三氧化二砷对胶原诱导关节炎大鼠及滑膜细胞的作用

类风湿关节炎（RA）是常见的风湿病之一，有研究表明，促进RA的细胞凋亡可能是未来治疗RA的重要方法之一。我们意外地观察到，急性早幼粒白血病合并RA的患者应用三氧化二砷（ATO）治疗后，在白血病缓解的同时，RA的关节损害症状也明显减轻。为探索新的有效治疗RA的药物及其作用机制，本研究观察了ATO对胶原诱导关节炎（CIA）大鼠滑膜组织细胞的凋亡作用、细胞因子的改变及ATO体外诱导人RA成纤维样滑膜细胞（HFLS-RA）的凋亡作用及机制。     

类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡研究进展

类风湿关节炎（rheumatiod arthritis,RA）成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）是关节滑膜细胞中主要的一种,可以释放多种细胞因子,并可因环境变化发生演变,存在异常凋亡与增殖.RA FLS凋亡不足与RA的发病有关.本文就RA FLS凋亡信号传导途径以及凋亡调控作一综述.     

三氧化二砷对类风湿关节炎滑膜细胞增殖及分泌作用的影响

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对体外培养的RA滑膜成纤维细胞的增殖及分泌功能的影响.方法 体外培养RA滑膜成纤维细胞,用含As2O3浓度分别为0、0.5、2、5 μmol/L的培养液分别作用于培养细胞,24 h后检测上清液TNF-α和IL-1的水平;采用TUNEL法和流式细胞仪测定细胞增殖情况.结果 As2O3作用组TNF-α及IL-1水平均较对照组降低(P<0.05),随浓度梯度的增加作用增强.TUNEL法检测细胞增殖,As2O3作用第3天后各实验组均明显低于对照组(P<0.05),且其作用呈剂量依赖性.滑膜细胞细胞周期在As2O3作用组均与对照组有明显差异,其变化亦呈剂量依赖性.结论 As2O3可促进RA滑膜B型细胞增殖,抑制TNF-α及IL-1的表达.     

三氧化二砷对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡影响的体外研究

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞的凋亡异常,以及三氧化二砷(As_2O_3)对体外培养RA的滑膜细胞凋亡的诱导作用.方法 用光镜、电镜、流式细胞仪检测As_2O_3对体外培养的RA滑膜细胞凋亡的诱导作用,As_2O_3,作用于RA滑膜后酶联免疫吸附试验(ELISA)检测凋亡过程中细胞色素C的变化,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Caspase-3.Bel-2 mRNA表达,采用单因素方差分析和LSD-t检验、Dunnet-t检验进行统计学处理.结果 流式细胞仪检测发现不同浓度的As_2O_3作用后,滑膜细胞的凋亡较空白对照组(NC)增加[NC(0.95±0.87)%,RA(0.21±0.12)%,P<0.05],呈一定的剂量依赖性,尤其以80 μmol/L药物浓度最为明显.凋亡早期(6 h)细胞色素C水平升高80 μmol/L组升高明显[NC(0.34±0.27),80 μmol/L组(32.04±1.62),P<0.05];不同浓度的As_2O_3作用后细胞中Caspase-3 mRNA表达显著增强[NC(0.144±0.022),RA(0.323±0.047),(0.824±0.109),(1.213±0.196),P<0.05],Bcl-2的mRNA表达显著减弱[NC(1.08±0.23),RA(0.94±0.15),(0.46±0.08),(0.22±0.06),P<0.05].结论 RA患者滑膜细胞凋亡较健康埘照减少,As_2O_3通过升高细胞色素c及Caspase-3,抑制Bcl-2诱导RA滑膜细胞凋亡.     

