PLC—γ1对血小板生长因子介导的细胞增殖的影响

目的观察磷酸脂酶C－γ1（PLC－γ1）对血小板生长因子（PDGF）介导的细胞增殖的影响。方法 应用无内源性PLC－γ1小鼠成纤维细胞株,观察在PDGF作用下细胞增殖情况（包括细胞内钙离子动员及DNA合成）,并与正常细胞株对照。结果 缺失PLC－γ1的细胞与正常细胞DNA合成显著增强,均出现细胞内钙动员;但PLC－γ1^-/-细胞DNA合成时间显著延长,钙流较PLC－γ1 / 值小且峰值出现较晚（P＜0．01）。结论 PLC－γ1在PDGF作用下成纤维细胞的增殖过程中有重要作用,当其缺乏时功能可被其他途径代偿。     

Wortmannin与U73122对缺失磷脂酶C－γ1细胞迁移的影响

0 引言 磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLC-γ1)与三磷酸肌醇激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI-3K)是生长因子介导的信号传递过程中的两个重要信号分子。尽管敲除plcgl基因后的小鼠不能正常发育，并于胚胎第9天死亡［1］；缺失PLC-γ1小鼠胚胎成纤维细胞(PLC-γ1-/-)在体外却能正常生长，且在表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)刺激下其受体激活与内吞、DNA合成、迁移能力等与正常细胞(PLC-γ1+/+)相似［2］。但PLC-γ1-/-并不出现其近亲PLC-γ2的代偿表达，PLC-γ1-/-细胞株迁移过程中PLC-γ1的信号传递功能是否由其他PLC同工酶或PI-3K通路代偿，目前还不清楚。为探讨PLC-γ1通路在信号传递过程中的代偿机制，本研究检测了PLC、PI-3K特异性抑制剂U73122、Wortmannin对PLC-γ1-/-细胞的EGF介导细胞迁移的影响。     

磷脂酶C-γ1和γ2对成纤维细胞生长及增殖的影响

目的 观察磷脂酶C-γ1和γ2基因在血小板源性生长因子(PDGF)诱导的成纤维细胞生长和增殖信号转导中的作用。方法 测定PDGF刺激后，敲除磷脂酶C-γ1基因的细胞株及其转染磷脂酶C-γ2基因后的生长和增殖能力，并对数据进行统计学分析。结果 磷脂酶C-γ1和γ2在PDGF引起的细胞生长、增殖信号转导中均有正调控作用，并不是必需的因素，两者有协同作用，但各自的作用力度和时期不同，γ1作用显著，γ2作用较弱且较晚；磷脂酶C-γ1对DNA合成和细胞周期进程有重要影响，缺失时，细胞G1和S期缩短，DNA合成能力增强；γ2对DNA合成无显著影响，但在野生型成纤维细胞中表达时，可使S期提前并相对延长。结论 在成纤维细胞中，磷脂酶C-γ1和γ2对细胞生长和增殖的影响各不相同，有相同处，起不同程度的协同作用；又有不同处，不能相互取代。     

血小板衍生生长因子诱导人血管平滑肌细胞增殖时钙调素的变化

目的:观察血小板衍生生长因子(PDGF)对培养的人血管平滑肌细胞增殖及钙调素含量变化的作用.方法:应用3H-TdR掺入法和磷酸二酯酶法,观察不同浓度(1、10、20、30、40 ng/ml)PDGF-BB对培养的人血管平滑肌细胞DNA合成和钙调素含量变化的影响及其时间效应.结果:不同浓度PDGF-BB作用后,处于静止状态的人血管平滑肌细胞DNA的合成增加,并呈现明显的浓度依赖关系,在40 ng/ml浓度时DNA的合成达到高峰(P＜0.01).平滑肌细胞在进入细胞增殖周期后,细胞内钙调素含量逐渐增加,在9 h时出现一个短暂的高峰,随后逐渐下降;不同浓度PDGF-BB作用后,钙调素含量增加,并呈现出明显的浓度依赖关系,30 ng/ml浓度时作用最为显著(P＜0.01).结论:PDGF可促进培养的人血管平滑肌细胞增殖,该作用可能与增加钙调素含量有关.     

