丹参注射液对肝星状细胞的毒性及其作用机制研究

目的:探讨丹参注射液体外对肝星状细胞HSC-T6的毒性及其作用机制。方法:利用细胞培养技术,台盼兰法检测系列丹参溶液对HSC-T6生长的影响,G im sa染色观察细胞形态,MTT法检测丹参对细胞的生长抑制率,免疫组化检测血小板衍生生长因子(PDGF-BB)表达,生物法检测转化生长因子的表达。结果:①2.5至80μg/m l系列剂量丹参作用于HSC-T6 24、48和72h后,随着丹参剂量增大,HSC细胞存活率呈明显下降。②丹参作用48 h后,10μg/m l剂量部分细胞变成缩水球状,细胞胞浆变得不透明;20μg/m l剂量,脱壁细胞增多,细胞间隙增大,细胞很多呈缩水状;40μg/m l剂量多数细胞收缩成团块状,可见成片细胞脱壁;80μg/m l剂量细胞大量脱壁,活细胞很少。③HSC-T6经10至80μg/m l丹参作用24和48h后,490nm处测得OD值随剂量增大而降低,并随时间延长OD值减少。④免疫组化分析结果显示,与对照组相比,随着丹参剂量的增大,HSC-T6 PDGF-BB表达逐渐减弱,至20μg/m l差别已很明显(P<0.05)。⑤经10至40μg/m l丹参处理后HSC-T6 TGFβ1占总TGFβ的百分比降低。结论:丹参体外能够显著抑制HST-T6细胞增殖,其抑制机制是通过拮抗细胞因子PDGF-BB和TGFβ1的表达途径达到的。     

丹参对肝星状细胞增殖和凋亡影响的实验研究

应用肝星状细胞系观察丹参对体外培养的肝星状细胞增殖和凋亡的影响。ＭＴＴ比色法检测表明，丹参可以抑制体外培养的肝星状细胞增殖；采用电镜观察、ＴＵＮＥＬ法和流式细胞仪检测细胞凋亡表明，丹参可以显著促进其凋亡，并呈剂量依赖关系（Ｐ〈０．０５），因此，丹参对活化的肝星状细胞有抑制作用。     

丹参酚酸B盐对内皮素诱导的人肝星状细胞收缩的抑制作用及机制研究

目的 以培养的人肝星状细胞（HSC）为研究对象,观察内皮素-1（ET-1）对HSC的收缩作用及丹参酚酸B盐（SA-B）对ET-1的抑制作用,并探讨SA B抑制HSC收缩的作用环节和可能作用机制。 方法 采用酶消化、Nycodenz密度梯度离心的方法分离人HSC,以胶原凝胶收缩法观察ET-1对于传代HSC的收缩作用,以及低、中、高3种剂量的SA B对其不同的干预作用;将ET-1、SA-B直接添加于传代HSC的无血清培养液中,以激光共聚焦显微镜技术观测HSC内钙离子浓度的变化。 结果 胶原凝胶收缩实验显示,ET-1可诱导HSC收缩（P<0.01）;3种剂量的SA-B可明显抑制ET-1诱导的HSC收缩（均P<0.01）;加入ET-1后,HSC形态学改变明显,细胞数量减少,但SA B对这些改变也有抑制。激光共聚焦显微镜下观察,ET-1可刺激细胞内钙离子短暂迅速增加,加入SA-B后,该作用被明显抑制。 结论 SA-B能显著抑制ET-1诱导的HSC收缩,其抑制收缩的机制与降低HSC内的钙离子浓度有关。SA-B的抑制HSC收缩作用可能是其抗肝纤维化及门脉高压的机制之一。     

四逆散加丹参对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨中药复方四逆散加丹参抗肝纤维化,对肝星状细胞(HSC)的增殖、凋亡的影响。方法:采用中药复方四逆散加丹参对体外培养的HSC进行干预,通过MTT法、电镜、流式细胞术等方法,对HSC增殖与凋亡进行研究。结果:四逆散加丹参组HSC细胞增殖率明显低于空白对照组(P<0. 05),并呈剂量效应关系。电镜下四逆散组中的凋亡HSC染色质固缩,聚集于核膜下呈境界分明的块状或半月形小体,细胞浆浓缩或裂解成质膜包绕的凋亡小体。结论:中药四逆散加丹参具有抑制HSC增殖,促进HSC凋亡的作用,这可能是四逆散抗肝纤维化的作用机制之一。     

