135Hz极低频电磁场对Hep G-2细胞骨架及Bcl-2的影响

目的:研究135Hz ELF照射对Hep G-2细胞骨架以及Bcl-2表达的影响.方法:135Hz ELF分别照射Hep G-2细胞6 h、 12 h、 24 h,运用免疫荧光染色法标记广谱细胞角蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2,用激光扫描共聚焦显微镜观察135Hz ELF照射后细胞骨架以及Bcl-2的变化.结果:135Hz ELF照射6 h,Hep G-2细胞胞浆中的角蛋白在核周呈斑片状表达,荧光增强;照射12 h,细胞收缩变圆,Hep G-2细胞角蛋白丝状纤维减少,部分呈团块状分布;照射24 h,Hep G-2细胞中角蛋白分布明显不均匀,浓缩于细胞质边缘,多见团块状分布.与之相对应,随着照射时间延长Hep G-2细胞中Bcl-2荧光有减弱趋势.结论:135Hz的ELF照射可引起Hep G-2细胞骨架发生凝集、部分断裂等凋亡形态变化,这种变化可能是由于Bcl-2表达减少所致.     

乙酰唑胺对水孔蛋白-1表达的抑制与细胞内pH及Ca2+的关系

为明确乙酰唑胺对水孔蛋白-1(aquaporin-1,AQP1)基因表达的抑制是否与其对细胞内pH和Ca2+浓度的影响有关,采用激光共聚焦扫描显微镜的技术观察不同培养条件下(培养液中含或不含NaHCO3),10-5 mol*L-1乙酰唑胺对原代培养的大鼠肾脏近曲小管上皮细胞内pH和Ca2+浓度的影响,同时用免疫荧光法观察给药1d、3d、7d后AQP1表达的变化.结果显示在含NaHCO3组,乙酰唑胺处理7d后,使细胞内的H+探针的荧光强度由91.81±5.44降至39.58±3.10, Ca2+探针荧光强度由18.23±1.02降至11.5±1.03,AQP1蛋白荧光强度由44.4±1.86减少到25.91±1.97;在不含NaHCO3组,细胞内pH和Ca2+浓度均无明显变化;但AQP1蛋白的荧光强度由43.15±2.97明显减少到23.85±1.92.结果表明乙酰唑胺对细胞内pH和Ca2+浓度的调节依赖于细胞外液HCO3-的存在,而它对AQP1表达的抑制与细胞内pH和Ca2+浓度的改变无关.     

利用激光扫描共聚焦显微镜实时监测体外诱导分化的人骨髓间充质干细胞内游离Ca2+浓度动态变化

目的 利用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)实时监测由人骨髓间充质干细胞(hMSC)诱导分化的心肌样细胞内游离Ca2+浓度的动态变化.方法 体外分离培养hMSC,5-氮胞苷诱导向心肌样细胞分化.分别以体外分离培养的原代搏动的出生2 d SD大鼠乳鼠心肌细胞(CM)和同代次的hMSC为阳性对照和阴性对照.Fluo-3/AM荧光探针分别标记hMSC、由hMSC诱导的心肌样细胞及CM,利用LSCM实时监测单细胞内Ca2+动态变化的优势,观察加入心脏正性肌力药物后的细胞反应及细胞内Ca2+水平的动态变化.结果 静息状态下(给药前),搏动的CM荧光强度有变化,而hMSC及心肌样细胞Ca2+的荧光强度保持在稳定的波动水平内,两者差异无统计学意义.给药后,hMSC的Ca2+离子流没有改变,与静息状态下趋于一致;而心肌样细胞则表现出一个明显的Ca2+离子流,且下降后细胞内Ca2+水平明显高于加药前静息钙水平,其Ca2+离子流的表现趋势与搏动的CM基本一致.比较给药后hMSC与心肌样细胞的Ca2+荧光强度落差值,差异具有统计学意义(64.04 ±22.68比180.75 ±34.04,P<0.01).结论 hMSC经5-氮胞苷诱导后,在电学特性方面具有向CM分化的趋势,心肌样细胞与CM具有某些相同的电生理特性.     