黄颜木素对HSC-T6细胞增殖和胶原合成的影响

目的：研究黄颜木素对激活的永生型大鼠肝储脂细胞--HSC-T6细胞增殖和胶原合成的影响。方法：细胞增殖采用结晶紫染色法检测,胶原合成采用3H-脯氨酸掺入法分析。结果：黄颜木素（6.25-50.00μmol/L）以剂量依赖方式显著抑制血小板源生长因子(PDGF)刺激的HSC-T6细胞增殖,并抑制转化生长因子β1(TGFβ1)诱导的细胞内胶原合成。结论：黄颜木素具有抑制激活的肝储脂细胞增殖和胶原合成的作用。     

血小板生长因子在NIH3T3成纤维细胞和MT3转化细胞应答中的作用

血小板生长因子(PDGF)通过促进细胞外Ca~(2 )内流,增加细胞内Ca~(2 )浓度,但在亲代NIH3T3成纤维细胞和转化的MT3细胞中,却表现出不同的作用。在亲代NIH3T3成纤维细胞中,PDGF能够抑制舒缓激肤介导的细胞内Ca~(2 )浓度增加,未能见到细胞内Ca~(2 )波动现象;而在转化的MT3细胞中,PDGF丧失了对舒缓激肽介导的细胞内Ca~(2 )浓度增加的抑制作用,常常引起细胞内Ca~(2 )波动现象。对于DNA的合成,PDGF在两种细胞中,也表现出有时程的差异。     

阻断PLC-γ1通路对TNF-α抑制胶质瘤细胞增殖并诱导其凋亡的影响

目的 探讨磷脂酶C-γ1（PLC-γ1）在肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导胶质瘤细胞凋亡中的作用。方法 应用PLC-γ1的特异性抑制剂U73122抑制SW0胶质瘤细胞PLC-γ1活性,用MTT法观察在阻断PLC-γ1通路前后,TNF-α对SWO胶质瘤细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测TNF-α诱导SWO胶质瘤细胞凋亡的情况;Western免疫印记法检测TNF-α是否激活caspase-3以及抑凋亡蛋白bcl-2表达的情况。结果 抑制PLC-γ1活性后,SWO胶质瘤细胞对低浓度TNF-α的敏感性显著增加。结论 阻断PLC-γ1通路本身虽不能直接启动凋亡,但却能增加SW0胶质瘤细胞对某些调亡因素（如TNF-α）的敏感性,其分子机制之一可能是下调抑凋亡基因bcl-2的表达。     

蛋白激酶C介导磷脂酶C-γ1参与高温诱导热休克蛋白70表达

目的 研究蛋白激酶C(PKC)是否介导磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)参与高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70(HSP70)表达的信号转导通路.方法 以基因敲除方法建立的缺失PLC-γ1基因(plcgl-/-)及野生型PLC-γ1基因(plcgl+/+)小鼠胚胎成纤维细胞为模型,Western免疫印迹-增强化学发光法检测高温诱导时PLC-γ1的磷酸化激活,PKC激酶检测试剂盒测定PKC激活程度,并以酶联免疫吸附(ELISA)法及MTT法测定PKC抑制剂白屈莱红碱(chelerthrine chloride,CH)和激活剂佛波醇-12-豆蔻酰-13乙酸(phorbol12-myristate 13-acetate,PMA)对HSPT0表达及细胞热耐力的影响.结果 plcgl+/+细胞经高温处理,PIE-γ1出现磷酸化激活、PKC活性显著增强(P<0.01);plcgl-/-细胞PKC活性也有所增强,但明显低于plcgl+/+细胞(P<0.01).PKC抑制剂或激活剂能增强或降低两种细胞热耐力,对高温引起的两种细胞HSP70合成都有明显抑制或促进作用.结论 蛋白激酶C可介导磷脂酶C-γ1参与高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70表达的信号传递.     

PLC-γ1信号通路在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨磷酸脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路对H2O2诱导的PC12细胞凋亡作用的影响.方法 利用PLC-γ1特异性抑制剂U73122(10 pμmol/L)预处理PC12细胞,阻断50 μmol/LH2O2诱导的PLC-γ1信号通路,Hoechst/P1双染观察细胞形态改变,MTT评估细胞活力,流式细胞仪分析凋亡和坏死细胞比例,DNA电泳验证细胞凋亡状态的改变.结果 H2O2对PC12细胞活力的影响呈时效和量效关系.PLC-γ1信号通路阻断后,PC12细胞出现了凋亡形态学改变,细胞活力明显降低.流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,凋亡细胞所占比例达35.7%,DNA电泳呈现明显的梯形条带.结论 PLC-γ1信号通路在50 μmol/L H2O2诱导的PC12细胞凋亡中发挥重要的保护作用.     

