益肾化瘀方拮抗肾间质纤维化作用有效部位筛选

目的:筛选益肾化瘀方拮抗肾间质纤维化作用的有效部位。方法:将益肾化瘀方煎煮液采用不同极性的有机溶剂进行萃取分离,分别得到益肾化瘀方石油醚部位、益肾化瘀方乙酸乙酯部位、益肾化瘀方正丁醇部位和水饱和部位。同时将大鼠随机分为假手术组、模型组、益肾化瘀方不同提取部位组、缬沙坦组。除假手术组外,其余6组复制单侧输尿管梗阻模型,比较各给药治疗组在不同时间点对大鼠肾功能、肾脏病理及肾组织中羟脯氨酸含量的影响。结果:大鼠梗阻后均出现明显的肾小管萎缩和肾间质纤维化,并伴有血清尿素氮、血肌酐、胱抑素C水平的升高,且随梗阻时间的延长而逐渐加重。给予益肾化瘀方4个不同极性部位提取物及缬沙坦治疗后,大鼠肾间质细胞炎性浸润、肾小管萎缩和肾间质纤维化病变逐渐减轻,肾功能明显改善,肾组织中羟脯氨酸含量降低。而在改善大鼠肾脏病理损伤、改善肾功能、降低肾组织羟脯氨酸含量方面益肾化瘀方正丁醇部位组疗效与缬沙坦组相当,显著优于其余3个极性部位。结论:益肾化瘀方正丁醇部位为本方发挥抗肾间质纤维化作用的有效部位。     

血府逐瘀胶囊对单侧输尿管梗阻大鼠SnoN和Ski表达的影响

目的：探讨血府逐瘀胶囊对单侧输尿管梗阻所致大鼠肾间质纤维化的作用及其机制。方法：雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、血府逐瘀胶囊治疗组，采用单侧输尿管结扎术（UUO）建立大鼠肾间质纤维化模型。术后21d取各组大鼠肾组织HE染色及六胺银染色（PASM），观察肾组织病理变化；检测大鼠血肌酐和尿素氮含量，观察肾功能变化；放射免疫法检测肾组织中Ⅲ型前胶原含量，观察肾纤维化程度；Western blot检测肾组织中核转录共抑制因子SnoN与Ski蛋白表达水平，观察TGF—β1／Smad信号转导通路中逆向调控信号分子表达水平的变化。结摹：与假手术组比较，模型组大鼠肾小管基底膜明显增厚，部分肾小管上皮细胞变性，肾小管萎缩，管腔显著扩张，。肾间质明显增宽；血肌酐与尿素氮含量以及肾组织中Ⅲ型前胶原含量显著增加：SnoN、Ski蛋白表达显著减少。血府逐瘀胶囊治疗组大鼠梗阻侧肾组织的病理变化明显改善，血肌酐与尿素氮水平以及肾组织中Ⅲ型前胶原含量明显降低，SnoN蛋白表达水平显著增加，而Ski蛋白表达没有改变。结论：血府逐瘀胶囊可通过恢复SnoN蛋白表达水平，抑制TGF—β1，靶基因的活化，从而改善UUO大鼠的。肾功能和肾间质纤维化程度。     

