端粒酶RNA及其催化亚单位基因hTRT在睑板腺癌中的表达

目的 探讨端粒酶RNA(hTR)及端粒酶催化亚单位基因hTRT在睑板腺癌中的表达意义。 方法 用原位杂交法检测hTR及hTRT在55例睑板腺癌、12例霰粒肿、4例睑板腺腺瘤中的表达;用EnVision法对Ki-67进行免疫组织化学染色,其结果用计算机图像自动分析系统进行量化,把积分光密度值作为肿瘤增殖指数;用SAS统计软件包对影响睑板腺癌的危险因素(性别、年龄、病程长短、肿瘤大小、肿瘤分化程度等)进行分析,结合增殖指数,hTR、hTRT表达的半定量结果对影响睑板腺癌预后因素进行综合评估。 结果 hTR在睑板腺癌中的阳性表达率为84.45％,hTRT的阳性表达为51.8％,hTR及hTRT在睑板腺癌中的表达明显高于癌旁组织、霰粒肿、睑板腺腺瘤(P<0.01)。hTR与睑板腺癌的分化有关(r=0.455,P相似文献   

端粒酶活性调控研究与相关眼科疾病的研究进展

端粒酶是由RNA和蛋白质组成、能维持端粒长度的核糖核蛋白酶。端粒酶的激活和抑制影响和端粒长度的改变，进而与衰老和肿瘤发展关系密切。本将综合介绍端粒酶活性调控及与有关眼科疾病关系的最新研究进展和应用前景。     

端粒酶活性调控研究与相关眼科疾病的研究进展

端粒酶是由RNA和蛋白质组成、能维持端粒长度的核糖核蛋白酶。端粒酶的激活和抑制影响到端粒长度的改变 ,进而与衰老和肿瘤发展关系密切。本文将综合介绍端粒酶活性调控及与有关眼科疾病关系的最新研究进展和应用前景     

端粒酶与视网膜母细胞瘤组织病理学特征相关性的初步研究

目的　探讨端粒酶基因 (hTR)和端粒酶催化亚单位基因 (hTRT)在视网膜母细胞瘤 (RB)组织标本中的表达 ,研究端粒酶与RB增殖和分化的关系。方法　应用原位杂交方法检测hTR、hTRT在 37例RB和 2例正常组织标本中的表达 ;并对标本中的增殖细胞核抗原 (PCNA)进行免疫组化染色 ,经过量化 ,作为肿瘤的增殖指数 ;应用SPSS统计软件对各指标进行相关性分析。结果　RB标本中hTR和hTRT的阳性表达分别为 83 8%、89 2 % ,2例正常视网膜组织内的表达均为阴性。hTR、hTRT的表达水平与RB不同的增殖、分化程度的统计学差异均有显著意义 (均P <0 0 5 ) ,RB侵犯视神经情况越严重、分化程度越差 ,hTR、hTRT的表达越强。此外 ,RB的端粒酶hTR、hTRT指标间有一定相关性。结论　RB中端粒酶基因hTR和催化亚单位基因hTRT的高表达可作为判断RB恶性及其程度的新型标记物。hTR、hTRT与RB分化类型、视神经侵犯情况密切相关 ,为端粒酶表达水平反映RB分化程度和增殖能力提供理论依据。端粒酶在RB中的存在为开辟新型临床治疗方法 ,即通过抑制RB细胞端粒酶活性达到治疗目的提供了新思路。     

端粒酶在眼睑皮脂腺癌中表达的意义

目的　探讨端粒酶与端粒酶RNA(humantelomeraseRNA ,hTR)在睑板腺癌中的表达及其与肿瘤生物学行为的关系。方法　用端粒酶重复扩增技术法检测 12例冰冻保存睑板腺癌组织标本中端粒酶活性 ;用原位杂交法检测 5 5例睑板腺癌石蜡切片中hTR的表达 ,并用免疫组化EnVision法检测肿瘤增殖指数Ki 6 7的表达。结果　 12例睑板腺癌组织标本中 ,端粒酶活性程度不同 ;hTR在睑板腺癌细胞内表达 ,其阳性表达率为 85 5 % (47/5 5 ) ,而癌旁组织中hTR表达阴性 ;hTR的表达水平随睑板腺癌分化程度的降低而呈上升的趋势 (χ2 =17 6 2 1,P <0 0 0 1) ;hTR表达与睑板腺癌肿瘤增殖指数Ki 6 7表达及睑板腺癌复发无关。结论　hTR在睑板腺癌变过程中具有调节作用 ,hTR阳性表达可作为判断睑板腺癌恶性程度的标记物。     