高糖加高胰岛素对心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 利用体外培养的乳鼠心肌成纤维细胞,观察高浓度葡萄糖加高浓度胰岛素对心肌成纤维细胞增殖的影响,并探讨其可能作用机制。方法 以培养的乳鼠心肌成纤维细胞为模型分组给药后,利用结晶紫染色法观察细胞的增殖情况;利用[^3H]thymidine标记法测定细胞DNA的合成;利用流式细胞仪分析细胞周期。结果与正常对照组相比,高糖、高胰岛素、高糖加高胰岛素组分别造成了心肌成纤维细胞数目、DNA合成及S＋G2＋M期细胞的百分比增加,（P〈0．01）,而高糖加高胰岛素组的各项指标值显著高于其它各组,（P〈0．01）。结论 高糖加高胰岛素具有协同促进心肌成纤维细胞增殖的作用。     

磷脂酶C-γ1在人胚组织中的表达

目的研究磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)在人胚组织中的表达情况。方法收集人胚组织(包括软骨、软骨膜、骨骼肌)并行石蜡包埋及切片,采用免疫细胞化学ABC染色法观察人胚组织细胞中PLC-γ1的表达情况。结果PLC-γ1在这几种细胞中均有较强的表达,主要位于胞质中。结论PLC-γ1相关的细胞内信号传递途径对于人早期胚胎细胞的发育、增殖具有重要的生物学意义。     

磷酸酯酶C—γ1对血小板生长因子介导的细胞迁移的影响

目的 生长因子诱导产生的细胞内信号分子参与调节细胞的增殖分化，磷酸脂酶C－γ1（PLC－γ1）被认为是连接生长因子和其下游信号传递分子之间的主要桥梁，但它在细胞分裂信号传递中是否必需。目前说法不一。本研究旨在阐明PLC－γ1在细胞分裂信号传导中的作用。方法 应用无内源性PLC－γ1小鼠成纤维细胞株，观察在血小板生长因子作用下细胞的迁移情况。结果 缺失PLC－γ1的细胞与正常细胞无显著差异。结论 当PLC－γ1缺乏时，在血小板生长因子作用下，成纤维细胞的迁移过程中其功能可被代偿。     

PDGF、FN诱导FHL1细胞增殖的P13K信号转导通路研究

目的 探讨血小板源性生长因子(PDGF)和纤维连接蛋白(FN)诱导人胚胎肺成纤维细胞(HFL1)增殖的磷酸酰基醇-3-激酶(P13K)信号转导通路.方法 采用不同浓度的PDGF和FN分别刺激HFL1并观察P13K抑制剂wortmannin(WMN)对PDGF、FN诱导HFL1增殖作用的影响.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况.结果 PDGF和FN对HFL1的诱导增殖作用明显,并呈剂量依赖性升高趋势,二者均在50 ng/mL时作用显著;P13K抑制剂wortmannin可抑制PDGF和FN诱导的HFL1细胞增殖.结论 PDGF和FN诱导HFL1的细胞增殖可以通过P13K信号转导途径实现.     

增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞生长差异比较

【目的】探讨增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞基因表现型的差异以及EGF、PDGF和bFGF对其的影响。【方法】测定细胞生长曲线;应用液闪计数测定成纤维细胞胶原蛋白的合成。【结果】增生性瘢痕成纤维细胞增殖速度比正常皮肤成纤维细胞慢;胶原蛋白的合成高于正常皮肤成纤维细胞。EGF、PDGF和bFGF均对两种成纤维细胞的增殖具有强烈的刺激作用。EGF和bFGF可减少增生性瘢痕成纤维细胞的胶原蛋白合成,PDGF可以使两种成纤维细胞的胶原蛋白合成增加。【结论】增生性瘢痕成纤维细胞是一种特殊基因表现型的成纤维细胞,它具有自己特殊的生物学特性。EGF、PDGF和bFGF在增生性瘢痕的形成过程中可能具有重要作用。     

重组人干扰素-γ对腭裂术后裸露骨面瘢痕成纤维细胞的影响

目的 探讨重组人干扰素γ(rhIFN-γ)对体外培养的腭裂术后裸露骨面瘢痕来源的成纤维细胞生物学作用的影响.方法 制作兔腭裂术后裸露骨面瘢痕动物模型,将rhIFN-y加入瘢痕成纤维细胞培养基内,采用MTT法测定细胞增殖率,应用流式细胞仪分析rhIFN-γ对腭裂瘢痕成纤维细胞的细胞周期生物学行为的影响;采用SPSS 13.0软件对数据进行分析.结果 和对照组比较,实验组加入rhIFN-γ后,腭裂术后裸露骨面瘢痕成纤维细胞增殖活性及DNA合成被明显抑制,S-G2-M期细胞百分数明显降低.结论 rhIFN-γ可以抑制腭裂术后裸露骨面瘢痕成纤维细胞的DNA合成及增殖,其与细胞数量改变之间有一定的剂量-效应关系,提示rhIFN-γ是成纤维细胞负性调节因子,在防治腭裂术后裸露骨面瘢痕的形成中有一定的应用价值.     