急性缺氧对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度的影响

目的:研究急性缺氧对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞(PVSMC)细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响及L型电压依赖性钙通道(VDCC)阻断剂硝苯地平的作用,为缺氧性肺动脉高压发病机制的进一步研究提供理论依据.方法:胶原酶消化法培养大鼠远端PVSMC,利用荧光显微镜和细胞内钙浓度检测系统观测急性缺氧(4％O2)、高钾(60 mmol/L KCl)溶液对PVSMC的[Ca2+]i影响及硝苯地平的干预作用.结果:对照组PVSMC的[Ca2+]i随时间变化维持基线水平;缺氧组PVSMC急性缺氧后,[Ca2+]i迅速升高并维持平台水平,△[Ca2+]i达82.83 nmol/L士23.03 nmol/L;硝苯地平干预组PVSMC予急性缺氧和5μmol/L硝苯地平干预后,[Ca2+]i升高幅度较小;高钾溶液孵育PVSMC后,[Ca2+]i迅速增高,5 μmol/L硝苯地平能完全阻断PVSMC的[Ca2+]i对高钾溶液的反应.结论:急性缺氧可使大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高,其机制可能与激活PVSMC的VDCC和另外的非VDCC依赖的钙通道导致细胞外Ca2+内流有关.     

硫化氢对体外大鼠肝星状细胞内Ca~(2+)浓度变化及细胞增殖的影响

目的 研究硫化氢(H2S)对大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6)Ca2+浓度、细胞增殖的影响及其机制. 方法 活化HSC-T6用含10%小牛1血清DMEM培养液制备为1×105个肝星状细胞(HSC)悬液.钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载细胞后,在不同刺激条件下,利用激光扫描共焦显微镜动态扫描HSC-T6细胞内Ca2+荧光强度(FI)变化,FI表示细胞内Ca2+浓度.四唑盐比色法,观察不同浓度H2S供体--NasH对HSC-T6细胞增殖的影响. 结果 低浓度H2S(100μmol/L)明显降低HSC-T6细胞内Ca2+浓度(P<0.05),而细胞增殖增加(增殖率为116%);KATP通道阻断剂--格列本脲可阻断H2S的作用.高浓度H2S(Immol/L)刺激HSC-T6细胞内Ca2+浓度增加,但细胞增殖无明显变化(P>0.05). 结论 低浓度H2S通过激活HSC-T6细胞KATP通道降低绌胞内Ca2+浓度,可能通过调节细胞氧化应激促进细胞增殖;高浓度H2S刺激HSC-T6细胞内Ca2+浓度增加.提示H2S在肝硬化门脉高压症的发生机制中具有双重作用.     

PAR-2激动剂对肝癌细胞增殖及Ca2+水平的影响

目的： 研究PAR-2激动剂对人肝癌HepG2细胞增殖及细胞内Ca2+浓度（［Ca2+］c）的影响。方法: 培养人肝癌细胞HepG2, 分别利用PAR-2激动剂SLIGKV-NH2及反PAR-2激动肽VKGILS-NH2干预肝癌细胞生长,用Fura-2荧光法测定肝癌细胞内［Ca2+］c,用MTT法检测对肝癌细胞增殖能力的影响,流式细胞术（FCM）检测细胞周期改变情况,RT-PCR法检测cyclinD1 mRNA表达变化。结果: 50 μmol/L SLIGKV-NH2刺激HepG2细胞后,［Ca2+］c迅速短暂升高（P<0.01）;G0/G1期比例明显降低,S期和G2/M期细胞比例和细胞增殖指数(PI)明显提高（P<0.01）;cyclinD1 mRNA的表达显著增加（P<0.01）。SLIGKV-NH2在1-50 μmol/L时可以促进HepG2细胞增殖,呈剂量依赖性（P<0.01或P<0.05）。而VKGILS-NH2组与对照组相比差异无显著（P>0.05）。结论: PAR-2激动剂在体外能通过激活PAR-2,诱导HepG2细胞内［Ca2+］c升高,上调cyclinD1 mRNA的表达,加速HepG2细胞周期进程,促进DNA合成,促进肝癌细胞增殖。     