类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞诱导分化的体外研究

目的 研究类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）体外培养时的增生分化特点及细胞分化诱导剂全反式维甲酸（ATRA）、骨化三醇[1，25（OH）2D3]地塞米松（DEX）对RA—FLS增殖分化的影响。方法 关节镜、关节活检针取RA患者滑膜组织或抽取RA患者关节积液分离培养鉴定滑膜细胞．四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和流式细胞仪法分别观察ATRA、骨化三醇和地塞米松对FLS细胞存活分数（SF）和细胞周期的影响。结果 RA—FLS在体外无诱导剂作用时呈现良性增殖方式。ATRA、骨化三醇和地塞米松对FLS的细胞标记和免疫染色无明显影响。三种诱导剂对RA—FLS的SF值均有不同程度的抑制（P〈0．05），其中地塞米松抑制作用最明显；骨化三醇和地塞米松对RA—FLS的SF抑制作用呈现剂量依赖性曲线（P〈0．01）。三种诱导剂均促使RA—FLS细胞周期改变即凋亡峰出现、S期缩短。结论 体外培养的RA—FLS生长特性为非恶性无限制增生。ATRA、骨化三醇和地塞米松抑制RA—FLS细胞增殖，促进细胞分化，诱导FLS凋亡，其中地塞米松抗增殖作用最明显；但未发现三者将FLS诱导分化为其他类型细胞。     

白芍总苷对类风湿关节炎滑膜细胞增殖及分泌作用的研究

【摘要】目的研究白芍总苷（TGP）对类风湿关节炎（RA）患者滑膜细胞增殖和分泌细胞因子的影响及作用机制。方法TGP作用于体外培养的RA患者膝关节滑膜细胞，并以骨关节炎（OA）患者为对照。四甲基偶氮唑蓝（mrr）法比较细胞增殖，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养上清液中自细胞介素（IL）一1B、肿瘤坏死因子（TNF）一0【浓度变化。结果TGP浓度分别在2．5la,g／ml和12．5la,g／ml时对RA和OA抑制作用最强．而在其高浓度时反而对细胞增殖有促进作用。TGP对RA的抑制率显著高于其对OA的抑制。12．5la,g／ml的TGP对RA滑膜细胞分泌IL一1的水平有显著性的抑制作用，但对0A滑膜细胞无明显抑制作用。结论TGP对RA患者滑膜细胞异常增殖和分泌炎性因子均有抑制作用，并均优于其对OA的作用。提示TGP通过调节细胞增殖和细胞因子分泌而起到治疗作用。     

类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞表观遗传学研究进展

RA是一种以免疫功能障碍和慢性炎症为特征的关节疾病。成纤维样滑膜细胞（FLS）是位于关节囊的内层并介导RA关节破坏的主要细胞,其在RA疾病过程中扮演重要角色。而表观遗传因素能够影响FLS的基因表达,从而对RA的发生发展起到重要的调控作用。表观遗传调控机制主要包括DNA修饰、组蛋白翻译后修饰和非编码RNA调控。随着基因测...     

C-myc反义寡脱氧核苷酸抑制类风湿滑膜细胞增生诱导滑膜细胞凋亡

目的 研究硫代磷酸化修饰的c—myc反义寡脱氧核苷酸(antisens phosphorothioate oligodeoxynucleotides，ASP-ODN)在血清存在条件下对培养的人类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)滑膜B型细胞增生的影响及诱导凋亡的作用。方法 培养RA滑膜B型细胞，合成c—myc AS P-ODN，以阳离子脂质体。lipofectin为载体转染滑膜B型细胞，用显微镜观察和四唑盐(MTT)法检测对细胞增生的抑制作用，用荧光染色、荧光显微镜、流式细胞仪检测诱导细胞凋亡和c—myc蛋白表达的变化。结果c—myc AS P-ODN呈序列特异性抑制滑膜B型细胞增生并下调c—myc蛋白表达，诱导滑膜B型细胞凋亡。结论 c—myc AS P-ODN可能对RA的滑膜增生性炎症具有潜在的治疗作用，c—myc原癌基因可能成为反义核酸技术治疗RA的靶基因。     

