CD45分子选择性剪接亚型的功能和调节

白细胞共同抗原CD45分子由一类结构相似、相对分子质量较大的跨膜蛋白组成,其胞浆区段具有蛋白质酪氨酸磷酸酶的作用,因而在细胞的信号传导及功能调节中发挥重要作用。CD45mRNA外显子的不同剪切拼接方式,能编码产生CD45RA、CD45RB、CD45RC、CD45RO等多种蛋白亚型。CD45亚型分子的表达与T淋巴细胞功能相关,且随着细胞的分化、发育和激活,分子亚型可发生转换。近年研究显示,CD45基因DNA的表观遗传学修饰、DNA结合的蛋白以及RNA剪接位点的突变等多种因素可以调控CD45不同外显子的剪接,从而调节淋巴细胞表面CD45分子不同亚型的表达。调控CD45外显子在成熟转录本的保留或者缺失的因素,也可能最终调控淋巴细胞CD45分子亚型的表达以及淋巴细胞的功能,并与临床自身免疫性疾病、血液病、肿瘤等疾病的发病相关。     

一对重要的免疫调节分子:CTLA-4及其抗体

杀伤性T细胞淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)分子是淋巴细胞表面的一种与免疫信号传递有关的配体蛋白分子，又称CD152，它属于免疫球蛋白超家族成员，为Ⅰ型膜蛋白分子。CTLA-4和CD28是同源性蛋白，它们在结构上相似，且都可以特异性结合B7-1／B7—2分子，但CD28与B7的结合，正调节T细胞的活化，而CTLA-4与B7结合后，负调节T细胞的活化，可减缓细胞周期的进程，降低IL-2的产生，使T细胞活化增殖受到抑制，从而使免疫达到平衡状态，保持外周的免疫平衡。而CTLA-4分子作为一种免疫活化的制动剂，表现为较少的量即可发挥强有力的免疫抑制功能。近几年来的研究结果使人们不断认识到此分子及其抗体在免疫调节中的重要作用。     

慢性乙型病毒性肝炎患者外周血T淋巴细胞CD27和CD45RA表达的研究

目的分析慢性乙型病毒性肝炎患者外周血T淋巴细胞CD27和CD45RA的表达。方法采集分离健康人和慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC),利用多种荧光标记抗体标记细胞表面分子,再用流式细胞仪检测CD8+T淋巴细胞表面CD27和CD45RA表达情况。结果31例慢性乙型病毒性肝炎患者CD8+CD45RA+CD27+T细胞占CD8+T细胞(29.03±13.18)%,低于28例健康对照组的(60.85±14.36)%,P<0.01。而CD8+CD45RA-CD27+T细胞占CD8+T细胞(30.31±24.11)%,显著高于健康对照组的(10.32±5.24)%,P<0.05。慢性乙型病毒性肝炎患者CD4+CD45RA+CD27+T细胞21.12±9.64%低于健康对照组的(60.89±17.93)%,P<0.01,而CD4+CD45RA-CD27+T细胞(54.28±18.75)%显著高于健康对照组的(27.16±9.24)%,P<0.01。结论健康人外周血CD8+和CD4+T淋巴细胞均以CD45RA+CD27+初始细胞表型为主,而慢性乙型病毒性肝炎患者外周血初始细胞减少,CD45RA-CD27+表型的T淋巴细胞明显增加。     

乙型肝炎外周血淋巴细胞CD3~+、CD3~+HLA-DR~+的表达

T淋巴细胞的CD3分子为成熟T淋巴细胞所特有的膜表面分子 ,它可代表T淋巴细胞总数。HLA DR是MHCII类分子 ,具高度多态性 ,在调控抗原递呈细胞 (APC )激活的T细胞活化的程度和特异性中起着重要作用。成熟T淋巴细胞受抗原激活后可表达MHCIl类分子 ,因此HLA DR分子可作为T细胞的活化标志。为观察乙型肝炎成熟T细胞量的变化及活化情况 ,我们测定了一些病人外周血CD3 、CD3 HLA DR 的表达。1　材料与方法1 1　临床资料　检测对象为 2 0 0 1年收治的乙型肝炎共 38例 ,男 34例 ,女 4例 ,平均年龄 36岁。慢性乙型肝炎 32例 ,其中轻度…     

