CD34+造血祖细胞定向诱导分化为T/NK细胞的研究进展

成熟T/NK细胞具有重要的移植免疫和抗肿瘤免疫效应。利用造血干/祖细胞具有多向分化的潜能,通过体外培养体系(含促进T/NK细胞分化发育的以下成份:如SCF、Flt-3L、IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、TNF-α等细胞因子,胸腺肽/胸腺素,胸腺基质细胞等不同组合),定向诱导其分化为成熟的T/NK细胞,可用于造血干细胞移植后的细胞过继免疫治疗。本文就CD34~+造血祖细胞定向诱导分化为T/NK细胞的实验研究的理论基础和进展作一综述。     

新一代细胞疗法：造血祖细胞体外扩增与定向诱导分化

第一代细胞疗法是成熟血细胞的全血输注,以后逐渐发展为成分输血。第二代细胞疗法是包括骨髓、动员外周血及脐带血的造血干细胞移植。近年来,体外扩增造血祖细胞的技术方法已逐渐成熟,在液体培养体系中加入FL(Flt-3 ligand),SCF,IL-1,IL-3,GM-CSF,G-CSF,Epo等细胞因子,可使细胞总数及各系祖细胞得以大量扩增,部分技术方法还可明显地扩增原始的早期祖细胞,(LTC-IC,CD34~ CD38~-细胞,CFU-GEMM等),如FL,Epo等细胞因子的组合,CD34~ CD38~-细胞亚群的扩增,负调控因子(如TGF-β,LIF及MIP-1α,IL-8,PF4等趋化因子)的应用,基质细胞的支持和继续灌注培养等。此外,利用上述细胞因子和FL,SCF,G-CSF,Epo,Tpo IL-4,FNF-α,IL-7,IL—15等的不同组合,还可定向地诱导CD34~ 细胞向粒系、红系、巨核系/血小板、NK细胞、树突状细胞(dendritic cells,DC)及淋巴细胞等方向分化与扩增。这些技术方法与方案已开始进入临床试用,在造血调控研究,造血干细胞移殖,大剂量化疗后的造血细胞支持治疗,肿瘤生物免疫治疗,基因治疗等领域将具有广阔的应用前景。     

不同细胞因子诱导脐带血有核细胞增殖及杀伤活性的研究

脐血来源丰富，采集方便，富含造血干／祖细胞及各种造血因子，且在体外具有增殖分化潜能，近年来倍受国内外研究者们的关注，且已成功地用于临床治疗多种疾病。我们采用提取脐血有核细胞的方法，研究其在体外对IL-2诱导的反应性及NK活性的变化，为脐血的临床应用提供了一定的实验依据。     

NK系白血病免疫表型特征

本研究目的是探讨NK细胞系白血病的的免疫表型。应用流式细胞术检测了297例急性白血病，并就发现的6例NK细胞系白血病病例分析其免疫表型特点。结果表明：297例急性白血病中CD56阳性43例，占14．5％，CD56阳性率21．4％～98．8％。43例中6例为NK细胞系白血病，其余37均为急性髓系白血病伴CD56表达；6例NK细胞系白血病中1例急性前髓系／NK细胞白血病（myeloid／NK cell precursor acute leukemia）；1例伴有早幼粒细胞样形态的急性髓系／NK细胞白血病；2例原始NK细胞白血病（blastic NK cell leukemia），1例NK样T细胞淋巴瘤／白血病（NK—like T—cell lymphoma／leukemia）；1例大颗粒淋巴细胞白血病。结论：伴CD56阳性急性白血病，绝大部分是急性髓系白血病伴CD56表达。NK细胞系白血病免疫表型各异，表现从多能造血干细胞经历髓系抗原阳性的T／NK双向祖细胞，分化为NK系祖细胞，再进一步分化为成熟NK细胞。对不同发育阶段的抗原表达特点．应仔细辨别，     

脐血造血干／祖细胞研究进展

脐血和骨髓均富含造血干／祖细胞，但二者在造血干／祖细胞的含量上存在差别。脐血中各CD34^ 细胞亚群有着独特的免疫表型。脐血造血干／祖细胞能在体外扩增，扩增后的CD34^ 细胞能在SCID小鼠体内造血，由脐血CD34^ 细胞可以生成淋巴细胞和内皮细胞。脐血造血干／祖细胞移植与骨髓造血干／祖细胞移植在患者的生存率、复发率及移植免疫排斥等方面均具有可比性，有着极大的潜在价值。     