扶正化瘀方抗大鼠肾间质纤维化作用的配伍特点

目的：探讨扶正化瘀方抗肾间质纤维化的主效药物及配伍特点。方法：除正常对照组外,其余大鼠采用氯化汞（HgCl2）灌胃诱导肾间质纤维化模型。采用正交实验设计,根据L16（2^15）正交表设为16个组,其中给药者15组,分别按正交表药物组合给药;无药物者为模型组。药物干预后,分别观察各组大鼠体重、肾重,肾组织炎症与胶原沉积变化,检测肾组织羟脯氨酸（Hyp）含量,血清尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）及尿蛋白浓度。结果：升高大鼠体重起主效应的药物是虫草菌丝、桃仁,有明显交互作用的是丹参／桃仁;降低肾体重比起主效应的药物是丹参、松黄、绞股蓝,有明显交互作用的是虫草菌丝／五味子;降低纤维化肾组织Hyp含量起主效应的药物是丹参、松黄、虫草菌丝、桃仁,有明显交互作用的是虫草菌丝／五味子、丹参／五味子、虫草菌丝／丹参、绞股蓝／五味子;降低BUN起主效应的是丹参、虫草菌丝、松黄、桃仁,有明显交互作用的是虫草菌丝／五味子、虫草菌丝／丹参;降低Scr起主效应的是虫草菌丝、松黄,呈明显交互作用的有丹参／桃仁;降低尿蛋白浓度的主效应药物是丹参、虫草菌丝、五味子,且考虑的6个交互作用都有统计意义。结论：扶正化瘀方抗大鼠肾纤维化的主要有效药物为丹参、虫草菌丝、松黄、桃仁;尤其以丹参作用突出,为全方之君药,与虫草菌丝、桃仁有良好交互作用,因此活血化瘀与益精补虚药物配伍具有综合疗效优势。     

单侧输尿管梗阻法制作大鼠肾间质纤维化模型的改进

目的建立改良的大鼠肾间质纤维化模型。方法用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,动态观察4周。治疗的第12、、3周末检测血肌酐、尿素氮含量等指标,观察肾功能变化;4周末采用HE染色、六胺银(periodic acid-silver methenamine,PASM)染色和丽春红染色观察肾组织病理变化。结果模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;模型组大鼠大部分肾小球呈玻璃样变,硬化的肾小球周围所属肾小管萎缩、基底膜增厚,部分肾小管消失;少数残存的肾小球肥大并周围肾小管扩张严重;肾间质胶原纤维增生和大量炎细胞浸润。结论该模型有明显的肾间质纤维化特征,且死亡率低,适合肾间质纤维化的实验研究。     

姜黄素通过TGF-β/Smads信号通路对肾缺血再灌注后肾小管间质纤维化抑制作用

目的:探究姜黄素通过TGF-β/Smads信号通路对肾缺血再灌注后肾小管间质纤维化的抑制作用.方法:将40只健康SD大鼠按随机数字表法平均分为假手术组、模型组、低剂量组和高剂量组.使用夹闭法松开肾蒂的方法复制肾缺血再灌注大鼠模型.检测血清中血清肌酐(serum creatinine,Scr)和尿素氮(urea nitrogen,BUN)水平、肾组织胶原含量、肾组织的病理变化以及肾脏中转化生长因子-β1 (transforming growth factor β1,TGF-β1)、Smad3和Smad7蛋白表达水平.结果:假手术组肾小管形态正常,模型组肾小管间质呈现明显的病理变化,低剂量组和高剂量组肾小管间质纤维病理变化明显改善,且高剂量组改善程度高于低剂量组;模型组的肾小管间质纤维化评分、Scr、BUN、胶原含量、TGF-β1和Smad3明显高于假手术组,Smad7明显低于假手术组(P＜0.05);低剂量组和高剂量组肾小管间质纤维化评分、Scr、BUN、胶原含量、TGF-β1和Smad3均明显低于模型组,Smad7明显高于模型组(P＜0.05);高剂量组肾小管间质纤维化评分、Scr、BUN、胶原含量、TGF-β1和Smad3评分明显低于低剂量组,Smad7明显高于低剂量组(P＜0.05).结论:姜黄素对肾缺血再灌注后肾小管间质纤维化具有抑制作用,其作用机制可能为抑制TGF-β/Smad信号转导通路.     