黄芪对小鼠淋巴细胞及其表面分子的调节作用

目的探讨黄芪灌胃给药C57BL/6小鼠后脾脏中淋巴细胞及其相关表面分子的变化。方法将黄芪通过灌胃给药小鼠,6 d后将对照组和黄芪组小鼠的脾细胞进行分离,制备单细胞悬液,然后通过流式细胞术检测小鼠B细胞、T细胞、CD8+T细胞和NK细胞及其相关表面分子CXCR3、CD69和CD62L的百分比含量。结果黄芪组小鼠脾脏中B细胞和NK细胞的百分比显著升高(P<0.05),而T细胞和CD8+T细胞的百分比显著降低(P<0.05和P<0.01)。黄芪组CXCR3分子在NK细胞中的表达明显高于对照组(P<0.05);黄芪组CD69分子在CD8+T细胞和NK细胞中的表达均明显高于对照组(P<0.05);黄芪组CD62L分子在B细胞、T细胞、CD8+T细胞和NK细胞中的表达均显著低于对照组(均P<0.01)。结论 C57BL/6小鼠在给药黄芪后,其脾脏中上述淋巴细胞及其相关表面分子可发生不同程度的变化,提示黄芪对小鼠的免疫功能可以产生多种调节作用。     

艾滋病患者HAART治疗前后CD4+T细胞表面某些归巢分子和辅助受体表达变化分析

目的 探讨艾滋病(AIDS)患者高效抗逆转录病毒治疗(HAART)治疗前后CD4+T细胞表面CD49d、CCR9、CD62L和CCR5表达的变化情况.方法 采用流式细胞术检测42例艾滋病患者和18例HIV阴性健康对照的外周血CD4+T细胞表面CIM9d、CD62L、CCR9和CCR5的表达,并对CD4+CCR9+和CD4+CCR5+T细胞进一步进行CD45RO表型分析,采用BD FACSDiva软件分析计算各组细胞表达的百分率.结果 艾滋病患者尚未开始HAART治疗组(pre-HAART组)外周血CD4+细胞计数明显低于HAART治疗组(HAART组)(P<0.01);pre-HAART组外周血单个核细胞(PBMC)中CD3+CD4+,CD4+CCR9+,CD4+ CCR5+T细胞的百分率均明显低于HAART组(P<0.01),pre-HAART组CD4+CD49d+,CD4+CD62L+,CIM+CCR9+CD45RO+,CD4+CCR9+CD45RO-,CD4+CCR5+CD45RO+,CD4+CCR5+CD45RO-T细胞的百分率显著低于HAART组(P<0.001);HAART组PBMC中CD3+CD4+,CD4+CD62L+,CD4+CCB5+T细胞的百分率均显著低于HIV阴性对照(HIV-neg组)(P<0.001);pre-HAART组以上各组细胞群的百分率均显著低于HIV-neg组(P<0.05).结论 AIDS患者外周血CD4+T细胞表面肠道归巢分子CD49d、CCR9,淋巴结归巢分子CD62L,辅助受体CCR5异常改变,但HAART可以逆转以上部分病理变化.肠道归巢分子CD49d、CCR9和淋巴结归巢分子CD62L可作为艾滋病疾病进展和评价机体HAART后免疫重建情况的指标.     

慢性乙型肝炎患者外周血T细胞KIR表达研究

目的：检测慢性乙型肝炎患者外周血T细胞表面KIR的表达情况。方法：采用三色流式细胞术检测慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋T细胞和CD8^high T细胞表面KIR分子表达，并与正常外周血比较。结果：慢性乙型肝炎患者外周血中CD8^high T细胞KIR表达明显高于对照组CD8^high T细胞。正常外周血CD4^＋T细胞几乎不表达KIR，慢性乙型肝炎患者外周血中CD4^＋T细胞表达KIR。结论：慢性乙型肝炎患者T细胞表面KIR表达明显增加。     

