PLC—γ1对血小板生长因子介导的细胞增殖的影响

目的观察磷酸脂酶C－γ1（PLC－γ1）对血小板生长因子（PDGF）介导的细胞增殖的影响。方法 应用无内源性PLC－γ1小鼠成纤维细胞株,观察在PDGF作用下细胞增殖情况（包括细胞内钙离子动员及DNA合成）,并与正常细胞株对照。结果 缺失PLC－γ1的细胞与正常细胞DNA合成显著增强,均出现细胞内钙动员;但PLC－γ1^-/-细胞DNA合成时间显著延长,钙流较PLC－γ1 / 值小且峰值出现较晚（P＜0．01）。结论 PLC－γ1在PDGF作用下成纤维细胞的增殖过程中有重要作用,当其缺乏时功能可被其他途径代偿。     

磷酸酯酶C—γ1对血小板生长因子介导的细胞迁移的影响

目的 生长因子诱导产生的细胞内信号分子参与调节细胞的增殖分化，磷酸脂酶C－γ1（PLC－γ1）被认为是连接生长因子和其下游信号传递分子之间的主要桥梁，但它在细胞分裂信号传递中是否必需。目前说法不一。本研究旨在阐明PLC－γ1在细胞分裂信号传导中的作用。方法 应用无内源性PLC－γ1小鼠成纤维细胞株，观察在血小板生长因子作用下细胞的迁移情况。结果 缺失PLC－γ1的细胞与正常细胞无显著差异。结论 当PLC－γ1缺乏时，在血小板生长因子作用下，成纤维细胞的迁移过程中其功能可被代偿。     

磷酸脂酶C-γ1对血小板生长因子介导的细胞迁移的影响

目的生长因子诱导产生的细胞内信号分子参与调节细胞的增殖分化,磷酸脂酶Ｃ－γ１（ＰＬＣ－γ１）被认为是连接生 长因子和其下游信号传递分子之间的主要桥梁,但它在细胞分裂信号传递中是否必需,目前说法不一。本研究旨在阐明 ＰＬＣ－γ１在细胞分裂信号传导中的作用。方法应用无内源性ＰＬＣ－γ１小鼠成纤维细胞株,观察在血小板生长因子作用 下细胞的迁移情况。结果缺失ＰＬＣ－γ１的细胞与正常细胞无显著差异。结论　当ＰＬＣ－γ１缺乏时,在血小板生长因子作 用下,成纤维细胞的迁移过程中其功能可被代偿。     

PLC-γ1信号通路在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨磷酸脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路对H2O2诱导的PC12细胞凋亡作用的影响.方法 利用PLC-γ1特异性抑制剂U73122(10 pμmol/L)预处理PC12细胞,阻断50 μmol/LH2O2诱导的PLC-γ1信号通路,Hoechst/P1双染观察细胞形态改变,MTT评估细胞活力,流式细胞仪分析凋亡和坏死细胞比例,DNA电泳验证细胞凋亡状态的改变.结果 H2O2对PC12细胞活力的影响呈时效和量效关系.PLC-γ1信号通路阻断后,PC12细胞出现了凋亡形态学改变,细胞活力明显降低.流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,凋亡细胞所占比例达35.7%,DNA电泳呈现明显的梯形条带.结论 PLC-γ1信号通路在50 μmol/L H2O2诱导的PC12细胞凋亡中发挥重要的保护作用.     

阻断PLC-γ1通路对TNF-α抑制胶质瘤细胞增殖并诱导其凋亡的影响

目的 探讨磷脂酶C-γ1（PLC-γ1）在肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导胶质瘤细胞凋亡中的作用。方法 应用PLC-γ1的特异性抑制剂U73122抑制SW0胶质瘤细胞PLC-γ1活性,用MTT法观察在阻断PLC-γ1通路前后,TNF-α对SWO胶质瘤细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测TNF-α诱导SWO胶质瘤细胞凋亡的情况;Western免疫印记法检测TNF-α是否激活caspase-3以及抑凋亡蛋白bcl-2表达的情况。结果 抑制PLC-γ1活性后,SWO胶质瘤细胞对低浓度TNF-α的敏感性显著增加。结论 阻断PLC-γ1通路本身虽不能直接启动凋亡,但却能增加SW0胶质瘤细胞对某些调亡因素（如TNF-α）的敏感性,其分子机制之一可能是下调抑凋亡基因bcl-2的表达。     

