实验教学中颗粒性抗原与可溶性抗原制备抗血清的方法及其应用

目的 比较颗粒性抗原与可溶性抗原制备抗血清的效价,寻求获取符合实验教学需要的高效价抗血清的较佳方法.方法 牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)作为可溶性抗原,伤寒"H"菌液作为颗粒性抗原,采用1周间隔的免疫程序,以BSA和伤寒杆菌"H"菌液免疫家兔,用对流免疫电泳和双向琼脂扩散试验、肥达试验检测并比较其血清抗体效价.结果 浓度为7×109个/ml伤寒杆菌"H"菌液免疫家兔后获取的伤寒"H"抗血清几何平均滴度(geometry mean titer,GMT)为1:9051.07,浓度为5mg/ml BSA免疫家兔后测得抗血清GMT分别为1:3.668和1:6.17.结论 颗粒性抗原与可溶性抗原1周间隔免疫程序制备的抗血清可获取符合实验教学的抗血清效价.     

neuB1失活空肠弯曲菌突变株灭活全菌苗经鼻免疫小鼠的实验研究

[目的]探讨neuB1失活空肠弯曲菌0:19突变株灭活全菌苗的免疫原性及其对抗野生株攻击的免疫保护性.[方法]以neuB1失活空肠弯曲菌0:19突变株灭活菌体,经鼻途径以不同剂量免疫Balb/C小鼠,ELISA法检测小鼠肠腔灌洗液和血液中的抗体滴度;并以5×109 cfu野生株进行攻击,计算疾病指数.[结果]免疫后7 d肠腔灌洗液中的抗CJ特异性slgA和21 d血清中特异性IgG及IgA滴度均显著增高;免疫组的疾病指数分别由0.90降至0.30～0.34,保护率为62%～67%.[结论]neuB1失活CJ 0:19突变株灭活全菌苗经鼻免疫,能诱导动物产生有效的体液免疫应答,具有显著的免疫原性;能有效保护免疫小鼠免受野生株的攻击,基于该突变株良好的免疫活性且无分子模拟所致的神经毒性,有望成为理想的全菌候选疫苗.     

铝对新生大鼠海马细胞内游离钙浓度的影响

目的 探讨铝对新生大鼠海马细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i)的影响.方法 采用体外实验的方法,将分离的新生Wistar大鼠海马细胞制成2×106个/ml的细胞悬液,经Fura-2-AM负载后,与氯化铝溶液(Al3 终浓度分别为0、10、100、1 000 μmol/L)一起孵育,分别测定孵育15、30、45 min后海马细胞悬液的荧光强度值(F')、最大荧光强度值(Fmax)、最小荧光强度值(Fmin),并计算海马神经细胞内[Ca2 ]i.结果 孵育15、30和45 min后,1 000 μmol/L Al3 海马细胞中[Ca2 ]i均高于对照组(0 μmol/L Al3 组),差异有统计学意义(P＜0.05).而10、100 μmol/L Al3 组[Ca2 ]i与对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 铝可通过增加新生大鼠海马神经细胞内[Ca2 ]i而发挥神经毒性作用.     

纳米银体外抗HIV活性的研究

[目的]制备纳米银颗粒并检测其抗人类免疫缺陷病毒(HIV)活性及其体内外毒性,探讨纳米银体外抗HIV的作用机制.[方法]在体外培养C8166细胞中加入不同浓度的纳米银,检测其体外细胞毒性CC50;不同病毒株感染细胞,同时加入不同浓度的纳米银,孵育后检测细胞病变及病毒抗原,检测纳米银对HIV的抑制作用.纳米银滴鼻处理小鼠,检测小鼠体重变化,并进行病理切片,观察纳米银滴鼻处理小鼠的肝、肾及肺组织的病理变化. [结果]纳米银颗粒对C8166细胞毒性的CC50为105.73 μg/ml,抑制HIV实验株HIV-1ⅢB,HIV-2CBL-20诱导细胞病变的EC50分别为26.56 μg/ml和35.47 μg/ml;抑制HIV-1ⅢB p24抗原产生的EC50为9.80μg/ml;直接杀病毒作用的EC50为12.08μg/ml.纳米银经滴鼻处理的小鼠,其体重及肝、肾及肺组织切片与对照组比较,均无明显改变. [结论]纳米银有较好的抗HIV活性,作用机制可能主要通过直接杀病毒来抑制HIV的复制;纳米银在呼吸道黏膜局部应用无明显的毒副作用,作为黏膜表面抗病毒药物,值得进一步深入研究.     