补体调节蛋白CD59在HIV感染者外周血T细胞上的表达研究

目的 观察补体调节蛋白CD59在HIV感染者外周血T细胞上的表达情况,并进一步探讨高效抗逆转录病毒治疗（Highly Active Antiretroviral Therapy,HARRT）前后CD59在外周血T细胞上的表达变化及其意义.方法 收集48例确诊HIV感染者外周血,根据是否HARRT分为未治疗组（23例）及治疗组（25例）,并收集14例健康志愿者外周血,全血细胞表面染色后使用BD FACSCanto 流式仪检测CD59在外周血T细胞上的表达情况,并进一步检测CD59在CD45RO＋记忆型CD4T细胞表面的表达情况;同时用定量PCR技术检测HIV感染者的血浆病毒载量及CD4细胞绝对计数,将结果进行统计学分析并比较各组间差异.结果 与健康对照者比较,CD59在HIV感染者CD4＋T细胞上的表达水平明显增高（P＜0.05）,其中以在CD45RO＋记忆型CD4T细胞上增高为主（P＜0.05）;治疗组CD4＋T细胞上CD59的表达较未治疗组明显下降（P＜0.05）,但与健康对照组比较其表达仍处于较高水平（P＜0.05）,进一步分析发现CD59的这种变化主要发生在CD45RO＋（记忆型）CD4＋T细胞上;CD59在CD4＋T细胞上的表达变化与病毒载量及外周血CD4＋T细胞绝对计数均有一定的相关性（R2=0.2181,P=0.0247;R2=0.1586,P=0.0486）.结论 HIV感染可引起补体调节蛋白CD59在CD4＋T细胞上表达增加,HARRT可使其表达水平有所下降.这种表达增加可能与病毒免疫逃逸及CD4＋T细胞的功能抑制有关,HARRT治疗可部分逆转这种免疫紊乱现象.     

人肠道正常粘膜组织与外周血中记忆性IL-22~+T淋巴细胞频率及表型的比较

目的比较人肠道正常粘膜组织与外周血中IL-22+T淋巴细胞的频率及其表型特征。方法分离人肠道正常粘膜与外周血中单个核细胞,anti-CD3+anti-CD28刺激后,采用流式细胞术(FACS)检测IL-22的产生及其与IFN-γ、IL-17的关系,分析IL-22+T淋巴细胞CD45RO,CD62L,CCR7,CCR6,CCR10,CCR4等表面分子的表达。结果与anti-CD3+anti-CD28刺激外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞产生少量的IL-22(0.6%;0.57%)相比,肠道粘膜CD4+T细胞产生大约3.15%的IL-22,CD8+T淋巴细胞产生4%左右的IL-22。此外,肠道粘膜CD4+和CD8+T细胞中存在一群产生IL-22并独立于Th1、Th17,Tc1、Tc17的细胞亚群。肠道粘膜IL-22+T细胞表达较高比例的CD45RO,其中部分细胞表达CCR7,而较少表达CD62L。进一步研究表明,肠道粘膜CD4+IL-22+和CD8+IL-22+T细胞表达较高水平的CCR10(55.3%;73.9%),部分细胞表达CCR6或CCR4。结论人肠道正常粘膜组织中IL-22主要由效应型或中央型记忆T细胞产生,部分IL-22+T细胞独立于Th1、Th17,Tc1、Tc17细胞亚群。     

GD患者外周血CD4+CD28-T细胞亚群的表型特征及临床意义

检测Graves病(GD)患者外周血CD4~+CD28-T细胞水平及其表面CD45RO/CD45RA及ICOS的表达,探讨CD4~+ CD28-T细胞亚群在GD免疫致病机制中的作用。采用三色荧光抗体染色及流式细胞术检测了42例初发GD患者和30例健康者外周血中CD4~+CD28-T细胞的百分率及其表面CD45RO/CD45RA和ICOS表达水平,同时检测其甲状腺功能并进行相关性分析。结果GD患者外周血中CD4~+CD28-T细胞百分率明显高于健康对照组,并高表达ICOS分子,与FT3水平显著正相关;与健康对照组相比,GD患者CD4~+CD28~-CD45RO~+T细胞百分率也显著增高,而CD4~+CD28~-CD45RA~+T细胞呈下降趋势,FT3、FT4水平与CD4~+CD28-T细胞表面CD45RO的表达率呈正相关,而FT3水平与CD45RA表达呈负相关。结论GD患者外周血CD4~+CD28~-T细胞异常增高,表面高表达ICOS分子,具有记忆性细胞的表型特征,与甲状腺功能异常有一定的相关性,CD4~+CD28-T细胞可能是参与GD免疫病理反应的自身反应性T细胞。     