端粒酶反义寡核苷酸抑制视网膜色素上皮细胞增殖的实验研究

目的：使用脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸对闭端粒酶基因在视网膜色素上皮细胞的表达从而抑制视网膜色素上皮细胞的增殖,为增殖性玻璃体视网膜病变的治疗探索一条基因治疗途径。方法：使用端粒重复序列扩增法（Telomeric repeat amplification protocol,TRAP)定性,定量检测浓度为0umol/L,2umol/L,4umol/L,6umol/L,8umol/L脂质体介导的端粒酶反义寡核苷酸及浓度为4umol/L的正义寡核苷酸在视网膜色素上皮细胞粒酶活性表达。结果：TRAP结果显示随着端粒酶反义寡核苷酸浓度的增高,视网膜色素上皮细胞端粒酶活性逐渐降低,8umol/L几乎没有表达,正义寡核苷酸很少抑制视网膜色素上皮细胞端粒酶活性。结论： 质体介导的端粒酶反义寡核苷酸能抑制视网膜色素上皮细胞端粒酶的活性从而抑制视网膜色素上皮细胞的增殖。     

端粒、端粒酶与眼部疾病

端粒是真核细胞线性染色体末端的一种特殊结构，与细胞的衰老及恶性肿瘤的发生密切相关。随着细胞的不断分裂，端粒不断缩短而趋于死亡。但端粒酶的存在却可以维持细胞端粒的长度，使细胞可以逃避凋亡而具有“不死性”。研究表明，端粒酶的活性对眼部组织的增生、细胞的衰老以及眼部肿瘤的发生具有重要的作用。我们就端粒、端粒酶的研究现状及其与眼科疾病的关系和应用进展作一综述。     

细胞周期依赖性激酶抑制剂及其在眼科的应用

哺乳动物细胞能否增殖主要取决于细胞内特异性细胞周期依赖性激酶 (cyclindependentkinase,CDK)的活性发挥 ,CDK的活性发挥依赖于其正调控亚基Cyclin的顺序性表达及其负调控亚基CDK抑制剂 (cyclin dependentkinasein hibitor,CKI)的浓度。因此CKI与眼科肿瘤及增殖性疾病有着密切关系。通过抑制或激活CKI活性也有着广阔的临床治疗前景。我们就CKI的结构功能 ,CKI与眼科肿瘤、白内障、角膜病、增生性玻璃体视网膜病变等的关系及治疗作用作一综述     

端粒酶系统在眼部疾病中的研究进展

端粒酶系统是端粒和端粒酶的总称.由于其与细胞衰老、增生乃至癌变的关系密切,端粒酶系统现已成为癌症及其他增生性疾病治疗研究的热点.大量研究表明,端粒酶的活性与眼部组织的增生、细胞的衰老及眼部肿瘤的发生关系密切.在此,我们就端粒、端粒酶研究现状及其与眼科疾病的关系和应用进展作一综述.     

survivin和c-myc蛋白在视网膜母细胞瘤中的表达

细胞凋亡和增殖异常在肿瘤的发生和发展中起重要作用。survivin是近年发现的凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族新成员，具有抗凋亡和参与细胞周期G2期调控的作用，与化疗耐药及预后有重要关系。原癌基因c—myc被认为是具有激活和抑制双重作用的转录调节子，在细胞的增殖、分化和凋亡过程中发挥着重要作用。视网膜母细胞瘤（retinoblastoma，RB）是起源于视网膜神经上皮层的一种儿童时期最常见的眼内恶性肿瘤，但survivin和c—myc蛋白与RB的关系文献报道较少。我们应用免疫组织化学方法研究survivin和c—myc蛋白在RB中的表达，旨在探讨两者在RB中的作用及其与瘤细胞凋亡的关系。     

苦参碱对人视网膜母细胞瘤细胞生长与端粒酶活性影响的实验研究

目的探讨苦参碱（Ma）对体外培养的人视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞的生长抑制作用及其机制。方法培养的人HXO—Rb44细胞经不同浓度的Ma作用后,采用噻唑蓝比色法（MTT法）测定细胞的生长状况;采用苏木素-伊红染色、流式细胞技术及核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口标记法检测细胞凋亡率和形态学变化;采用端粒重复扩增法检测端粒酶活性的变化。结果一定浓度范围内Ma可抑制HXO—Rb44细胞的生长（P〈0．01）,24h内呈浓度依赖性。0．4mmol／LMa作用12h,可观察到HXO—Rb44细胞凋亡的形态改变,细胞凋亡率开始增加（P〈0．01）,端粒酶活性下降（P〈0．01）,两者在48h内均呈时间依赖性,并具有一定相关性（r=-0．961,P〈0．01）。结论Ma可抑制HXO—Rb44细胞生长,诱导其凋亡,端粒酶活性下降可能是Ma诱发HXO—Rb44细胞凋亡机制之一,提示Ma对视网膜母细胞瘤的综合治疗具有一定的应用前景。     