体外诱导人骨髓间充质干细胞向造血细胞分化的研究

目的探讨体外诱导人骨髓间充质干细胞（hMSC）向造血细胞分化的可行性及分化条件。方法首先建立hMSC的分离培养扩增体系，制备小鼠胎肝基质细胞条件培养液（FLSC-CM），将hMSC接种在分别含FLSC-CM和IL-6、SCF组合的培养体系中，通过形态学、直接免疫荧光染色检测法、粒-单／巨噬系集落形成细胞培养（CFU-GM）对分化细胞进行鉴定。结果hMSC经FISC—CM诱导培养9天后，产生较多的悬浮细胞，悬浮细胞瑞士染色后形态类似于单核或小淋巴细胞，表达人CD34和人CD45表面抗原。且能够形成造血祖细胞集落（CFU-GM）。结论FLSC-CM可诱导hMSC分化为具有造血干／祖细胞特性的前体细胞。     

白细胞介素-11在白血病治疗中的临床应用及研究进展

白细胞介素-11(IL-11)是一种多功能细胞因子，可直接作用于骨髓造血祖细胞、巨噬细胞、T细胞、上皮细胞和肝细胞。具有促进造血、调控免疫、抗炎和保护黏膜上皮等功能，临床前研究和临床试验已表明IL-11可促进白血病患者化疗后血小板恢复，在造血干细胞移植中可防治移植物抗宿主痛的发生，维持移植物抗白血病效应并可协同G—CSF动员造血干／祖细胞进入外周血。本文对IL-11在白血病治疗中的临床应用和研究进展作一综述。     

转录因子GATA-3在T细胞发育过程中的作用

脊椎动物的造血是一个极其复杂的过程。机体内多能造血干细胞的相关基因在各种不同转录因子的参与下通过诱导或沉默其表达从而促使造血干细胞向各系细胞分化与成熟。GATA-3属Ⅳ型锌指蛋白GATA家族，是辅助性T细胞(Th2)特异性转录因子，它不但直接参与T淋巴细胞的分化调控，诱导Th2细胞的生成，亦可通过直接或间接作用参与红细胞、巨核细胞、嗜酸性粒细胞、NK细胞的分化调控，同时对CD8 T淋巴细胞分化成熟产生抑制作用。     

外周T细胞淋巴瘤的诊治进展

外周T细胞淋巴瘤(Peripheral T-celllymphoma,PTCL)是一组源于胸腺后成熟T淋巴细胞的淋巴系统恶性疾病.自然杀伤(natural killer,NK)细胞和T细胞都起源于具有双向分化潜能的T/NK祖细胞,具有某些相似的免疫表型和功能特征,因此NK细胞肿瘤包括在PTCL中.     

多西环素诱导表达下IL-3基因转染小鼠骨髓基质细胞促进造血

本研究探讨用多西环素调控IL-3基因表达的小鼠骨髓基质细胞系对小鼠造血干细胞增殖分化的促进作用。构建含小鼠IL-3基因逆转录病毒载体系统，转染小鼠骨髓基质细胞系，获得QXMSClTet-on-IL-3；体外加入多西环素诱导IL-3基因表达并检测IL-3表达活性；观察细胞培养条件上清液对造血祖细胞集落形成单位的作用及QXMSClTet-on-IL-3与骨髓细胞共培养对造血干细胞增殖分化的影响。结果表明：多西环素提高了QXMSClTet-on-IL-3细胞系IL-3的表达，促进骨髓造血祖细胞克隆形成数；与骨髓细胞共培养可促进造血干细胞的增殖分化。结论：应用多西环素诱导外源基因转染的骨髓基质细胞IL-3的表达，可促进造血。     

造血干／祖细胞体外大规模定向诱导分化及其临床应用前景

体外利用细胞培养技术和不同的细胞因子组合可将造血干细胞定向分化为中性粒细胞、红细胞、巨核细胞以及树突状细胞等细胞成分，利用这一特性可望在体外开发可应用于临床的造血细胞工程产品。本文就造血干／祖细胞体外定向诱导分化的细胞产品及其临床应用的前景进行综述。     

