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目的 研究siRNA干扰β-Catenin表达、阻断Wnt/β-Catenin信号通路对肝星状细胞(HSC)Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响.方法 将化学合成siRNA β-Catenin以Lipofectamine包裹,转染HSC-T6细胞,设阴性对照和空白对照,抽提细胞总RNA及蛋白质,收集培养上清液,应用反转录-聚合酶链反应和Western blot法检测细胞β-Catenin表达;Western blot法检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达情况;细胞免疫荧光法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达与定位;酶联免疫吸附法检测培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量.结果 转染siRNA的HSC-T6细胞β-Catenin基因及蛋白表达水平明显下调,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达显著下调,免疫细胞化学提示转染siRNA β-Catenin后的Ⅰ、Ⅲ型胶原表达均较对照组明显减弱;48 h和72 h时培养上清液中Ⅰ型胶原表达水平显著减少,分别比阴性对照下降(23.68±7.96)%和(38.42±6.58)%(F= 18.26,P<0.01;F= 26.38,P<0.01),Ⅲ型胶原含量于72 h时降低(39.68±4.92)% (F= 37.68,P<0.0t).结论 siRNAβ-Catenin能高效抑制HSC-T6细胞β-Catenin表达,阻断Wnt/β-Catenin信号通路,从而抑制HSC-T6细胞增殖,显著减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和分泌,具有预防及治疗肝纤维化的潜力. 相似文献
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目的观察卡维地洛对肝星状细胞增殖与凋亡的影响。方法以不同剂量卡维地洛(CVD)作用于肝星状细胞(HSC-T6)。CCK-8法检测CVD对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测CVD对细胞凋亡的影响。统计学处理采用t检验。结果 CVD作用于HSC-T6后,CCK-8法检测模拟对照组细胞增殖抑制率为2.18±0.60,CVD10μmol/L组细胞增殖抑制率为6.30±1.44,CVD20μmol/L组细胞增殖抑制率为7.75±1.33。提示细胞增殖抑制率随CVD浓度的增高而增高。CVD10μmol/L组及CVD20μmol/L组与模拟对照组相比,差异有统计学意义。流式细胞术检测模拟对照组细胞凋亡率为(2.30±0.08)%,CVD10μmol/L组细胞凋亡率为(3.54±0.50)%,CVD20μmol/L组细胞凋亡率为(4.25±0.13)%,提示细胞凋亡率随药物浓度的增大而增加。CVD10μmol/L组及CVD20μmol/L组与模拟对照组相比,差异有统计学意义。结论 CVD可以抑制HSC-T6的增殖,促进HSC-T6的凋亡。 相似文献
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目的探讨交感神经递质去甲肾上腺素(NE)对HSC细胞株(CSFC)增殖和凋亡的影响。方法体外培养CFSC,分为以下6组:(1)空白对照组,为单纯CFSC培养;(2)交感兴奋(NE)组;(3)交感抑制(酚妥拉明+普萘洛尔)组;(4)α肾上腺素受体(AR)阻滞(酚妥拉明)组;(5)β1AR阻滞(CGP20712A)组;(6)β2AR阻滞(ICI118551)组。MTT法测定细胞增殖;TUNEL法观察CFSC凋亡状况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;倒置相差显微镜观察细胞形态学变化。结果MTT法显示,NE对CFSC具有明显的促增殖作用,加入α-AR、β1AR、β2AR阻滞剂后细胞增殖均受到明显抑制。NE作用于CFSC 24h,TUNEL法显示CFSC的凋亡率显著低于对照组(6.60%±3.05%与12.60%±4.76%,P〈0.05);加入AR阻滞剂后CFSC凋亡率升高,其中α-AR和β2AR阻滞剂作用最显著。同时,流式细胞仪显示加入NE后CFSC凋亡率也显著降低(2.29%±0.22%与3.06%±0.57%,P〈0.05);与TUNEL结果一致。NE对细胞形态没有明显影响。结论交感神经递质NE对体外活化的CFSC具有促增殖作用,并且可以抑制CFSC的凋亡,可能主要通过α受体和β2体起作用。 相似文献
