激活型Akt1转染大鼠胰岛联合应用细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白延长异种胰岛移植存活

目的 观察激活型Akt1基因转染大鼠胰岛对异种胰岛移植功能和存活的影响.方法 提取大鼠胰岛培养转染,AO/EB和Tunel染色检测存活和凋亡;BALB/C糖尿病小鼠肾被膜下胰岛移植.分4组,实验组:Akt1转染胰岛联合应用细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA-4Ig);Akt1组:移植Akt1转染的胰岛;未转染组:单纯胰岛移植,CTLA-4Ig组:单纯胰岛联合应用CTLA-4Ig;观察胰岛移植后功能存活时间和平均生存时间.结果 Akt1转染胰岛体外细胞抗凋亡生存率提高了25%;实验组移植物功能存活(32.5±6.6)d,平均生存时间(39.6±5.9)d比Akt1组(15.4±3.5)、(22.5±1.7)d和CTLA-4Ig组(18.7±4.5)、(21.7±3.5)d未转染组(4.5±2.8)、(6.8±3.1)d明显延长(P<0.05).结论 激活型Akt1转染大鼠胰岛联合应用CTLA-4Ig,可减少移植胰岛凋亡,延长异种胰岛移植物存活时间.     

激活型Akt1转染大鼠胰岛对移植物凋亡和再血管化的影响

目的 探讨腺病毒介导激活型蛋白激酶B(Akt1)基因(Adv-CA-Akt1)转染大鼠胰岛对同种糖尿病大鼠胰岛移植物凋亡和再血管化的影响.方法 分离纯化Wistar大鼠胰岛,转染Adv-CA-Akt1.36只糖尿病Wistar大鼠完全随机均分为3组: Adv-CA-Akt1组(Adv-CA-Akt1转染的胰岛移植); Adv-LacZ组(Adv-LacZ转染的胰岛移植); 未转染组(单纯胰岛移植).术后每日测血糖,隔日测血清胰岛素浓度,术后10 d行静脉糖耐量试验(IVGTT)观察胰岛功能; HE染色和胰岛素免疫组化检测胰岛功能,细胞凋亡原位检测胰岛凋亡,CD31免疫组化计数微血管密度(MVD).结果 Adv-CA-Akt1组大鼠血糖术后2 d恢复正常,Adv-LacZ组和未转染组血糖虽下降但仍高于正常; Adv-CA-Akt1组术后各时相血清胰岛素水平明显高于其他2组(P＜0.05).IVGTT示Adv-CA-Akt1组血糖下降较快,60 min恢复至空腹水平; 另2组下降慢,60 min仍未恢复至空腹水平.术后3 d,Adv-CA-Akt1组肾被膜下存活胰岛细胞数量多,胰岛素免疫组化证明为有功能的胰岛.Adv-CA-Akt1组胰岛凋亡率比Adv-LacZ组和未转染组降低约25%; 术后12 d,Adv-CA-Akt1组MVD比Adv-LacZ组及未转染组明显增高(P＜0.05).结论 激活型Akt1转染大鼠胰岛能够抑制胰岛细胞凋亡,提高胰岛β细胞功能,促进移植物早期再血管化.     

大鼠胰岛细胞转染Wee1Hu基因延长异种胰岛细胞移植后存活时间

目的 探讨大鼠胰岛细胞转染Wee1Hu基因对异种胰岛细胞移植后存活时间的影响。方法 以Wistar大鼠为供者，Balb／c糖尿病小鼠为受者，进行异种胰岛细胞移植。实验分为2组，每组20只。实验组：将转染Wee1Hu基因的1×10^6个供者胰岛细胞悬于0．5ml无菌生理盐水中，注射至受者的腹腔；空白对照组：将1×10^6个空载体胰岛细胞用与实验组相同的方法注射至受者腹腔。实验组和空白对照组的部分受者在移植前1周腹腔注射降植烷0．5ml，并于胰岛细胞移植后开始口服环孢素A30mg／kg，直至实验结束。监测2组胰岛细胞移植后的胰岛素释放功能及存活时间。结果 胰岛细胞移植后，空白对照组的受者均维持高血糖，且体重持续下降，平均生存时间为（18±2．5）d；实验组的受者血糖在2d内均降至正常，且体重增加，生存时间延长（38±3．5）d；两组相比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。空白对照组维持正常血糖时间为（8±2．3）d，而实验组为（10±2．5）d。实验组中采用免疫抑制剂治疗的受者，长期维持正常血糖，平均维持时间超过30d，与空白对照组中采用免疫抑制剂治疗的受者比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 大鼠胰岛细胞转染Wee1Hu基因可延长异种胰岛细胞移植后的存活时间，与免疫抑制剂协同作用时效果更佳。     

