DADS诱导人胃癌细胞分化作用中ERK/AP-1通路的改变

目的　探讨ERK/AP 1通路在二烯丙基二硫 (DADS)诱导人胃癌细胞分化中的作用 ,阐明DADS诱导人胃癌细胞分化的分子机制。方法　采用免疫细胞化学、图像分析及WesternBlot等方法 ,观察DADS作用于体外培养的人胃癌MGC80 3细胞前后AP 1成员c fos与c jun表达的改变以及ERKMAPK激酶的变化。结果　免疫细胞化学及图像分析结果显示 ,对照组c fos、c jun表达呈强阳性 ,而处理组呈阴性或弱阳性 ,阳性率明显降低 ,处理组光密度值较对照组明显低 (P <0 0 5 )。WesternBlot结果显示 :从 2 0、2 5、30到 35mg·L-1DADS处理癌细胞 ,DADS呈浓度依赖性抑制人胃癌细胞中ERK的活化 (P <0 0 5 ) ;并且DADS +MEK抑制剂PD980 5 9能完全阻断ERK活化 (P <0 0 5 ) ;时间效应上 ,在DADS刺激后 15～ 30min抑制作用最强 ,2h左右恢复至接近正常 (P <0 0 5 )。结论　ERK/AP 1通路抑制是DADS诱导人胃癌细胞分化的重要分子机制     

二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞G_2/M期的阻滞作用

目的　探讨二烯丙基二硫 (DADS)对人胃癌MGC80 3细胞G2 /M期的阻滞作用及分子机制。方法　体外培养MGC80 3细胞 ,采用MTT比色实验、细胞计数法 ,流式细胞光度术和Westernblot分析DADS对MGC80 3细胞的抑制增殖作用 ,细胞周期分布的影响及细胞周期相关蛋白的表达。结果　MTT法显示 ,2 0mg·L-1DADS、30mg·L-1DADS作用MGC80 3细胞 72h后 ,生长抑制率分别达2 5 7%、5 8 6 %。细胞计数法表明常规培养MGC80 3细胞群体倍增时间为 2 9 92h ,30mg·L-1DADS作用MGC80 3细胞后 ,其细胞群体倍增时间延长到 5 5 5 8h。流式细胞仪分析结果显示DADS呈浓度依赖性将MGC80 3细胞阻滞在G2 /M期。 30mg·L-1DADS作用MGC80 3细胞 36h ,与对照组相比 ,可使G2 /M期细胞增加到 4倍多。Westernblot分析表明在G2 /M期阻滞同时有Cdc2 5C蛋白表达下降 ,但CDK1蛋白表达不受DADS作用的影响。结论　DADS对MGC80 3细胞的抑制增殖作用与G2 /M期阻滞有关 ,DADS对MGC80 3细胞G2 /M期阻滞的分子机制可能与降低Cdc2 5C蛋白水平有关     

组蛋白去乙酰化酶1对人胃癌发生发展的影响

目的观察组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在胃癌及癌前病变组织中的表达,探讨HDAC1在胃癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组织化学PV6000法分别检测20例正常胃黏膜组织,20例萎缩性胃炎伴肠化生组织,20例不典型增生组织及60例胃癌组织中HDAC1的表达,并分析HDAC1与胃癌临床病理特征的关系,同时检测60例胃癌组织中p53,p21的表达,分析HDAC1与p53、p21表达的关系。结果 HDAC1在萎缩性胃炎伴肠化生、不典型增生及胃癌各组表达均高于正常胃黏膜组(45.0%,60.0%,63.3%vs 5%,均P<0.05);胃癌组中HDAC1的表达与分化程度和淋巴结转移有关(均P<0.05);胃癌组织中HDAC1与p21蛋白的表达呈负相关,而与p53蛋白的表达呈正相关(均P<0.05)。结论 HDAC1在胃癌及癌前病变组织中表达增高,HDAC1的表达与胃癌分化程度和淋巴结转移有关,胃癌组织中HDAC1与p21蛋白的表达呈负相关,而与p53蛋白的表达呈正相关,HDAC1可能通过调节癌基因与抑癌基因参与胃癌的发生、发展,对胃癌的早期诊断及预后的判断具有一定的意义。     

