新型骨基质材料细胞相容性的形态学研究

目的 检测新型有机-无机复合类骨基质材料（new bone-matrix material,NBM)的细胞相容性，为骨组织工程探寻一种新型复合类细胞外基质材料提供实验依据。方法 应用组织培养技术，对兔骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cell,BMSC)和NBM体外联合培养进行相差显微镜观察和扫描电镜观察。结果 BMSC可以在NBM材料上发生良好的粘附，增殖，并能长入材料的孔隙内，分泌大量的细胞外基质成分，结论 NBM在体外与BMSC复合培养时表现出良好的细胞相容性，对细胞的粘附，增殖和功能表达未见明显影响。     

新型骨基质材料的研制及其细胞相容性评价

骨基质材料的构建是限制骨组织工程学发展的“瓶颈” ,寻找理想的基质材料已经成为骨组织工程学者的共识[1] 。我们将有机成分和无机成分通过合适的方法进行交联 ,制成一种多孔的有机 无机复合类新型骨基质材料 (ｎｅｗｂｏｎｅ ｍａｔｒｉｘｍａｔｅｒｉａｌ,ＮＢＭ) ,并以生物活性玻璃陶瓷材料 (ｂｉｏａｃｔｉｖｅｇｌａｓｓｃｅｒａｍｉｃ ,ＢＧＣ)作对比 ,初步观察ＮＢＭ材料与兔骨髓基质干细胞 (ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌ,ＢＭＳＣ)体外复合培养情况 ,为该材料的进一步改良提供相关实验依据。一、材料与方法1 主要…     

血管组织工程生物材料细胞相容性的评价

目的探讨以聚羟基丁酸戊酸酯(PHBV)为主体的几种生物材料和人包皮成纤维细胞的生物相容性,为组织工程血管初步选择较好的支架材料。方法将以PHBV为主体的几种生物材料和人包皮成纤维细胞体外培养,并对材料的接触角、细胞的形态和细胞的增生情况进行测定。结果所有的材料中,PHBV生物材料接触角最小,与细胞的相容性最好。结论PHBV具有良好的细胞相容性,从而为组织工程血管初步筛选出一种较好的生物材料。     

聚酯／钙磷盐植骨材料的细胞生物相容性

骨缺损修复一直是骨科领域的难题之一，而利用骨组织工程的方法修复骨缺损被认为是最有前途的手段。作为骨组织工程细胞载体材料需要良好的组织及细胞相容性，我们采用骨髓基质细胞检测聚酯／钙磷盐支架与组织工程种子细胞的相容性，试图寻找一种有潜力的骨移植及细胞组织工程细胞载体材料。     

三嵌段骨基质材料的体外生物学性能评价

目的 对自主研制的三嵌段骨基质材料——聚丙交酯／乙交酯／天冬氨酸聚乙二醇（PLGA-[ASP—PEG]）的体外生物相容性进行评价。方法 选用建系的L929成纤维细胞进行细胞毒性试验、溶血试验和热原试验；并以PLGA作为对照，计算细胞黏附率。结果 PLGA—EASP-PEG]的毒性评级为0～Ⅰ级；细胞在其表面生长旺盛、形态良好；溶血率为3．08%无热原反应。PLGA-[-ASP—PEG]的细胞黏附率高于PI．GA（P〈0．05）。结论 PLGA-[ASP—PEG]具有良好的生物相容性。     

具有良好细胞相容性的脱细胞血管支架的制备

目的制备具有良好细胞相容性的脱细胞血管支架材料,为构建组织工程血管奠定基础。方法用含有脱氧胆酸钠、SDS、EDTA的低渗液和等渗液以及核酸酶对猪的胸主动脉进行脱细胞处理．使用HE、Movat五色法、DAPI染色及电镜观察处理结果。以MTT法分析脱细胞溶液的细胞毒性,通过种植内皮和平滑肌细胞,分析支架的细胞相容性。结果上述方法使用的脱细胞溶液细胞毒性低;经该法处理后,血管的细胞成分完全去除,胶原纤维、弹性纤维、糖蛋白等主要基质成分充分保留,组织结构完整,内皮细胞和平滑肌细胞可以在上面黏附生长,形成完整的细胞层。结论利用脱氧胆酸钠、SDS、EDTA和核酸酶联合消化的方法．可制备出基质成分充分保留、细胞相容性优良的脱细胞血管支架．适于构建组织工程血管。     