心房颤动时心房肌细胞L型Ca2+通道与肌浆网间Ca2+信号转导的探讨

目的：探讨房颤时心房肌细胞膜上L型Ca2+通道与肌浆网之间的Ca2+信号转导。 方法： 杂种犬10条，随机分为正常对照组和单纯房颤组。房颤组用起搏器行右心房快速起搏（500±20）次/分，术后观测24周。正常对照组不植入起搏器。胶原酶Ⅱ型分离心房肌细胞，用激光共聚焦显微镜检测L型Ca2+ 通道对细胞内Ca2+浓度变化的影响；L型Ca2+通道与肌浆网三磷酸肌醇受体（IP3R）和兰尼碱受体（RyR）之间的Ca2+信号转导。 结果： （1）L型Ca2+通道与肌浆网IP3R之间的Ca2+信号转导：正常对照组、单纯房颤组的心房肌细胞在用mibefradil和丁卡因分别阻滞T型Ca2+通道和RyR后给予细胞膜激动剂时，细胞内Ca2+浓度均升高（分别为1.4000±0.0776和1.5169±0.4414），组间比较无显著差异（P＞0.05）；（2）L型Ca2+通道与肌浆网RyR之间的Ca2+信号转导：正常对照组的心房肌细胞在用mibefradil和肝素分别阻滞T型Ca2+通道和IP3R后给予细胞膜激动剂时，细胞内Ca2+浓度升高（1.5576±0.1989），单纯房颤组的细胞内Ca2+浓度也升高（1.5372±0.2952），两组间比较无显著差异（P＞0.05）。 结论： 房颤时L型Ca2+通道与RyR和IP3R之间可能存在信号转导，但其可能在房颤时的细胞内Ca2+超载及异常Ca2+信号转导方面不起重要作用。     

氯通道ClC-3对脑血管平滑肌细胞Ca2+池操纵性Ca2+内流的影响

目的 :研究ClC - 3Cl-通道在培养的牛脑血管平滑肌细胞 (CSMC)Ca2 + 池操纵性Ca2 + 内流中的作用。方法 :采用培养的CSMC ,用硫代磷酸修饰的ClC - 3反义寡核苷酸与脂质体一起转染入平滑肌细胞 4 8h ,以正义和随机序列寡核苷酸作为对照 ,在生物荧光双波长影像分析系统用Fura- 2 /Am荧光探针测定单个细胞内游离Ca2 + 浓度。结果 :(1)采用Ca2 + ImageSystem测定脑血管平滑肌细胞静息 [Ca2 + ]i ,以 340 / 380nm波长的比值表示为 0 6 84± 0 0 0 2 ,内皮素 - 1(ET - 1) 10 -7mol·L-1刺激细胞引起 [Ca2 + ]i呈双相升高反应 ,先是快…     

高糖激活Ca~(2+)-CaN-NFAT3信号通路致H9c2细胞肥大

目的:利用细胞实验探讨不同高糖浓度培养H9c2细胞是否引起心肌细胞肥大,探讨Ca2+-Ca NNFAT3信号通路是否参与高糖引起H9c2心肌细胞肥厚过程。方法:体外培养H9c2大鼠心肌细胞48 h,分为5mmol/L糖对照组、25mmol/L糖培养组、50 mmol/L糖培养组、25mmol/L糖培养加L型钙通道阻滞剂苯磺酸氨氯地平[商品名络活喜(Norvasc)]组和50 mmol/L糖培养加Norvasc组5组。观察H9c2细胞形态并测量细胞表面积大小;荧光分光光度法检测心肌细胞内钙离子浓度[Ca2+]i;ELISA测细胞内Ca N浓度;real-time PCR法及Western blot检测Ca NAβ、NFAT3和β-MHC的mRNA及蛋白表达。结果:细胞大小、单细胞平均[Ca2+]i测定荧光值及细胞内Ca N浓度在随糖浓度升高呈阶梯上升,50 mmol/L时达到最高点。加入Norvasc后细胞大小较相同条件不加Norvasc者降低。Ca NAβ、NFAT3和β-MHC的mRNA及蛋白表达随糖浓度升高逐步升高,50 mmol/L时达最高。加入Norvasc后Ca NAβ、NFAT3和β-MHC的mRNA及蛋白表达均较未加Narvasc组明显降低。结论:高糖通过激活Ca2+-Ca N-NFAT3信号通路引起H9c2心肌细胞肥大。     

