双氢青蒿素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡

目的：探讨双氢青蒿素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞的凋亡作用和机制。方法：用二甲氧唑黄（XTT）细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测双氢青蒿素对HL-60细胞生长的抑制作用,AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位变化,分光光度法检测细胞Caspase3活性变化。结果：双氢青蒿素对HL-60细胞生长有抑制作用,呈剂量依赖性,并能诱导HL-60细胞凋亡,使线粒体膜去极化,增强Caspase3活性。结论：双氢青蒿素能抑制人急性髓系白血病HL-60细胞生长,并诱导细胞凋亡,可能和线粒体凋亡通路有关。     

双氢青蒿素人对急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的 探讨双氢青蒿素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的作用和机制.方法 用二甲氧唑黄细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测双氢青蒿素对HL-60细胞生长的抑制作用,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位变化,分光光度法检测细胞Caspase-3活性变化.结果 双氢...     

阿托伐醌通过ROS介导的自噬抑制结肠癌细胞增殖的研究

目的研究阿托伐醌抑制结肠癌细胞增殖的作用机制。方法通过MTT法和细胞克隆实验检测阿托伐醌对结肠癌细胞增殖的影响;免疫荧光、免疫印迹和流式细胞术检测阿托伐醌处理结肠癌细胞后凋亡、自噬水平的变化以及胞内活性氧(ROS)的产生。结果阿托伐醌对结肠癌细胞的增殖具浓度依赖性抑制作用,但凋亡水平无明显变化;阿托伐醌可促进结肠癌细胞自噬,激活胞内ROS的产生;且抑制自噬可削弱阿托伐醌对结肠癌增殖的抑制;同时,ROS清除剂NAC能抑制阿托伐醌诱导的结肠癌细胞自噬。结论阿托伐醌通过促进结肠癌细胞胞内ROS的产生诱导细胞自噬,进而抑制结肠癌细胞增殖。     

三氧化二砷对黑素瘤B16细胞内活性氧自由基的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）对黑素瘤B16细胞增殖及细胞内活性氧自由基（ROS）水平的影响。方法：30μmol/LAs2O3与500μmol/L N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）分别单独或联合作用于B16细胞,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞生长抑制情况;流式细胞术检测ROS水平。结果：As2O3能明显抑制B16细胞的增殖,NAC可部分拮抗As2O3对黑素瘤细胞的杀伤效应及诱导凋亡效应。As2O3作用1 h后的B16细胞内ROS水平比对照组升高（P〈0.01）,4 h达到高峰,24 h有所下降,与对照组差异均有统计学意义（P〈0.01）。ROS升高的趋势可被抗氧化物NAC部分阻断（P〈0.05-P〈0.01）。结论：As2O3诱导B16细胞凋亡与ROS水平改变有关,As2O3可通过提高细胞内ROS水平诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用,这也可能是As2O3抗黑素瘤的途径之一。     

人参皂苷Rg3对急性髓细胞性白血病THP-1、HL-60细胞的干预作用

目的:探讨人参皂苷Rg3对急性髓细胞性白血病的干预机制。方法:体外培养急性单核细胞性白血病细胞系(THP-1)、急髓白血病M3细胞系(HL-60),采用人参皂苷Rg3对细胞系进行干预,采用MTS法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法分析相关蛋白表达。结果:人参皂苷Rg3对THP-1、HL-60细胞均有不同程度的抑制生长效果,IC50分别为3.5、3.02 g·L~(-1)。人参皂苷Rg3作用24 h、48 h均可抑制急性髓细胞性白血病细胞增殖,且抑制作用与药物剂量呈依赖关系;人参皂苷Rg3对THP-1以及HL-60细胞的凋亡可起到诱导作用,细胞凋亡会随药物浓度升高而增加,且干预时间延长同样会增加细胞凋亡率,细胞凋亡率呈现时间、剂量依赖性。在作用48 h后,凋亡相关因子PARP出现了降解分裂条带,THP-1出现了Caspase-8条带轻度减弱,HL-60细胞出现了p-Akt明显减弱。结论:人参皂苷Rg3可以对Caspase-8及PARP相关蛋白的表达以及凋亡过程起到激活作用,使p-Akt表达水平降低,从而对肿瘤细胞的增殖以及凋亡起到抑制以及诱导作用。     