二烯丙基二硫诱导人胃癌细胞G_2/M期阻滞中p-CDK1、cyclin B1和p21~(WAF1)蛋白的表达

二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)是大蒜中提取的一种低分子量的脂溶性成分,也是大蒜中的主要有效成分,对结肠癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌和白血病等多种肿瘤均有明显的抑制作用.本实验室以前研究表明[1],DADS对人类白血病细胞HL60有诱导分化作用,对体外[2]和体内[3]的人胃癌MGC803细胞均有生长抑制作用、G2/M期阻滞作用.对体内的人胃癌细胞有诱导分化作用[3],对体外的人胃癌细胞有诱导凋亡作用[4].     

DADS诱导人胃癌细胞周期阻滞相关基因的差异表达

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人胃癌MGC803细胞G2/M周期阻滞相关基因表达的变化。方法MTT法、流式细胞术分别分析DADS对MGC803细胞的抑制作用与细胞周期分布的影响;功能基因芯片检测周期相关差异表达基因;Western blot、RT-PCR验证周期相关基因的表达。结果MTT法、流式细胞术证明DADS可明显抑制MGC803细胞增殖并诱导G2/M期阻滞。基因芯片结果显示,30 mg.L-1DADS作用MGC803细胞4 h后,表达上调的基因有CDC45L、CDK5R1、p21、CUL4A、GADD45α、RAD17、TP53,下调的基因是ANAPC5、ATR、BRCA1、CCNA2、CCNB2、CCNE1、CCNE2、CDC16、CDC6、CDK5RAP1、GTF2H1、MCM5、RAD9A、RGC32。RT-PCR显示30 mg.L-1DADS处理MGC803细胞4、8、12 h后,p21、GADD45α时间依赖性的表达增强(P<0.05),CyclinB1呈时间依赖性的表达降低(P<0.05)。TP53在4、8、12 h后与对照组比较表达明显增强(P<0.05)。Western blot结果表明,30 mg.L-1DADS作用MGC803细胞6、12、24 h后,p53、GADD45α、p21蛋白表达上调,CyclinB1蛋白表达下调(P<0.01)。结论DADS诱导人胃癌MGC803细胞G2/M周期阻滞是由多基因协同作用的结果,可能通过两种途径共同调节完成的。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂调控p21~(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平影响乳腺癌MCF-7细胞周期

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACI)调控p21~(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平,调节乳腺癌MCF-7细胞周期的分子机制。方法采用实时定量PCR、Western blot和DNA-Ch IP方法测定SAHA对乳腺癌MCF-7细胞周期调控系统的影响;应用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,Ch IP)技术探究SAHA调控p21~(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平的情况。结果 SAHA明显影响乳腺癌细胞周期相关调控因子的表达;在针对p21~(WAF1/CIP1)基因功能的筛查中发现,SAHA可明显诱导p21~(WAF1/CIP1)mRNA和蛋白的表达,并且可调节p21~(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平。结论 SAHA通过影响p21~(WAF1/CIP1)启动子乙酰化程度调节乳腺癌MCF-7细胞周期的进程。     

二烯丙基二硫上调p21、STAT1和CAMTA1诱导人白血病HL-60细胞分化

目的应用抑制性消减杂交(SSH)研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病HL-60细胞分化的分子机制。方法在前期工作中,我们成功地构建了具有高消减效率的DADS诱导白血病分化的cDNA文库,本实验通过挑取文库中的30个克隆制备质粒并酶切分析、测序和同源性检索。结果18个克隆均具有100～600bp左右的插入片段,测序分析发现10个差异表达基因,分别与细胞周期、信号转导、代谢、RNA结合等有关。RT-PCR验证其中上调的3个基因:p21、STAT1和CAMTA1,结果与SSH相符。结论p21、STAT1和CAMTA1表达上调与DADS诱导白血病分化密切相关。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin/SAHA体外抑制人卵巢浆液性囊腺癌细胞的实验研究

