腺癌相关差异表达蛋白质的初步研究

目的:通过分离并鉴定乳腺癌、癌旁和正常乳腺组织的差异表达蛋白质,以发现可能用于早期诊断的乳腺癌肿瘤标志物.方法:提取人乳腺癌、癌旁和正常乳腺组织的总蛋白质,用双向电泳分离蛋白并进行比较.选择在乳腺癌组织中明显差异表达的蛋白点,行质谱分析.结果:获得了分辨率和重复性均很好的凝胶蛋白图谱.对筛选出的在乳腺癌组织中明显差异表达的20个蛋白点,共有13个蛋白点被成功鉴定,其中在乳腺癌组织巾高表达的为8个,低表达的为5个.结论:乳腺癌组织相对于癌旁、正常乳腺组织蛋白存在明显的差异,过蛋白质组学方法筛选并鉴定出的这些蛋白质可能成为用于早期诊断和评价预后的乳腺癌标志物.     

食管鳞癌转移淋巴结蛋白质双向凝胶电泳图谱差异分析

目的 分析食管鳞癌转移淋巴结与正常淋巴结组织蛋白质表达差异.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)技术和计算机辅助的图像分析方法,对食管鳞癌转移淋巴结与正常淋巴结组织蛋白质进行分离和比较分析.结果 获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱,比较分析显示23个蛋白点的表达量存在明显差异,其中新增蛋白点4个,缺失1个,14个蛋白点表达发生明显上调,4个蛋白点表达发生明显下调.结论 食管鳞癌转移淋巴结与正常淋巴结蛋白质表达存在明显差异,可能与食管鳞癌淋巴结转移机制有关.     

胃癌组织差异蛋白表达谱的初步研究

目的:建立胃癌和癌旁胃黏膜组织pH 4~7蛋白质表达谱,分析胃癌和癌旁黏膜组织中蛋白质表达的差异。方法:提取胃癌及癌旁胃黏膜组织总蛋白,采用二维电泳获得胃癌和癌旁胃黏膜组织蛋白质表达谱并进行分析。结果:通过比较分析5对胃癌和癌旁胃黏膜组织pH 4~7蛋白质表达谱,共发现128个差异表达的蛋白质点,其中仅在胃癌组织中表达的蛋白质点56个,胃癌组织中失表达的蛋白质点27个,32个点在胃癌组织中表达上调,13个点在胃癌组织中表达下调。结论:胃癌与癌旁胃黏膜组织之间存在蛋白质表达差异。寻找胃癌与癌旁胃黏膜组织之间表达差异的蛋白质,为阐明胃癌发生的分子机制奠定基础。     

利用双向凝胶电泳和质谱技术进行前列腺癌差异蛋白质组学研究

目的 分离前列腺癌雄激素依赖型和非依赖型细胞系差异表达蛋白质,为进一步研究前列腺癌的蛋白组学打下基础. 方法 培养前列腺癌雄激素依赖型(LNCaP)和非依赖型(DU145)细胞系,分别提取两种细胞系的总蛋白,进行等电点聚焦和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,对所得胶图利用ImageMaster4.01软件进行分析,选取差异点进行质谱分析,对分析结果进行数据库检索. 结果 得到了分辨率和重复性均好的前列腺癌雄激素依赖型和非依赖型细胞系的双向凝胶电泳图谱,每块凝胶上平均蛋白质点数为816±15,通过分析得到3倍差异点41个,完全差异点10个.对完全差异点进行质谱分析和数据库检索得到与差异点相对应的3个蛋白质,其中第83号和175号为未命名蛋白质,第632号蛋白质是KIAA1283蛋白质,具有载脂蛋白功能. 结论 在前列腺癌激素依赖型和激素非依赖型细胞系中存在差异表达蛋白质,并可以利用双向凝胶电泳技术进行分离,为进一步研究前列腺癌的蛋白质组学和发病机制提供了线索.     

先天性核性白内障晶状体蛋白质双向凝胶电泳可重复性与分辨率研究

目的:研究人先天性核性白内障混浊晶状体蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)的可重复性及分辨率.方法:临床手术中抽提先天性核性白内障患儿混浊晶状体组织蛋白,采用固相pH梯度等电聚焦(IPG-DALT)的方法,选用12.5%的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,分别以270μl、300μl上样量对晶状体组织总蛋白(crystallin)进行分离,并用银染显示分离效果.结果:上样量为270μl、12.5%的分离胶对晶状体总蛋白的分离效果较好,上样量为300μl、1、12.5%的分离胶对高相对分子质量蛋白的分离效果较好.凝胶点的匹配率为93.17%.结论:采取适当的制备方法及合适的上样量可以充分分离人混浊晶状体蛋白质,并可以得到较好的分辨效果,但重复性还有待于进一步提高.