人胸腺和脐血造血干/祖细胞联合移植对裸鼠T细胞免疫功能影响

目的:建立人胸腺和脐血造血干/祖细胞联合移植裸鼠动物模型,探讨胸腺对造血干细胞发育分化的机制.方法:实验组为人胸腺与脐血CD34+细胞联合移植.对照组只给予人脐血CD34+细胞移植,通过观察裸鼠移植胸腺CD3、HLA-DR的表达、人源CD3+细胞在小鼠脾脏的表达、裸鼠血液CD3+、CD4+、CD8+和CD4+ CD25+细胞的百分比,以及联合移植裸鼠对移植肿瘤的排斥能力,判断联合移植对裸鼠免疫功能的影响.结果:移植胸腺在裸鼠肾被膜下存活,表达CD3和HLA-DR分子;裸鼠脾脏中检测到人源CD3+T细胞呈点块状分布;裸鼠血液中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+细胞均增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);联合移植组能抵抗肿瘤细胞的生长,单独脐血造血干/祖细胞移植组不能抑制肿瘤生长.结论:裸鼠移植人胸腺能促进人脐血造血干/祖细胞向T细胞分化、促进免疫功能重建.     

参与骨损伤修复的白细胞介素6

白细胞介素6是机体免疫网络中最重要的细胞因子,对淋巴细胞、造血干细胞、巨核细胞、肝细胞、神经细胞等具有促进生长和诱导分化的功能,还可促进B淋巴细胞分化和抗体蛋白的分泌,诱导细胞毒性T细胞活化,增加白细胞介素2诱导的LAK细胞的杀伤瘤细胞的活性,明显促进小鼠骨髓移植后的免疫功能重建,并且能够抑制M1髓样白血病细胞系的生长,促进其成熟和分化,可抑制黑     

FLT3及其配体FL研究进展

FLT3是一种受体型酪氨酸激酶,主要表达在造血干细胞(HSC)上。FLT3配基(FL)是新近发现的与造血调控有关的早期造血生长因子。FLT3与FL特异性结合后,自身酪氨酸激酶被激活,并与细胞内一系列蛋白质结合,催化其酪氨酸残基磷酸化,启动细胞内的信号传递,从而促进造血细胞的增殖与分化。当与SCF、EPO、IL-3、IL-6、G-CSF、GM-CSF等联合应用时,则显示较强的体外扩增造血干/祖细胞及定向分化诱导作用,更好地应用于造血干细胞移植(HSCT)及肿瘤的免疫治疗。     

脐血体外同时诱导扩增T,NK和CD34+细胞

体外研究表明,人脐血含有比骨髓细胞更原始更早期的造血干细胞群。移植后所引起的GVHD发生率及程度都比骨髓及外周血要低,但其相应的GVL效应也较低,容易复发。单份脐血所含有的造血细胞量仅可以满足一定体重以下的儿童患者需求,对需移植的大部分成人患者则要进行体外扩增。脐血体外扩增后进行干细胞移植是一种新的设想和尝试,移植物中免疫细胞的组成和功能是决定干细胞移植能否成功重建造血与免疫、以及平衡GVHD和GVL的重要因素。为了研究脐血体外同时诱导扩增T、NK和CD34 细胞的可能性,本实验无菌采集健康正常足月产新生儿脐血,并分离出单个核细胞,在不同的细胞因子组合作用下用IMDM培养液培养14天。在培养0、3、7、14天时收集细胞,用FCM分析扩增前后脐血干/祖细胞及T、NK免疫细胞含量。结果表明,与无细胞因子的对照组相比,所有细胞因子SCF,IL3,IL6,IL7,IL2组合组别均能显著扩增脐血中的单个核细胞。所有细胞因子组合组别均能显著增加脐血中的CD34 细胞比例,使其含量从新鲜脐血中的1.6%升高到最高D组的11.9%。第7天时CD34 细胞平均增加10至50倍不等。新鲜脐血中CD3 T细胞平均为(18.7±4.3)%,在无细胞因子的对照组中CD3 T细胞下降明显,而在含细胞因子的组别中CD3 T有不同程度的增加,扩增最高的组别中CD3 T细胞是新鲜脐血的2倍。在新鲜脐血中含(3.6±1.9)?56 细胞。CD56 细胞数量仅在含细胞因子IL2的组别中有显著增加,其它组则无明显变化。结论:脐血中T细胞、NK细胞在一定细胞因子组合下,可与干/祖细胞同时在体外被扩增和诱导分化。     