脂蛋白脂酶对VLDV致肾小球系膜细胞增殖和血小板原性生长因子-A mRNA表达影响

目的 :探讨脂蛋白脂酶 (L PL)对极低密度脂蛋白 (VL DL)引起的肾小球系膜细胞增殖和细胞因子血小板原性生长因子 (PDGF) - A m RNA表达的影响。方法 :采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定不同浓度 L PL对 VL DL引起的肾小球系膜细胞的影响 ;逆转录 - PCR伴还原磷酸甘油醛脱氢酶 (GAPDH)同管共扩增方法检测 L PL 对VL DL引起的肾小球系膜细胞 PDGF- A m RNA表达的影响。结果 :(1) VL DL对系膜细胞的作用存在一定的剂量—效应的线性增殖关系 (r=0 .989,P<0 .0 1) ;L PL 组与不加入组相比有统计学意义 (P<0 .0 1) ,在 L PL 浓度为 3μg·ml- 1 对系膜细胞的增殖作用较其它浓度显著 ;VL DL 与 L PL 的交互作用存在 (P<0 .0 1)且呈协同关系。(2 ) VL DL 组、L PL 组及 VL DL L PL 组系膜细胞的 PDGF- A m RNA表达均高于对照组 (P<0 .0 1) ,与对照组相比分别为 1.4倍、1.7倍和 2 .5 3倍。 VL DL与 L PL的交互作用存在 (P<0 .0 1) ,VL DL增加系膜细胞的 PDGF- A m RNA表达可因L PL 的存在而增强约 5倍。结论 :L PL能增强 VL DL 引起的系膜细胞增殖及细胞因子 PDGF- A m RNA的表达     

磷脂酶C-γ1和γ2对成纤维细胞生长及增殖的影响

目的 观察磷脂酶C-γ1和γ2基因在血小板源性生长因子(PDGF)诱导的成纤维细胞生长和增殖信号转导中的作用。方法 测定PDGF刺激后，敲除磷脂酶C-γ1基因的细胞株及其转染磷脂酶C-γ2基因后的生长和增殖能力，并对数据进行统计学分析。结果 磷脂酶C-γ1和γ2在PDGF引起的细胞生长、增殖信号转导中均有正调控作用，并不是必需的因素，两者有协同作用，但各自的作用力度和时期不同，γ1作用显著，γ2作用较弱且较晚；磷脂酶C-γ1对DNA合成和细胞周期进程有重要影响，缺失时，细胞G1和S期缩短，DNA合成能力增强；γ2对DNA合成无显著影响，但在野生型成纤维细胞中表达时，可使S期提前并相对延长。结论 在成纤维细胞中，磷脂酶C-γ1和γ2对细胞生长和增殖的影响各不相同，有相同处，起不同程度的协同作用；又有不同处，不能相互取代。     

血小板衍生生长因子对缺氧肺动脉平滑肌细胞增殖作用的研究近况

肺血管结构改建是缺氧性肺动脉高压(PHT)形成的重要基础,主要表现形式是中膜平滑肌的增殖及迁移,其中心环节是平滑肌细胞的增殖,而平滑肌细胞的增殖依赖于多种生长因子的作用,尤其是血小板衍生生长因子(PDGF).[1]本文就PDGF在缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用,综述如下.     

磷脂酶C—γ1和γ2在PDGF促成纤维细胞克隆形成中的不同作用

目的 探讨磷酯酶Cγ1和γ2（PLC－γ1和γ2）在血小板源性生长因子（PDGF）诱导小鼠成纤维细胞克隆形成信号传导中的作用。方法 将全长PLCγ2cDNA亚克隆进真核细胞表达载体，转染小鼠成纤维细胞株PLC－γ1－／－和PLC－γ1^ / ，使PLC－γ2在成纤维细胞中表达，同时以未插入目的基因的空载体转染这两种细胞作为实验对照。用有限稀释法随机挑选几个单细胞克隆，经Western Blotting鉴定其PLC－γ2表达量，转染细胞及其相应对照被用来测量克隆形成能力。结果 PLC－γ2可在PDGF的作用下活化，对克隆形成有显的正调控作用，而PLC－γ1基因对克隆形成无任何影响。并且γ2利于细胞低密度时的存活，因而，PLC－γ2可显促进低密度细胞的克隆形成,γ1可能有相反作用。结论 PLC－γ1和γ2在PDGF诱导小鼠成纤维细胞克隆形成中的有不同作用。     

血小板生长因子对肌醇磷酸代谢的影响

血小板生长因子（ＰＤＧＦ）能明显地影响细胞肌醇磷酸代谢，在亲代ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞（简称ＮＩＨ３Ｔ３细胞）和多瘤病毒ｍｉｄｄｌｅＴ抗原转化的ＮＩＨ３Ｔ３成纤维（简称ＭＴ３细胞）中，表现出不同的应答。在ＮＩＨ３Ｔ３细胞中，ＰＤＧＦ刺激１ｍｉｎ时，表现为肌醇－１、４、５－三磷酸［Ｉｎｏｓｉｔｏｌ１，４，５－Ｔｒｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ；Ｉｎｓ（１，４，５）Ｐ３］明显地增加并达到峰值，持续时间的３￣４ｍ     