基因表达调控物对HXO-Rb44细胞瘤株端粒酶活性的影响

目的　通过检测基因表达调控物全反式维甲酸对HXO Rb4 4 细胞端粒酶活性及细胞周期变化的影响 ,探讨治疗视网膜母细胞瘤的新途径。方法　将视网膜母细胞瘤株HXO Rb4 4 分为对照组及实验组 ,分别进行体外培养 2 4、48、72h后 ,以PCR ELISA方法检测其端粒酶活性及用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果　实验组与对照组的端粒酶活性有显著差异 (P <0 .0 1) ,实验组的端粒酶活性与药物作用时间之间 ,呈显著负相关 (r =-0 7756,F =3 3 2 16,P <0 .0 1)。实验组细胞周期发生变动 ,即G1期比率上升 ,S期比率下降。结论　基因表达调控物全反式维甲酸可减弱HXO Rb4 4 细胞端粒酶活性 ,影响其周期变化 ,抑制其增殖     

Inhibition on Telomerase Activity and Cytotoxic Effects by Cisplatin in Cultured Human Choroidal Melanoma Cells

Purpose: To study the changes of telomerase activity and cytotoxic effects by Cisplatin; cis-dichlorodiamine platinum (CDDP) in cultured human choroidal melanoma. Material and Methods: The primary cultured human choroidal melanoma cells were cultured in the presence and absence of CDDP with different concentration and time respectively. The toxic effects were evaluated by MTT and the level of telormarse was detected by PCR-ELISA assay. And the relationship between telomerase activity and cytotoxic effects were analyzed by a correlation analysis.Results: Following the increase of the concentration and the time of CDDP, gradually repressed telomerase activity was detected in cultured cells. Meanwhile, the restrain rate of the cells increased. The telomerase activity at 24h and 1μg/ml was repressed significantly compared with the control cells. However, the appearance of cell death lagged behind the decreasing of telomerase.Conclusions: CDDP is an effective telomerase inhibitor in cultured choroidal melan     

8-溴-环腺苷酸对视网膜母细胞瘤细胞系端粒酶活性及动力学影响的研究

目的 探讨8-溴-环腺苷酸（8-Br-cAMP）对视网膜母细胞瘤（RB）细胞系端粒酶活性及细胞周期变化的影响。 方法 将培养的RB细胞系分为对照组及实验组（加8-Br-cAMP培养组），分别进行体外培养2 4、48、72 h后，以聚合酶链反应-酶标免疫吸附实验方法检测其端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞周期变化。 结果 各实验组RB细胞端粒酶活性与 对照组相比，差异均有显著性的意义（P<0.01）。8-Br-cAMP作用不同时间实验组的 端粒酶活 性吸光度[A，旧称光密度（OD）]值与作用时间之间，呈显著负相关（r=-0.778 9，F=33.936，P<0.01）。实验组细胞周期变化：G1期比率上升，S期比率下降。 结论 8-Br-cAMP可减弱RB细胞系端粒酶活性，影响其周期变化，抑制RB细胞系增生。 （中华眼底病杂志，2004，20：358-360）     

Telomerase expression in uveal melanoma

BACKGROUND/AIMS: Accumulating evidence indicates that telomerase activity is repressed in normal human somatic cells but reactivated in cancers and immortal cells, suggesting that activation of telomerase activity has a role in carcinogenesis and immortalisation. To date, telomerase in uveal melanoma and, whether, it may have a role in the development or progression of these tumours has not been described. The expression patterns and the activity of telomerase were investigated in 14 uveal melanoma and these results were correlated with histological and immunohistological features of these tumours. METHODS: A modified PCR based telomeric repeat amplification protocol (TRAP) assay was used to demonstrate telomerase activity in 14 uveal melanomas. In addition, in situ hybridisation was used to demonstrate the expression pattern of the telomerase RNA component (hTR) at the single cell level in eight of these globes. RESULTS: The TRAP assay revealed moderate telomerase activity in all uveal melanomas examined. In situ hybridisation visualised a moderate to high upregulation of hTR in the melanoma cells but not in the admixed reactive cells. There was no correlation among tumour location, cell type, or growth fraction and the amount of telomerase activity. In addition, the cells of the germinative zone of the lens demonstrated a strong hTR expression. CONCLUSION: Telomerase activity is upregulated in uveal melanomas. The expression of hTR was located to the tumour cells and not the reactive tumour infiltrating cells. Strong telomerase expression was also demonstrated in cells of the germinative zone of the lens.     

