健脾化瘀方抑制肝癌SMMC一7721细胞ERK和c-fos表达的研究

目的:从基因和蛋白水平探讨健脾化瘀方抑制肝癌SMMC-7721细胞ERK和c-fos表达的影响.方法:分别采用RT-PCR和Western blot方法检测不同浓度健脾化瘀方处理SMMC-7721细胞前后ERK、c-fos mRNA和蛋白水平的改变.结果:健脾化瘀方能抑制肝癌SMMC-7721细胞ERK、c-fos mRNA和蛋白表达.结论:健脾化瘀方的作用机制之一可能是抑制肝癌SMMC-7721细胞ERK和c-fos的基因表达.     

健脾化瘀方对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响

[目的]探讨健脾化瘀方对人肝癌细胞系SMMC-7721的抑制率及药物浓度和作用时间对细胞抑制率的影响,以及IC_(50)药物浓度下对SMMC-7721凋亡的影响。[方法]采用MTT法,观察不同浓度的健脾化瘀方对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响及与药物作用时间之间的关系。用AnnexinV/PI双染色法,用流式细胞仪检测健脾化瘀方对肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响。[结果]健脾化瘀方浓度在5mg/mL时,对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖和时间依赖效应关系。健脾化瘀方对人肝癌细胞SMMC-7721作用24h后,肝癌细胞凋亡率升高,并有一定的浓度依赖性。[结论]健脾化瘀方有抑制SMMC-7721细胞的增殖,能诱导人肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡。     

健脾柔肝方含药血清诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及对VEGF表达的影响

目的:探讨健脾柔肝方含药血清诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:以健脾柔肝方低、中、高剂量含药血清培养液作用体外培养SMMC-7721细胞,并设立空白血清及5-FU组。MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数,荧光定量PCR检测VEGF-mRNA在细胞中的表达。结果:健脾柔肝方含药血清各组均有一定的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,均能不同程度的诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,抑制VEGF-mRNA的表达;而以化疗药5-FU组作用最强,健脾柔肝汤中、高剂量含药血清组次之,且作用相当。结论:健脾柔肝方含药血清可有效诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,其作用机制可能是通过抑制VEGF-mRNA的表达而实现的。     

清肝化瘀方含药血清对TGFα诱导人肝癌细胞SMMC-7721 MEK表达的影响

目的:观察清肝化瘀方含药血清对TGFα诱导人肝癌细胞增殖和信号传导因子MEK影响.方法:采用血清药理学方法,以病理鼠血清作对照,应用MTT比色法观察清肝化瘀方含药血清对TGFα诱导人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用.用Western免疫印迹方法检测对MEK蛋白表达影响,RT-PCR方法检测对MEK1mRNA表达影响.结果:肝化瘀方含药血清对TGFα诱导的肝癌细胞SMMC-7721增殖有明显的抑制作用,抑制效应呈时间依赖性.清肝化瘀方含药血清能抑制MEK蛋白的表达和MEK1的mRNA的表达.结论:清肝化瘀方含药血清能抑制TGFα诱导的人肝癌细胞增殖,抑制MEK1的mRNA的表达和MEK蛋白的表达,阻断TGFα在细胞内的信号传导.     

健脾柔肝方含药血清抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖及诱导凋亡作用

目的:探讨健脾柔肝方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:SMMC-7721细胞体外培养,以健脾柔肝方低、中、高剂量含药血清培养液作用SMMC-7721细胞,并设立空白血清及5-Fu组。MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果:健脾柔肝方含药血清各组均有一定的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,均能不同程度的诱导细胞凋亡;而以化疗药5-Fu组作用最强,健脾柔肝汤中剂量含药血清组次之。结论:健脾柔肝方含药血清不仅可直接抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,而且可有效诱导细胞凋亡。     

抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721的Bcl-2基因表达的调控作用

目的:研究与分析抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721的Bcl-2基因表达的调控作用.方法:首先培养人肝癌细胞SMMC-7721,然后使用噻唑蓝比色法(MTT比色法)检测抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721增殖能力,使用流式细胞仪检测人肝癌细胞SMMC-7721抑制能力和Bcl-2基因表达水平.结果:通过检测发现...     