羧胺三唑通过抑制NFAT2核转运降低小鼠CD8^+T细胞中程序性死亡受体1的表达

目的研究羧胺三唑(CAI)对CD8+T细胞的作用,并探索其增强活化的T细胞杀伤作用的关键机制。方法用免疫磁珠分选出小鼠CD8+T细胞,分为对照组、CAI组、ZK756326(Ca2+激活剂)组以及CAI+ZK756326组。流式细胞计量术检测细胞内游离钙离子水平;酶联免疫吸附法检测细胞内钙调磷酸酶(CaN)的表达;免疫荧光染色检测细胞活化T细胞核因子2(NFAT2)核转运;染色质免疫共沉淀-qPCR检测细胞中NFAT2调控程序性死亡受体1(PD-1)表达。分离小鼠脾脏细胞毒性T淋巴细胞(CTLs),流式细胞计量术检测其中CD8+T细胞PD-1的表达。结果CAI组显著降低CD8+T细胞内Ca2+浓度(P<0.001),CAI+ZK756326组胞内Ca2+浓度有所升高(P<0.01);CAI显著降低CD8+T细胞中钙调磷酸酶的含量(P<0.001);CAI可显著抑制NFAT2核转运(P<0.001),并使NFAT2依赖的PD-1转录进程显著降低(P<0.001);CAI使小鼠脾脏CTLs细胞中PD-1+CD8+T细胞比例显著减少(P<0.001)。结论CAI通过抑制CD8+T细胞内钙离子水平以及钙调磷酸酶的表达抑制NFAT2核转运,从而降低CD8+T细胞PD-1的表达,进一步产生免疫治疗干预作用。     

问号钩端螺旋体内化过程中细胞内游离Ca2+水平变化及细胞凋亡

目的建立观察问号钩端螺旋体(简称钩体)黏附的双荧光染色法,探讨不同毒力钩体对细胞内游离Ca2+水平及细胞凋亡的影响.方法以问号钩体黄疸出血群赖型56601株和双曲钩体三堡垄群patoc型PatocⅠ株抗血清为一抗、羊抗兔IgG荧光素F(ab)2和罗丹明F(ab)2片段为二抗的双荧光染色法,分别检测56601株和PatocⅠ株钩体对Vero、J774A.1细胞的黏附作用.采用fluo-3/AM胞内Ca2+特异荧光标记激光共聚焦技术,检测问号钩体56601株和波摩那群波摩那型56608株、双曲钩体PatocⅠ株作用的J774A.1细胞胞内游离Ca2+水平的变化.采用FITC-annexinⅤ/PI荧光标记流式细胞术,检测紫外线灭活前后的56601株钩体诱导Vero和J774A.1细胞凋亡的情况.结果所建立的双荧光染色法能清晰地观察到强毒力的56601株钩体对Vero和J774A.1细胞的黏附,无毒力的PatocⅠ株钩体则否.正常J774A.1细胞胞内游离Ca2+基础值为(105.0±7.0)%,PatocⅠ株钩体作用细胞的荧光强度变化百分数一直波动于(102.2±5.2)%.56601株钩体感染J774A.1细胞胞内游离Ca2+浓度迅速增高,呈现为双峰型曲线,其荧光强度变化百分数分别为(747.5±35.7)%和(804.6±40.8)%.56608株钩体感染J774A.1细胞胞内游离Ca2+浓度呈现为缓慢的单一坡型升高,其最大荧光强度变化百分数为(402.4±23.6)%,明显小于56601株钩体,差异有统计学意义(P<0.01).紫外线灭活前后56601株钩体作用Vero细胞的凋亡率分别为84.5%和78.2%,J774A.1细胞凋亡率分别为34.5%和30.9%.结论所建立的双荧光染色法可用于观察钩体的黏附.细胞胞内游离Ca2+水平与所感染的钩体菌株毒力成正相关.有毒力的钩体接触细胞时即可诱导凋亡发生,启动细胞凋亡信号通路的配体分子可能位于钩体表面.     

