人血红素加氧酶基因近端启动子区研究进展

分析血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)基因mRNA加帽位点上游1416bp及mRNA5′端未翻译区24bp全长1.44kb片段。通过大片段缺失,发现与诱导剂相关的mRNA加帽位点近端上游121bp,可使基因的瞬时表达提高3～5倍,同时诱导作用发生在SV_(40)增强子元件位于启动子序列上游。另外在1.44kb片段间mRNA加帽位点上游有沉默子或负调控元件及NF-κB-和AP-2结合位点,而在1.44kb之外还有附加的诱导增强子元件。     

人β-防御素-2基因5′-端转录调控序列分析

目的 :对在LPS、TNF α刺激下 ,人 β 防御素 2基因 5′ 端转录调控机制进行初步分析。 方法 :将HBD 2基因 5′ 端上游序列连接入无启动子的pEGFP 1质粒 ,构建了系列 5′端缺失的 pEGFP 1 /HBD 2报告质粒。pEGFP 1 /HBD 2质粒转染细胞后给予LPS、TNF α刺激 ,用RT PCR检测 pEGFP的mRNA浓度。 结果 :显示HBD 2基因上游 2 41段有较强的启动子活性 ;LPS、TNF α刺激后 ,即使上游序列缩短至 2 41位点时 ,报告基因 pEGFP的mRNA表达量仍明显增高。说明HBD 2基因上游 2 41区域含有LPS、TNF α刺激后激活的转录因子作用位点。计算机分析表明 2 3 2 / 2 2 2区域有一同源性极高的NF kB结合元件 ,提示NF kB结合元件可能调控HBD 2的增强表达     

NF-κB3结合位点在人TNF-α基因转录调节作用中的研究

目的 :探讨TNF α启动子中 3个κB位点在调节基因转录中的作用及其与核蛋白作用的亲和力关系。方法 :用含不同调节区域的重组报告基因进行HL 6 0细胞的基因转染 ,检测LPS刺激前后及κB3 反义寡核苷酸封闭后的报告基因表达水平 ;提取LPS刺激 6h的HL 6 0的细胞核蛋白 ,用凝胶迁移率改变实验及竞争结合实验比较NF κB与TNF α的 3个NF κB位点的亲和力。结果 :尽管TNF α基因中 3个κB位点都参与该基因的诱导和非诱导性转录调节 ,但κB3 位点的作用更为重要 ;3个κB位点能同LPS刺激和非刺激的HL 6 0细胞核蛋白发生特异性结合 ,但LPS刺激的蛋白 DNA复合物电泳条带明显增粗 ,尤其κB3 位点出现 2条明显的特异性条带 ;3个κB位点与LPS诱导后HL 6 0核蛋白的亲和力强弱顺序依次为 :κB2 >κB1 >κB3。结论 :TNF α基因的 3个κB位点都能与NF κB结合 ,从而参与调节HL 6 0细胞TNF α组成性表达和LPS诱导性表达。尽管κB3 位点在对LPS刺激的反应性中发挥的作用最大 ,但这种效应与其同核蛋白亲和力的大小无关。     

组织因子基因的顺式调节元件

人组织因子(TF)基因位于1p21-22,启动子区有2个AP-1位点、1个κB样位点、5个Spl位点及3个Egr-1位点。其中TF的基础表达与5个Spl位点均有关;血清反应元件与近端3个Spl位点和3个Egr-1位点有关;切应力反应元件与近端3个Spl位点有关;缺氧反应元件与3个Egr-1位点有关;脂多糖反应元件与2个AP-1位点和1个κB位点相关;PMA反应元件与2个AP-1位点、κB位点、近端3个Spl位点和3个Egr-1位点均有关。     

研究短文伊贝沙坦对系膜增生肾炎大鼠肾核因子-κB及MMP-9的作用

核因子-κB(nuc lear factor-kappaB,NF-κB)是一种重要的核转录因子,参予细胞内信号传递,调控多种基因表达,许多肾脏疾病均伴有NF-κB转录活性异常。基质金属蛋白酶-9(m atrix m etalloprote inase-9,MMP-9)基因5′端启动子内有NF-κB的结合位点,许多细胞因子可通过这些结合位点来诱导MMP-9的表达。MMP-9的表达和活性与肾小球内的细胞增生呈正相关。血管紧张素II(angiotensinII,AngII)有调节血管张力、血流和促进细胞生长、增生以及致炎等作用,它可激活肾脏NF-κB表达,从而使NF-κB调控下的炎症因子表达上升。系膜增生性肾小…     