血小板衍生生长因子-BB激活Rac1对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖与迁移的影响

目的 探讨Rac1活化在血小板衍生生长因子(PDGF-BB)刺激引起的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖与迁移中的作用.方法 贴块法分离培养主动脉平滑肌细胞,CCK8法和Transwell小室检测Rac1抑制剂NSC23766和Rac1siRNA对PDGF-BB诱导的平滑肌细胞增殖和迁移的影响.GST-pulldown法和免疫印迹(Western印迹)检测PDGF-BB对Rac1活性和pi-JNK表达的时间特性以及NSC23766和Rac1 siRNA对Rac1活性和pi-JNK表达的影响.结果 PDGF-BB(50 μg/L)显著促进了大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖和迁移.在给予不同浓度NSC23766( 25、50、100 μg/L)以及Rac1 siRNA( 50 nmol/L)后,其增殖和迁移显著受到了抑制.PDGF-BB刺激后Rac1活性和pi-JNK逐渐升高,并分别在5 min和15 min达到最高峰后下降.给予NSC23766和Rac1 siRNA处理后Rac1活性(5 min)和pi-JNK( 15 min)表达均明显受到了抑制.结论 Rac1活性影响JNK磷酸化并在调节PDGF-BB诱导的主动脉平滑肌细胞增殖与迁移中起着重要的作用.     

血小板衍生生长因子-BB和转化生长因子-β对人牙周膜细胞增殖的影响

目的探讨血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)和转化生长因子-β(TGF-β)对人牙周膜(PDL)细胞增殖的影响。方法体外培养人PDL细胞,与不同浓度的PDGF-BB、TGF-β或PDGF-BB+TGF-β作用,用噻唑盐(MTT)法观察PDL细胞增殖的情况。结果PDGF-BB和TGF-β均明显促进PDL细胞增殖,在1～50ng/ml和5d范围内,呈浓度-时间依赖关系,PDGF-BB最佳效应时间为3d,最佳效应浓度为10ng/ml,其增殖比对照组增加了256.1%(P<0.001),TGF-β最佳效应时间为4d,最佳效应浓度为5ng/ml,比对照组增加了187.7%(P<0.01),在时间上TGF-β的促增殖作用晚于PDGF-BB。PDGF-BB与TGF-β联合应用时,二者有协同作用,可非常显著地促进PDL细胞增殖,其最大效应作用发生在用药后3d,此时与对照组相比增加了326.9%(P<0.001)。结论PDGF-BB、TGF-β可促进人PDL细胞的增殖,二者联合应用有协同效应。     

血小板衍化生长因子对离体牙周膜细胞增殖的影响

目的：探讨血小板衍化生长因子-β（Platelet-derived growth factor-β，PDGF-β）对离体人牙周膜细胞（periodontal ligament cells,PDLCs)增殖的影响。方法：体外培养人PDLCs，与不同浓度的的PDGF-β作用，用噻唑蓝（MTT）比色法进行观察。结果：PDGF-β作用后PDLCs的增殖较对照组有明显的升高，而且具有浓度效应。结论：PDGF-β可促进离体人PDLCs的增殖。     

转化生长因子-β1对人眼眶成纤维细胞增殖的影响

目的：观察转化生长因子β1(TGF—β1)对人眼眶成纤维细胞(orbital fibroblasts．OFs)增殖的影响．探讨增殖性玻璃体视网膜病变(proljferative vitreoretinopathy．PVR)的发病机制。方法：OFs体外培养，用不同浓度TGF—β1(0.1、1.0、5．0、10．0、100．0μg／L)对细胞进行处理。计算细胞的数量，绘制细胞生长曲线；椎虫蓝染色计算活细胞比例、MTT比色法测定吸光度(A)值：流式细胞仪(FCM)检测细胞周期分布。结果：0．1、1．0、5、0、10、0μLg／L的TGF-β1作用后OFs生长曲线上移，活细胞数增加，A值上升，处于增殖期(S G2)的细胞比例增多。100.0μg／L的TGF-β1对OFs作用相反。结论：TGF-β1对人眼眶成纤维细胞增殖有双相调节性．其不同作用的发挥依赖TGF—β1的浓度，TGF—β1的促成纤维细胞的增殖作用可能诱发PVR。     

大鼠功能性下颌前伸后髁突软骨骨化前后PLC-γ1的变化研究

目的 探讨磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLC-γ1)在功能性下颌前伸后大鼠髁突后部软骨骨化过程中的作用机制.方法 60只4周龄健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,适应性饲养1周,建立SD大鼠下颌前伸模型,随机等量分为2组,实验组24 h/d佩戴自制下颌前伸斜面导板矫治器,对照组不...     