异种胰岛移植近展

异种胰岛移植近展张伟杰实验研究已证明，胰岛移植不仅能逆转糖尿病动物的高血糖状态，而且能防止糖尿病慢性并发症的发生、发展。但供体的严重短缺大大阻碍了临床胰岛移植的发展。不论是胎儿还是成人供体，其来源均十分有限，故选择动物供胰、发展异种移植很有必要。目前...     

胰岛FasL基因转染对大鼠胰岛移植的影响

目的 探究胰岛细胞FasL基因转染对同种大鼠胰岛移植的影响。方法 通过磷酸钙沉淀法构建含目的基因FasL的重组腺病毒AdV-FasL,感染胰岛细胞后移植于糖尿病受者大鼠,通过RT-PCR和免疫组织化学检测移植物FasL表达,观察移植物存活情况及基因转染胰岛细胞凋亡情况。结果 单纯移植胰岛组平均存活期为（6.3±0.56）d,FasL基因转染组并未出现排斥延迟,反而排斥加速,存活期缩短至（3.4±0.24）d。FasL转染的胰岛细胞在移植后24h见FasL表达,在 48 h表达增强,AdV-5感染组及未转染组未见FasL表达。TUNEL标记见移植后FasL转染胰岛细胞凋亡。结论 尽管表达FasL的睾丸细胞与胰岛共移植可诱导活化的淋巴细胞凋亡,使胰岛移植物获得免疫豁免、存活期延长,但通过FasL基因转染使胰岛细胞直接表达FasL,引起胰岛细胞凋亡和粒细胞浸润,导致排斥加速。     

微囊化胰岛细胞异种移植治疗小鼠糖尿病

我们进行空囊移植及胰岛、微囊化胰岛的异种移植 ,以期寻找影响胰岛存活的原因 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1 .糖尿病小鼠的制备 :链脲菌素溶于枸橼酸钠溶液中 ( ｐＨ4.5)制成浓度1 0 ｇ/Ｌ溶液 ,2 2 0ｍｇ/ｋｇ体重小鼠腹腔注入。非空腹血糖连续 2次超过 3.5ｇ/Ｌ则定为已患糖尿病。剪尾以便携式血糖仪测定尾静脉血糖。2 .胰岛细胞的分离和纯化 :胰岛细胞的分离见文献 [1 ]。胰岛细胞纯化 :Ｆｉｃｏｌｌ离心。消化沉淀物和 2 5%Ｆｉｃｏｌｌ溶液混匀 ,其上依次加入 2 3.0 %、2 0 .5%、1 1 .0 %Ｆｉｃｏｌｌ各 2ｍｌ,80 0 ｇ离心 1 5…     

猪胰岛异种移植的研究进展

糖尿病是严重威胁人类健康的疾病,而胰岛移植可以通过调节内源性胰岛素的分泌,治疗1型糖尿病。由于人源胰腺供体不足,无法满足大批量胰岛细胞移植需求。猪胰岛素与人胰岛素仅差1个氨基酸,在糖尿病患者身上使用已有较长历史,而且猪可以进行基因修饰,减少移植后免疫排斥反应,因此目前猪胰岛作为异种胰岛移植来源进入临床试验阶段。本文将就猪-非人灵长类移植的发展史,猪胰岛异种移植中存在的问题、解决方案和研究进展,及猪胰岛异种移植前景和展望做一综述。     

大鼠胰岛移植物制备与异种移植

增加胰岛收获量，提高胰岛纯度一直是胰岛移植中面临的重要问题，本实验经胰管注射胶原酶，胰静止消化分离成年大鼠胰岛纯度一直是胰岛葡聚糖离心纯化。纯化后胰岛收获量为６１０－８２０个／胰纯度达９２％；胰岛形态结构完整，内分泌细胞超微结构保持良好，对葡萄糖刺激反应胰岛素释放量是基本分泌水平的８倍；异种移植可逆转实验性糖尿病小鼠的高血糖达一周。     