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小分子干扰RNA沉默结缔组织生长因子对鼠肝星状细胞培养激活的影响 总被引:12,自引:0,他引:12
目的研究化学合成小分子干扰RNA(siRNA)对大鼠原代肝星状细胞(HSC)结缔组织生长因子(CTGF)基因表达的阻抑作用及对HSC培养激活的影响。方法以胶原酶原位灌注消化加密度梯度离心法分离大鼠原代HSC,将siRNA以脂质体包裹,转染培养72h的原代HSC,设空白对照,收集孵育96h细胞,以Westernblot和免疫细胞化学染色法检测原代HSCCTGF及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因表达。结果转染siRNA的原代HSCCTGF及α-SMA基因表达显著下调,与对照相比,CTGF蛋白下调(92±5)%(P<0.01);α-SMA蛋白表达分别下调(62±9)%(P<0.01,Westemblot方法)和(58±6)%(P<0.01,免疫细胞化学染色法)。结论siRNA能显著下调大鼠原代HSCCTGF基因表达,明显阻抑原代HSC培养激活,提示针对CTGF基因化学合成的siRNA具有防治肝纤维化的潜力。 相似文献
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目的 观察靶向沉默结缔组织生长因子(CTGF)表达对肝星状细胞(HSC)-T6增殖、凋亡的影响。方法将HSC-T6细胞随机分为3组,A、B组分别转染CTGF siRNA及无义序列4~6 h,C组不转染;培养24 h,采用RTPCR法检测CTGF mRNA,MTT法检测细胞增殖速度,Annexin V/PI双染色法测算细胞凋亡率,Western blot法检测细胞中Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白。结果 A组CTGF mRNA表达量(0.12±0.03)明显低于B组(0.87±0.07)和C组(0.85±0.09),细胞增殖速度(0.21±0.05)明显慢于B组(0.38±0.04)和C组(0.39±0.05),细胞凋亡率(37.5%±0.6%)高于B组(0.9%±0.3%)和C组(1.1%±0.2%),Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达量(29.2±0.8,26.4±2.7)均低于B组(66.7±1.7,64.7±0.9)和C组(68.4±1.7,66.1±2.2),P均<0.05。结论 靶向沉默CTGF基因可抑制HSC-T6细胞增殖,促进其凋亡,并显著减少Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的合成和分泌。 相似文献
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目的研究IGFBPrP1 siRNA对大鼠肝星状细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),分别设立:正常对照组,阴性对照组,IGFBPrP1 siRNA转染组。IGFBPrP1 siRNA转染大鼠肝星状细胞,转染不同时间后,用CCK-8试剂盒检测肝星状细胞增殖的变化,AnnexinV/PI双标法流式细胞术检测肝星状细胞凋亡的变化,免疫细胞化学染色法检测P53及Bcl-2蛋白表达的变化。结果 (1)IGFBPrP1 siRNA转染大鼠肝星状细胞不同时间(24、48、72 h)后,转染组细胞增殖受到抑制且凋亡率明显增高,与正常对照组及阴性对照组相比,差异均有统计学意义(P〈0.01);(2)IGFBPrP1 siRNA转染大鼠肝星状细胞48 h后,与正常对照组及阴性对照组相比,转染组P53蛋白的表达量显著增高(P〈0.01);Bcl-2蛋白的表达明显降低(P〈0.01)。结论 IGFBPrP1 siRNA能显著抑制大鼠肝星状细胞增殖且能促进其凋亡;上调P53的表达,下调Bcl-2的表达可能是IGFBPrP1 siRNA诱导大鼠肝星状细胞凋亡的途径之一;推测抑制IGFBPrP1的表达有可能成为治疗肝纤维化的新靶点。 相似文献
