高原红细胞增多症骨髓红系祖细胞体外培养的研究

目的 了解高原红细胞增多症(HAPC)骨髓红系组细胞增殖状况。方法 HAPC患者25例,正常对照22例身体健康者,应用造血祖细胞体外培养技术了解骨髓红系祖细胞(BFU-E,CFU-E)增殖能力,BFU-E及CFU-E对红细胞生成素(Epo)的反应能力。结果 HAPC患者骨髓BFU-E,CFU-E集落数分别高于正常对照。Epo对HAPC患者骨髓BFU-E,CFU-E刺激明显,与正常对照组比较BFU-E集落数差异显著(P<0.05);CFU-E集落数差异显著(P<0.01)。结论 HAPC骨髓红系祖细胞增殖能力增强,对Epo敏感性增高。     

高原红细胞增多症骨髓红系祖细胞凋亡异常的研究

目的：了解高原红细胞增多症(HAPC)骨髓红系祖细胞在细胞凋亡方面是否存在异常；方法：应用造血干细胞体外培养技术对红系祖细胞进行动态观察，培养72小时以后细胞染色观察细胞形态，应用凋亡细胞检测盒了解细胞凋亡发生率；结果：高原红细胞组与正常对照组均发生细胞凋亡，但发生率程度不一，高原红细胞凋亡少于正常对照(P＜0．05)；结论：高原红细胞增多症红系祖细胞存在凋亡异常，需进一步研究是否存在基因表达异常。     

高原红细胞增多症骨髓红系祖细胞体外培养的研究

目的：了解高原红细胞增多症（ＨＡＰＣ）骨髓红系组细胞增殖状况。方法：ＨＡＰＣ患者２５例，正常对照２２例身体健康者，应用造血祖细胞体外培养技术了解骨髓红系祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－Ｅ）增殖能力，ＢＦＵ－Ｅ及ＣＦＵ－Ｅ对红细胞生成素（Ｅｐｏ）的反应能力，结果：ＨＡＰＣ患者骨髓ＢＦＵ－Ｅ，ＣＦＵ－Ｅ集落数分别高于正常对照。Ｅｐｏ对ＨＡＰＣ患者骨髓ＢＦＵ－Ｅ集落数差异显著（Ｐ〈０．０１）。结论：ＨＡＰＣ     

Cimetidine对小鼠低氧条件下红系造血增强的抑制作用

本实验以组按H_2受体拮抗剂甲氰咪胍(Cimetidine)处理低压(0.5大气压)条件下生活的LACA小鼠。观察到:低氧两周后外周RBC数、PCV、Hb骨髓CFU-E数和BFU-E数明显增多,且CFU-E和BFU-E集落较大(集落直径为正常对照的3～5倍,资料未录入);外周血WBC数及骨髓CFU-GM数明显减少。CFU-S向红系分化明显增多,向巨核系、粒系分化明显减少。低氧小鼠同时给予Cimetidine两周后与低氧对照组比较,外周血RBC数、PCV、Hb、CFU-E数、BFU-E数均明显减少。外周血WBC数和Pt数在Cimetidine低剂量组(1mg/天)升高,但随着剂量的增加又有降低趋势(无统计学意义)。Cimetidine使CFU-GM数较低氧对照组明显增多,但随着剂量的增加CFU-GM增多的幅度逐渐减少。高浓度的Cimetidine(2-4mg/天)使CFU-S数较低氧对照组明显减少。CFU-S在Gmetidine的作用下向红系分化明显减少。而向粒系和巨核系的分化相对增多。     

干扰素γ联合红细胞生成素对多发性骨髓红系祖细胞的体外作用研究

为研究干扰素γ(IFN-γ)联合红细胞生成素(EPO)对多发性骨髓瘤(MM)红系祖细胞(CFU-E)的作用，采用细胞体外培养对10例MM患者进行了CFU-E培养。结果表明，单一IFN-γ对MM患者CFU-E即有明显促增殖作用；与EPO联合时，其促增殖作用更加明显，使MM患者CFU-E接近正常对照。提示IFN-γ联合EPO对MM红系祖细胞具有显著促增殖作用，可能提供可靠的实验依据。     