糖尿病小鼠胰岛移植部位的实验研究

目的探讨小鼠肝内、肾包膜下等不同部位胰岛移植物生存时间及免疫学功能的差异。方法采用滤网法分离纯化胰岛,供体胰岛植入受体肝内及肾包膜下。用酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定INF-γ的含量。3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入法测定单向混合淋巴细胞反应。结果肾包膜下移植组胰岛生存时间(12．18±1．25)d明显长于肝内移植组[(7．09±0．70)d,P< 0．01]。单项混合淋巴细胞反应显示,肝内移植组淋巴细胞较肾包膜下移植组增殖明显(P<0．01)。上清液测IFN-γ含量,肝内移植组明显升高,差别有统计学意义(P<0．05)。结论不同移植部位, 胰岛的生存时间及免疫功能差异存在统计学意义,肾包膜下是胰岛移植的理想部位。     

采用Edmonton免疫抑制方案的成人胰岛移植治疗1型糖尿病八例

目的：探讨成人胰岛移植治疗1型糖尿病的临床效果。方法：为8例1型糖尿病患者施行胰岛移植，供胰来自于成人尸体，消化、分离获得的胰岛培养过夜，然后经动脉插管输注至肝固有动脉，每例输注胰岛数为（8415±757）胰岛当量／kg，其中3例接受1个供者的胰岛移植，5例接受2个供者的胰岛移植（分2次进行）。8例患者中，除1例供、受者的ABO血型不同外，其余供、受者的ABO血型均相同。本组病例未行HLA配型。术后免疫抑制治疗采用Edmonton方案中的免疫抑制剂使用方法，即不使用类固醇激素，采用西罗莫司和他克莫司联用，并辅以5剂达利珠单抗。术后观察外源性胰岛素的使用量、血糖及血清C-肽的变化。结果：移植后平均随访7．7个月，2例完全停用胰岛素，5例的胰岛素用量减少47％～90％，1例效果不明显，胰岛素用量仅减少21％。8例血糖从移植前的（10．6±3．9）mmol／L降至（6．6±1．3）mmol／L，控制更为平稳；糖化血红蛋白A1从（11．9±1．6）％降至（5．9±1．2）％。移植有效者的血清C-肽基础值及葡萄糖刺激后C-肽水平分别由移植前的（0．054±0．076）nmol／L和（0．075±0．045）nmol／L升高至（0．620±0．080）nmol／L和（1．580±0．770）nmol／L。免疫抑制剂相关的并发症主要为白细胞减少（6例），减少或停用免疫抑制剂后白细胞可回升至正常，无大出血、门静脉栓塞或门静脉高压等并发症发生。结论：经肝动脉输注成人胰岛治疗1型糖尿病具有一定的临床效果，采用Edmonton免疫抑制方案安全、有效。     

体外转染可溶性IL-1RI-Ig基因延长糖尿病小鼠移植胰岛细胞存活时间

目的 探讨糖尿病小鼠移植经可溶性白细胞介素1(IL-1)受体胞外段Fc融合蛋白(sIL-1RI-Ig)基因修饰的胰岛细胞对延长移植物存活时间的作用及机制.方法 将Ad-sIL-1RI-Ig体外转染Balb/c小鼠的胰岛细胞,并将其移植给糖尿病C57BL/6小鼠,观察移植物的存活时间,并检测移植局部组织炎症细胞的浸润以及炎症细胞因子的表达.结果 糖尿病小鼠移植转染sIL-1RI-Ig基因的胰岛细胞后,血糖水平很快下降至正常范围,胰岛移植物存活时间达(39±3)d,而移植正常胰岛细胞的小鼠胰岛移植物存活时间为(9±2)d(P<0.01).糖尿病小鼠移植转染sIL-1RI-Ig基因的胰岛细胞后,胰岛素分泌量随糖负荷增加而升高,并与胰岛素分泌功能正常的小鼠呈相似变化趋势(P>0.05).糖尿病小鼠移植转染sIL-1RI-Ig基因的胰岛细胞后,移植局部组织表达肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和RANTES等水平明显下调;病理学观察发现移植局部组织浸润的炎症细胞明显少于移植正常胰岛细胞的小鼠.结论 sIL-1RI-Ig基因转染胰岛细胞后,可通过表达sIL-1RI-Ig,阻断IL-1的作用,降低TNF-α、IFN-γ、RANTES等细胞因子的表达,从而减轻排斥反应,延长胰岛细胞移植物的存活时间和提高胰岛素分泌功能.     