大鼠肾间质纤维化模型建立与活血药抗肾间质纤维化研究

目的:观察单侧输尿管结扎方法制备大鼠肾间质纤维化模型的效果并探讨活血药抗肾间质纤维化的研究进展。方法:实验大鼠肾间质纤维化模型采用单侧输尿管结扎的方法制备,分别于术后2周和4周后检查尿液分析肾功能以及应用HE、Masson染色观察肾脏病理变化,探讨活血药对肾间质纤维化的研究进展。结果:模型组2周后呈现血清肌酐(Scr)、血清尿素氮(BUN)升高,4周后血清肌酐(Scr)、血清尿素氮(BUN)、尿蛋白水平显著升高,与正常组相比较均有统计学意义;病理学检测模型组镜下可见典型肾间质纤维化表现,伴有硬化,系膜细胞和基质弥漫性轻微增生。模型组4周后可见肾小管出现萎缩的病理变化,呈现出多灶状或大片状改变,部分肾小管组织呈现肿胀、空泡样变性或伴有脱落、刷状缘细胞消失,肾间质纤维化显著,炎性细胞浸润明显。结论:应用单侧输尿管结扎可建立稳定的肾间质纤维化实验模型,造模方法得当,可明显降低死亡率。活血药抗肾间质纤维化的作用机理研究不断进步。     

扶正化瘀方影响转化生长因子β1/Smad信号通路的抗肝纤维化作用机制

目的：探讨扶正化瘀方影响转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）/Smad信号转导的抗肝纤维化作用机制。方法：本研究分体内实验和体外实验两部分。在体内实验中,37只雄性Wistar大鼠分为正常组（5只）、模型组（18只）和扶正化瘀方组（14只）。模型组和扶正化瘀组大鼠采用二甲基亚硝胺（dimethylnitrosamine,DMN）腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型。灌胃治疗4周后,采用盐酸水解法检测肝组织中羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）含量,蛋白质印迹法分析肝组织中TGF-β1、TGF-β1Ⅰ型受体（TGF-β1 type Ⅰ receptor,TβR-Ⅰ）、Smad2、Smad3及磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外实验采用培养4d的原代大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）,分为对照组、TGF-β1组、10%扶正化瘀方药物血清组及TβR-Ⅰ胞内激酶抑制剂（SB-431542）组。后3组用2.5ng/mLTGF-β1刺激24h后,对照组及TGF-β1组加10%正常大鼠血清,10%扶正化瘀方药物血清组加10%服用扶正化瘀方的大鼠血清,SB-431542组加10%正常大鼠血清及10μmol/LSB-431542。共孵育24h后,免疫荧光染色检测HSC中α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）和Smad3蛋白的表达,蛋白质印迹法分析HSC中α-SMA蛋白的表达。结果：体内实验发现,扶正化瘀方可明显降低纤维化肝组织中异常升高的Hyp含量及TGF-β1、TβR-Ⅰ、磷酸化Smad2/3蛋白的表达。体外研究发现,正常HSC中α-SMA、TβR-Ⅰ表达较低,TGF-β1刺激可显著上调其表达;扶正化瘀方药物血清共孵育后,可明显抑制TGF-β1诱导的HSC中α-SMA的表达;正常HSCSmad3主要表达在细胞质中,细胞核中表达较低,TGF-β1可显著刺激Smad3向细胞核转移,扶正化瘀方药物血清可明显抑制TGF-β1诱导的Smad3核转位。结论：扶正化瘀方可下调纤维化大鼠肝脏及HSC中的TGF-β1/Smad病理信号转导通路,这可能是扶正化瘀方抗肝纤维化的部分作用机制。     

中药正肝化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织胶原代谢的影响

目的:观察正肝化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织胶原代谢的影响。方法:采用四氯化碳+高脂低蛋白饮食制备大鼠肝纤维化模型,治疗组以正肝化瘀方灌胃,正常组、模型组予以等量生理盐水灌胃,6 w后取材检测。用Jamall氏法测定各组大鼠肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,Western blot法检测各组大鼠肝组织α-SMA、Ⅰ型、Ⅳ型胶原蛋白的表达。结果:与模型组比较,治疗组大鼠肝组织Hyp含量及α-SMA、Ⅰ/Ⅳ型胶原蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01)。结论:正肝化瘀方的抗肝纤维化机制与减少肝组织胶原合成与沉积有关。     