顺铂对人脉络膜黑色素瘤细胞端粒酶活性影响的实验研究

目的 研究顺铂对人脉络膜黑色素瘤细胞端粒酶活性的影响及其对细胞的毒性作用,并探讨两者之间的关系,为临床化疗提供更多依据.方法 实验研究.采用原代培养的人脉络膜黑色素瘤细胞,用特定时间下(72 h)不同浓度(100.00、10.00、1.00、0.10、0.01 mg/L)以及特定浓度下(10 mg/L)不同时间(96、72、48、24、12 h)的端粒酶抑制剂顺铂作用于黑色素瘤细胞,以生理盐水作用于细胞为空白对照组,用四甲基偶氮唑盐法检测药物对细胞的毒性作用,聚合酶链反应.酶联免疫吸附法测定细胞中端粒酶活性的变化.各组细胞端粒酶活性的变化采用单因素方差分析,细胞抑制率与端粒酶活性之间的关系采用Spearman等级相关分析.结果 随着顺铂浓度的增加及作用时间的延长,细胞中端粒酶活性逐渐下降,在药物浓度>0.10 mg/L及作用时间达到24 h后,其活性出现大幅度下降,随后出现细胞抑制率明显升高,与端粒酶活性下降呈负相关(r=-0.900,P=0.037),但前者均发生不同程度的滞后现象.结论 顺铂作为一种端粒酶抑制剂,可有效降低体外培养的人脉络膜黑色素瘤细胞的端粒酶活性,呈浓度和时间依赖性,并造成细胞死亡.(中华眼科杂志,2008,44:705-710)     

白内障晶状体上皮细胞端粒酶与凋亡增龄性研究

目的 探讨白内障晶状体上皮细胞端粒酶活性的表达随着年龄的增长与凋亡的关系,及其在白内障发生发展中的作用机制.方法 选取行超声乳化白内障手术的患者91例91眼,取晶状体前囊膜.根据年龄分为三组,即Ⅰ组为≤30岁的患者11例,Ⅱ组为31-60岁的患者30例,Ⅲ组为≥61岁的患者50例.采用脱氧核苷酸末端转移酶缺口标记原位细胞检测法(the terminal deoxynueleotidyl transferass (TDT)-medinted dUTP nick-end lsbeling(TUNEL)检测三个不同年龄组白内障患者晶状体上皮细胞的凋亡细胞.采用TRAP-ELISA法检测三个不同年龄组白内障患者晶状体上皮细胞的端粒酶活性.结果 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组白内障晶状体上皮细胞凋亡百分率分别0%、13%、23%.三组白内障晶状体上皮细胞中端粒酶活性随着年龄增高明显降低.各项指标经统计学分析具有统计学意义(P＜0.05).结论 随着年龄的增长白内障晶状体上皮细胞端粒酶的活性逐渐降低,凋亡逐渐增强,端粒酶活性的降低促进了晶状体上皮的凋亡,是引起发生白内障的一个重要机制.     

端粒酶反義寡核苷酸抑制視網膜色素上皮細胞增殖的實驗研究

目的使用脂質體介導的端粒酶反義寡核苷酸封閉端粒酶基因在視網膜色素上皮細胞的表達從而抑制視網膜色素上皮細胞的增殖,爲增殖性玻璃體視網膜病燮的治療探索一條基因治療途徑.方法使用端粒重復序列擴增法(Telomeric repeat amplification protocol,TRAP)定性、定量檢測濃度爲0umol/L、2umol/L、4umol/L、6umol/L、8umol/L脂質體介導的端粒酶反義寡核苷酸及濃度爲4umol/L的正義寡核苷酸在視網膜色素上皮細胞端粒酶活性表達.結果TRAP結果顯示随着端粒酶反義寡核苷酸濃度的增高,視網膜色素上皮細胞端粒酶活性逐漸降低,8umol/L幾乎没有表達,正義寡核苷酸很少抑制視網膜色素上皮細胞端粒酶活性.結論脂質體介導的端粒酶反義寡核苷酸能抑制視網膜色素上皮細胞端粒酶的活性從而抑制視網膜色素上皮細胞的增殖.     

端粒酶活性与白内障

端粒酶活性对人晶状体上皮细胞的增生、衰老以及白内障的发生发展具有重要作用。目前,白内障晶状体上皮细胞中端粒酶活性的改变与细胞ＤＮＡ损伤、凋亡、增殖的因果关系成为争论的焦点。本文就晶状体上皮细胞中端粒酶的表达、调节机制及其临床应用进行综述。