高原红细胞增多症骨髓前红系祖细胞体外培养动态观察

目的:对高原红细胞增多症(HAPC)骨髓前红系祖细胞(BFU—E)进行动态观察,以探讨其发病机理。方法:应用造血干细胞体外培养技术,取其体系内含单个核细胞2×10~5/ml置于培养液中,在5％CO_2、37℃及饱和湿度条件下培养,以观察其细胞生长情况。结果:红系祖细胞接种及增殖延滞时间为24h后,可见双细胞及少数4～6个细胞组成的细胞团。第4天可见10个左右细胞的细胞团,第6～7天可见较多CFU—E集落,第9天CFU—E集落数量明显减少,第10天可见较大或多中心的集落。呈桔黄色或颜色逐渐加深,以50～100个细胞的爆式集落为多见,联苯胺染色阳性,呈棕褐色,第14天可见较多较大的爆式集落含100～1000个左右细胞,培养至21d,BFU—E集落多数退化或消失。结论:观察中发现HAPC骨髓BFU—E集落产率与正常对照比较有显著差异(P<0.01),集落类型以多中心型,分散型为主。提示,HAPC骨髓BFU—E具有很强的增殖、分化能力,其机理需要进一步探讨。     

脐带血清在骨髓造血祖细胞培养中的效应

目的:探讨人脐带血清(CBS)在骨髓造血祖细胞培养中的效应,为脐血的应用提供实验依据.方法:用人骨髓单个核细胞,分别加入CBS或混合脐带血清(MCBS)和细胞因子,进行造血祖细胞(CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-GEMM)培养,观察集落数.结果:10?S能直接刺激骨髓细胞CFU-GM的形成.CBS的刺激活性和骨髓细胞血型相同与否无关.4人份以上的MCBS,刺激产生的CFU-GM显著高于单人份、双人份混合者,活性稳定.在CFU-GM培养时,20%MCBS与100ng/mlGM-CSF、20%马血清具有相同的效果.MCBS可提高CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-GEMM常规体系的集落产率.10%MCBS相当于65.6ng/ml GM-CSF、0.23U/ml、0.3U/ml 0.46U/ml Epo对CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-GEMM所起的作用.20%MCBS可直接刺激CFU-E形成.如培养体系内无BpA(爆式集落活性)存在时,形成 BFU-E、CFU-GEMM较少或几乎为零,当含BpA时,可形成一定量的BFU-E、CFU-GEMM集落.结论:CBS(MCBS)内含有能刺激CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-GEMM的生长活性;同血型或不同血型4人份以上混合,其刺激活性高,且稳定.具有良好的应用前景.     

用人尿中提取的红细胞生成素进行人骨髓红系祖细胞体外培养

本文介绍用从再生障碍性贫血病人尿中提取的EPO制剂进行人骨髓红系祖细胞体外培养的结果.在EPO为0.1～1u/ml的剂量范围内,CFU-E产率与EPO剂量呈良好线性关系,与同时用日本EPO制剂培养所得的结果相同.在BFU-E培养中,加入EPO 1u/ml,集落产率也与日本制剂相似.用普通显微镜和电子显微镜对集落和细胞进行的观察说明,集落中大部分是幼稚红细胞.     

低剂量率γ线连续照射后造血损伤与恢复的长期观察

小鼠经低剂量率(70拉德/天)γ线连续照射25天后,造血干细胞和造血祖细胞数量大幅度减少。在连续观察的一年期间,虽然骨髓有核细胞数和晚红系祖细胞(CFU-E)很快恢复到了正常水平,但造血干细胞(CFU-S)、祖细胞(BFU-E、CFU-GM)却始终处于低下状态,其水平相当于向年龄正常动物的50～70%.骨髓造血微环境也同时受到不同程度的破坏,停止照射詹半年其CFU-F只恢复至正常的70%.这些结果表明,小鼠经低剂量率γ线连续照射后,造血组织中存在着潜在的损伤,它是产生一系列辐射远后效应的重要原因。     

EPO单克隆抗体抑制CFU-E研究

目的 探讨EPO单克隆抗体是否具有抑制红系集落形成单位（CFU-E）形成的功能.方法 对大鼠骨髓进行定向体外CFU-E培养,按以下条件进行分组培养：空白对照组（不加EPO）、常规组（加EPO,不加EPO单克隆抗体）、EPO单克隆抗体干预组（EPO＋EPO单克隆抗体）.培养168 h后,观察各组CFU-E数量.结果 空白对照组、常规组、EPO单克隆抗体干预组的CFU-E集数落分别为0.0±0.0、151.8±23.3和10.7±3.9.EPO单克隆抗体干预组与常规组比较,CFU-E集落数存在非常显著性差异（P＜0.01）.结论 该EPO单克隆抗体可明显抑制CFU-E形成,即抑制红细胞系的增殖,是治疗高原红细胞增多症的可能药物.     