聚酯／钙磷盐植骨材料的细胞生物相容性

骨缺损修复一直是骨科领域的难题之一。而利用骨组织工程的方法修复骨缺损被认为是最有前途的手段。作为骨组织工程细胞载体材料需要良好的组织及细胞相容性，我们采用骨髓基质细胞检测聚酯／钙磷盐支架与组织工程种子细胞的相容性，试图寻找一种有潜力的骨移植及细胞组织工程细胞载体材料。     

新型生物玻璃支架细胞相容性的实验研究

目的探讨新型生物玻璃支架BG-20的细胞相容性,为组织工程支架材料的选择提供依据。方法将骨髓基质干细胞（BMSc）与BG-20体外复合培养,进行形态学观察、细胞增殖、碱性磷酸酶（ALP）测定。结果BMSc能贴附在BG-20上,增殖、生长不受影响,且BG-20有一定的促细胞增殖的作用。ALP测定结果BG-20组与对照组的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论BG-20具有良好的细胞相容性,能作为BMSc的载体用于组织工程骨的构建。     

脱细胞腮腺基质材料制备及生物相容性实验研究

目的：探讨新西兰大白兔脱细胞腮腺基质的生物相容性。方法采用冻融联合酶消化-冷冻干燥法制备的脱细胞腮腺基质材料,通过体外毒性试验、全身急性毒性及亚毒性试验等评价其生物相容性。结果脱细胞腮腺基质材料具有利于腮腺细胞生长的三维网状基质胶原结构。加入浓度为50%、100%的脱细胞腮腺基质浸提液的培养液培养腮腺细胞于3、5、7d时细胞数目与对照组无显著差异（P〉0.05）。浸提液注入兔腹腔未引起急性及亚急性毒性反应,心、肝、脾、肺、肾组织学检查未见组织和细胞变性。加入脱细胞腮腺基质浸提液的兔血溶血程度为1.86%。注射浸提液的兔的升高温度的最高值均小于0.6℃,体温升高总和小于1.4℃,符合致热原试验要求。结论脱细胞腮腺基质材料具有很好的生物相容性。     

多肽二维凝胶支架材料与鼠神经干细胞的细胞相容性

目的研究鼠神经干细胞在二维自组装多肽凝胶支架材料表面生长及分化情况，证明多肽凝胶可作为神经组织工程支架材料。方法取新生1周内乳鼠的大脑皮质，机械分离出神经干细胞，无血清培养液（DMEM／F12＋bFGF＋EGF＋B27）培养，免疫组化SABC法对神经干细胞进行鉴定；然后，将其接种到凝胶支架材料表面（实验组）及多聚赖氨酸包被的盖玻片表面（对照组），倒置相差显微镜观察干细胞的生长及分化情况。结果免疫组化法鉴定：培养的细胞为神经干细胞，Nestin（＋）。神经干细胞可分化为神经元及星形胶质细胞，NSE（＋），GFAP（＋）。倒置相差显微镜观察：实验组中。接种的神经干细胞生长良好，7d后可分化为有突起神经细胞；对照组中，7d后未发现长出突起神经细胞。结论二维自组装多肽凝胶对神经干细胞有良好细胞相容性，可作为神经组织工程支架材料。     

牛心包脱细胞基质的研制

目的为组织工程学方法研制生物瓣提供适合的基质材料。方法用去污剂-酶联合四步法脱除牛心包组织中的细胞,并对处理后组织的理化性质进行分析、测试。结果脱细胞效果良好,且能较好地保持胶原纤维和弹性纤维的排列分布。脱细胞后的牛心包组织的厚度、抗拉负荷、抗拉强度、断裂伸长率和热皱缩温度无明显变化。组织中可溶性蛋白含量无显著变化,而作为结构成分的胶原蛋白和蛋白聚糖得到了较好的保存。结论去污剂-酶联合四步法能有效地制造牛心包脱细胞基质材料。     