垂盆草总黄酮影响肝星状细胞凋亡的作用机制研究

目的:研究垂盆草总黄酮(SSTF)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)凋亡的影响及其作用机制。方法:将不同质量浓度的SSTF与HSC-T6细胞共培养不同时间后,MTT法检测SSTF对HSC-T6细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪Annexin-V/PI双染方法检测SSTF对HSC-T6细胞凋亡的影响;应用Western blotting和Real-time PCR方法观察药物对凋亡相关细胞因子Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白及mRNA表达的影响。结果:SSTF能显著抑制HSC-T6细胞增殖、诱导细胞凋亡,且呈剂量和时间依赖;Western blotting结果显示,SSTF通过抑制Bcl-2,促进Bax和Caspase-3蛋白表达促进细胞凋亡;进一步采用Real-time PCR研究发现,Bcl-2能够从mRNA水平抑制Bcl-2、促进Bax和Caspase-3表达。结论:SSTF具有促进HSC-T6凋亡的作用,这种作用的发挥主要是通过抑制Bcl-2、促进Bax和Caspase-3蛋白和mRNA的表达实现的。     

软肝冲剂对肝细胞影响及星状细胞活化机制的干预作用

目的：观察软肝冲剂抗肝纤维化的作用及机理。方法：体外培养四氯化碳（CCL4）肝纤维化大鼠肝细胞（HC）、星状细胞（HSC），观察软肝冲剂含药血清对其影响。结果：软肝冲剂有保护肝细胞、减轻CCl4对肝细胞损伤，抑制HSC活化，促肝细胞再生的作用。结论：软肝冲剂具有抗脂质过氧化和抑制HSC活化的作用，从而抑制肝纤维化的形成。     

肝星状细胞与肝纤维化

肝纤维化(hepatic fibrosis)是指肝脏纤维结缔组织的过度沉积,是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成和降解不平衡的结果,是各种慢性肝病向肝硬化发展所共有的病理改变和必经途径。而肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是ECM产生的主要细胞来源,它的激活、凋亡受到众多细胞因素及细胞内信号转导系统的调节,因此阐明肝星状细胞的生物学特性与功能及其在肝纤维化中的作用机制,对肝纤维化的预防和治疗都有     

肝星状细胞的凋亡机制研究进展

大量研究发现激活状态的肝星状细胞(HSC)减少主要通过凋亡.而凋亡机制到目前为止仍然未清楚.其凋亡机制非常复杂,而很多的研究都提示HSC的凋亡与细胞因子及细胞外基质,NF-kB及其他因素有关.而控制细胞的生死程序以基因的形式存储于细胞中.当凋亡诱导因素作用细胞时按死亡程序凋亡.笔者就其机制作一综述.     

肝星状细胞与肝纤维化

肝纤维化是一切慢性肝病的共同病理学基础 ,是形成肝硬化的必经病理阶段。肝纤维化的形成机理目前多数认为是致病因子造成肝细胞 (HC)损伤 ,引起肝枯否氏细胞 (KC)激活 ,分泌多种细胞因子 (CK) ,随同血小板、肝窦内皮细胞 (SEC)和肝细胞等分泌多种细胞因子 ,与某些化学递质共同作用于肝星状细胞 (HSC) ,使其激活 ,转化为肌成纤维细胞 (MFBLCs) ,通过旁分泌与自分泌作用 ,使 HSC增殖 ,合成大量的细胞外基质(ECM) ,ECM的分泌增加 ,降解减少 ,以致其在肝内大量沉积 ,肝纤维化逐渐形成 [1]。但肝纤维化与其它组织纤维化不同 ,很少有…     

软肝冲剂对肝细胞影响及星状细胞活化机制的干预作用

目的:观察软肝冲剂抗肝纤维化的作用及机理。方法:体外培养四氯化碳(CCL4)肝纤维化大鼠肝细胞(HC)、星状细胞(HSC),观察软肝冲剂含药血清对其影响。结果:软肝冲剂有保护肝细胞、减轻CC l4对肝细胞损伤,抑制HSC活化,促肝细胞再生的作用。结论:软肝冲剂具有抗脂质过氧化和抑制HSC活化的作用,从而抑制肝纤维化的形成。     