冬凌草甲素对肝癌细胞增殖的抑制作用及其对E-cadherin、Vimentin表达的影响

目的:观察冬凌草甲素对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的增殖抑制作用并探讨其作用机制。方法:采用不同浓度的冬凌草甲素作用于人肝癌SMMC-7721细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,免疫组化法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、波形蛋白(Vimentin)的表达。荧光定量PCR检测上游基因mRNA的表达。结果:MTT法检测结果显示不同浓度的冬凌草甲素可抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性。免疫组化法显示,人肝癌SMMC-7721细胞的E-cad蛋白随冬凌草甲素浓度增加而表达增加,Vimentin蛋白随药物浓度增加而表达下降。荧光定量PCR结果显示,冬凌草甲素可上调人肝癌细胞E-cad上游基因mRNA的表达,抑制Vimentin上游基因mRNA的表达。结论:冬凌草甲素能抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,其机制与上调E-cad蛋白及mRNA的表达,降低Vimentin蛋白及mRNA的表达有关。     

健脾益气方含药血清下调Vimentin蛋白水平对人肝癌细胞SMMC-7721的影响

目的研究健脾益气方下调Vimentin蛋白水平对肝癌细胞的影响,探讨健脾益气方防治肝癌的机制。方法利用TGF-β1诱导的人肝癌细胞SMMC-7721 EMT模型,采用血清药理学方法,并结合Vimentin裂解剂和Caspase抑制剂,观察7.5%、15%、30%浓度健脾益气方含药血清干预对肝癌细胞增殖、侵袭、凋亡,及Vimentin、Caspase-3、PARP-1与Caspase-1蛋白表达的影响。结果与空白血清组比较,健脾中、高剂量组健脾益气方含药血清均可以降低肝癌细胞Vimentin和PARP-1蛋白表达量(P0.01),其下调程度与二者的裂解程度,及肝癌细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和凋亡率趋势一致;并升高肝癌细胞Caspase-3、降低Caspase-1蛋白的表达(P0.01)。Vim裂解组细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率和早期凋亡率在各实验组中均为最高值,其肝癌细胞中各蛋白表达趋势与健脾组一致,但下调或上调程度更明显。Casp抑制组细胞的增殖抑制率、侵袭抑制率在各实验组均为最低值,早期凋亡率在各实验组中也仅高于EMT模型组,两组间差异无统计学意义(P0.05);细胞中Caspase-3蛋白表达下调(P0.01),PARP-1表达上调(P0.01),Vimentin表达差异无统计学意义(P0.05),Vimentin和PARP-1无蛋白裂解片段出现。健脾各剂量组中以中剂量组效果最佳。结论 15%浓度的健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721的干预效果最佳。健脾益气方可能通过下调人肝癌细胞SMMC-7721中Vimentin蛋白的表达,抑制肝癌细胞的增殖与侵袭、并诱导部分肝癌细胞凋亡;导致Vimentin蛋白下调的原因可能在于Caspase-3对它的裂解。此过程中,健脾益气方一方面利用Caspase-3/Vimentin裂解片段形成的正反馈促凋亡信号诱导肝癌细胞发生凋亡,另一方面可能利用Vimentin水平的下调导致NLRP3/Caspase-1炎症信号通路减弱,干预肝癌炎症微环境。     

斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721 ERK1/2通路和G_2/M期调控蛋白的影响

目的探讨斑蝥素酸镁对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路和周期相关蛋白的影响。方法将不同浓度的斑蝥素酸镁作用于人肝癌细胞SMMC-7721,免疫印迹法检测ERK1/2通路和周期相关蛋白表达的变化。结果与对照组比较,0.895、1.79μmol/L浓度组的ERK1/2蛋白磷酸化水平明显下降,同时周期相关蛋白Cdc25C、Cdc2表达显著下调。结论推测斑蝥素酸镁可能是通过抑制ERK1/2通路,进而调控Cdc25C、Cdc2的表达下调,使细胞发生G_2/M期阻滞,最终诱导细胞凋亡。     