CD154(CD40L)的表达与初始和记忆CD4+T细胞相关性的探讨

目的:探讨CD154 细胞的表型特征与初始和记忆CD4 T细胞以及与细胞因子表达之间的关系。方法:正常人外周血单个核细胞(PBMC),经抗CD3 抗CD28单克隆抗体(mAb)刺激培养后,利用多种抗细胞表面分子和抗细胞因子以及抗CD154抗体进行标记,用流式细胞术检测。结果:体外刺激PBMC6h后,CD154表达于CD4 T细胞,而不表达于CD8 T细胞。对比分析CD4 CD154 T和CD4 CD154- T细胞上CD45RA(初始)和CD45RO(记忆)表面分子的结果表明,大多数CD4 CD154 T细胞为记忆细胞。当利用抗CD3或抗CD3 抗CD28mAb刺激后,分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α的CD4 T细胞均为CD4 CD154 T细胞,而且单个细胞可以同时分泌两种以上细胞因子。进一步研究表明,CD4 CD154 T细胞低表达或不表达CD25,不表达CD62L,50%左右的细胞表达CCR7。结论:体外短时间刺激PBMC,经过对细胞表型和细胞因子表达的研究,表明CD154分子结合其他表面标记或细胞因子的表达可以用于鉴别初始和记忆CD4 T细胞。     

人初始和记忆CD4+T细胞信使RNA基因芯片检测结果分析

目的探讨健康成人外周血初始和记忆CD4~+T细胞静息状态下表面分子、趋化因子受体、细胞因子和转录因子mRNA表达的差异。方法抽取健康成年人外周血,分离PBMC,染色后流式分选出CD45RO-的初始和CD45RO+的记忆CD4~+T细胞,裂解细胞,进行mRNA表达谱芯片检测。结果相比初始T细胞,静息状态下记忆CD4~+T细胞表达高水平的表面分子CTLA-4、PD-1、FAS、CD25,趋化因子受体CCR4、CCR6、CXCR3、CXCR5,细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17和转录因子T-bet、EOMES、STAT4、GATA3和RORγt,并表达低水平的表面分子CD62L、CCR7、ICAM-I、CD40L,细胞因子IL-1β和转录因子NF-κB。结论静息状态下,与初始CD4~+T细胞相比,记忆CD4~+T细胞高表达某些活化分子、细胞因子、转录因子mRNA,可能是记忆CD4~+T细胞发生快速免疫应答的关键因素。     

IL-37通过作用树突状细胞调节CD8~+T细胞功能

将小鼠骨髓细胞诱导分化为DC,用IL-37处理后,流式细胞术检测细胞表面共刺激分子(CD86、CD80),RT-PCR法检测TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-12和TGF-βmRNA的表达,多重液相蛋白定量CBA试剂盒及ELISA试剂盒检测细胞上清中TNF-α、IL-6、IL-12、IFN-γ、MCP-1和TGF-β蛋白的表达。Western blotting方法检测DC中磷酸化蛋白的表达。将DC与T细胞共培养,流式细胞术检测CD8+T细胞增殖及活化程度(CFSE、CD69)。结果显示,IL-37能够降低表达CD80+/CD86+的DC数量。促炎因子TNF-α、IL-12和IL-6的表达被明显抑制,而T淋巴细胞抑制因子TGF-β明显增高。IL-37预处理的DC明显降低T淋巴细胞的增殖和活化能力。IL-37能够降低DC中磷酸化ERK和NF-κB的表达。IL-37处理的DC对CD8+T细胞产生明显抑制作用。结果表明,IL-37能够通过影响ERK和NF-κB依赖的信号通路抑制DC的成熟和免疫反应,从而抑制CD8+T细胞的活化及增殖。     