目的:卵巢恶性肿瘤是妇科三大恶性肿瘤之一,其死亡率居妇科恶性肿瘤第一位.目前手术是治疗卵巢恶性肿瘤的主要方法,且术后常辅以紫杉醇和铂类为主的化疗,但化疗常常由于肿瘤细胞发生耐药而导致化疗失败.因此对于卵巢癌的治疗迫切需要寻找新的突破.方法:是对体外培养人卵巢浆液性囊腺癌上皮细胞,取对数生长期细胞接种于96孔细胞培养板上,每组设6个复孔.采用全定量PCR方法检测p21基因mRNA含量的表达.结果:体外实验证实组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)能够诱导肿瘤细胞周期阻滞于G0/G1期和/或G2/M期,从而抑制肿瘤细胞的增殖率,具有很粒的临床应用价值.结论:本次实验探讨不同浓度下的组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidin、SAHA在人卵巢浆液性囊腺癌细胞系的作用和机制,为巢浆液性癌的治疗提供新的思路.     

二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究

目的　研究二烯丙基二硫 (diallyldisulfide ,DADS)诱导人胃癌MGC80 3细胞凋亡和对细胞周期的影响。方法　采用MTT法、丫啶橙染色、流式细胞仪等方法检测DADS对MGC80 3的增殖抑制 ,诱导凋亡以及细胞周期分布的影响。结果　MTT法显示 ,DADS对MGC80 3细胞有明显的抑制增殖作用 ,2 0、3 0、40mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞72h后 ,生长抑制率分别达 2 5 7%、58 6%、69% ;经 3 0mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞 48h后 ,用丫啶橙染色法观察到不同阶段的凋亡细胞形态学改变 ;流式细胞仪分析结果显示 ,DADS对MGC80 3细胞有明显的G2 /M期阻滞作用 ,3 0mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞 2 4h ,与对照组相比 ,可使G2 /M期细胞增加到 4倍多 ,且DADS呈时间依赖性诱导MGC80 3细胞凋亡 ,3 0mg·L- 1DADS作用MGC80 3细胞48h ,凋亡率从对照组的 3 5%升高到 3 9 5%。结论　DADS引起MGC80 3细胞G2 /M期阻滞并诱导凋亡可能是其抗肿瘤的机制之一     

腺病毒介导的p21基因联合顺铂对胃癌的作用

目的 探讨腺病毒介导的p21基因在人胃癌细胞株SGC-7901中的表达及其对肿瘤细胞生长和荷瘤小鼠的作用。方法 采用腺病毒载体携带周期控制基因p21转染人胃癌细胞株,用流式细胞仪技术测定p21基因对SGC-7901细胞周期的影响,并与CDDP联合应用,观察p21基因和／或CDDP对SGC7901细胞株和荷瘤小鼠的作用。结果 腺病毒介导的p21基因可在胃癌细胞株SGC-7901中过度表达,使胃癌细胞株S期含量下降,抑制其生长(抑制率为80％),并可诱导胃癌细胞的凋亡;p21基因联合CDDP作用使SGC-7901细胞G2／M含量明显下降,并可抑制荷瘤小鼠肿瘤细胞的生长,且联合作用比单一用药作用更明显。结论 腺病毒介导的p21基因可抑制人胃癌细胞株的生长,抑制瘤体的生长,结合化疗药物作用更强,为临床应用提供了依据。     

二烯丙基二硫对小鼠肾包膜下移植人胃癌细胞的生长抑制作用

二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)是大蒜的主要有效成分,对多种肿瘤均有明显的抑制作用[1].本室体外研究表明:DADS可明显抑制人胃癌MGC803细胞生长[2],其机制与G2/M期阻滞和信号传导通路ERK/AP-1途径有关[3,4].本研究采用人肿瘤细胞肾包膜下移植模型,探讨DADS对体内生长的MGC803细胞的抑制作用.     

