SOCS3基因对肺腺癌细胞株A549中c-Myc表达的影响

目的探讨SOCS3基因对人肺腺癌细胞株A549中c-Myc表达的调控作用。方法以脂质体为载体将pEFSOCS3和pSV2neo共转染至人肺腺癌细胞株A549,RT-PCR和免疫细胞化学法测定转染前后细胞中SOCS3mRNA和蛋白表达;Westernblot检测STAT3蛋白酪氨酸磷酸化水平变化;sqRT-PCR测定转染前后细胞中c-MycmRNA的表达。MTT法检测转染前后细胞增殖变化。结果RT-PCR和免疫细胞化学证实转染后细胞中SOCS3稳定表达;Westernblot证实pEFSOCS3转染组细胞STAT3蛋白酪氨酸磷酸化水平明显降低(P <0.01);sqRT-PCR显示pEFSOCS3转染组细胞中c-MycmRNA的表达显著降低。MTT法结果示pEFSOCS3转染组细胞增殖明显受到抑制。结论SOCS3蛋白可能通过抑制A549细胞中STAT3蛋白的酪氨酸磷酸化从而下调c-Myc基因的表达,最终抑制A549增殖。     

SOCS3基因转染对肺腺癌细胞株A549原癌基因c-fos、c-jun mRNA表达及细胞增殖的影响

目的探讨SOCS3基因对人肺腺癌细胞株A549中c-fos、c-jun mRNA表达及细胞增殖的影响.方法以脂质体为载体将pEFSOCS3和pSV2neo共转染至人肺腺癌细胞株A549,RT-PCR和免疫细胞化学法测定转染前后细胞中SOCS3mRNA和蛋白表达;半定量RT-PCR测定转染前后细胞中c-fos、c-jun mRNA水平表达变化;3H-TdR掺入法检测基因转染前后细胞增殖情况.结果RT-PCR和免疫细胞化学证实转染后细胞中有SOCS3稳定表达;半定量RT-PCR证实转染后细胞中c-fos、c-jun mRNA水平显著降低(P＜0.01);且转染组细胞3H-TdR掺入量显著降低(P＜0.01).结论SOCS3蛋白可能通过负性调控STAT3介导的信号通路降低c-fos、c-jun的表达,从而抑制肺癌细胞增殖.     

大鼠肺动脉平滑肌细胞缺氧后STAT3活性变化对细胞癌基因c-jun mRNA表达及细胞增殖的影响

目的观察大鼠肺动脉平滑肌细胞缺氧后信号转导和转录活化因子3(STAT3)活性变化对细胞癌基因c-jun mRNA表达及细胞增殖的影响.方法组织块法原代培养肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),用AG490预孵育后进行缺氧处理,Western blot检测缺氧2、4、6、8、12 h组STAT3酪氨酸活性水平变化;半定量RT-PCR检测缺氧2、4、6、8、12 h组细胞中c-jun mRNA表达水平变化;流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 Western blot定量分析示缺氧培养6 h组STAT3酪氨酸磷酸化水平升高,12 h组达高峰;缺氧2 h细胞c-jun mRNA表达升高,6 h达高峰,8 h下降;细胞在缺氧6 h出现G0/G1期细胞比例明显减少,S G2/M期细胞比例明显增加,并随缺氧时间延长变化更显著.与对照组细胞相比,AG490处理组细胞在缺氧各时相点STAT3酪氨酸磷酸化水平及c-jun mRNA表达明显降低,同时G0/G1期细胞比例显著增加,S G2/M期细胞比例显著减少.结论①STAT3活化和c-jun mRNA表达增加参与缺氧PASMCs增殖;②AG490可通过抑制STAT3活性下调c-jun mRNA表达,从而抑制缺氧诱导的PASMCs增殖.     