Epo多克隆抗体对抗Epo活性的研究

促红细胞生成素(Erythropoieti Epo)是促进骨髓红系祖细胞生长、增殖、分化和成熟的主要刺激因子,在高原红细胞增多症(HAPC)发病机理中起关键性作用。本文采用Epo多克隆抗体作为Epo拮抗剂,观察其抑制红系增殖、分化和成熟的作用,为临床应用Epo抗体治疗高原红细胞增多症提供理论依据。作者随机选取高原红细胞增多症患者8例,对其均进行临床检查及血液化验,于髂骨抽取骨髓,分离单个核细胞,在高原现场(海拔3680m)做以下条件骨髓培养:空白对照培养(既不加Epo,亦不加Epo抗体);加Epo常规培养(加Epo,但不加Epo抗体);加Epo抗体实验培养(既加Ep…     

Epo多克隆抗体对抗Epo活性的研究

目的:探讨促红细胞生成素(Epo)多克隆抗体是否具有拮抗Epo所致的高原红细胞增多症患者骨髓红系增殖活性的功能。方法:抽取高原红细胞增多症病人骨髓,分离单个核细胞,进行红系定向体外培养,观察加入Epo及Epo多克隆抗体对红系集落形成单位(CFU-E)的影响。结果:Epo多克隆抗体体外能抑制高原红细胞增多症病人骨髓红系增殖。结论:Epo抗体可以显著拮抗Epo促红细胞增生作用。     

8Gy60Co照射后小鼠骨髓中造血细胞损伤与修复的研究

研究了F₁小鼠(C₅₇BL×LACA)经SGy⁶⁰CoY射线一次全身照射后两个月中, 骨髓造血于细胞、粒系祖细胞、红系祖细胞以及骨髓有核细胞和外用血象的动态变化。结果表明, BMC, WBC和Hb照后下降一个数量级, 24天左右恢复正常。照后早期肯髓造血干细胞、粒系槛邹弛、红系祖细胞减少哥对照值的10^-3～10^-5山水平, 60天后不同程度恢复。它们总的变化趋势是一致的。骨髓造血干细胞与各拒细胞动态变化曲线经线性回归计算, 其相关系数顺序为BFU-E(0.979)>粒系祖细胞(0. 916)>CFU-E(086 3), 本文对致死剂量照射后各类细胞损伤与恢复的规律及相互联系进行了讨论。     

EPO多克隆抗体抑制EPO促CFU-E形成研究

目的:探讨EPO多克隆抗体是否具有对抗EPO促红系形成的功能。方法:对大鼠骨髓进行定向体外红系集落形成单位(CFU-E)培养,观察CFU-E数量,判定EPO多克隆抗体对红系增殖活性的影响。结果:与常规培养组比较,EPO多克隆抗体培养组CFU-E明显减少,P<0.01,差别有非常显著性。结论:EPO抗体可抑制EPO促红系形成,其可作为治疗高原红细胞增多症病人的药物进一步研究。     

人白介素9在大肠杆菌中的高表达

1989年杨育中教授成功地克隆与表达了人成熟白介素9(IL-9),各国学者对其生物学活性进行了深入研究,发现人IL-9与造血调控密切相关。富集人骨髓及外周血中细胞膜表面标志CD34~+DR~+/CD34~+DR~+D33的红系造血祖细胞或早期红系造血细胞,观察IL-9单独或协同促红细胞生成素(EPO)均可明显增加红系爆式集落(BFU-E)及红系集落形成(CFU-E),且与多种造血因子有较好的协同作用。最近还发现IL-9可提高T细胞系存活率,IL-9与其相应受体结合,传递生物信息,进一步拓宽了细胞因子的生物学活性范围。运用基因工程手段获得大量IL-9,无疑对基础医学研究及潜在临床应用具有较重要意义。通过PCR扩增获得IL-9基因片段,然后优化转译起始序列,选取大肠杆菌(E.coli)偏性碱基终止密码子TAA等条件,构建了人IL-9重组表达质粒pBV-HIL-9,重组人IL-9约占菌体总蛋白的20%,实现了人IL-9在大肠杆菌中高表达。     

高原红细胞增多症患者骨髓端粒酶活性的研究

目的研究高原红细胞增多症(HAPC)患者骨髓端粒酶活性的变化。方法用PCR-ELISA法测骨髓单个核细胞端粒酶活性。结果HAPC组患者骨髓端粒酶活性升高,并且与血红蛋白间有显著正相关,随端粒酶活性的增高,HAPC组患者血红蛋白也增高。结论端粒酶活性升高是引起HAPC红细胞增殖的调控机制之一,并且在HAPC形成的慢性代偿到失代偿过程中,端粒酶可能主要在失代偿阶段发挥作用。     