转化生长因子β1基因对骨髓基质干细胞增殖分化的影响

目的 观察转化生长因子β1（TGF－β1）基因能否转入骨髓基质干细胞（MSCs)，并探讨经TGF－β1基因转染后的MSCs增殖和分化情况。方法 取新西兰雄性大耳白兔的骨髓，得骨髓源MSCs体外培养。将重组TGF－β1和空载pcD-NA3基因分别转染MSCs后，免疫组化（SABC）法检测TGF－β1转染是否成功，用透射电镜和流式细胞仪观察两组MSCs的增殖和分化情况。结果 SABC法证明TGF－β1瞬间转染成功；转染48h后，实验组MSCs增殖较对照组显著；实验组MSCs具有一定的分化趋势。结论 重组TGF－β1基因转入骨髓源MSCs的方法是可行的，瞬间TGF－β1转染对MSCs的增殖和分化有显著促进作用。     

血小板衍生生长因子诱导人血管平滑肌细胞增殖时钙调素的变化

目的:观察血小板衍生生长因子(PDGF)对培养的人血管平滑肌细胞增殖及钙调素含量变化的作用.方法:应用3H-TdR掺入法和磷酸二酯酶法,观察不同浓度(1、10、20、30、40 ng/ml)PDGF-BB对培养的人血管平滑肌细胞DNA合成和钙调素含量变化的影响及其时间效应.结果:不同浓度PDGF-BB作用后,处于静止状态的人血管平滑肌细胞DNA的合成增加,并呈现明显的浓度依赖关系,在40 ng/ml浓度时DNA的合成达到高峰(P＜0.01).平滑肌细胞在进入细胞增殖周期后,细胞内钙调素含量逐渐增加,在9 h时出现一个短暂的高峰,随后逐渐下降;不同浓度PDGF-BB作用后,钙调素含量增加,并呈现出明显的浓度依赖关系,30 ng/ml浓度时作用最为显著(P＜0.01).结论:PDGF可促进培养的人血管平滑肌细胞增殖,该作用可能与增加钙调素含量有关.     

Wortmannin与U73122对缺失磷脂酶C-γ_1细胞迁移的影响

0　引　　言　　磷脂酶 C-γ1 (phospholipase C-γ1 ,PL C-γ1 )与三磷酸肌醇激酶 (phosphatidylinositol- 3kinase,PI- 3K)是生长因子介导的信号传递过程中的两个重要信号分子。尽管敲除 plcgl基因后的小鼠不能正常发育 ,并于胚胎第 9天死亡 [1 ] ;缺失PL C- γ1 小鼠胚胎成纤维细胞 (PL C- γ1 - /- )在体外却能正常生长 ,且在表皮生长因子 (epiderm al growth factor,EGF)刺激下其受体激活与内吞、DNA合成、迁移能力等与正常细胞(PL C-γ1 + /+ )相似 [2 ] 。但 PL C-γ1 - /- 并不出现其近亲 PL C-γ2的代偿表达 ,PL C- …     

腺病毒介导p55γ基因N末端的过表达对胃癌细胞增殖的影响

目的：通过腺病毒介导,研究磷脂酰肌醇3-激酶p55γ调节亚基N末端24个氨基酸的过表达对胃癌MGC803细胞生长增殖的影响。方法：在HEK293细胞中扩增重组腺病毒Ad—N24-GFP以及空载体病毒Ad—GFP,并进行病毒滴度以及腺病毒对胃癌细胞感染率的测定,免疫印迹方法鉴定重组腺病毒感染MGC803细胞后融合蛋白N24-GFP的表达。通过细胞生长曲线和克隆形成实验观察Ad—N24-GFP对细胞增殖的影响。结果：重组腺病毒经过感染HEK293细胞后大量扩增,病毒滴度测定为1．0&#215;10^10pfu／ml,重组腺病毒对MGC803细胞的感染率在感染复数（MOI）为100时最强。与空载体细胞相比较,N24-GFP的高表达明显抑制MGC803细胞的生长,且抑制程度随病毒感染复数的增加呈逐渐增强的趋势;感染Ad—N24-GFP组细胞的克隆形成率[（28．30&#177;3．25）％]明显低于对照组细胞[（42．16&#177;2．84）％,P〈0．05]。结论：腺病毒介导N24p55γ基因的过表达能抑制胃癌细胞MGC803的增殖,其在胃癌基因治疗上可能具有潜在的应用前景。