周围神经损伤后脊髓前角运动神经元内游离Ca2+的浓度

背景：神经损伤后可引起细胞膜上Ca²⁺通道的开放,使细胞外Ca²⁺内流,造成细胞内的钙超载。 目的：观察臂丛神经根切断伤后相应脊髓前角运动神经元内游离Ca²⁺浓度的变化。 方法：健康成年雄性Wistar大鼠84只,分为3组：假手术组暴露臂丛神经不切断;对照组臂丛神经切断伤后不做其他处理;实验组臂丛神经切断伤后,给予腹腔注射Ca2+阻带剂维拉帕米4 mg/(kg•d)。于切断伤后12 h,24 h,48 h,72 h,1周,2周,4周每组随机以4只取材。 结果与结论：周围神经损伤开始,对照组及实验组大鼠损伤侧脊髓前角运动神经元细胞内Ca²⁺浓度开始升高,至伤后48 h达高峰,此后逐渐下降,伤后1周,实验组已基本回至正常水平,但仍较假手术组高。说明神经损伤后相应神经元细胞膜上L型Ca²⁺通道开放,Ca2+内流进入细胞内,导致神经细胞内游离Ca²⁺浓度增加,L型Ca²⁺通道可以被维拉帕米阻断,减少神经损伤后的Ca²⁺内流,减少神经细胞凋亡的数量。     

Ryanodine受体2基因沉默对大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的影响

目的 观察应用RNA干扰阻断Ryanodine受体2(RyR2)合成是否对心肌缺血再灌注(I/R)损伤有保护作用.方法 分离培养大鼠原代心肌细胞并建立I/R模型.应用RNA干扰技术阻断RyR2表达,分别检测对照组、RNA干扰组、I/R模型组、RNA干扰+IYR模型组细胞凋亡率、RyR2 mRNA、细胞内钙离子浓度、培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)水平和线粒体膜电位变化.结果 与对照组相比.I/R组细胞发生明显凋亡和损伤(60.1%比5.5%.P<0.05),细胞内钙离子浓度显著上升(平均荧光强度21.2比7.6,P<0.05),RyR2表达变化不明显(20.1比22.7,P>0.05),线粒体膜电位显著下降(平均荧光强度37.2比85.1,P<0.05).相对于I/R组,siRNA干预组细胞RyR2表达显著下降(6.8比20.1,P<0.05),LDH水平、凋亡率、细胞内钙离子浓度均有明显下降(上清LDH为48 IU/L比125 IU/L,Annexin V阳性细胞31.2%比60.1%,钙离子浓度为平均荧光强度8.6比21.2,均P<0.05),线粒体膜电位显著升高(55.8比37.2,P<0.05).结论 在大鼠原代心肌细胞中RyR2基因沉默对心肌I/R损伤有一定保护作用.     

硫化氢保护被ATP损伤的PC12细胞

目的:观察硫化氢的供体硫氢化钠(Na HS)对三磷酸腺苷(ATP)诱导的PC12细胞活力、胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)及膜通透性的变化,探讨硫化氢神经保护作用的嘌呤信号机制。方法:将对数生长期高分化的PC12细胞,随机分为4组,分别为(1)正常对照组:常规培养,不进行ATP处理;(2)ATP组:接种细胞24 h后ATP处理;(3)Na HS+ATP组:Na HS预先孵育30 min后再用ATP处理,并且Na HS始终存在于反应体系中;(4)KN-62(P2X7受体阻断剂)+ATP组:KN-62预先孵育30 min,其余同Na HS+ATP组。MTT检测各组细胞活力,Fura-2/AM荧光染料检测各组[Ca2+]i,检测荧光染料YO-PRO-1的相对荧光单位以反映膜的通透性。结果:(1)0.3mmol/L ATP对细胞活力无影响,但1、3、5、10 mmol/L ATP则呈浓度依赖式明显降低细胞活力,200μmol/L Na HS干预可明显逆转ATP引起的细胞活力下降(P0.05),而800μmol/L Na HS预处理则加剧ATP对PC12细胞的损伤(P0.05)。(2)ATP处理PC12细胞会引起[Ca2+]i迅速升高并且呈浓度依赖性,Na HS预处理能对抗ATP引起的[Ca2+]i升高(P0.05)。(3)随着ATP浓度的增加及作用时间的延长,PC12细胞内YO-PRO-1的荧光强度显著增加,Na HS预处理可明显减少细胞对YO-PRO-1的摄取(P0.05)。结论:硫化氢可保护ATP损伤的PC12细胞,可能与其抑制[Ca2+]i升高和YO-PRO-1荧光增强有关。     