类风湿关节炎滑膜中促凋亡基因PDCD5的表达

目的 探讨类风湿关节炎(RA)发病机制中促凋亡基因PDCD5的表达与作用.方法 采用实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot方法来检测RA滑膜组织中PDCD5在mRNA和蛋白水平的表达,免疫组织化学检测PDCD5在滑膜内的表达特征,用骨关节炎(OA)患者滑膜标本作对照.结果 RA滑膜组织中PDCD5 mRNA的表达为1.3±0.9,与OA滑膜组织(4.3±2.7)相比低了约4倍(P＜0.05),二者之间的差异有统计学意义.Western blot检测结果表明与OA滑膜组织相比较,RA滑膜组织中PD-CD5蛋白水平的表达较低.免疫组织化学染色显示在RA滑膜组织与OA滑膜组织之间PDCD5蛋白有不同的表达特征,RA滑膜组织阳性染色强度明显弱于OA滑膜组织,其增生滑膜表现为分散的PDCD5阳性染色,主要集中在衬下层而不是衬里层,衬下层主要分布为成纤维样滑膜细胞,而在OA滑膜中PDCD5阳性染色主要集中在衬里层,衬下层PDCD5表达的细胞较少.结论 在RA滑膜细胞凋亡过程中PDCD5表现为下调,至少部分地减少了RA滑膜组织凋亡.     

NF-κB信号通路的阻断对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡与炎症的影响

目的探讨核因子(NF)-κB信号通路的阻断对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞凋亡与炎症的影响。方法分离正常滑膜组织及RA滑膜组织中成纤维滑膜细胞(FLS),分为正常FLS组(正常组),RA FLS组(模型组),NF-κB抑制剂(PDTC)低、中、高剂量组(2,5,10μmol/L)(PDTC组)。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测PDTC对RA FLS细胞活力的影响,Annexin V-FITC流式双染检测各组细胞凋亡情况,酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α,白介素(IL)-1β含量,Western印迹检测各组细胞中环氧化酶(COX)-2,Bax,Bcl-2蛋白的表达。结果与模型组比较,PDTC低、中、高剂量组能显著抑制RA FLS活力,诱导RA FLS凋亡,抑制RA FLS细胞释放TNF-α、IL-1β因子,下调COX-2和Bcl-2表达,上调Bax表达(均P0.05)。结论阻断NF-κB信号通路能够显著抑制RA FLS细胞炎症并诱导细胞凋亡。     

氧化型低密度脂蛋白促进类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖及炎性因子mRNA表达的研究

目的:探讨氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)对RA患者成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖及炎性因子mRNA表达的影响。方法:采用组织块贴壁法分离培养RA-FLS,4~6代细胞用于后续实验。不同浓度的人Ox-LDL刺激RA-FLS 24 h,MTS实验检测细胞增殖情况,实时(RT)-PCR法检测炎性因子IL-6、TGF-β、IL-8、TNF-α及清道夫受体CD36、结合磷脂酰丝氨酸和氧化脂蛋白的清道夫受体(SR-PSOX)mRNA表达水平。siRNA特异性敲减SR-PSOX,RT-PCR法检测敲减效果,同时验证SR-PSOX基因敲减后各相关基因的表达。统计学分析采用t检验,F检验。结果:不同浓度Ox-LDL(10、25、50μg/ml)可明显促进RA-FLS的增殖,其吸光度(A)值(490 nm)分别为:(1.04±0.15)、(1.05±0.14)、(1.00±0.10),均高于对照组(0.81±0.04),差异有统计学意义(F=4.737,P<0.01)。在炎性因子mRNA表达方面,与对照组相比较,50μg/ml和100μg/ml Ox-LDL可显著促进IL-6 mRNA的表达(F=14.709,P<0.01);不同浓度Ox-LDL均可抑制RA-FLS中TGF-βmRNA的表达(F=299.074,P<0.01),而对IL-8、TNF-αmRNA的表达无明显影响。进一步的机制探讨发现Ox-LDL可促进RA-FLS高表达SR-PSOX(F=68.636,P<0.01),并抑制CD36的表达(F=18.085,P<0.01)。siRNA特异性敲减SR-PSOX,可显著抑制Ox-LDL刺激RA-FLS表达IL-6 mRNA(t=3.875,P<0.01),而对TGF-βmRNA表达水平无显著影响(t=-0.193,P>0.05)。结论:Ox-LDL可显著促进RA-FLS的增殖,同时Ox-LDL可能通过上调SR-PSOX的表达促进了IL-6 mRNA的表达,提示Ox-LDL可能参与了RA的滑膜增生及炎症持续过程。     