阻断磷脂酶C—γ1信号通路对大肠癌细胞凋亡的影响

目的 探讨磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路被阻断对大肠癌细胞凋亡状态的影响。方法 利用U73122(1、5、10μmol／L)处理细胞以阻断PLC-γ1信号通路，光镜、电镜观察细胞形态改变，MTT法评估细胞杀伤效应，流式细胞仪分析凋亡细胞比例。结果 PLC-γ1信号通路阻断后，大肠癌细胞出现了典型的凋亡形态学改变，存活细胞明显减少，流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰，凋亡细胞所占比例达到半数以上。结论 阻断PLC-γ1信号通路能够启动大肠癌细胞凋亡。     

阻断磷脂酶C-γ1信号通路对大肠癌细胞凋亡的影响

目的探讨磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路被阻断对大肠癌细胞凋亡状态的影响。方法利用U73122(1、5、10μmol/L)处理细胞以阻断PLC-γ1信号通路,光镜、电镜观察细胞形态改变,MTT法评估细胞杀伤效应,流式细胞仪分析凋亡细胞比例。结果PLC-γ1信号通路阻断后,大肠癌细胞出现了典型的凋亡形态学改变,存活细胞明显减少,流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,凋亡细胞所占比例达到半数以上。结论阻断PLC-γ1信号通路能够启动大肠癌细胞凋亡。     

人参皂苷-Rf诱导骨肉瘤细胞DNA损伤和修护受损的人成纤维细胞研究

目的:探讨人参皂苷-Rf对骨肉瘤细胞和人成纤维细胞是否具有细胞凋亡和DNA损伤的作用。方法:体外培养骨肉瘤细胞系(MG-63,U-2OS,HOS和SAOS-2)和人成纤维细胞;利用MTT法检测人参皂苷-Rf对骨肉瘤细胞系和人成纤维细胞增殖的影响;再用彗星电泳和γH2AX焦点实验检测人参皂苷-Rf诱导MG-63和U-2OS细胞的DNA损伤作用;最后利用DNA梯度实验观察人参皂苷-Rf对受损人成纤维细胞的修护作用。结果:MTT显示人参皂苷-Rf对骨肉瘤细胞增殖有抑制作用。人参皂苷-Rf诱导骨肉瘤MG-63、U-2OS细胞凋亡和DNA损伤,随浓度和处理时间增加而显著增加;进一步发现人参皂苷-Rf可修复和保护发生DNA损伤和凋亡(MNNG诱导)的人成纤维细胞。结论:人参皂苷-Rf可抑制骨肉瘤细胞的增殖,同时保护和修复受损的正常细胞。因此人参皂苷-Rf不仅可以作为抗癌药物使用,同时与其它抗癌药物配合使用可以有效的降低抗癌药物对正常细胞的副作用,保护正常细胞,使抗癌药物更好的发挥作用。     

磷脂酶C—γ1和γ2在PDGF促成纤维细胞克隆形成中的不同作用

目的 探讨磷酯酶Cγ1和γ2（PLC－γ1和γ2）在血小板源性生长因子（PDGF）诱导小鼠成纤维细胞克隆形成信号传导中的作用。方法 将全长PLCγ2cDNA亚克隆进真核细胞表达载体，转染小鼠成纤维细胞株PLC－γ1－／－和PLC－γ1^ / ，使PLC－γ2在成纤维细胞中表达，同时以未插入目的基因的空载体转染这两种细胞作为实验对照。用有限稀释法随机挑选几个单细胞克隆，经Western Blotting鉴定其PLC－γ2表达量，转染细胞及其相应对照被用来测量克隆形成能力。结果 PLC－γ2可在PDGF的作用下活化，对克隆形成有显的正调控作用，而PLC－γ1基因对克隆形成无任何影响。并且γ2利于细胞低密度时的存活，因而，PLC－γ2可显促进低密度细胞的克隆形成,γ1可能有相反作用。结论 PLC－γ1和γ2在PDGF诱导小鼠成纤维细胞克隆形成中的有不同作用。     

黑色素细胞培养上清液对增生性瘢痕成纤维细胞的生物学效应

目的　观察正常的黑色素细胞 ( MC)对增生性瘢痕成纤维细胞 ( HSFib)的生物学效应 .方法　收集 MC的上清液按不同的浓度加入培养的 HSFib中 ,MTT法测定细胞的增殖率 ,3H- Td R参入法测定细胞 DNA合成率 .结果　加入MC上清液的 HSFib,培养 48h后 ,较正常对照组 ,实验组细胞增殖明显 ( P<0 .0 5 ) .DNA合成率各实验组 (除 MC1组外 )与对照组相差显著 ( P<0 .0 1) ,但高浓度组 ( 75 % )的合成率有下降趋势 .结论　 MC细胞可能分泌活性物质促进 HSFib细胞 DNA合成及殖增 ,可能与烧伤后瘢痕形成及色素形成有关