异基因造血干细胞移植中NK细胞的作用

摘要异基因造血干细胞移植后，供者细胞可产生强大而持久的免疫治疗功效，其中异源反应性NK细胞活性是T细胞异源反应活性以外的，具有显著抗肿瘤／白血病活性的自然免疫现象，并逐渐受到人们的重视。已证实，NK细胞通过其受体与靶细胞MHC分子特异性的识别机制参与移植物抗白血病（GVL）作用并影响移植物抗宿主病（GVHD）的发生。异基因造血干细胞移植后异源反应性NK细胞输注已从动物实验逐渐应用于临床。本文就NK细胞异源反应性及其在异基因造血干细胞移植中的作用进行综述。     

白细胞介素-2临床免疫治疗的现状及前景

<正> 1976年,由 Morgen 等首先发现,白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)是一种参与效应淋巴细胞分化诱导作用和免疫调节的 T 细胞生长因子,它能维持 T 细胞的生长、分化和成熟,能诱导自然杀伤细胞(Nature kill cell,NK),特异细胞毒性T 淋巴细胞(CTL),和淋巴因子活化的杀伤细胞(Lymphokine—activated killercells,LAK)的活化和增殖。动物实验和临床研究表明,IL-2诱导的淋巴细胞对具有     

脐血CD34+细胞体外扩增过程中Fas、Caspase-3表达及染色体核型分析

随着造血细胞工程这一新兴学科的兴起 ,利用造血干 祖细胞体外定向诱导分化为我们所需的细胞以供临床所需已越来越受重视 ,利用不同的细胞因子组合已可以扩增出近百倍的细胞产品 ,从而为其临床应用奠定了坚实的基础。然而我们不得不考虑体外短时间内扩增出大量的细胞是否具有无限增殖的特性、是否具有致瘤性而对患者存在潜在的威胁 ,因此研究造血干 祖细胞在体外定向诱导分化过程中的相应的安全指标就显得尤为重要。我们研究了ＣＤ3 4+细胞在体外定向诱导分化过程中ＣＤ95(Ｆａｓ抗原 )的表达情况 ,以及细胞扩增过程中Ｃａｓｐａｓｅ 3的动…     

急性白血病患者HLA不全相合非清髓造血干细胞移植后淋巴细胞亚群变化分析

本研究观察并比较急性淋巴细胞白血病及急性髓系白血病患者经HLA不全相舍非清髓造血干细胞移植（NST）后免疫重建及其与感染和移植物抗宿主病（GVHD）的关系。6名急性淋巴细胞白血病（ALL）,4名急性髓系白血病（AML）患者有HLA不全相合亲缘供者,接受以氟达拉滨,ATG,阿糖胞苷,环磷酰胺,TBI2Gy为主的非清髓预处理方案,移植前后给予环孢霉素A或他克莫司联合霉酚酸酯防治GVHD。采用流式细胞术分别于移植前化疗缓解期,移植后监测患者体内的总T细胞、辅助／诱导T细胞、抑制／杀伤T细胞、γ/δT细胞、CD4／CD8比值,B细胞、NK细胞、NKT细胞、调节T细胞、活化T细胞、原始T细胞、记忆T细胞移植后变化规律,分析各免疫功能细胞与移植后感染及急、慢性GVHD的关系;比较ALL与AML免疫系统恢复差别。结果表明,移植后患者各淋巴细胞量恢复有各自规律,发生GVHD患者各淋巴细胞亚群数量较高,而移植后1个月γ/δT细胞、调节T细胞、NK细胞量较低。移植后2—3月时CD4／C12）8、B细胞、NK细胞、原始T细胞较低。6—8个月时B细胞,原始T细胞,NK细胞较低。移植后早期发生感染患者总T细胞及各淋巴亚群恢复较慢,NK,NKT细胞数恢复较快,移植后3个月出现感染的患者,其B细胞及原始T细胞量恢复较快。ALL上与AML患者淋巴细胞恢复无差异。结论：不全相合NST后各淋巴细胞亚群分析可间接反映患者胸腺功能恢复状态,NK、B细胞、原始T细胞的变化对匿分和监测GVHD及感染有重要意义。     

造血干／祖细胞归巢的重要影响因素

输注的造血干／祖细胞经血液循环主要归巢于受体骨髓中，进行增殖分化，重建造血和免疫功能。归巢效率受多种因素影响，研究表明：不同表型的供体细胞具有不同的归巢能力，归巢及重建造血依赖于基质细胞、细胞—微环境间细胞因子、粘附分子特别是趋化因子等对造血干细胞归巢所起的调控作用。本文就造血干／祖细胞表型、骨髓造血微环境及二者之间相互作用等重要影响因素的研究进展作一简要综述。