Cyr61 participates in the pathogenesis of rheumatoid arthritis via promoting MMP-3 expression by fibroblast-like synoviocytes

Objectives: The aim of this study was to investigate the effect and potential mechanism of Cysteine-rich 61 (Cyr61) on stimulating MMP-3 expression by fibroblast-like synoviocytes (FLS) from rheumatoid arthritis (RA) patients.

Methods: Primarily cultured RA FLS were treated with exogenous Cyr61 protein or Cyr61-siRNA, then, MMP-3 expression was analyzed by real-time PCR, western blotting and ELISA. Signal transduction pathways in Cyr61-induced MMP-3 production were examined by real-time PCR, western blotting, confocal microscopy, luciferase reporter assay. Mice with collagen-induced arthritis (CIA) were treated with anti-Cyr61 monoclonal antibodies (mAb), or IgG1 as control and MMP-3 in the joint was detected by IHC, real-time PCR and western blotting.

Results: High expressed MMP-3 and Cyr61 were positively correlated in RA ST; Cyr61 stimulated MMP-3 production in FLS of RA patients in an IL-1β and TNF-α independent manner. Cyr61 induced MMP-3 could further enhance the invasive ability of RA FLS. Mechanistically, we found that Cyr61 promoted MMP-3 production via the P38, JNK-dependent AP-1 signaling pathway. Blockage of Cyr61 function with monoclonal antibody could decrease MMP-3 expression in the joints of CIA mice.

Conclusion: This study provides new evidence that Cyr61 participates in RA pathogenesis not only as a pro-inflammatory factor but also plays a key role in bone erosion via promoting MMP-3 expression. We suggest that targeting of Cyr61 may represent a potential strategy in RA treatment.     

肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂诱导成纤维样滑膜细胞合成基质金属蛋白酶-1机制的研究

目的 通过研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂(TWEAK)诱导类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)合成基质金属蛋白酶(MMP)-1过程中的作用,探讨TWEAK参与RA发病的机制.方法 将重组TWEAK与FLS共培养,对经或未经SB203580预处理的FLS,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养液中MMP-1水平;应用Western-blot法检测FLS中p-p38MAPK和P65的表达.结果 100 ng/ml的TWEAK能够明显诱导RAFLS合成MMP-1;SB203580能够部分抑制TWEAK诱导RA FLS合成的MMP-1;TWEAK作用于RAFLS,能够使D38MAPK磷酸化,并使细胞核内P65蛋白表达增加.结论 TWEAK诱导RA FLS合成MMP-1过程中,p38MAPK信号通路处于激活状态,并诱导核因子(NF)-κB的表达.     