抗氧化剂和NFκB对大鼠肺微血管内皮细胞iNOS表达的影响

目的 :探讨NFκB在大鼠肺微血管内皮细胞iNOS基因诱导表达中的作用及抗氧化剂对内皮细胞iNOS诱导表达的影响及其机制。方法 :Griess法测定细胞培养上清液NO-2 水平以反映NO的生成 ,Northern印迹分析iNOSmRNA水平 ,EMSA法测定细胞核内NFκB的结合活性。结果 :抗氧化剂可阻断内皮细胞培养体系LPS和TNFα诱导的NO生成及iNOSmRNA的表达 ;LPS和TNFα可诱导大鼠肺微血管内皮细胞NFκB的激活并可被抗氧化剂阻断。结论 :LPS和TNFα诱导的内皮细胞iNOS基因表达依赖于NFκB的激活 ;抗氧化剂可通过抑制NFκB的活化而阻断iNOS基因的诱导表达     

NF-κB结合位点突变对人NOD2基因启动子调控的影响

探讨NF-κB结合位点突变对人NOD2基因启动子调控的影响。采用PCR技术从人基因组DNA中扩增含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子序列,并定向克隆入已切除启动子的表达载体pEGFP-N3中,构建含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白(green fluorescent proteins,GFP)载体pEGFP-N3-NOD2wt,并构建NF-κB结合位点2个碱基缺失突变的载体,将构建的重组质粒瞬时转染HEK293细胞,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果显示重组质粒转染HEK293细胞后,在倒置荧光显微镜下均能看到绿色荧光,其中pEGFP-N3-NOD2wt重组质粒在HEK293细胞中荧光表达较强,而突变质粒mpEGFP-N3-NOD2荧光强度明显减弱。说明NF-κB结合位点是驱动NOD2基因转录的重要元件,且在NOD2基因启动子的调控中发挥了正调节作用,为进一步研究NOD2基因表达及调控机制提供了新的思路。     

CaMK Ⅱα基因启动子的克隆和神经细胞特异性Cre表达载体的构建

目的克隆和鉴定CaMKⅡα基因启动子序列，构建神经细胞特异性Cre重组酶的真核表达载体。方法采用高保真PCR方法分步扩增CaMKⅡα基因5′端8．1kb的调控区DNA片段，该片段包括了CaMKⅡα基因5′端调控区的所有序列。经克隆和部分序列测定后，依次与pCre—IRES—EGFP质粒框架连接，构建载体。结果克隆的CaMKⅡα基因5′端侧翼区酶切图谱与公布的C57BL/6J小鼠相应序列的酶切位点相一致，其中文献报道的富含顺式调控元件的序列与公布的小鼠序列完全相同。CaMKⅡα基因启动子正确地连接于Cre基因的5′端，构建了目标载体。结论这一载体的构建为建立前脑神经细胞特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠奠定了基础，有助于神经系统相关疾病的研究。     

NF-κB的信号通路与阻断策略

核因子κB(nuclearfactor -kappaB ,NF -κB)是普遍存在于细胞浆中以p5 0 /p6 5异二聚体为形式的一种快反应转录因子 ,与NF -κB的抑制性蛋白 (in hibitorkappaB ,IκB)结合而呈非活性状态。大量研究表明 ,它可以被多种刺激剂 ,如TNF -α、IL - 1、神经生长因子、蛋白激酶C激活剂、有丝分裂原、氧化剂、细菌、病毒、免疫刺激剂、脂多糖 (lipopolysacchar ide ,LPS)、自由基以及紫外线等激活[1- 3] 。激活的NF -κB与IκB解离后转位入核与靶基因启动子 /增强子上的κB位点结合 ,从而调节许多靶基因的表达 ,因此被誉为控制早期基因…     