胰岛移植治疗糖尿病的研究进展

Islet transplantation is effective in treating diabetes, however, its clinical use is highly restricted by a series of influencing factors. This review elucidates the non-immune factors including islet purification, instant blood-mediated inflammatory response and revascularization deficit on the development of islet transplantation, and also highlights the application and perspective of islet xenotrasplantation in the treatment of diabetes.     

骨髓来源细胞移植对糖尿病小鼠胰岛功能的影响

目的 观察骨髓来源细胞(BMDCs)移植对糖尿病小鼠胰岛功能的影响.方法 建立糖尿病小鼠模型并分成两组:实验组小鼠(n=8)通过尾静脉移植BMDCs;对照组小鼠(n=8)通过尾静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS).观察两组小鼠血糖的变化、胰岛数量、胰腺组织形态学特征及相关标记物的表达.结果 与对照组比较,实验组小鼠移植后第4周血糖出现明显下降(20.7±5.2)比(27.1±1.4)mmol/L,P＜0.05,并持续下降至第6周(16.9±6.0)比(27.7±0.3)mmol/L,P＜0.01,胰岛数目显著增加(22.9±4.8)比(11.6±5.2)个,P＜0.01;实验组小鼠胰岛周围和胰岛内发现绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞,部分GFP阳性细胞同时表达CD34,但未发现同时表达GFP和insulin的细胞.结论 BMDCs移植能促进糖尿病小鼠胰岛的修复和再生,但BMDCs在糖尿病小鼠体内不能转分化为胰岛β细胞,CD34阳性细胞在损伤胰岛修复和再生的过程中起重要作用.     

糖尿病髂动脉硬化患者肾移植术51例报告

目的探讨糖尿病髂动脉硬化患者的肾移植手术特点。方法51例糖尿病合并髂动脉硬化的肾移植受者共行肾移植术54例次。其中肾动脉与髂外动脉直接端侧吻合13例次；切除硬化内膜，肾动脉与髂总／髂外动脉端侧吻合19例次；切除硬化内膜，肾动脉与髂内动脉钛环钉法端端吻合22例次。结果发生移植肾血流灌注不足致移植肾原发性无功能3例次，发生移植肾功能延迟恢复9例次（17．6％），其余42例次移植肾功能恢复良好。围手术期死亡2例（均为心跳骤停）。随访11—70个月，1年人／肾存活率为89．8％／87．8％，3年存活率为84．4％／81．3％。结论糖尿病髂动脉硬化患者移植肾动脉吻合困难，为保证移植肾有充足的血流灌注，应根据患者的不同情况选择吻合血管，并行硬化动脉内膜切除术。合并冠心病的患者肾移植术前应先行心肌再血管化手术。     

Islet cell transplantation today

Introduction Long-term studies strongly suggest that tight control of blood glucose can prevent the development and retard the progression of chronic complications of type 1 diabetes mellitus. In contrast to conventional insulin treatment, replacement of a patient’s islets of Langerhans either by pancreas organ transplantation or by isolated islet transplantation is the only treatment to achieve a constant normoglycemic state and avoiding hypoglycemic episodes, a typical adverse event of multiple daily insulin injections. However, the cost of this benefit is still the need for immunosuppressive treatment of the recipient with all its potential risks. Materials and methods Islet cell transplantation offers the advantage of being performed as a minimally invasive procedure in which islets can be perfused percutaneously into the liver via the portal vein. Between January 1990 and December 2004, 458 pancreatic islet transplants worldwide have been reported to the International Islet Transplant Registry (ITR) at our Third Medical Department, University of Giessen/Germany. Results Data analysis of islet cell transplants performed in the last 5 years (1999–2004) shows at 1 year after adult islet transplantation a patient survival rate of 97%, a functioning islet graft in 82% of the cases, whereas insulin independence was meanwhile achieved in 43% of the cases. However, using a novel protocol established by the Edmonton Center/Canada, the insulin independence rates have improved significantly reaching meanwhile a 50–80% level. Conclusion Finally, the concept of islet cell or stem cell transplantation is most attractive, as it offers many perspectives: islet cell availability could become unlimited and islet or stem cells my be transplanted without life-long immunosuppressive treatment of the recipient, just to mention two of them.     