嵌合抗菌肽的研究

嵌合蛋白（Chimeric protein）是20世纪90年代发展起来的一种基因工程技术,通过PCR拼接技术,将2个或以上生物活性蛋白或其功能结构域编码基因偶联起来,以产生新的生物活性蛋白。比如CD4免疫粘附素。CD4分子是一种辅助T淋巴细胞和巨噬细胞的跨膜蛋白,是爱滋病病毒（HIV）的受体,HIV通过CD4复合受体进入和感染T淋巴细胞和巨噬细胞,导致免疫功能受损。CD4跨膜蛋白的细胞外区段可从细胞膜上脱落下来,进入血循环,这个细胞外区段称为可溶性CD4分子,它可以与HIV外膜糖蛋白特异结合。CD4免疫粘附素就是将CD4分子的细胞外区段的编码基因与IgG的轻链和重链基因偶联产生的,     

HBD1对新生儿脐带血CD4~+T淋巴细胞活化和增殖的研究

本文探讨了HBD1对脐血CD4~+T细胞的增殖、细胞表面分子CD69、CD25、CD40L和CD45RO的表达及B细胞CD80、CD86分子表达的影响,并以成人外周血CD4~+T细胞作对照。采用CCK-8增殖实验检测CD4~+T细胞的增殖情况,采用流式细胞术检测CD80、CD86、CD69、CD25、CD45RO和CD40L的表达情况。结果表明:HBD1促进了脐血CD4~+T细胞的增殖,CD69、CD25、CD40L表达上调;B细胞CD80、CD86的表达也上调,但并未促进CD45RO表达的上调。而相同处理条件下,HBD1对成人外周血CD4~+T细胞作用不明显,提示HBD1对脐血来源CD4~+T细胞具有一定的免疫调节作用。     

T淋巴细胞活化在严重发热伴血小板减少综合征疾病发展中的作用

目的 探讨严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSv)感染过程中,外周血T淋巴细胞活化对血液细胞、组织损伤和疾病发展的影响.方法 应用流式细胞术,动态定量监测严重发热伴血小板减少综合征(SFTS)患者外周血中T淋巴细胞表面CD69、HLA-DR、CD28和CTLA-4等表达水平,分析其细胞表面分子变化与血清酶学以及白细胞和血小板异常的关系.结果 SFTS患者T细胞活化分子CD69和HLA-DR在整个病程中表达水平明显增加(P＜0.05);CD4+细胞表面CD28的表达在SFTSV感染早期明显减低,但随病程发展而逐渐回升至正常范围,而T细胞表面CTLA-4的高表达则出现在感染后的中晚期.SFTS患者病程中,血清ALT、AST和LDH、CK等均明显高于正常范围,并伴随着T细胞表面CD69、HLA-DR等活化分子下调和CTLA-4表达水平上调而逐步恢复正常;白细胞和血小板计数的最低值出现在病程初期,伴随着T细胞表面CD69、HLA-DR等活化分子下调和CTLA-4表达增加逐渐回升至正常范围.结论 T淋巴细胞的过度活化可能是组织损伤的主要因素之一,而CTLA-4高表达,则可能是对机体T淋巴细胞过度活化的一种负反馈调节,在SFSTV感染者的免疫应答调节中发挥重要作用.     

体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为T淋巴细胞

目的 体外诱导小鼠胚胎干细胞(ESC)分化为T淋巴细胞. 方法 借助小鼠胚胎干细胞体外自然分化形成的类胚体(EB)中含有=三胚层细胞的独特细胞环境,加入多种细胞因子和胸腺肽α1,体外诱导小鼠ESC向T淋巴细胞分化.利用流式细胞仪在不同时间点检测诱导细胞表面T淋巴细胞发育相关的表面标志CD25、CD44、CD3、CD4、CD8以及T细胞受体(TCR)αβ和TCRγδ分子的表达水平. 结果 诱导3 d后,出现CD44+细胞;第6天出现CD44+、CD44+CD25+和CD25+细胞群;第15天开始表达CD3分子;1周后开始出现CD4+CD8+双阳性细胞.随着诱导时间的延长,CD3+细胞和CD4+CD8+细胞的百分比不断升高.培养1个月后,出现少量的CD4+和CD8+的单阳性细胞.诱导细胞早期表达TCRαβ和TCRγδ.随着诱导时间的延长,T细胞进一步成熟,诱导细胞以TCRαβT细胞为主. 结论 细胞因子和胸腺肽α1的共同作用可以在体外诱导小鼠胚胎干细胞分化成具有T淋巴细胞表型的细胞,且细胞的表型变化与T细胞体内正常的胸腺发育过程中的表型变化一致.     