真皮多能干细胞促进大鼠急性放射损伤造血恢复的研究

目的 观察真皮多能干细胞移植对大鼠急性放射损伤后造血恢复的作用。方法 分离新生大鼠真皮多能干细胞体外培养至第10代用于研究，观察干细胞层体外对正常大鼠骨髓粒-巨噬系祖细胞和红系祖细胞集落生长的影响；进一步将真皮多能干细胞经尾静脉输入5Gyγ射线全身照射的大鼠体内，检测移植后骨髓有核细胞、粒-巨噬系祖细胞集落CFU—GM、红系祖细胞集落CFU—E和外周血白细胞数量、血红蛋白含量等指标的恢复情况，观察4周后动物的存活率。结果 真皮多能干细胞层体外可促进正常大鼠CFU—GM和CFU—E集落的生长；全身输入干细胞促进了5Gyγ射线全身照射动物的外周血白细胞和骨髓有核细胞、CFU-GM和CFU—E集落数的恢复。实验组动物4周后的存活率也明显高于对照组。结论 真皮多能干细胞具有一定支持造血的功能，可促进急性放射损伤大鼠的造血恢复，为造血损伤相关疾病的干细胞治疗提供新的细胞来源途径。     

胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段抑制EPO促CFU-E形成的研究

目的:观察胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段能否抑制EPO促红系形成。方法:对大鼠骨髓进行红系定向体外培养,加入胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段干预,观察红系集落形成单位(CFU-E)之数量,判定胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段对红系增殖活性的影响。结果:胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段加入干预培养后,CFU-E数量明显减少(P<0.01)。结论:胰蛋白酶酶切EPO之多肽产物体外能对抗EPO,抑制红系增殖。其可作为治疗高原红细胞增多症的可能药物进一步研究。     

复方天葡片对辐射损伤小鼠免疫与造血功能的影响

目的观察复方天葡片(cTP)对辐射损伤小鼠免疫与造血功能恢复的促进作用。方法 6周龄清洁级雄性ICR小鼠108只,随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组及cTP高、中、低剂量组,每组18只。cTP高、中、低剂量组动物分别给予0.06、0.12、0.24g/kg cTP灌胃,阳性对照组给予20mg/kg利可君灌胃,正常对照组及模型对照组用等体积蒸馏水灌胃,均为1次/d,连续21d。然后采用3.0Gy60Coγ放射源照射除正常对照组外的动物建立辐射损伤模型,并继续灌胃给药10d至实验结束。测定各组小鼠的淋巴细胞转化率、巨噬细胞吞噬作用、外周血白细胞数及红系(CFU-E、BFU-E)、粒-单核细胞系(CFU-GM)、巨核系(CFU-Meg)、混合系(CFU-Mix)集落生成单位并进行组间比较。结果与正常对照组比较,模型组小鼠经3.0Gy60Coγ照射后,T淋巴细胞、B淋巴细胞转化功能以及巨噬细胞吞噬功能均明显下降(P<0.01),而cTP可明显提高辐射损伤后小鼠淋巴细胞转化率及巨噬细胞吞噬作用;此外,与正常对照组比较,模型组小鼠接受3.0Gy60Coγ射线照射后外周血白细胞数量迅速降低(P<0.01),造血系统受损明显,CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-MEG和CFU-MIX数量急剧下降(P<0.001),而cTP可促进白细胞恢复,粒细胞-单核细胞集落、红细胞系集落生成单位、混合系集落生成单位生成数增加。结论 cTP具有明显的辐射防护作用,其作用机制可能与提高机体免疫功能及造血功能有关。     

高原红细胞增多症及药物防治

目的:了解高原红细胞增多症(highalti-tude polycythemia,HAPC)发病机制与治疗药物的研究进展。方法:查阅并研究了近15年国内外文献。结果:缺氧使肾合成促红细胞生成素(erythro-poietin;EPO)引发HAPC,腺苷(adenosine;AD)参与EPO合成调节;RBC膜收缩蛋白异常致RBC变形力降低,骨髓造血细胞对EPO过度敏感,骨髓红系祖细胞凋亡减少等亦是HAPC发病因素。治疗药血管紧张素转换酶抑制剂对纤溶抑制状态有效;乙酰唑胺降低HCT和EPO,提高动脉PaO2和SaO2;AD受体拮抗剂茶碱类,减少EPO与RBC生成,提高肺通气量;一些中药和中成药作用全面,疗效肯定。结论:HAPC启动因素是缺氧致肾脏合成/分泌EPO;血管紧张素转换酶抑制剂、AD受体阻断药是很有前途的HAPC治疗药;中药及其制剂值得进一步开发。