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目的 观察半乳糖凝集素-3(galectin-3)表达与肝星状细胞增殖和凋亡的关系.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测大鼠肝星状细胞中galectin-3 mRNA和蛋白的表达,设计合成galectin-3小干扰片段,筛选有效片段构建质粒,转染大鼠肝星状细胞系rHSC-99,并设立对照组和空质粒转染组,RT-PCR及Western blot检测RNA干扰后galectin-3的表达.活细胞计数法观察干扰后24、48,72 h各组细胞增殖情况;Annexin-V/PI染色,流式细胞仪检测转染72 h后各组细胞凋亡情况.组间比较用LSD法t检验进行统计学分析.结果 rHSC-99细胞表达galectin-3;成功构建pG Csilencer U6/Neo/GFP/shRNA,并经测序验证正确.转染效率为40%~50%,RT-PCR结果显示:RNA干扰组galectin-3 mRNA表达量较对照组下降了52.4%(F=136.432,P<0.01),Western blot显示RNA干扰组galectin-3蛋白表达量较对照组下降了69.2%(F=144.842,P<0.01).干扰后48 h和72 h时,galectin-3 RNA干扰组细胞增殖较对照组分别下降38.1%(F=4.425,P=0.010)和37.5%(F=4.415,P=0.018);干扰72 h时,galectin-3 RNA干扰组细胞凋亡率显著高于对照组:早期凋亡率增加155.2%,与对照组比较,F=27.588,P<0.01;晚期凋亡率增加56.9%与对照组比较,F=12.798,P<0.01.结论 rHSC-99细胞表达galecitn-3;RNA干扰rHSC-99细胞galectin-3的表达能抑制rHSC-99的增殖并促进其凋亡. 相似文献
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熊果酸对肝星状细胞增殖与凋亡的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 体外观察熊果酸对肝星状细胞增殖与凋亡的影响,探讨熊果酸诱导肝星状细胞凋亡的可能作用机制. 方法 将不同浓度熊果酸作用于肝星状细胞HSC-T6及肝细胞L02,分别在药物作用24、48、72 h后用四甲基偶氮唑盐法检测熊果酸对HSC-T6及L02细胞增殖的影响;流式细胞仪检测熊果酸对HSC-T6凋亡的影响;光学显微镜观察熊果酸作用后细胞形态学变化情况;免疫细胞化学法检测HSC-T6中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达情况. 结果 各种浓度的熊果酸均可抑制HSC-T6细胞的增殖,且呈剂量-时间依赖性;当熊果酸浓度为25、50、75μmol/L时可促进L02细胞增殖,浓度>75μmol/L则表现为抑制L02细胞增殖.在病理形态学方面,熊果酸作用HSC-T6细胞48 h后,光学显微镜下可见细胞缩小变圆、核浓缩等.25、50、75 μmol/L熊果酸作用HSC-T6细胞48 h后,流式细胞仪检测显示细胞凋亡率分别为10.30%±3.85%、21.87%±4.46%、31.33%±6.18%,比对照组(2.93%±1.60%)明显升高(P<0.01).免疫细胞化学显示Bax及Caspase-3蛋白表达较对照组升高(P<0.05),且呈剂量依赖性,而Bcl-2蛋白表达水平与对照组无明显差异(P>0.05).结论 在体外熊果酸可较明显地抑制HSC-T6细胞增殖,诱导其凋亡;对L02细胞的生长具有双向调节作用.熊果酸诱导HSC-T6细胞凋亡可能与降低Bcl-2/Bax比值、激活Caspase-3蛋白有关. 相似文献