NF-κB结合位点在NOD2基因调控中的作用

目的 探讨NF-κB结合位点在NOD2基因调控中的作用.方法 以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子序列,以切除启动子的pEGFP-N3作为框架结构,将这段序列进行酶切并定向克隆入表达载体pEGFP-N3中,构建含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白(GFP)载体,将构建的重组质粒经脂质体LipofectAMINETM2000介导瞬时转染HeLa细胞,在倒置荧光显微镜下观察其能否在NOD2基因启动子的调控下表达报告基因GFP.用突变试剂盒将重组质粒pEGFP-N3-NOD2wt中的NF-κB结合位点缺失突变,将构建的突变重组质粒mpEGFP-N3-NOD2瞬时转染HeLa细胞,观察绿色荧光蛋白的表达情况.结果 pEGFP-N3-NOD2wt和mpEGFP-N3-NOD2经酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功,并且NF-κB结合位点突变成功.细胞转染结果表明,构建的重组质粒pEGFP-N3-NOD2wt转染HeLa细胞,在倒置荧光显微镜下能看到绿色荧光,而突变质粒mpEGFP-N3-NOD2荧光强度明显减弱,与未转染质粒相近.结论 成功构建了含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子的重组质粒和含有NF-κB结合位点缺失突变的重组质粒;NF-κB结合位点突变重组质粒在HeLa细胞巾绿色荧光表达明显减弱,说明NF-κB结合位点在NOD2基因调控中发挥了正调节作用;为进一步研究NOD2基因表达及调控机制奠定了良好的基础.     

衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3的表达

目的:研究在衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)表达增加的影响因素.方法:用Northern blot的方法显示IGFBP-3基因的表达在年轻和衰老的2BS细胞中存在差异;PCR扩增出人类IGFBP-3上游包括5′-UTR区的2 kb的序列并用酶切得到4组不同长短的IGFBP-3启动子片段;将各片段用Effectene Transfection Reagent试剂盒转染到年轻和衰老细胞中,测出几组构建基因片段的启动活性,确定可调控转录活性的区域;通过重叠寡核苷酸凝胶阻滞实验确定在该活性区域中的增强子元件.结果:与年轻的2BS细胞相比,衰老的2BS细胞中IGFBP-3基因的表达升高;在IGFBP-3启动子+59到-58序列之间存在着蛋白结合位点;5′-ccagcctgccaagcagcgtgccccggttgc-3′是IGFBP-3的增强子元件.结论:在衰老的2BS细胞中IGFBP-3基因上游-37到-8的30 bp序列存在一个新的增强子元件IEE (IGFBP-3 enhancer element),对IGFBP-3的表达起到调控作用.     

NF-κB "decoy"寡核苷酸对LPS诱导巨噬细胞产生NO及活性氧的影响

目的 :探讨NF -κB“decoy”寡核苷酸 (ODNs)对脂多糖 (LPS)诱导小鼠巨噬细胞株J774 1产生一氧化氮 (NO)及活性氧的影响。方法 :通过体外细胞培养技术 ,观察转染NF -κB“decoy”ODNs对LPS刺激巨噬细胞产生NO和活性氧 (ROS)的影响 ,以及诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)活力的变化。结果 :在LPS刺激的巨噬细胞中转染NF -κB“decoy”ODNs减少NO和ROS的产生 ,降低iNOS的活力。结论 :NF -κB“decoy”ODNs可以对抗LPS诱导巨噬细胞产生的ROS和NO ,可能与其特异性竞争抑制活化NF -κB结合位点有关。     

NF-κB 激活蛋白2(NAP2)诱导白细胞介素-12分泌的研究

目的：研究新克隆的编码NF—κB激活蛋白2(NAP2)基因的功能及作用机制。方法：采用NF-κB和IL—12启动子荧光素酶报告质粒及胞质内IL—12染色法，观察NAP2基因产物在巨噬细胞中对NF—κB、IL—12启动子的激活及对IL-12合成的调控。结果：NAP2可激活NF—κB和IL—12启动子，而IκBαDN则可抑制他们的活化。在巨噬细胞系J774中，NAP2也可诱导IL—12表达。结论：NAP2基因产物可激活IL—12启动子并诱导IL—12的合成，提示NAP2可能是通过调控NF—κB转录因子而调节IL—12的表达。     

TNFα激活NF-κB转录活性由Rel/p65 529位丝氨酸磷酸化介导

NF－κB／Rel转录因子在与免疫和炎症反应、生长、发育和死亡等有关基因转录中具有重要的调控作用．NF－κB因其与免疫球蛋白κ轻链基因增强子结合而得名,是由p50和p65组成的杂合二聚体;存在于大多数细胞的胞浆中,与抑制蛋白IκBs结合而没有活性．以往的许多研究证明I...     