柔红霉素诱导急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡的作用因素研究

目的 探讨柔红霉素(DNR)致急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡的作用因素.方法 不同浓度(0、0.05、0.1、0.5、1μg/mL)DNR及N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理组作用于Jurkat细胞株,采用MTT法检测细胞活力,Hoechst/PI双染法观察细胞凋亡,流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)浓度及凋亡,RT-PCR法检测bax、survivin、bcl-2和bcl-xl基因的表达.结果 DNR可明显抑制Jurkat细胞株的活性,0、0.05、0.1、0.5、μg/mL的DNR及NAC预处理组分别作用于Jurkat细胞株24 h后,ROS水平分别为(7.98±0.55)%、(8.88±0.86)%、(9.46±0.98)%、(17.48±2.98)%、(24.46±2.43)%和(11.59±1.29)%,加入NAC后ROS生成受到抑制(P<0.01);细胞凋亡率分别为(11.41±1.44)%、(34.96±3.32)%、(45.58±3.12)%、(84.19±2.65)%、(87.93±1.74)%和(80.47±0.63)%,NAC预处理组与0.5 μg/mL DNR组比较,细胞凋亡率变化无统计学意义(P>0.05).NAC抑制bax基因mRNA表达,上调survivin、bcl-2和bcl-xl表达(均P<0.05).结论 DNR能够诱导Jurkat细胞株凋亡;ROS参与了DNR诱导的Jurkat细胞株凋亡;凋亡相关基因bax、bcl-2、bcl-xl及survivin能够与ROS相互作用,调节DNR诱导的Jurkat细胞株凋亡.     

大黄酸通过非活性氧依赖性内质网应激通路诱导L-02细胞凋亡

研究大黄酸对人正常肝细胞L-02的凋亡作用及探讨其机制。应用MTT法评价大黄酸对L-02细胞的活性抑制作用;流式细胞术检测大黄酸诱导L-02细胞的凋亡;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot技术检测细胞内质网应激相关基因和蛋白的表达变化;并探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对内质网应激蛋白及caspase-4、caspase-3的影响。实验结果显示:大黄酸能够呈剂量和时间依赖性抑制L-02细胞活性,增加L-02细胞凋亡率;诱导细胞ROS水平增高,NAC预给药可显著降低其水平;大黄酸能显著上调L-02细胞内的葡萄糖调节蛋白78(GRP 78)、活化转录因子4(ATF-4)和C/EBP同源蛋白(CHOP)基因的mRNA水平;显著增加GRP 78,磷酸化c-jun 氨基末端激酶(p-JNK),CHOP蛋白表达;NAC不能抑制大黄酸诱导的GRP 78,p-JNK,CHOP蛋白表达上调,亦不能抑制大黄酸诱导的caspase-4及caspase-3活性增加。表明大黄酸能够诱导L-02细胞凋亡,其作用机制与非活性氧依赖性的内质网应激通路有关。     

羽扇豆醇对白血病细胞株增殖和凋亡作用的影响

目的研究羽扇豆醇对人髓系K562、NB4、SHI-01及淋系Jurkat白血病细胞的增殖和凋亡作用。方法以不加药物处理为对照组,设置5个羽扇豆醇浓度梯度分别处理人髓系、淋系白血病细胞,采用MTT法检测细胞活力及增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果随着羽扇豆醇浓度的升高,细胞增殖明显受到抑制。当浓度达到150μmol/L时,4种细胞都呈现出明显的增殖抑制作用（均P〈0.05）;与对照组相比,羽扇豆醇组细胞凋亡率明显增加（P〈0.05）。结论羽扇豆醇可显著抑制人髓系K562、NB4、SHI-01及淋系Jurkat白血病细胞增殖并诱导其凋亡。     