脐带间充质干细胞对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞基质金属蛋白酶的影响

目的探讨脐带间充质干细胞（UCMSCs）对 RA 滑膜成纤维细胞（FLSs）分泌 MMPs 的影响。方法 Wistar 大鼠制作胶原诱导关节炎（CIA）模型,第17天尾静脉输注1×106 UCMSCs,第42天处死大鼠后收集滑膜组织提取 RNA,实时荧光定量 PCR 检测滑膜组织 MMP-1、MMP-3、MMP-13的表达水平。取行膝关节置换术的 RA 和 OA 患者滑膜组织,分离培养 FLSs,比较 RA 与 OA FLSs 的 MMP-1、MMP-3和 MMP-13的表达水平。将 RA FLSs 与 UCMSCs 用 Transwell 小室共培养72 h,配对 t 检验比较共培养前后 FLSs 的 MMPs 表达水平变化及上清中 MMPs 含量,并检测 UCMSCs 在共培养过程中分泌的可溶性细胞因子水平。向培养体系中加入可溶性细胞因子的抑制剂后观察 FLSs 表达 MMPs 水平变化。2组间比较采用 t 检验,而3组及以上之间比较采用单因素方差分析。结果 CIA 大鼠滑膜组织较正常鼠高表达 MMP-1（6.9±5.4,1.3±1.4,P<0.05）、MMP-3（6.0±6.5,1.4±1.0,P<0.05）和 MMP-13（21.8±20.8,1.5±1.6, P<0.05）,UCMSCs 治疗后与未治疗组及成纤维细胞治疗组比较,滑膜组织 MMP-1（1.3±1.4,6.9±5.4,8.7±6.8,P<0.05）、MMP-3（1.4±1.5,6.0±6.5,6.0±5.7,P<0.05）和 MMP-13（3.0±3.2,22±21,22±26,P<0.05）均表达下调。 RA 患者 FLSs MMP-1（1.8±0.9,0.9±0.7,t=2.44,P<0.05）、MMP-3（2.6±1.7,1.1±1.0,t=2.25,P<0.05）和MMP-13（2.4±2.3,0.6±0.7,t=2.37,P<0.05）水平明显高于 OA 患者。经 UCMSCs 体外共培养后,MMP-13（1.3±1.2,0.9±1.2,t=3.63,P<0.05）水平下调,而 MMP-1（1.5±1.4,6.6±6.0,t=3.90,P<0.05）、MMP-3（7±17,22±35,t=2.86,P<0.05）上调。共培养后 UCMSCs 表达 IDO、肝细胞生长因子（HGF）和 IL-10等可溶性细胞因子水平明显增多。加入 IL-10抗体后 UCMSCs 抑制 MMP-13的能力减弱。结论 UCMSCs 通过分泌可溶性细胞因子 IL-10抑制 RA 滑膜组织 MMPs 分泌,从而改善关节炎病情。     

三氧化二砷对胶原诱导的关节炎大鼠凋亡及肿瘤坏死因子-α白细胞介素-1的作用

目的研究三氧化二砷（As2O3）对Ⅱ型胶原诱导的关节炎（CIA）模型大鼠滑膜组织凋亡的影响,并进一步探讨As2O3对细胞因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1的作用.方法将72只DA大鼠随机分成正常对照组、CIA大鼠模型组及不同浓度As2O3治疗组,共6组.As2O3治疗后第15天各组取膝关节滑膜、软骨和骨组织,光、电镜观察,TUNEL法检测凋亡.酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清细胞因子IL-1和TNF-α的浓度.结果治疗组滑膜组织病理改变比模型组减轻,滑膜细胞凋亡数明显增多,滑膜细胞超微结构接近正常对照组.并且与模型对照组相比,治疗组大鼠血清IL-1、TNF-α浓度降低,以第Ⅴ组和第Ⅵ组更显著（P＜0.01）.结论As2O3可能通过促进CIA大鼠滑膜细胞及组织的凋亡,抑制炎性因子TNF-α及IL-1的释放,起到减少CIA损害的保护作用.     

Gliostatin/thymidine phosphorylase-regulated vascular endothelial growth-factor production in human fibroblast-like synoviocytes

Gliostatin/thymidine phosphorylase (GLS/TP) is known to have angiogenic and arthritogenic activities. The purpose of this study was to elucidate whether GLS/TP is involved in the regulation of the angiogenic cytokine vascular endothelial growth factor (VEGF) in rheumatoid arthritis (RA). Fibroblast-like synoviocytes (FLSs) from patients with RA were cultured and stimulated with recombinant human GLS (rHuGLS) and interleukin (IL)-1β. Immunohistochemistry showed that GLS/TP and VEGF were detectable in the synovial lining cells. In cultured FLSs, both VEGF mRNA and protein levels were markedly increased by rHuIL-1β treatment. rHuGLS increased VEGF mRNA expression in a dose-dependent manner. We detected high concentrations of VEGF165 protein in culture supernatants from FLSs treated with rHuGLS (300 ng/ml), which were comparable to GLS levels found in synovial fluid of RA patients. These findings indicate that GLS/TP and VEGF have synergistic effects on angiogenesis in rheumatoid synovitis, and that GLS/TP has a role in regulating VEGF.