大鼠肾小管间质纤维化过程中血清瘦素水平的变化

目的观察大鼠肾小管间质纤维化过程中血清瘦素（leptin）水平的动态变化过程,探讨其在肾小管间质纤维化过程中的可能作用。方法32只雄性Wistar大鼠行单侧输尿管结扎术（UUO模型）,造成结扎侧肾脏纤维化模型,于术后3d,7d,14d,21d各时点随机处死8只,另有8只行假手术作为对照组。收集血清测定其中瘦素及肌酐、尿素氮水平,肾组织切片行HE及Masson染色,供病理分析其纤维化程度。结果①血肌酐及尿素氮UUO组与假手术组相比无统计学差异;②UUO组肾小管间质损伤评分明显高于假手术组;③UUO大鼠较对照组血清瘦素水平显著升高,且在UUO各组之间血清瘦素水平随着肾纤维化程度的加重而增加。结论在肾小管间质纤维化过程中血清瘦素水平的增高与小管间质纤维化并存。     

腺嘌呤诱发的大鼠肾间质纤维化组织中α-平滑肌肌动蛋白和Ⅳ型胶原的表达及其意义

[目的]探讨腺嘌呤诱发的大鼠肾间质纤维化组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅳ型胶原的表达及其意义.[方法]正常组大鼠灌胃给予生理盐水10mL/kg,模型组给予腺嘌呤250mg/kg,共24d,检测两组大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、钙离子和磷的含量.剖取肾脏,行HE和直接红染色,观察肾组织的病理变化和纤维的增生程度,行免疫组织化学染色观察肾组织α-SMA和Ⅳ型胶原的表达情况.[结果]模型组与正常组比较,血清BUN,Scr含量明显升高,血清钙离子含量明显下降,磷含量显著升高.模型组肾小球数量明显减少,肾间质内胶原纤维、α-SMA和Ⅳ型胶原阳性面密度明显高于对照组.[结论]在腺嘌呤诱发的大鼠肾间质纤维化的发生发展过程中肌成纤维细胞的增殖活化和Ⅳ型胶原发挥重要作用.     

抗纤灵方对大鼠单侧输尿管梗阻所致肾纤维化的防治作用

目的：探讨中药抗纤灵方对大鼠单侧输尿管结扎（UUO）所致肾纤维化的防治作用及机制。方法：用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,动态观察4周。治疗组以抗纤灵方在造模的同时开始灌胃,1次／d,共4周。治疗的第2周末检测BUN、Scr含量等指标,观察肾功能变化;第4周末采用HE染色、丽春红染色观察。肾组织病理变化和胶原纤维沉积变化;采用RT-PCR法观察梗阻肾皮质C-Met、HGF、Erk1 mRNA表达。结果：模型组大鼠BUN、Scr明显升高;肾小管和间质的结构基本消失,呈现弥漫的细胞增殖;肾间质胶原纤维增生和大量炎细胞浸润;肾组织C-Met mRNA表达显著上调,而HGF mRNA水平显著下调。中药抗纤灵方治疗组肾脏炎性细胞浸润及间质损伤均轻于模型组;BUN含量显著降低,Scr含量趋向正常;肾组织C-Met mRNA表达明显减少,HGF mRNA水平明显上调。ERK总基因水平的表达在假手术组、模型组及中药治疗组之间比较无明显差异。结论：抗纤灵方可能与抑制肾组织C-Met mRNA表达并增加抗肾纤维化的细胞因子HGF mRNA表达来改善大鼠梗阻性肾间质纤维化及肾功能有关。     