透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关因子的影响

[目的]观察透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,探讨透骨草提取物诱导SMMC-7721细胞凋亡的分子机制。[方法]流式细胞术检测透骨草提取物诱导SMMC-7721细胞凋亡的影响;免疫组化法检测透骨草提取物对SMMC-7721细胞caspase-9、-3、-7和x连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）表达的影响。[结果]40．91μg／mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞凋亡率为（26．84±1．23）％,明显高于对照组（P〈0．05）。40．9μg／mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞Caspase-9、-3、-7蛋白表达明显低于与对照组（P〈0．05）,而XIAP蛋白表达明显高于对照组（P〈0．05）。瞄论]透骨草提取物能通过XIAP／Caspase信号通路抑制SMMC-7721细胞凋亡。关键词：透骨草提取物;SMMC-7721细胞;凋亡;Caspase-9中图分类号：R285．5文献标识码：A文章编号：1672—1519（2013）10—0612—03     

积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的:观察积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法:用不同浓度的积雪草酸处理人肝癌SMMC-7721细胞;MTT法检测积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响;流式细胞术检测积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响;Transwell小室法检测积雪草酸对肝癌细胞迁移的影响;Western blot法检测积雪草酸对凋亡相关基因Bcl-2和Bax及上皮间质转化标志基因E-cadherin表达的影响。结果:与对照组比较,25、50、100μmol/L的积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖均有明显的抑制作用,差异均有统计学意义(P0.01)。流式细胞术结果显示,50μmol/L的积雪草酸处理后,肝癌细胞凋亡率显著增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。Transwell小室法检测结果发现,TGF-β能显著促进人肝癌SMMC-7721细胞迁移,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。1、10μmol/L的积雪草酸处理能够显著抑制TGF-β诱导的肝癌细胞迁移。积雪草酸处理后,人肝癌SMMC-7721细胞Bcl-2蛋白水平显著下降,Bax蛋白水平显著上调。TGF-β处理24 h后,SMMC-7721细胞E-cadherin表达水平显著降低,而不同浓度的积雪草酸均能抑制TGF-β诱导的E-cadherin表达水平下调。结论:积雪草酸能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡。     

PUMA在EGCG调节肝癌细胞生长中的作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人肝癌细胞株SMMC-7721生长的影响及其可能作用机制。方法采用不同浓度的EGCG处理SMMC-7721细胞,以四唑氮蓝还原法(MTT)观察处理后细胞的生长情况,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测抑癌基因PUMA mRNA表达水平的变化,Western-Blot检测PUMA蛋白水平的表达。结果 EGCG处理后SMMC-7721细胞生长明显抑制,并且呈现时间、剂量依赖性,凋亡细胞比例明显上升。抑癌基因PUMA的mRNA水平和蛋白表达水平随着EGCG浓度的增加而升高。结论 EGCG可以明显抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长,诱导其凋亡;其可能机制为上调抑癌基因PUMA的表达水平,从而促进细胞凋亡。     

沙蟾毒精诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制的研究

目的观察沙蟾毒精诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用。方法用M,rr法观察沙蟾毒精对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响：通过荧光染色、流式细胞分析等方法观察沙蟾毒精对细胞凋亡的影响：RT—PCR和Westernblot分析沙蟾毒精对Bcl-2、Bax、p53和p21等基因和蛋白表达的影响。结果沙蟾毒精对人肝癌SMMC-7721细胞的生长有明显的抑制作用,24h半数抑制剂量（IC50）为0．415μg／mL。细胞周期结果显示,人肝癌SMMC-7721细胞经不同浓度的沙蟾毒精处理后,G／M期细胞数量增加,而Go／G,期细胞数明显减少。RT—PCR和Westernblot结果显示,人肝癌SMMC-7721细胞经沙蟾毒精处理后,Bax的表达升高,而bcl-2的表达降低（P〈0．05）。结论沙蟾毒精可能通过线粒体凋亡途径诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡。     