毛蕊异黄酮抗肝星状细胞活化的作用机制研究

目的观察毛蕊异黄酮对TGF-β1/Smads信号通路的影响,探讨毛蕊异黄酮抗肝星状细胞活化的作用机制。方法以人肝星状细胞株(LX-2)为研究对象,采用高内涵系统观察细胞增殖(Ed U)及细胞内F-actin骨架的聚合情况,RT-PCR法检测细胞I型胶原(Col-Ⅰ)、α-SMA、TGF-β1mRNA表达水平,Wstern-blot法检测细胞内p-Smad2、Smad2及Smad7蛋白表达水平。结果 TGF-β1可显著促进LX-2细胞增殖、活化,Ed U阳染细胞明显增加,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2及Col-ⅠmRNA或蛋白表达显著增加(P均0.05),Smad7表达显著下降;毛蕊异黄酮可显著降低TGF-β1诱导的LX-2中Ed U阳染细胞率以及α-SMA、p-Smad2与Col-Ⅰ的mRNA或蛋白表达(P均0.05),显著提高Smad7蛋白表达,且作用与TβRI激酶抑制剂SB-431542相当。结论毛蕊异黄酮可显著抑制肝星状细胞活化,其机制与抑制TGF-β1、p-Smad2的表达,提高Smad7蛋白表达,进而抑制TGF-β1/Smads信号转导有关。     

罗汉果甜苷对体外人肝星状细胞活化和凋亡的影响

目的研究罗汉果甜苷对体外培养人肝星状细胞LX-2活化及凋亡的影响。方法体外培养LX-2,将其分为空白对照组、不同质量浓度的罗汉果甜苷干预组(80、160、240、320μg/mL),每组8瓶细胞,药物与细胞共同孵育24 h后,采用CCK-8试剂检测细胞增殖状态,用酶联免疫吸附法测定转化生长因子-β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原的蛋白分泌,用RT-PCR法检测TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA的表达。用流式细胞仪双染法检测细胞凋亡。结果 CCK8结果显示罗汉果甜苷各剂量组作用LX-2细胞24 h后,细胞增殖均明显降低(P<0.05);ELISA和RT-PCR结果表明,与空白对照组比较,罗汉果甜苷各剂量组可抑制LX-2中TGF-β1和Ⅰ型胶原的蛋白分泌;并能抑制TGF-β1和α-SMA的mRNA表达(P<0.05)。流式细胞检测结果显示罗汉果甜苷各剂量组亦可剂量依赖性显著增加LX-2凋亡率。结论罗汉果甜苷可通过抑制TGF-β1和I型胶原的蛋白及TGF-β1和α-SMA的mRNA的表达来抑制肝星状细胞活化,还能促进肝星状细胞凋亡,从而发挥抗肝纤维化的作用。     

Anti-proliferative and pro-apoptotic effects of herbal medicine on hepatic stellate cell

Hepatic stellate cells (HSC) play a central role in hepatic fibrosis and compounds that promote apoptosis in HSC may have anti-fibrotic potentials. Herbal medicine has long been used in chronic liver disease but there is little scientific evidence for their actions. The present study investigated the effects of 14 commonly used herbs on cellular proliferation and apoptosis of a rat hepatic stellate cell line, HSC-T6 and the underlying mechanism of herb-induced apoptosis. HSC-T6 cell were incubated with herbal extracts and their proliferation was assessed by colorimetric assay. Apoptosis was measured and confirmed by flow cytometry, terminal transferase uridyl nick end labeling (TUNEL) assay and morphological features in hematoxylin and eosin staining. Apoptotic pathways involving Fas receptor and Bcl-2 family were investigated by Western blot. Five herbs, namely Angelica sinensis (AS), Carthamus tinctorius (CT), Ligusticum chuanxiong (LC), Salvia miltiorrhiza (SM) and Stephania tetrandra (ST) demonstrated both anti-proliferative and pro-apoptotic activities in HSC-T6. The highest potency was detected in SM and ST with 51.63 and 44.52% of HSC-T6 showing apoptotic changes, respectively. This was associated with upregulation of Fas and Bax and down-regulation of Bcl-xL in HSC. Fas ligand and Bcl2 expressions remained unchanged. The potential anti-fibrotic effect of herbal medicine warrants further evaluation.     