甲基乙二醛通过ROS-MCU途径诱导成骨细胞凋亡的研究

目的 研究甲基乙二醛(methylglyoxal,MG)通过活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS)-线粒体钙单向转运蛋白(mitochondrial calcium uniporter,MCU)诱导成骨细胞凋亡的机制。方法 本研究将细胞随机分为4组,即对照组、MG组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组和NAC+MG组。采用MG处理小鼠MC3T3-E1成骨细胞系构建凋亡模型,MTT法检测细胞增殖活性,Annexin Ⅴ-FITC/PI染色结合流式细胞仪以及TUNEL染色检测细胞凋亡,Western blot法检测MCU蛋白表达水平。结果MG组较对照组显著抑制了成骨细胞增殖活性,同时增加了成骨细胞凋亡,而Western blot法检测结果显示MCU蛋白水平表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。在加入抗氧化剂NAC干预后,NAC+MG组较MG组细胞增殖活性明显恢复,凋亡减少,MCU蛋白表达水平降低。结论 MG诱导成骨细胞凋亡,该作用可能通过调控ROS-MCU途径有关。     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导髓系白血病细胞株HL60凋亡的机制研究

目的 探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导髓系白血病细胞HL60凋亡的机制。方法 四甲基偶氮唑盐（MTT）法、Hoechst33342染色形态学观察及流式细胞仪证实细胞凋亡,Western印迹检测B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcl-2）、Caspase-9、Caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶（PARP）蛋白表达。结果 硼替佐米对HL60细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖关系,30nmol/L的硼替佐米作用24h能明显抑制HL60细胞增殖,抑制率为76％,形态学观察可见明显的胞核凝聚、固缩及碎裂;流式细胞仪检测可见明显的凋亡峰凋亡率为62．6％;Western印迹检测显示Bcl-2表达下降,Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白均裂解激活。结论 硼替佐米能诱导髓系白血病细胞HL60凋亡,其机制与Bcl-2蛋白的抑制及Caspase凋亡信号途径的激活有关。     

双氢青蒿素对卵巢癌生长的抑制作用及其机制的研究

目的研究双氢青蒿素对体内外卵巢癌生长的抑制作用及其机制。方法双氢青蒿素卵巢癌细胞株HO-8910PM 24h后,CCK-8法检测细胞增殖;ELISA法检测细胞凋亡;以DCFH-DA为荧光探针检测卵巢癌细胞内活性氧(reactiveoxygen species,ROS)水平;Western blotting检测卵巢癌细胞中keap1蛋白、胞核Nrf2蛋白的表达;建立起裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,免疫组织化学法检测肿瘤组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxi-dase,GPX)的阳性表达。结果与对照组相比,双氢青蒿素可明显抑制体外卵巢癌细胞生长,并明显诱导细胞凋亡;双氢青蒿素可显著下调卵巢癌细胞胞核卵巢癌蛋白表达,而促进细胞内Keap1蛋白表达;化学显示法结果显示,双氢青蒿素使卵巢癌细胞SOD、GPX的活性明显降低;双氢青蒿素亦可明显降低卵巢癌肿瘤组织中SOD和GPX的阳性表达。结论双氢青蒿素可显著抑制卵巢癌细胞的生长,该作用可能通过Nrf2-Keap1信号通路来促进卵巢癌细胞内活性氧的产生,进一步促进细胞凋亡。     

阿司匹林诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:研究非甾体类抗炎药阿司匹林(ASA)对体外诱导人急性白血病细胞的凋亡作用及其相关机制.方法:采用MTT法测定ASA对HL-60细胞的抑制率,通过光镜、流式细胞仪(FCM)、原位末端标记法(TUNEL)观测ASA诱导HL-60细胞凋亡,半定量RT-PCR检测基因表达.结果:浓度为2.5～10mmol/L的ASA能抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡;ASA与阿糖胞苷(Ara-c)抗肿瘤作用具有相加效应;ASA可下调HL-60细胞c-myc mRNA水平表达.结论:一定浓度ASA在体外有抑制急性白血病细胞生长和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与c-myc基因下调有关.     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷抗白