补肾活血方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中HGFmRNA表达变化的影响

目的:建立肾间质纤维化大鼠模型,动态观察模型大鼠肾功能、肾组织中HGFmRNA的表达变化及补肾活血方对其影响,探讨补肾活血方治疗慢性肾功能衰竭的可能作用机制.方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、洛汀新组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组,除假手术组外其余大鼠采用单侧输尿管梗阻的方法建立肾间质纤维化大鼠模型;分别于UUO术后3、7、14、21、28 d观察造模大鼠血肌酐、尿素氮的动态变化;采用RT-PCR法,观察造模大鼠肾组织中肝细胞生长因子(HGF)mRNA的表达变化及补肾活血方对其影响.结果:与假手术组比较,造模大鼠血清肌酐、尿素氮浓度呈进行性增高,P＜0.05或P＜0.01;HGFmRNA表达于UUO术后第3天开始增加,于第14天达高峰,P＜0.05或P＜0.01,随后随时间延长表达逐渐渐弱.与模型组比较,各给药组大鼠肾功能改善,P＜0.05或P＜0.01;各时间点HGFmRNA的表达呈不同程度增加,P＜0.05或P＜0.01.结论:补肾活血方可以改善肾间质纤维化大鼠肾功能;可以提高肾组织中HGFmRNA的表达,防治肾间质纤维化.     

通脉口服液抗肾小管间质纤维化作用研究

目的探讨益气活血中药复方通脉口服液对肾小管间质纤维化的干预作用。方法采用单侧输尿管结扎致肾小管间质纤维化模型,同时制备中医气虚血瘀模型,实验共分6组,分别为空白对照组、模型组、洛汀新组、通脉口服液高、中、低剂量组。观察实验大鼠用药前后证候积分、血清肌酐及尿素氮的水平、梗阻侧肾间质慢性病变（包括肾小管萎缩和间质纤维化）评分（atrophy and fibrosis score,AFS）、肾间质细胞浸润情况评分CIS（cell infiltration score,CIS）。结果通脉口服液可明显改善实验大鼠的症状,明显减轻肾组织纤维化的病理形态,降低纤维化指数,疗效优于洛汀新组。结论通脉口服液具有一定的抗肾小管间质纤维化作用。     

慢性马兜铃酸肾病动物模型的建立及其意义

目的探讨建立马兜铃酸引起的大鼠慢性肾间质纤维化动物模型.方法将雌性wistar大鼠分为马兜铃酸组与对照组.马兜铃酸组大鼠腹膜内注射马兜铃酸5mg@kg-1@d-1共16周,开始用药后8、12、16、20、24周分别处死6只大鼠.对照组大鼠(5只)腹膜内注射生理盐水2ml/d,共16周,24周时处死.两组动物处死时分别留取血、尿、肾组织标本,分别作生化、病理(光镜,免疫荧光,电镜)等方面的检查及应用电脑软件测定肾小管-间质面积.结果马兜铃酸组大鼠用药后16、20、24周体重明显低于对照组;用药后16周血尿素氮、血清肌酐明显高于对照组,24周时肾功能损伤进一步加重.光镜检查可见马兜铃酸组大鼠有明显肾小管-间质损伤,16周时肾小管面积明显增加,管腔面积明显小于对照组;24周时出现明显肾小管萎缩,肾小管面积明显缩小,而肾间质面积明显增加,肾间质呈多灶性纤维化.电镜检查16周时肾小管上皮细胞胞质内初级溶酶体、次级溶酶体明显增加,部分肾小管上皮细胞刷状缘消失;20、24周时可见胞质内次级溶酶体和髓样小体堆积.结论建立了慢性马兜铃酸肾病动物模型.马兜铃酸具有慢性肾毒性作用,可引起大鼠慢性肾间质纤维化.     