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目的 观察半乳糖凝集素-3(galectin-3)表达与肝星状细胞增殖和凋亡的关系.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测大鼠肝星状细胞中galectin-3 mRNA和蛋白的表达,设计合成galectin-3小干扰片段,筛选有效片段构建质粒,转染大鼠肝星状细胞系rHSC-99,并设立对照组和空质粒转染组,RT-PCR及Western blot检测RNA干扰后galectin-3的表达.活细胞计数法观察干扰后24、48,72 h各组细胞增殖情况;Annexin-V/PI染色,流式细胞仪检测转染72 h后各组细胞凋亡情况.组间比较用LSD法t检验进行统计学分析.结果 rHSC-99细胞表达galectin-3;成功构建pG Csilencer U6/Neo/GFP/shRNA,并经测序验证正确.转染效率为40%~50%,RT-PCR结果显示:RNA干扰组galectin-3 mRNA表达量较对照组下降了52.4%(F=136.432,P<0.01),Western blot显示RNA干扰组galectin-3蛋白表达量较对照组下降了69.2%(F=144.842,P<0.01).干扰后48 h和72 h时,galectin-3 RNA干扰组细胞增殖较对照组分别下降38.1%(F=4.425,P=0.010)和37.5%(F=4.415,P=0.018);干扰72 h时,galectin-3 RNA干扰组细胞凋亡率显著高于对照组:早期凋亡率增加155.2%,与对照组比较,F=27.588,P<0.01;晚期凋亡率增加56.9%与对照组比较,F=12.798,P<0.01.结论 rHSC-99细胞表达galecitn-3;RNA干扰rHSC-99细胞galectin-3的表达能抑制rHSC-99的增殖并促进其凋亡. 相似文献
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苦参碱对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响 总被引:13,自引:0,他引:13
目的研究苦参碱对体外培养肝星状细胞(HSC)增殖与凋亡的影响,探讨苦参碱抗肝纤维化作用机制。方法用0.125、0.25、0.5mgml的苦参碱分别处理HSC细胞系rHSC99和肝细胞株HL770224h后,MTT比色法检测细胞增殖,AnnexinVFITCPI双染色流式细胞分析法检测早期细胞凋亡,TUNEL法原位检测DNA断裂,透射电镜观察形态改变。结果①苦参碱对HSC增殖有明显的抑制作用,且作用呈剂量依赖性;苦参碱对肝细胞增殖有促进作用,但促增殖作用不随浓度增加而增强。②AnnexinVFITCPI双染色流式细胞分析:对照组、苦参碱0.125mgml组、0.25mgml组、0.5mgml组凋亡率分别为0.99%±0.45%、5.00%±0.98%、13.6%±2.19%、17.2%±2.17%,差异有显著性(F=63.14,P<0.05)。苦参碱处理组细胞TUNEL检测发现DNA断裂,透射电镜下见核仁消失,染色质浓缩并凝聚成团块状,沿核膜排列。结论苦参碱可抑制HSC增殖、诱导HSC凋亡,可能是其抗肝纤维化机制之一。 相似文献
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目的 探讨特异性小分子干扰RNA对晚期糖基化终产物受体(RAGE)介导肝星状细胞(HSC)激活和胶原生成的影响。方法 构建RAGE特异性siRNA表达载体,经脂质体转染入HSC—T6细胞,以空白和转染非特异性siRNA表达载体pGCsi-C为对照,分别用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测各组HSC—T6细胞RAGE、α平滑肌肌动蛋白(α—SMA)和Ⅰ型胶原基因及蛋白的表达。结果 与空白对照组和pGCsi—C组相比,转染特异性siRNA表达载体pGCsi—R1的HSC—T6细胞RAGE mRNA和相对分子质量50×10^3、46×10^3的RAGE蛋白表达分别下调79.65%、78.04%(F=26.005,P〈0.01),56.09%、54.93%(F=365.185,P〈0.01)和63.67%、59.67%(F=386.07,P〈0.01),同时α—SMAmRNA和蛋白、Ⅰ型胶原mRNA和蛋白的表达也受到明显抑制,分别为空白对照组和pGCsi—C组的57.53%、65.50%(F=20.913,P〈0.05)、58.48%、62.80%(F=56.592,P〈0.05)、71.16%、74.23%(F=18.091,P〈0.05)和71.91%、76.09%(F=17.299,P〈0.05)。结论 RAGE特异性siRNA可在细胞内稳定表达,并能有效抑制HSC的激活和Ⅰ型胶原生成。 相似文献