目的:研究甲基转移酶抑制荆5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dC)对人急性髓系白血病细胞株HL-60生长、分化、凋亡的影响,初步探讨其抗白血病作用的可能机制.方法:不同浓度和时间的5-aza-2dC处理HL-60细胞后,采用MTT比色试验检测5-aza-2dC对HL-60细胞生长的影响;采用流式细胞术检测5-aza-2dC对HL-60细胞周期及分化的影响;采用Hochest33342染色和流式细胞术检测5-aza-2dC时HL-60细胞凋亡的影响;采用RT-PCR法检测药物处理对S100A8和S100A9基因mRNA表达水平的影响.结果:(1)5-aza-2dC呈剂量和时间依赖性地抑制HL-60细胞的生长,并使HL-60细胞周期阻滞于G2/M期;(2)5-aza-2dC处理使HL-60细胞的髓系分化抗原CD11b的表达增强,在低浓度(0.5 μmol/L)时其促分化作用最明显;(3)5-aza-2dC呈剂量和时间依赖性地诱导HL-60细胞凋亡,在高浓度(5.0μmol/L)时诱导凋亡的作用最明显;(4)5-aza-2dC能明显上调S100A8和S100A9基因mRNA的表达.结论:5-aza-2dC能抑制HL-60细胞生长,阻滞HL-60细胞于G2/M期,促进HL-60细胞分化和诱导其凋亡,并能上调S100A8和S100A9基因的表达,这些作用可能是5-aza-2dC抗急性髓系白血病的重要机制.     

黄芩苷通过激活JNK/p38 MAPK通路诱导ALL Reh细胞凋亡

目的探究黄芩苷对急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞株Reh增殖和凋亡的影响及c-Jun氨基蛋白激酶(JNK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路在其机制中的作用。 方法黄芩苷处理或联合活性氧(ROS)清除剂NAC共处理Reh细胞；流式细胞术检测细胞凋亡、胞内ROS水平和线粒体膜功能(MMP)；免疫荧光实验观察凋亡细胞的数目及其形态变化。Western blotting免疫印迹检测Reh细胞内凋亡蛋白和信号通路蛋白的表达水平。 结果与对照组比较,黄芩苷组Reh细胞增殖被抑制,细胞凋亡率、促凋亡蛋白、ROS、JNK和p38磷酸化水平显著上升,抗凋亡蛋白表达下调,MMP明显受损(P＜0.01)。NAC清除ROS后明显恢复细胞增殖,JNK和p38磷酸化水平明显下降,Survivin表达恢复(P＜0.01)。 结论黄芩苷经激活JNK/p38 MAPK通路活化Caspase3/7,诱导Reh细胞凋亡。     

露蜂房纯化蛋白对白血病细胞抑制作用的研究

目的 研究中药露蜂房纯化蛋白(nidus vespae protein-Ⅱ,NVP-Ⅱ) 对白血病细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用.方法 采用NVP-Ⅱ在体外作用于人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60及急性髓系白血病患者(AML)骨髓单个核细胞(BMMNC),MTT比色法检测NVP-Ⅱ对白血病细胞增殖的影响,透射电镜观察细胞超微变化,并用Hochest33258荧光染色法和TdT缺口末端标记(TUNEL)技术分析细胞凋亡.结果 0.019 19 mg/L、0.191 9 mg/L NVP-Ⅱ组能明显抑制白血病细胞的生长,使白血病细胞在透射电镜和荧光显微镜下呈现典型的凋亡形态特征,而且TUNEL检测见凋亡细胞核深染,NVP-Ⅱ处理组与生理盐水对照组比较,阳性细胞明显增多(P＜0.05).结论 NVP-Ⅱ体外对白血病细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导其凋亡.     

内质网应激在对比剂诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的:探讨内质网应激(ERS)在对比剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡中的作用及N-乙酰半胱氨酸(NAC)的保护作用。方法:将不同浓度(50,100,150mgI/ml)碘普罗胺分别加入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)中孵育1h;10mmol/L NAC预处理细胞1h后,加入100mgI/ml碘普罗胺共孵育1h。Hoechst-33342染色法检测肾小管上皮细胞凋亡率;荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)的产生;Western印迹法检测细胞内内质网功能调节蛋白GRP78、内质网源性转录因子CHOP表达水平。结果:对比剂呈浓度依赖性诱导NRK-52E细胞凋亡,且呈浓度依赖性诱导NRK-52E细胞内ROS生成及GRP78、CHOP蛋白表达上调(P<0.05);经NAC预处理后,细胞内ROS生成及细胞凋亡率明显下降(P<0.05),且GRP78、CHOP蛋白表达下调(P<0.05)。结论:碘普罗胺能诱导肾小管上皮细胞凋亡,其机制可能与细胞内ROS生成增加,诱发ERS,上调GRP78、CHOP蛋白表达有关。抗氧化剂NAC通过降低NRK-52E细胞内ROS介导的ERS,减少肾小管上皮细胞凋亡。     