低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞中Gax基因表达及细胞增殖的影响

目的探讨低氧对肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)中生长终止特异性同源盒(growth arrest-spec ific homeobox,Gax)基因表达及细胞增殖的影响。方法以RT-PCR法、免疫细胞化学法和W estern blot法测定经低氧处理后的大鼠PASMCs中Gax mRNA和蛋白表达3。H-TdR掺入法观察低氧处理后PASMCs增殖情况。结果RT-PCR、免疫细胞化学和W estern blot检测证实低氧(2.5%O2)处理后的PASMCs中Gax mRNA和蛋白的表达逐渐降低;与常氧组比较,低氧组Gax mRNA和蛋白的表达显著下降3。H-TdR掺入法测定结果示PASMCs3H-TdR掺入量在低氧6 h开始增加,随着低氧时间延长,3H-TdR掺入量逐渐增加,至低氧24 h时3H-TdR掺入量最高。结论低氧可下调大鼠PASMCs中Gax mRNA和蛋白的表达并诱导PASMCs增殖,提示Gax基因在低氧性PASMCs增殖过程中可能起着重要作用。     

Canstatin基因表达载体的构建及其生物学效应研究

目的　构建可表达人血管生成抑制素 (canstatin)蛋白的真核表达载体 ,探索canstatin对人脐静脉内皮细胞系(HUVEC)和人肺腺癌A5 49细胞株的生物学效应。方法　RT PCR法从胎儿肝组织中获取canstatincDNA全长 ,并将其克隆到真核蛋白表达载体pCMV Script上。阳离子脂质体介导该重组载体转染HUVE细胞系、A5 49细胞株。RT PCR法检测其对canstatinmRNA的表达。台盼蓝拒染法活细胞记数 ,3 H TdR掺入法检测细胞增殖 ,TUNEL法检测细胞凋亡 ,流式细胞术检测细胞周期。结果　成功构建pCMV Script Cans真核表达重组载体 ,并在转染该表达载体的A5 49及HUV EC C细胞株中均检测到canstatinmRNA的表达。HUV EC C细胞株pCMV Script Cans载体转染组比空载体组 3 H TdR掺入量明显减低(P <0 0 1) ,细胞凋亡率明显增加 (P <0 0 1) ,A5 49细胞株转染组与空载体组 3 H TdR掺入量无显著差异 (P >0 0 5 ) ,细胞凋亡率无显著差别 (P >0 0 5 )。结论　pCMV Script Cans重组载体能在转染的哺乳动物细胞中表达canstatin ,并抑制内皮细胞增殖 ,诱导内皮细胞凋亡 ,但对肿瘤细胞没有直接抑制作用。     

腺病毒介导gax基因转染抑制血管平滑肌细胞增殖

目的　以腺病毒介导gax基因转染血管平滑肌细胞 (VSMC) ,探讨gax基因表达增强后VSMC增殖的变化。方法　以携带大鼠gax基因表达序列的复制缺陷型 5型腺病毒载体 (AdCMV gax)常规转染VSMC后 ,应用免疫细胞化学染色检测gax基因表达的变化 ;应用四唑盐 (MTT)比色试验、3H标记的胸腺嘧啶核苷 ( 3H TdR)掺入试验和流式细胞仪检测观察gax基因表达增强对VSMC增殖的影响。结果　①AdCMV gax转染前 ,PDGF BB下调Gax蛋白的表达 ,接近正常生理浓度的PDGF BB( 2ng ml)即可使VSMC的Gax蛋白表达率由 3 6.42 %显著降低至 2 2 .83 %(P <0 .0 5 ) ,随着PDGF BB浓度的升高 ,gax基因表达下降程度更加显著 ;AdCMV gax转染后 ,无论有无PDGF BB刺激 ,VSMC中gax基因的表达均比转染前显著增高。②AdCMV gax转染使VSMC表达gax增强后 ,VSMC的MTT吸光度值和3H TdR掺入量均较未转染组显著降低 ,G0 G1期的VSMC比例较未转染组显著增高 (P <0 .0 1) ,G2 M期和S期细胞比例显著降低 (P <0 .0 1)。结论　增强gax基因表达可抑制由有丝分裂原刺激所引起的VSMC增殖     