纳米羟基磷灰石/明胶仿生复合材料的制备及其细胞相容性

目的：评价纳米羟基磷灰石/明胶仿生复合材料的一般理化性质及细胞相容性。方法：采用冷冻干燥技术 将纳米羟基磷灰石与明胶复合物制成3D多孔支架材料,并用扫描电镜、傅里叶红外光谱、万能试验机等对复合材料 进行表征;原代培养BALB/c小鼠成骨细胞,取第3代与复合材料共培养,采用扫描电镜、细胞毒性实验、细胞增殖实 验和碱性磷酸酶活性测定法观察支架材料对细胞分化、增殖的影响。结果：扫描电镜显示复合材料为三维多孔状, 孔径大小约150~400 μm;傅里叶变换红外光谱显示复合材料无机相和有机相之间有较强的化学键合;复合材料抗压 强度为(3.28±0.51)MPa,孔隙率为(80.6±4.1)%,接近人松质骨。扫描电镜观察和MTT实验结果显示复合材料具有良好 的细胞相容性,小鼠成骨细胞在材料上黏附和伸展情况良好;细胞毒性I~II级;与材料共培养第5,7天的细胞增殖 率与对照组差异有统计学意义(P<0.05);第1,3天的碱性磷酸酶活性与对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。结 论：明胶与纳米羟基磷灰石在一定比例和条件下,采用冷冻干燥法可制备出具有较高孔隙率、适宜孔径大小的三维 连通多孔结构的仿生支架材料,具有良好的细胞相容性,有望成为一种新型骨组织工程支架材料。     

新型血管内支撑物材料的药理学、毒理学实验

目的 研究新型血管内支撑物材料对实验动物物循环、呼吸、自主活动、血管刺激的影响。方法 利用不同剂量的血管内支撑物材料及其溶液刺激SD大鼠、昆明种小鼠、家兔等动物，并进行相关的药理学、毒理学实验。结果 内置新型血管内支撑物材料对大鼠心血管及呼吸系统无明显影响，血管内支撑物溶液静脉注射对大鼠平均动脉压、收缩压、舒张压、呼吸频率均无明显影响。血管内支撑物溶液静脉注射对小鼠无明显兴奋或抑制作用；血管内注射支撑物溶液或血管内置支撑物，对家兔血管无明显刺激；家兔肠系膜动脉内置血管内支撑物后，血管内膜、中膜和外膜均未见明显病理变化。结论 新型血管内支撑物材料对实验动物循环、呼吸、自主活动、血管无明显作用，可作为内置材料用于激光血管吻合。     

经转染人骨形态发生蛋白7基因后骨髓间充质干细胞mRNA的表达

目的构建人骨形态发生蛋白7(humanbonemorphogeneticprotein7,hBMP-7)逆转录病毒载体并检测经逆转录病毒介导基因转染的兔骨髓间充质干细胞(bonemarrow-derivedmesenchymalstemcell,MSCs)mRNA的表达。方法构建hBMP-7逆转录病毒载体后利用脂质体介导的基因转移技术转染包装细胞PT67,制备含目的基因的重组逆转录病毒液并感染兔骨髓间充质干细胞,采用原位杂交、RT-PCR检测hBMP-7mRNA在MSCs中的表达。结果成功构建了hBMP-7逆转录病毒载体,经hBMP-7基因转染的MSCs可表达外源性BMP-7mRNA。结论采用逆转录病毒介导的方法可以将hBMP-7转染至MSCs中并表达外源性基因。     