Emodin induces apoptosis and down-regulates Bcl-2/Bax in leukemia KG-1a cells

目的 本研究观察大黄素( emodin)对人急性髓系白血病KG-1a细胞的增殖及凋亡影响,探讨Bcl-2/Bax基因在其中的作用.方法 采用四唑蓝比色试验(MTT)检测大黄素对KG-1a细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)测定细胞周期变化与凋亡情况;RT-PCR法检测大黄素作用后细胞Bcl-2/Bax mRNA表达的变化.结果 大黄素能抑制KG-1a细胞的增殖,作用48 h的半数抑制浓度(IC50)约为171.8 μmol/L流式细胞仪分析出现典型的亚二倍体峰(凋亡峰),将细胞阻滞于G0/G1期,大黄素作用后KG-1a细胞Bcl-2基因表达下调,而Bax基因表达上调,并呈量效关系.结论 大黄素可诱导KG-1a细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2,上调Bax基因表达水平有关.     

大黄素诱导白血病KG-1a细胞凋亡及对Bcl-2/Bax mRNA表达的影响

目的本研究观察大黄素(emodin)对人急性髓系白血病KG-1a细胞的增殖及凋亡影响,探讨Bcl-2/Bax基因在其中的作用。方法采用四唑蓝比色试验(MTT)检测大黄素对KG-1a细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)测定细胞周期变化与凋亡情况;RT-PCR法检测大黄素作用后细胞Bcl-2/Bax mRNA表达的变化。结果大黄素能抑制KG-1a细胞的增殖,作用48 h的半数抑制浓度(IC50)约为171.8μmol/L流式细胞仪分析出现典型的亚二倍体峰(凋亡峰),将细胞阻滞于G0/G1期,大黄素作用后KG-1a细胞Bcl-2基因表达下调,而Bax基因表达上调,并呈量效关系。结论大黄素可诱导KG-1a细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2,上调Bax基因表达水平有关。     

二甲双胍抑制急性髓系白血病细胞增殖

目的 探讨降糖药物二甲双胍对人急性髓系白血病细胞系U937细胞增殖的作用。方法 将浓度梯度的二甲双胍(0、5、10、20、40、60 mmol·L^-1)分别作用于U937细胞24、48 h,采用CCK-8试剂盒检测U937细胞活力,Annexin-V/PI assay试剂盒检测U937细胞凋亡率,JC-1检测U937细胞线粒体膜电位下降水平。同时基于细胞活力试验检测结果,将上述浓度梯度的二甲双胍分别作用于U937细胞48 h,采用Western blot检测Bcl-2蛋白表达水平。结果 二甲双胍作用24 h对U937细胞增殖抑制作用较弱、无明显杀伤作用;作用48 h对U937细胞有抑制细胞生长、促进凋亡、降低线粒体膜电位作用,同时显著降低U937细胞Bcl-2蛋白水平。结论 二甲双胍可杀伤人急性髓系白血病细胞系U937细胞。二甲双胍抗白血病作用可能与其下调线粒体膜电位、抑制Bcl-2蛋白表达有关。     

双氢青蒿素促进胶质瘤GL261细胞的凋亡

目的研究双氢青蒿素对胶质瘤GL261细胞凋亡的影响与作用机制。方法 0、30、60、90μmol/L双氢青蒿素处理GL261细胞,倒置显微镜下观察细胞形态改变,CCK-8法检测处理后GL261细胞活力的改变,Annexin V PI法检测双氢青蒿素对GL261细胞凋亡的影响,免疫荧光显微镜观察双氢青蒿素处理后激活型Caspase-3的表达改变与亚细胞定位,Western blot检测激活型Caspase-3与抗凋亡蛋白Bcl-xL的表达变化。结果双氢青蒿素能有效诱导胶质瘤GL261细胞凋亡,抑制细胞活性,具有浓度依赖性(P<0.05);30μmol/L双氢青蒿素作用12 h即可诱导Caspase-3激活并与细胞核共定位;双氢青蒿素能够下调Bcl-xL、上调激活型Caspase-3的表达水平,且具有浓度依赖性(P<0.05)。结论双氢青蒿素通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-xL、诱导Caspase-3激活途径介导胶质瘤GL261细胞凋亡。