细胞因子基因型多态性与肾移植排斥反应的关系

目的：探讨细胞因子基因型多态性对肾脏移植后急性排斥反应发生率的影响。方法：采用序列特异引物聚合物酶链反应（PCR－SSP）法对115例肾移植受者和24名健康对照者的细胞因子肿瘤坏死因子（TNF）－α,转化生长因子（TGF）－β1,白细胞介素（IL）－6和IL－10基因型进行测定,探讨其细胞因子基因型对肾脏移植后急性排斥反应发生率的影响。结果：在115例肾移植受者及24名健康对照者中,TNF－α和IL－10低产生型基因型者分别为88.7%(102.115),87.5%(21/24)和80％(92/115),75%(18／24）,占明显优势。而TGF－β1和IL－6的硎 是以高产生型占明显优势,分别为79.1%(91/115),100%(115/115)和66.7%(16/24),100%(24/24)。115例肾移植受者中,在移植后6个月内共有26例发生了急性排斥。其中TNF－α高产生基因型和IL－10的中,高产基因型受者的急性排斥发生率分别为53．8％（7／13）和43．5％（10／23）,显著高于相应的低产生基因型受者的18．6％(19/102,x^2=8.17)和17．4％（16／92,x^2=7.16),差异有非常显著意义（P值均＜0＝0．01）。结论：肾移植受者和正常健康人群的TNF－α和IL－10基因型是以低产生型为主;TGF－β1和IL－6的基因型是以高产生型为主;TNF－β1和IL－10细胞因子基因型多态性对肾移植术后急性排斥反应的发生率有显著的影响。     

胰岛移植即刻经血液介导的炎症反应应对策略

胰岛移植作为治疗1型糖尿病和终末期2型糖尿病的有效手段,可以使患者获得较好的血糖控制能力。即刻经血液介导的炎症反应(IBMIR)是胰岛移植早期出现的非特异性炎症反应,发生后可迅速出现凝血级联和补体系统激活、炎症细胞聚集等,造成大量移植胰岛丢失,严重影响胰岛移植的疗效。如何减轻IBMIR对胰岛造成损伤是目前胰岛移植的研究热点,临床推荐的治疗胰岛移植IBMIR的药物有肝素和肿瘤坏死因子-α抑制剂依那西普。新近研究表明多种方法和药物可以减轻IBMIR对胰岛的损伤,本文就这些临床研究成果和临床前研究成果进行综述,以期为胰岛移植IBMIR的应对提供参考。     

Islet cell transplantation for the treatment of type 1 diabetes in the USA

Islet cell transplantation (ICTx) is one of the most effective treatments for type 1 diabetes and is less invasive compared to whole organ transplantation. The US has been the leader in the research and clinical applications of ICTx for the last 40 years. ICTx requires complex procedures, including pancreas procurement and preservation; pancreas digestion; islet purification; and transplantation. Even with the dramatic progresses in each of the procedures listed above, there are still challenges to make ICTx the standard therapy. These challenges are: (1) obtaining enough islets from a single donor and (2) preventing graft loss due to allogenic rejection and recurrence of autoimmune islet destruction. A new preservation strategy for pancreata and pancreatic ducts using ET-Kyoto solution as well as a new islet purification method using iodixanol has substantially improved islet yields. Continuous research to improve the efficacy of islet isolation will solve the issue of obtaining enough islets from a single donor. Immunological tolerance is an ideal solution for the issue of rejection and autoimmune recurrence and a regulatory T cell strategy seems promising. Moreover, the SUITO index is a simple and powerful tool to assess engrafted islet mass and is, therefore, useful for evaluating the efficacy of new immunosuppressant strategies. Once ICTx becomes a standard treatment, the donor shortage will become the next challenge. Marginal or living donor islet transplantations could help alleviate this issue; however, bio-artificial islet transplantation with animal islets could be the ultimate solution.