2006年邳州市麻疹疫苗效价与免疫成功率调查

[目的]为评价麻疹疫苗效价及免疫原性,更好地做好麻疹疫苗接种管理工作.[方法]2006年7月分别选择8月龄麻疹疫苗基础免疫儿童60人、4周岁麻疹疫苗复种免疫儿童60人,于接种前当天及接种后1个月各采集末稍血0.3 ml,分离血清,用ELISA方法检测麻疹IgG抗体.选择邳州市疾病预防控制中心及其辖区内2个接种门诊,各采集麻疹疫苗10支,采用微量细胞培养板法,进行麻疹疫苗效价检测.[结果]3个采样点麻疹疫苗效价均值为3.73 log CCID50/ml,合格率100.00%.8月龄儿童基础免疫后抗体阳性率、几何平均滴度(GMT)均较免前明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.05),基础免疫成功率为93.33%.4周岁儿童复种免疫后抗体阳性率较免前升高,但差异无统计学意义(P＞0.05);复种免疫后GMT明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05 ).复种免疫前抗体阴性及低水平抗体儿童免疫成功率为100.00%;免前抗体 1∶800者,免后抗体4倍增长率为28.30%.[结论]邳州市冷链系统运转正常,麻疹疫苗免疫成功率较高,两剂次麻疹疫苗接种具有良好的免疫效果.     

金银花水提物与益生菌治疗致敏小鼠作用比较

[目的]比较中药金银花水提物(以下简称金银花)与双歧杆菌、乳酸杆菌治疗卵清蛋白(OVA)致敏小鼠免疫调节作用. [方法]BALB/c雌鼠40只均分为5组,按照肠道激发后灌服不同的药物随机分为金银花高(HLT100%)、中(MLT 50%)浓度组,益生菌组(PT),致敏对照(激发后生理盐水灌服),以及正常对照(生理盐水灌服).取空肠标本行HE及甲苯胺蓝染色;取腹腔巨噬细胞行瑞氏染色;平板活菌计数肠道双歧杆菌、乳酸杆菌;ELISA法检测血清OVA特异性IgE(sIgE)、sIgG2a及小肠粘液总IgA、sIgA水平. [结果]金银花和益生菌均可缓解致敏小鼠小肠炎症,改善肥大细胞聚集和脱颗粒,提高腹腔巨噬细胞吞噬率与吞噬指数;肠道双歧杆菌、乳酸杆菌增多,以HLT组显著;致敏小鼠血清sIgE下降,sIgG2a增加,致sIgE/sIgG2a比值下降,肠道总IgA、sIgA水平增加,以高浓度金银花作用更明显.[结论]首次比较研究金银花与益生菌治疗OVA介导的致敏小鼠速发型变态反应,证实金银花与益生菌均可明显改善致敏小鼠的过敏症状作用,高浓度金银花治疗效果更好.     

甲基汞诱导海马神经细胞凋亡及其机制研究

目的 研究甲基汞对海马神经元的损伤及致凋亡作用,并初步探讨甲基汞神经毒性的机制.方法 以5 d内新生SD大鼠海马神经元为实验对象,用四甲基偶氮唑盐(MMT)法检测甲基汞对培养的海马神经细胞活性的影响,原位末端标记(TUNEL)法和流式Annexin V-FITC-PI法检测甲基汞诱导海马细胞凋亡细胞数和凋亡百分率,并用激光共聚焦技术,从单个细胞水平检测甲基汞对胞内游离Ca2 瞬间动态变化的影响.结果 MMT法显示,0.1 μmol/L甲基汞作用24 h对培养的海马神经细胞杀伤率为(22.90±2.77)%(n=7).TUNEL法显示,0.1 μmol/L甲基汞作用24 h组海马神经元凋亡指数[(34.45±1.30)%,n=10]高于溶剂对照组[(6.01±0.64)%,n=10],差异有统计学意义(P＜0.01).流式Annexin V-FITC-PI法显示,0.1 μmol/L甲基汞作用24 h诱导海马神经细胞凋亡率为(51.20±4.98)%(n=5).即时染毒0.01、0.1、1 μmol/L甲基汞,使海马神经元细胞内游离钙离子浓度分别增加(5.58±2.37)%(n=5),(82.71±20.42)%(n=4)和(246.38±64.77)%(n=4).预孵育硝苯的平可延缓甲基汞升钙作用的起效时间并降低胞内钙离子浓度增加的幅值.结论 甲基汞对培养的海马神经细胞的急剧升钙作用可能参与了甲基汞的致细胞损伤和诱导凋亡作用,并且可能与细胞膜上的电压门控钙通道有关.