鼻咽癌STGC3基因转录调控元件分析与鉴定*

目的：分析并鉴定STGC3基因转录调控元件,探讨鼻咽癌STGC3基因的转录调控分子机制。方法：运用 生物信息学,预测并分析STGC3基因核心启动子区的转录因子结合位点;将相关转录因子结合位点,制备3 种探 针即生物素标记野生型、突变型及未标记野生型;提取CNE2细胞核蛋白,利用电泳迁移率变动分析（ EMSA） 及染色质免疫共沉淀（ ChIP）分析,体内外鉴定转录因子结合位点。结果：在STGC3基因核心启动子区存在21 个转录因子结合位点,其中9 个为Sp1 转录因子结合位点;进一步严格限定参数,STGC3基因核心启动子区域含 有转录因子结合位点5 个,其中Sp1 转录因子结合位点2 个;EMSA和ChIP 实验结果显示,STGC3基因中存在转 录因子Sp1 特异性结合位点,从而鉴定出STGC3基因转录调控元件。结论： STGC3基因核心启动子区含有Sp1 特异性结合位点,为该基因的转录调控元件。     

核转录因子κB在全身为症反应综合征中的作用

核转录因子κB（NF－κB）是一种多向性核转录调工蛋白,参与多种炎症介质基因的转录和调控,在炎症、免疫反应中发挥重要作用。本文就NF－κB与全身炎症反应综合征的关系以及阻断NF－κB对全身炎症反应综合征、多器官功能不全综合征的治疗作用作一综述。     

NF-κB信号转导途径与肿瘤抗凋亡关系的研究进展

细胞核因子κB(NF κB)家族及其介导的细胞信号转导通路广泛调控着人类免疫和炎症反应中一系列基因的表达 ,同时也发现它对肿瘤的发生发展有着重要作用 ,特别是它可以调控一些细胞凋亡相关基因如TRAF家族、IAPs家族、Bcl 2家族及FLIP基因、p5 3基因、COX 2基因的转录表达 ,从而大大提高肿瘤细胞的抗凋亡能力。本文就近年来对NF κB通路与肿瘤抗凋亡关系的研究进展作一综述     

呼吸道合胞病毒激活靶细胞NF—κB的机制及途径研究进展

NF－κB是一个重要的转录调节因子，调控许多生物活性介质基因的转录和表达。静息时，NF－κB与IκB结合以非活性异寡聚体的形式存在于胞浆中，胞外刺激通过不同的信号转录途径激活NF－κB。本文主要介绍了呼吸道合胞病毒作用于靶细胞通过蛋白激酶C、磷脂酰肌醇激酶3、丝裂原活化蛋白激酶及蛋白磷酸酶2A等介导的信号级联反应活化NF－κB的机制及途径的研究进展。     

内皮细胞应力反应元件的研究进展

内皮细胞能对力学刺激发生反应,流体切应力能直接调节内皮细胞基因的表达,现已发现内皮细胞内受切应力调节的基因有20多种。目前认为其调节机制是通过存在于基因的启动子内并且能够被切应力所诱导的启动基因转录的顺式调控元件－－应力反应元件来调节基因的转录。目前已知的应力反应元件至少涉及4种转录因子的结合位点及10余种受切应力调控的相关基因。这4种转录因子分别是：（1）NF－κB;（2）AP－1;（3）Egr-1和（4）SP1。对应力反应元件的基序及基序结合蛋白的鉴定有待进一步的深入,以后还可能有效的应力反应元件被发现。在采用基因疗法来调控血管壁不同区段基因表达这方面已进行了有益的探索,显示出良好的前景。     

NF-κB信号通路基本元件调节机制的研究进展

核因子-kappaB（NF-κB）信号通路广泛参与调节免疫反应、炎症反应、细胞分化与凋亡、肿瘤形成等多种生物学功能。在非激活细胞中,NF-κB转录因子通常与其抑制物结合形成复合物,并在胞浆与胞核间达到平衡,但这种复合物主要存在于胞浆中。当受到胞外信号刺激后,复合物可以在NF—κB信号通路的多个信号转导途径中发生降解,使得抑制物从复合物中解离,释放出的大量活性NF—κB迅速转移入核,从而调控相应靶基因的表达。目前发现的和NF—κB的调节紊乱有关的疾病谱在不断扩大,这也使得对于NF—κB信号通路功能和调节的研究得到了深入发展,对通路中一些基本元件的调节也有了较为充分的了解。