经典退黄三方抗二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化的方证比较研究

目的：通过观察经典退黄三方茵陈蒿汤、茵陈五苓散和栀子柏皮汤对二甲基亚硝胺（dimeth—ylnitrosamine,DMN）诱导的大鼠肝纤维化模型的效应,探讨该模型的病机。方法：48只大鼠按体质量分层随机分为正常对照组、模型组、茵陈蒿汤组、茵陈五苓散组和栀子柏皮汤组,采用DMN腹腔注射4周的方法诱导大鼠肝纤维化模型。从造模第3周开始,各药物组在继续造模的同时予以相应的药物干预,正常对照组和模型组给以等量生理盐水。4周末结束实验,杀鼠取材,观察各组大鼠一般情况、肝组织病理学、羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）含量及肝功能变化。结果：与正常对照组相比,模型组大鼠出现显著的肝损伤和肝纤维化,肝组织Hyp含量显著升高（P〈0．01）,肝功能显著异常（P〈0．01）。与模型组比较,茵陈蒿汤可显著改善肝功能（P〈0．05或P〈0．01）,显著改善肝组织病理改变,降低肝组织Hyp含量及肝脏胶原增生程度（P〈0．01）;茵陈五苓散可显著降低血清总胆红素含量（P〈0．01）,对肝组织病理影响不明显;而栀子柏皮汤显著改变肝脏病理,并对肝组织Hyp含量有降低作用。结论：茵陈蒿汤对DMN诱导的大鼠肝纤维化的治疗效果优于茵陈五苓散和栀子柏皮汤;DMN诱导的大鼠肝纤维化模型在其形成期的病机以“湿（瘀）热内蕴”为主,且湿（瘀）热并重,与茵陈蒿汤方证高度相关。     

红花注射液对梗阻性肾病解除梗阻后肾功能恢复的机制研究

目的：探讨在新西兰大白兔梗阻性肾病的动物模型上解除梗阻后,红花注射液对促进肾功能恢复的机制。方法：将50只新西兰大白兔随机分为假手术组20只、模型组20只、治疗组10只。先建立梗阻性肾病新西兰大白兔动物模型,梗阻成功后,普通喂养4周,再次手术解除梗阻,治疗组向腹腔注射红花注射液,假手术组、模型组向腹腔注射生理盐水,2周后处死全部新西兰大白兔,提取肾组织行病理检查。检测血肌酐及尿素氮评价肾功能,评估药物的疗效,分析药物可能的作用机制及作用途径。结果：新西兰大白兔双侧输尿管梗阻后,肾功能明显减退,肾间质纤维化增加;运用红花注射液治疗后,肾功能显著改善,肾间质纤维化延缓。结论：红花注射液对新西兰大白兔梗阻性所致的肾功能损害解除梗阻后肾功能的恢复具有显著的保护及促进作用,该作用可能与红花其具有抗纤维化的作用有关。     

六味地黄汤对慢性肾衰模型大鼠PHD2和HIF-1α表达的影响

目的观察六味地黄汤对慢性肾衰模型大鼠肾组织中脯氨酸羟化酶2(PHD2)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,探讨慢性肾衰的发病机制以及六味地黄汤防治慢性肾脏病的分子机制。方法 60只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组。5/6肾切除法复制慢性肾衰模型。六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组分别给予3.38 g/(kg·d)、6.75 g/(kg·d)、13.5 g/(kg·d)六味地黄汤灌胃。假手术组和模型组给予10 mL/(kg·d)生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃12周。造模12周后,检测各组大鼠24 h尿蛋白、血尿素氮和血肌酐,HE染色观察各组大鼠肾组织形态学变化,免疫组化法和RT-PCR法分别检测各组大鼠肾组织中PHD2、HIF-1α蛋白水平和基因表达。结果模型组大鼠24 h尿蛋白、血尿素氮和血肌酐较假手术组明显升高(P0.05),六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组较模型组明显降低(P0.05)。HE染色假手术组大鼠肾组织肾间质纤维化不明显,模型组肾间质纤维化明显,六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组较模型组肾间质纤维化程度明显减轻。与假手术组比较,模型组大鼠肾组织PHD2蛋白水平和mRNA表达均明显降低(P0.05),HIF-1α蛋白水平和mRNA表达均明显升高(P0.05)。与模型组比较,六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组大鼠肾组织中PHD2蛋白水平和mRNA表达均明显升高(P0.05),HIF-1α蛋白水平和mRNA表达均明显降低(P0.05),且PHD2与HIF-1αmRNA的表达呈负相关(r=-0.653,P=0.00)。结论 PHD2/HIF-1α信号途径参与肾间质纤维化,六味地黄汤可有效防治慢性肾脏病,其作用机制可能与上调PHD2、降低HIF-1α表达有关。