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肝星状细胞(HSC)在肝纤维化的发生中起重要作用,我们应用体外HSC培养技术,初步研究了姜黄素对HSC增殖与凋亡的影响,探讨姜黄素用于肝纤维化治疗的可能性。 相似文献
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目的:探讨甘油三酯和极低密度脂蛋白对大鼠肝星状细胞增殖的影响。方法:用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠肝星状细胞,并以MTT比色法观察甘油三酯和极低密度脂蛋白对肝星状细胞增殖效应。结果:甘油三酯和极低密度脂蛋白可影响肝星状细胞的增殖,甘油三酯和极低密度脂蛋白浓度分别在12.5μg/ml和25~100μg/ml时对肝星状细胞增殖有促进作用(P<0.05或P<0.01)。结论:体外细胞培养表明,甘油三酯和极低密度脂蛋白可促进肝星状细胞增殖,其与脂肪肝纤维化的发生可能有关。 相似文献
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甘油三酯和极低密度脂蛋白对肝星状细胞增殖的影响 总被引:11,自引:3,他引:11
目的探讨甘油三酯(triglyceride,TG)和极低密度脂蛋白(verylow-densitylipoprotion,VLDL)对大鼠肝星状细胞(hepaticstelatecel,HSC)增殖的影响。方法用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠HSC,并以MTT比色法观察TG和VLDL对HSC增殖效应。结果TG和VLDL可影响HSC的增殖,TG和VLDL浓度分别在125mg/L和(25~100)mg/L时对HSC增殖有促进作用(P<005或P<001)。结论体外细胞培养表明,TG和VLDL可促进HSC增殖,其与脂肪肝肝纤维化的发生可能有关。 相似文献
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牛磺酸对离体肝星状细胞增殖及凋亡的影响 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 观察牛磺酸对肝星状细胞增殖及凋亡的影响 ,并探讨其作用的可能机制。方法 用噻唑蓝 (MTT)法检测细胞增殖 ,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡 ,丫啶噔活体染色观察细胞凋亡形态 ,免疫细胞化学结合计算机图像分析系统检测c jun、c fos表达。 结果 在 5~ 5 0mmol/L浓度范围内 ,牛磺酸能剂量依赖性地抑制肝星状细胞增殖 ,可使G0 /G1期细胞增多 ,S期细胞减少 ,并能明显抑制c jun、c fos的表达 (P <0 .0 1)。此外 ,牛磺酸尚可抑制血小板源生长因子BB对肝星状细胞的促增殖作用 ,而牛磺酸对肝星状细胞凋亡无诱导作用。结论 牛磺酸可显著抑制肝星状细胞增殖 ,使肝星状细胞阻滞于G0 ~G1期 ;牛磺酸对肝星状细胞增殖的抑制作用与其抑制c jun、c fos的表达有关 ;牛磺酸不能诱导肝星状细胞凋亡。 相似文献
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氧化苦参碱对肝星状细胞增殖抑制和促凋亡作用的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
[目的]研究氧化苦参碱对体外乙醛造模后的肝星状细胞(HSC)增殖抑制及促凋亡作用的影响,探讨该药抗酒精性肝纤维化的作用机制。[方法]选取乙醛造模后HSC-T6为体外模型,以四甲基固氮唑盐(MTT)法分别检测800、400、200、100ug/ml浓度氧化苦参碱药物血清对HSC-T6作用48h后的抑制情况,找出最佳含药浓度;根据以上结果,以流式细胞仪检测HSC-T6的促凋亡作用。[结果]800ug/ml氧化苦参碱对HSC-T6细胞生长的抑制率最高,达到51.31%,与模型组比较差异有统计学意义(P〈0.01)。碘化丙啶染色流式细胞分析:800ug/ml药物血清作用HSC-T6,其在G0/G1、apop期细胞比例较模型组明显上升,S期细胞明显下降。[结论]氧化苦参碱可明显抑制HSC-T6增殖和诱导其调亡。 相似文献