健脾消癥方对肝癌细胞HepG2的增殖和凋亡作用研究

目的探讨健脾消癥方对人肝癌细胞增殖、凋亡的影响及可能的机制。方法 MTT法观察健脾消癥方对HepG2、SMMC-7721增殖的影响;Annexin V/PI双染色法观察健脾消癥方对HepG2凋亡的影响;实时荧光定量PCR法检测健脾消癥方对HepG2的凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Bak的mRNA表达的影响;Western blot检测健脾消癥方对HepG2细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。结果健脾消癥方对HepG2、SMMC-7721均有良好的增殖抑制作用,对HepG2的抑制作用尤为显著;Annexin V/PI双染显示,健脾消癥方作用HepG2 48h后出现明显的早期凋亡;实时荧光定量PCR证实健脾消癥方作用HepG2 48 h后,Bak、Bax基因mRNA表达上升,Bcl-2基因mRNA表达下降,Bcl-2/Bax比例下降;Western blot证实健脾消癥方作用HepG2 48 h后,Bax蛋白表达上升,Bcl-2蛋白表达下降。结论健脾消癥方对HepG2有良好的抑制增殖、诱导凋亡的作用;其作用机制可能与健脾消癥方下调Bcl-2、上调Bak Bax基因mRNA表达,下调Bcl-2蛋白,上调Bax蛋白有关。     

槲皮素对SMMC-7721肝癌细胞PI3K/AKT信号通路影响的探讨

目的:观察槲皮素( quercetin)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与细胞凋亡的影响,探讨其对SMMC-7721细胞PI3K/AKT信号通路的影响.方法:采用MTT法检测槲皮素对SMMC-7721细胞生长的抑制,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot检测槲皮素对SMMC-7721细胞PI3K/AKT信号通路凋亡相关蛋白表达的影响.结果:槲皮素抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖作用明显,且呈浓度和时间依赖性.顺铂和槲皮素40,80,160,320 μmol·L-148 h抑制率分别为62.19％,25.47％,27.18％,36.96％,51.28％.流式细胞术结果提示,槲皮素80,160,320μmol ·L -可使SMMC-7721肝癌细胞周期阻滞于G0/G1期.Western blot凋亡相关蛋白表达检测表明,药物组AKT的表达受抑制,PTEN,Caspase-9蛋白的表达率随着药物浓度的增加而增加.结论:槲皮素能诱导SMMC-7721肝癌细胞凋亡,其机制可能是使肝癌细胞SMMC-7721周期阻滞于G0/G1期,PTEN的过表达抑制AKT活化,激活Caspase-9从而促进细胞凋亡.     

芪术方诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡机制研究

目的:探讨芪术方(QZP)诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的分子机制。方法:以不同浓度的QZP干预人肝癌细胞SMMC-7721,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布情况,RT-PCR法检测AKT1、AKT2、Caspase-9mRNA的表达;蛋白质印迹法检测p-AKT、PTEN蛋白表达。结果:QZP能阻滞人肝癌细胞SMMC-7721从G0/G1期进入S期,并诱发细胞凋亡;能抑制AKT1、AKT2表达,提高Caspase-9表达,且跟浓度呈正比例关系。结论:QZP能诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡和阻滞细胞周期,其机制可能为促进人肝癌细胞SMMC-7721 PTEN表达的增加,使得PI3K/AKT信号通路激活受阻,同时抑制p-AKT、AKT1、AKT2的表达,激活下游Caspase-9促凋亡分子的表达,从而为PI3K/AKT信号通路介导细胞凋亡这一设想提供了理论依据。     

抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721 PI3K/AKT信号通路的影响

目的:研究抗癌扶正方(KFP)对肝癌抑制作用的分子机制.方法:体外培养人肝癌细胞5MMC-7721,分别予以9.72,19.44,38.88 g·L-1的3个质量浓度的KFP作用于细胞,采用MTT法检测KFP对人肝癌细胞SMMC-7721生长增殖的影响,并通过Western Blot法检测KFP对人肝癌细胞SMMC-7721 PI3K/AKT通路凋亡相关蛋白表达的影响.结果:KFP以浓度及时间依赖的方式抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖;Western Blot显示KFP作用于人肝癌细胞SMMC-7721后,人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN),caspase-9的活性增强,p-AKT的表达降低,且呈剂量依赖性.结论:KFP能增加入肝癌细胞SMMC-7721 PTEN的表达,进而抑制PI3K/AKT信号通路的激活,继之激活下游caspase-9促凋亡分子的表达,诱导人肝癌SMMC-7721发生凋亡.该研究表明PI3K/AKT信号通路在KFP诱导的人肝癌细胞SMMC-7721凋亡中起了重要作用.     

苦参碱和氧化苦参碱对肝癌细胞增殖凋亡及JAK-STAT信号通路的影响

目的：观察苦参碱和氧化苦参碱对肝癌细胞SMMC-7721增殖凋亡及JAK-STAT通路的影响。方法：苦参碱和氧化苦参碱干预肝癌细胞SMMC-7721，MW法检测对肝癌细胞增殖的影响，双荧光染色观察细胞凋亡率，RT-PCR法检测其对SMMC-7721细胞Stat3、Star5 mRNA的影响。结果：苦参碱和氧化苦参碱能显著抑制肝癌细胞增殖，促进其凋亡，并呈时间与剂量依赖性；二者均能下调Star3、Star5 mRNA表达水平。相同浓度苦参碱和氧化苦参碱比较，苦参碱对肝癌细胞Stag、Star5 mRNA下调作用更显著。结论：苦参碱和氧化苦参碱能显著抑制SMMC-7721细胞增殖、促进其凋亡，其机制可能与下调stat3、stat5的基因表达，抑制细胞信号转导通路有关。     

健脾化瘀方对胃癌MGC-803细胞侵袭转移相关基因表达的影响

目的探讨健脾化瘀方抑制人胃癌MGC-803细胞侵袭转移的作用机制。方法分别采用Real-time q PCR和Western Blot技术检测健脾化瘀方对胃癌MGC-803细胞侵袭转移基因转录和蛋白表达的影响。结果健脾化瘀方作用于人胃癌MGC-803细胞24h后,MMPs、VEGF随着给药浓度增加其mRNA和蛋白表达下降,RECK随着给药浓度增加其mRNA和蛋白表达上升,STAT3基因转录和蛋白表达未见明显变化,而p-STAT3蛋白表达量随着给药浓度增加下降。结论健脾化瘀方具有体外抑制MGC-803细胞侵袭转移的作用,其分子机制可能与抑制STAT3蛋白磷酸化和RECK基因转录、表达,进而影响下游VEGF、MMPs等有关。     

珍珠梅黄酮纳米粒通过抑制Akt/mTOR信号通路诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的探讨珍珠梅黄酮纳米粒对人肝癌SMMC-7721细胞体外生长的抑制作用及其作用机制。方法不同浓度的珍珠梅黄酮纳米粒(40,80,120μmol·L-1)处理SMMC-7721细胞后,采用MTT法检测珍珠梅黄酮纳米粒对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用;Hoechst染色法观察SMMC-7721细胞凋亡的形态学变化;利用Annexin/PI双标记法检测细胞凋亡率;Western blot检测SMMC-7721细胞中Akt,m TOR,p-Akt,p-m TOR及active-caspase3蛋白表达。结果珍珠梅黄酮纳米粒能显著抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡,具有剂量依赖性;显著降低p-Akt和p-m TOR蛋白表达。结论珍珠梅黄酮纳米粒具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖及诱导凋亡的作用,其作用机制可能与抑制Akt/m TOR信号通路有关。