SOCS3基因转染对小鼠CD4＋T h细胞分化及炎症细胞因子表达的影响及机制研究

目的：观察SOCS3基因对小鼠CD4＋Th细胞分化及细胞因子表达的影响。方法分离、培养并转染小鼠CD4＋Th细胞,以植物血凝素（PHA）刺激靶细胞,采用逆转录聚合酶链反应（RT‐PCR）检测相应细胞因子基因表达;蛋白质印迹法（West‐ernblot）检测目的细胞因子蛋白表达。结果与对照组相比较,转染组T‐bet、白细胞介素（IL）‐2、干扰素‐γ（IFN‐γ）、信号转导及转录激活因子（STAT）4、IL‐12Rβ2基因表达明显下调,细胞因子信号抑制物（SOCS）3、GATA‐3、IL‐4、IL‐6、IL‐10、STAT6基因表达明显上调,T‐bet、IL‐2、IFN‐γ、STAT4、IL‐12Rβ2蛋白表达明显下调,SOCS3、GATA‐3、IL‐4、IL‐6、IL‐10、STAT6蛋白表达明显上调,差异均有统计学意义（P＜0．01）。结论SOCS3基因转染可上调小鼠CD4＋Th细胞SOCS3基因表达,下调STAT4活化和磷酸化,抑制Th1细胞分化,并下调炎症细胞因子基因和蛋白表达,同时间接促进Th2细胞分化,并上调相应炎症细胞因子基因和蛋白表达。     

p27基因对血管平滑肌细胞中连接蛋白43表达的影响

目的 研究连接蛋白43(Cx43)在p27基因抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用.方法 以携带大鼠p27基因表达序列的复制缺陷型5型腺病毒载体(AdCMV-p27)转染VSMC后,应用免疫细胞化学染色检测p27和Cx43表达的变化;应用3H标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入试验观察p27基因表达增强对VSMC增殖的影响.结果 (1)Ad-CMV-p27转染前,血小板衍化生长因子BB(platelet.derived growth factor,PDGF-BB)下调P27蛋白的表达,AdCMV-p27转染后,无论有无PDGF-BB刺激,VSMC中P27蛋白的表达均比转染前显著增高.(2)AdCMV-p27转染使VSMC中Cx43蛋白的表达基本恢复至有丝分裂原刺激前状态.(3)AdCMV-p27转染使VSMC的.H.TdR掺入量均较未转染组显著降低.结论 p27基因对Cx43表达的调控,使细胞间连接通讯得到维护,是其抑制VSMC增殖的重要机制之一.     

衰老和缺氧对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨衰老及缺氧对体外培养的肺动脉平滑肌(PASMCs)增殖的影响。方法将细胞分为年轻常氧组、老年常氧组、年轻缺氧组、老年缺氧组,应用MTT比色法、3H-TdR掺入法、流式细胞术、免疫组化方法检查细胞的增殖情况。结果同年轻组比较,老年组PASMCs的生长曲线明显抬高,3H-TdR掺入明显增加,进入有丝分裂期的细胞比例明显增加,总蛋白量减少,增殖细胞核抗原(PCNA)增加;同常氧组比较,缺氧组PASMCs的生长曲线明显抬高,3H-TdR掺入先受抑制,后明显增加,进入有丝分裂期的细胞比例明显增加,总蛋白量减少,PCNA增加。结论衰老和缺氧部能直接刺激平滑肌细胞的增殖,衰老的平滑肌细胞受缺氧刺激增殖最为明显。     

衰老和缺氧对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨衰老及缺氧对体外培养的肺动脉平滑肌(PASMCs)增殖的影响。方法 将细胞分为年轻常氧组、老年常氧组、年轻缺氧组、老年缺氧组。应用MTT比色法、^3H-TdR掺入法、流式细胞术、免疫组化方法检查细胞的增殖情况。结果 同年轻组比较，老年组PASMCs的生长曲线明显抬高，^3H-TdR掺入明显增加，进入有丝分裂期的细胞比例明显增加，总蛋白量减少，增殖细胞核抗原(PCNA)增加；同常氧组比较，缺氧组PASMCs的生长曲线明显抬高。^3H-TdR掺入先受抑制，后明显增加，进入有丝分裂期的细胞比例明显增加，总蛋白量减少，PCNA增加。结论 衰老和缺氧部能直接刺激平滑肌细胞的增殖．衰老的平滑肌细胞受缺氧刺激增殖最为明显。     

RNA干扰沉默STIM1表达对低氧下大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 应用RNA干扰抑制肺动脉平滑肌细胞(pulmonary aretery smooth muscle cells,PASMCs)基质交感分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)基因表达,探讨STIM1表达抑制后对PASMCs缺氧增殖反应的影响.方法 采用离体培养大鼠肺动脉平...