基于Wnt信号通路研究表没食子酸儿茶素没食子酸酯对肝星状细胞活化的作用及机制

目的 基于Wnt信号通路探究表没食子酸儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对人肝星状细胞LX-2活化的影响及其作用机制.方法 体外培养LX-2细胞,CCK-8法筛选EGCG的实验浓度;取对数生长期的LX-2细胞,设置对照组(正常培养)、模型组[10ng/mL转化生长因子-β1(...     

Effect of Orostachys japonicus on cell growth and apoptosis in human hepatic stellate cell line LX2

Orostachys japonicus (O. japonicus), used to treat diseases such as various cancers, gastric ulcers, fever, hepatitis, arthritis, eczema, for hemostasis, and intoxication in folk medicine, has been an important constituent in many herbal formulae. We demonstrated that the water extract of O. japonicus led to growth inhibition of LX2 cells by inducing apoptosis through the caspase activation, related to the MAPK pathway. O. japonicus inhibited proliferation of LX2 cells in a dose- and time-dependent manner, increased the apoptosis fraction at cell cycle progression with an accompanying DNA fragmentation, and resulted in a significant decrease in Bcl-2 and an increase in Bax mRNA levels. Exposure of LX2 cells to O. japonicus induced caspase-3 activation, however when the LX2 cells were also treated with the pan-caspase inhibitor Z-VAD-FMK and the caspase-3 inhibitor Z-DEVE-FMK, apoptosis was blocked. O. japonicus inhibited anti-apoptotic Mcl-1 protein and MEK/ERK phosphorylation in LX2 cells. The results indicate that O. japonicus inhibits the cell growth of LX2 cells by inducing apoptosis through caspase activity. O. japonicus down-regulated Mcl-1 protein levels and inhibited the phosphorylation of MEK/ERK, suggesting that it mediates cell death in LX2 cells through the down-regulation of Mcl-1 protein via a MEK/ERK-independent pathway.     

肝星状细胞的凋亡与肝纤维化的研究进展

<正>肝星状细胞(HSC)是肝脏的一种间质细胞,肝纤维化(HF)是肝脏对各种原因所致肝损伤的创伤愈合反应,由于损伤引起HSC激活及其转化为肌成纤维细胞(MF),从而大量合成各种细胞外基质(ECM)沉积于肝脏,最终导致HF。激活状态HSC减少主要通过HSC的凋亡来实现,抑制HSC激     

中药诱导肝星状细胞凋亡的研究进展

概述近年来中药诱导肝星状细胞（HSC）凋亡的研究进展。诱导HSC凋亡是减少活化的HSC、逆转肝纤维化的主要途径,中药以其多路径、多环节、多靶点的作用方式,在诱导HSC凋亡、治疗肝纤维化方面显示出确切的疗效。     

The molecular mechanism of gypenosides-induced G1 growth arrest of rat hepatic stellate cells

AIM OF THE STUDY: Gypenosides, the saponins extract derived from Gynostemma pentaphyllum Makino, have been used for treating hepatitis and cancer in Asia. Our previous study demonstrates that gypenosides inhibit the onset and improve the recovery of liver fibrosis induced by CCl4 in rats. In this study, we used the isolated rat hepatic stellate cells (HSCs) as a model to study the cellular mechanism of gypenosides-inhibited liver fibrosis. MATERIALS AND METHODS: Rat HSCs was treated with PDGF, gypenosides or vehicle. Cell viability was assessed by trypan blue staining. Apoptosis and cell cycle were evaluated by flow cytometry. The activation or inhibition of signal molecules was detected by Western blotting. RESULTS: Our results showed that 500 microg/ml gypenosides decreased PDGF-induced rat HSCs numbers (8750+/-2629 versus 103,000+/-6683, p<0.001, 95% confidence interval) and arrested cells at the G1 phase without the presence of sub-G1 fraction. Analysis of PDGF-induced proliferative molecules including phosphorylation of Akt and p70 S6K, gypenosides inhibited the activation of this signal pathway. Furthermore, gypenosides down-regulated the protein expression of cell cycle G1-specific cyclin D1 and D3. CONCLUSIONS: Gypenosides inhibited PDGF-induced HSCs proliferation by inhibiting the signal pathway of PDGF-Akt-p70 S6K and down-regulation of cyclin D1 and D3 expression.