羟基磷灰石体内植入的实验研究

目的 探讨颗粒型羟基磷灰石(hydroxyapatile,HA)植入体内后的凝固、塑形和机体对植入物的反应情况。方法 实验用新西兰大白兔16只,随机分成二组：实验组和对照组。取兔鼻小柱正中小切口,对照组鼻背筋膜下行钝性分离出遂道后植入固体硅胶,实验组钝性分离至骨膜下,植入等体积的颗粒状HA。术后肉眼观察局部组织改变、HA塑形情况以及与骨粘连的牢固度。3周后处死动物取植入物周围组织行组织病理学检查。结果 两组动物在术后3周内手术部位无化脓、破溃和植入物外露。实验组术后2天植入物凝结成块状,1周时完全变硬,3周时均达到骨性硬度,术后2周植人物与骨完全粘连,经皮难以推动。对照组植入物硬度无改变,在隧道内可以推动。术后3周时两组植入物周围组织均有不同程度的纤维组织增生,且有很薄的纤维囊壁形成,以对照组更为明显。结论 颗粒型HA植人体内后可快速凝固;且和骨组织牢固融合,机体组织反应轻。     

4种生物材料大鼠体内生物相容性的对比实验研究

目的：探讨羟基磷灰石（HA）、高密度多孔聚乙烯（Medpor）、聚己内酯（PLA）、硅橡胶在大鼠体内的生物相容性,为骨组织修复材料的选择和临床修复骨缺损提供参考依据.方法：Wistar大鼠28只随机分为对照组、实验1组和实验2组,实验1组分别将HA、Medpor植入大鼠背部左、右侧肌肉内,实验2组分别将PLA、硅橡胶植入大鼠背部左、右侧肌肉内,对照组不植入任何材料.分别于术后2、4、8、12周处死大鼠,进行大体标本、光镜和电镜下观察.结果：所有动物没有出现感染死亡.实验1组HA界面的炎性反应较重,Medpor界面无明显炎性反应,Medpor与周围组织紧密结合,组织可长入材料的微孔内.实验2组PLA界面无明显炎性反应,并可在体内缓慢降解,硅橡胶界面的炎性反应较重.结论：Medpor和PLA具有良好的生物相容性,无毒性及免疫原性,是较好的生物材料.     

新型复合盖髓材料的体外细胞毒性研究

目的检测新型复合盖髓材料磷酸钙-硅酸钙-泡铋矿复合水门汀（calcium phosphate-calcium silicate-bis-muth compound cement,CASBi）的体外细胞毒性,并与临床常用盖髓材料的细胞毒性进行比较,为评价新型盖髓材料的生物相容性提供基础依据。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法和琼脂覆盖法,评价CASBi和商品化盖髓材料Dycal、氢氧化钙糊剂（calcium hydroxide,CH）对人牙髓细胞的体外细胞毒性作用。结果 MTT和琼脂覆盖法均显示CASBi的细胞毒性为1级,Dycal和CH的细胞毒性为2级。统计结果显示,MTT实验中,CASBi与Dycal、CH的吸光光度值间存在显著性差异（P〈0.05）。结论新型复合盖髓材料CASBi具有轻微的细胞毒性,对牙髓组织的影响还有待进一步研究。     

新型猪胶原基真皮支架细胞毒性及亲和性的实验研究

目的通过对一种新型的猪胶原基真皮支架（PCDM）的细胞毒性和与成纤维细胞（FB）的亲和性进行评价,为这种新型生物材料的安全应用及工艺改良提供依据。方法用MTT法检测真皮支架不同浓度的浸提液对细胞增殖的影响情况,按医用生物材料细胞毒性分级标准进行评级;用MTT法测定种植24 h后FB在PCDM乳头层面的黏附情况,并与空白培养板对照,确定细胞在支架上的黏附率;在PCDM乳头层面种植人FB,于接种后1、7、14天通过苏木精-伊红染色、扫描电镜观察FB在PCDM上的生长情况。结果PCDM细胞毒性评级为0～1级,可认为无细胞毒性;FB在PCDM上的黏附数目相当于在培养板上的50%;FB在真皮支架乳头层表面增殖良好,但无法长入支架内部。结论猪胶原基真皮支架是一种无毒的天然异种真皮替代物,细胞亲和性较好,但需要改良生产工艺,以提高细胞黏附率和细胞相容性。