Antiproliferative activity of paeoniflorin is through cell cycle arrest and the Fas/Fas ligand-mediated apoptotic pathway in human non-small cell lung cancer A549 cells

1. Paeoniflorin (PF), isolated from the paeony root, is reported to have immunoregulatory, neuromuscular blocking, anticonvulsant, antihyperglycaemic and antihypotensive effects. 2. The present study investigated the antiproliferative activity of PF. The results showed that PF inhibited the proliferation of A549 by blocking cell cycle progression in the G(0)/G(1) phase and inducing apoptosis. 3. An ELISA showed that G(0)/G(1) phase arrest may be due to p53-independent induction of p21/wild-type p53-activated fragment 1 (WAF1). Increased protein expression of Fas/apoptosis-1 (APO-1) and its two ligands, membrane-bound Fas ligand and soluble Fas ligand, may be responsible for the PF-induced apoptosis. 4. This is the first study to show that the induction of p21/WAF1 and the activity of the Fas/Fas ligand apoptotic system may participate in the antiproliferative activity of PF in A549 cells.     

二烯丙基二硫对人结肠癌HT-29细胞G_1期的阻滞作用

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人结肠癌HT-29细胞G1期的阻滞作用及分子机制。方法采用MTT、细胞计数法、流式细胞术和免疫细胞化学方法分析DADS对体外培养的HT-29细胞增殖抑制作用、细胞周期分布及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果MTT法显示,60、120μmol.L-1DADS作用HT-29细胞24 h后,生长抑制率分别达23.1%、45.6%。细胞计数法表明,常规培养HT-29细胞群体倍增时间为22.58 h,60μmol.L-1DADS作用HT-29细胞后,其细胞群体倍增时间延长到31.20 h。流式细胞仪分析结果显示,60μmol.L-1DADS阻滞HT-29细胞在G1期,与对照组相比,可使G1期细胞增加约2倍,而120μmol.L-1DADS显著地将细胞阻滞在G2/M期。免疫细胞化学分析表明在G1期阻滞同时有p21W af1蛋白表达上调,Cyc lin E、C-myc蛋白表达下降。结论低剂量DADS对HT-29细胞的抑制增殖作用可能与G1期阻滞有关,DADS对HT-29细胞G1期阻滞的分子机制可能与调节p21W af1、Cyc lin E、C-myc表达相关。     

白藜芦醇诱导人成骨肉瘤细胞凋亡及其机制

目的 探讨白藜芦醇(resveratrol)诱导人成骨肉瘤细胞株MG63的凋亡作用及其分子机制.方法 应用不同浓度的白藜芦醇作用于MG63细胞,利用透射电镜观察细胞形态学变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡、细胞周期分布;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测P21cip1/WAF1 mRNA、Survivin mRNA的表达.结果 白藜芦醇能明显抑制MG63细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性.经白藜芦醇处理MG 63细胞后,透射电镜下可见到凋亡细胞,FCM分析发现,10、20 μg/ml的白藜芦醇处理细胞72 h后,凋亡率分别为(11.9±0.6)%、(19.7%±0.9)%(P＜0.01),处理后的细胞G0/G1期比例增高,S期、G2/M期细胞比例减少;RT-PCR检测到P21cip1/WAF1表达升高,Survivin表达降低(P＜0.01).结论 白藜芦醇能明显抑制MG63细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与促进P21cip1/WAF1表达、抑制Survivin的表达有关.     

二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞分化的差异蛋白质分析

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人胃癌MGC803细胞分化过程中蛋白质的差异表达。方法用固相pH梯度双向凝胶电泳分离DADS处理前后人胃癌MGC803细胞总蛋白,凝胶经过银染后用PDQuest软件进行分析,差异蛋白质点经胶内原位酶解,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定肽质量指纹图(PMF),将所得的数据进行生物信息学处理。结果 DADS处理MGC803细胞前后的总蛋白质的双向电泳银染图谱,经扫描成像及PDQuest软件分析,对照组与处理组蛋白质点与平均匹配率分别为(576±14)个和(583±4)个与76%和70%,421个匹配,200个未被匹配。经相关数据库查询,在初步鉴定的差异蛋白质点中,发现24个与细胞分化、肿瘤转移、细胞凋亡、细胞周期、细胞免疫及代谢等相关的蛋白质,如gastric mucin、nM23、CDC2、uPAR、LIMK、RORα、MHC DR-beta-1 chain、TCR等,这些蛋白质可能在胃癌的发生发展中起着潜在的作用。结论 DADS可能通过多种途径诱导MGC803细胞分化。蛋白质组差异表达的初步分析为进一步研究胃癌分化的相关蛋白质及标记物奠定一定基础。