没食子儿茶素没食子酸酯对1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导的大鼠PC12细胞凋亡的作用

目的： 探讨没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)抑制1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）诱导大鼠PC12细胞凋亡及其抗氧化作用、调节胞浆钙离子稳态与其抑制细胞凋亡作用之间的关系。方法: 培养大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株PC12细胞,给予MPP+诱导细胞凋亡。EGCG（10、50及100 μmol·L-1）预处理0.5 h,再加入MPP+使其终浓度为900 μmol·L-1处理24 h后,MTT法检测细胞存活率,Annexin V-PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光酶标仪测定细胞内活性氧,激光共聚焦荧光显微镜通过检测细胞内钙的荧光强度、检测细胞胞浆［Ca2+］i的变化,透射电镜观察凋亡细胞线粒体结构形态变化,并测定细胞内超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量。结果: MPP+呈剂量依赖性损伤PC12细胞,诱导细胞凋亡发生率达到31.0％。与模型组比较,EGCG处理后,明显提高细胞活力,降低凋亡细胞率,同时增强SOD活性、减少MDA和ROS的含量,降低胞浆［Ca2+］i浓度,减轻MPP+诱致的细胞线粒体改变。结论: EGCG具有抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡的作用,其作用机制可能与其提高细胞抗氧化能力和减少胞浆［Ca2+］i有关。     

趋化性细胞因子对人Tc1和Tc2细胞内Ca~(2+)浓度变化的影响

为了探讨趋化性细胞因子在体外对人Tc1和Tc2亚群细胞内Ca2 + 浓度变化的影响 ,从PBMC中分离纯化CD8+ T细胞 ,在特定细胞因子及细胞因子抗体作用下 ,体外定向诱导出能长期培养的Tc1和Tc2细胞系 ,用免疫荧光染色结合流式细胞术分析对其进行鉴定后 ,通过流式细胞术检测在趋化性细胞因子刺激前后 ,细胞内Ca2 + 浓度的变化。发现受SDF 1作用后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 浓度变化均不明显 ,而IP 10刺激后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 水平在短时间内明显上调 ,且在Tc1胞内的上升幅度远高于Tc2细胞 ,在MIP 1β刺激后 ,也观察到类似趋势 ;受Eotaxin刺激后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 水平均有微小上升 ,在Tc2细胞内的上升幅度略高于Tc1细胞。说明Tc1和Tc2细胞受趋化性细胞因子作用后 ,细胞内Ca2 + 浓度有不同程度的变化 ,且与趋化性细胞因子受体的表达呈现一定的相关性。     

抗人DR5单链抗体诱导HepG2细胞凋亡的实验研究

目的探究抗人DR5单链抗体(scFv)ZF1对肝癌细胞株HepG-2的凋亡作用及机制。方法 MTT法检测ZF1对HepG-2的细胞毒效应;流式细胞术检测ZF1诱导HepG2的凋亡率;荧光显微镜观察经ANNEXIN-V/PI双染的HepG-2细胞;DNA Ladder检测HepG-2细胞的DNA特点;Western blotting检测Bcl-2、PARP蛋白的表达。结果 MTT结果显示ZF1抑制HepG-2细胞生长呈剂量依赖性,ZF1终浓度分别为0.225、0.45、0.9mg/ml、1.2mg/ml200μl时,HepG-2细胞的生长抑制率分别为28.8%、52.3%、65.3%、89.8%;流式细胞仪检测结果显示,终浓度分别为0.225、0.45、1.2mg/ml2ml作用HepG-2细胞4h,凋亡率分别为32.9%、56%、83.2%;荧光显微镜下可见早期凋亡细胞,细胞膜呈绿色荧光,细胞内有凋亡小体的形成,伴有核结构的变化;DNALadder出现明显的彗星尾状条带;Western blotting检测到ZF1诱导凋亡的细胞内Bcl-2、PARP蛋白表达上调。结论 ZF1可诱导HepG2细胞株凋亡,这种作...     

RELMα/FIZZ1信号通路对血管新生影响的细胞学研究

目的:探讨类抵抗素分子α/炎症区域分子1(RELMα/FIZZ1)对小鼠主动脉血管平滑肌细胞MOVAS Ca~(2+)/CaM信号通路的调控及小鼠主动脉内皮细胞(MAEC)管腔形成能力的影响。方法:将离体培养的MAEC分为p GSadeno-HK组、p GSadeno-RELMα/FIZZ1组、p GSadeno-sh RNA control组和p GSadeno-sh RNA RELMα/FIZZ1组,MTT法检测细胞活力的变化,基质胶管腔形成实验检测血管生成情况;同时将离体培养的MOVAS细胞分为p GSadeno-HK组、p GSadeno-RELMα/FIZZ1组、p GSadeno-sh RNA control组和p GSadeno-sh RNA RELMα/FIZZ1组,MTT法检测MOVAS的细胞活力变化,Fluo-3 AM钙离子荧光探针和流式细胞术检测细胞内的Ca~(2+)浓度,并用real-time PCR和Western blot检测钙调蛋白(Ca M)和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的m RNA和蛋白表达水平。结果:过表达RELMα/FIZZ1显著提高MAEC的细胞活力,管腔形成数目显著增加(P0.05);干扰RELMα/FIZZ1的表达显著抑制MAEC的细胞活力和管腔形成(P0.05)。过表达RELMα/FIZZ1显著促进MOVAS的细胞活力,细胞内Ca~(2+)平均荧光强度增强,Ca M和MLCK的m RNA和蛋白的表达水平均显著上调(P0.05);干扰RELMα/FIZZ1的表达显著抑制MOVAS的细胞活力,细胞内Ca2+平均荧光强度降低,CaM和MLCK的m RNA和蛋白表达水平均显著下调(P0.05)。结论:RELMα/FIZZ1信号通路参与血管管腔的生成,其机制可能是通过细胞内Ca2+浓度变化调节细胞内Ca M和MLCK的表达,进而对管腔相应功能产生影响。     

中药脊髓Ⅰ号对脊髓厚片Ca~(2+)荧光强度的影响

目的　探讨中药脊髓Ⅰ号对脊髓厚片Ca2 + 荧光强度的影响。方法　将 33只Wistar大鼠随机分为 3组 :下胸段脊髓半横断组 (损伤组 )、对照组和中药脊髓Ⅰ号治疗组。快速处死大鼠 ,取下胸段脊髓 ,切脊髓厚片 ,用Fluo 3荧光染料孵育 ,激光共聚焦显微镜观察。结果　损伤组、对照组和中药治疗组左侧Ca2 + 荧光强度分别为 12 6 3± 3 2 7、13 34± 3 5 1和 12 89±3 31,右侧分别为 2 1 6 8± 3 6 9、14 72± 2 12和 12 97± 3 6 0 ,损伤组脊髓厚片损伤侧Ca2 + 荧光强度显著升高 ,治疗组两侧灰质Ca2 + 荧光强度无显著差异。结论　 (1)损伤侧Ca2 + 荧光强度显著升高 ;(2 )中药脊髓Ⅰ号对Ca2 + 荧光强度的升高有一定抑制作用。     

Ca2+与NO在过氧化氢所致正常成年大鼠肠系膜微血管通透性增高中的作用

 目的 观察内皮细胞Ca2+浓度及NO生成在过氧化氢所致正常成年大鼠肠系膜微血管通透性增高中的作用。方法 通过测定在体大鼠肠系膜微血管静水传导性观察微血管通透性变化。采用钙荧光指示剂(Fura 2-AM)、NO荧光指示剂(DAF-2 DA)标记在体微血管内皮细胞,并应用荧光显微镜检测细胞内钙或NO的荧光信号,观察H2O2作用下内皮细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)、NO的变化。结果 H2O2可增加正常成年大鼠微血管通透性（正常对照的6.13±0.87倍,P<0.01）,同时增加微血管内皮细胞[Ca2+]i（714.58±144.70 nmol/L,P<0.01）,并促进内皮细胞NO的生成（正常对照荧光强度的1034.3%±44.3%,P<0.01）。Ca2+通道阻滞剂氯化镧可抑制H2O2所引起的微血管通透性增加（P<0.01）及内皮细胞[Ca2+]i升高（P<0.01）。NOS抑制剂AP-Cav-1可抑制H2O2所引起的微血管通透性增加（P<0.01）,但对H2O2的Ca2+增加作用无影响。结论 H2O2所致的通透性增加与细胞内Ca2+增加、NO的产生增多有关。