慢性乙型肝炎患者外周血CD45RA+、CD45RO+T淋巴细胞亚群的特点及临床意义

目的：探讨慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋CD45RA^＋、CD4^＋CD45RO^＋、CD8^＋CD45RA^＋和CD8^＋CD45RO^＋T淋巴细胞亚群的特点及其与肝病病情的关系。方法：采集46例轻中度慢性乙型肝炎患者、58例重度慢性乙型肝炎患者和30例健康人的外周抗凝血，应用流式细胞技术三色荧光分析法对其外周血中CD4^＋CD45RA^＋、CD4^＋CD45RO^＋、CD8^＋CD45RA^＋和CD8^＋CD45RO＋T淋巴细胞亚群进行检测。结果：轻中、重度慢性乙型肝炎患者与正常人相比，其外周血中CD4^＋、CD8^＋T细胞均无明显改变；CD8^＋CD45RA^＋T细胞均明显降低，CD8^＋CD45RO^＋T细胞均明显增高，而CD4^＋CD45RA^＋、CD4^＋CD45RO^＋T细胞均无明显改变；重度慢性乙型肝炎患者与轻中度慢性乙型肝炎患者相比，CD8^＋CD45RA^＋T细胞明显降低（P〈0.05），CD8^＋CD45RO^＋T细胞明显升高（P〈0.05）。结论：乙型肝炎慢性化过程中，CD8^＋CD45RO^＋T细胞起重要作用且与慢性乙型肝炎患者病情的进展呈正相关；检测CD4^＋CD45RA^＋、CD4^＋CD45RO^＋、CD8^＋CD45RA^＋和CD8^＋CD45RO^＋T淋巴细胞亚群比检测CD4^＋和CD8^＋T细胞亚群更能正确、充分、全面地了解慢性乙型肝炎的发病机制和预后，从而有效地指导临床治疗。     

恶性胸/腹水肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)体外选择性CD8+T细胞扩增的培养体系建立及功能表型分析

目的 探讨体外恶性胸/腹水中肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)大量培养扩增方法并初步研究其分子表型及功能特征。方法 无菌操作条件下抽取恶性肿瘤患者胸/腹水，密度梯度离心法分离淋巴细胞，采用γ干扰素(IFN-γ)、抗CD3多克隆抗体OKT3和白细胞介素2(IL-2)为基础的联合方案扩增TIL,并记录其细胞形态及扩增速度。采用流式细胞术动态检测扩增淋巴细胞的分子表型T淋巴细胞亚群中淋巴细胞激活信号分子F7(SLAMF7)、CD45RO、颗粒酶B(GZMB)、程序性死亡蛋白1(PD-1)、CD57阳性细胞比例，CCK-8法检测其对肿瘤的杀伤能力。结果 在本培养方案中，TIL细胞培养至第26天状态良好，第30天开始增殖速率下降。CD4^- CD8⁺ T细胞及CD8⁺ CD56⁺ T细胞比例随培养时间的延长逐渐提高，CD4⁺ CD8^- T细胞的比例逐渐下降，CD4⁺ CD25⁺ T细胞始终保持低水平状态。与扩增前相比，SLAMF7、...     

CD45分子结构和功能研究进展

CD45分子是第一个被确认的典型的受体型蛋白酪氨酸磷酸酶(RPTPα),儿乎在所有的有核白细胞表面均有表达.在环境信号整合进入细胞并引起反应的过程中,蛋白激酶和磷酸酶共同调节的酪氨酸磷酸化状态是一个关键的调控点,CD45分子在酪氨酸的磷酸化过程中发挥重要作用.CD45突变细胞系、CD45缺陷小鼠、CD45缺陷人群的研究均表明了CD45对于抗原受体信号转导和淋巴细胞的分化发育等过程都是必不可少的,CD45分子功能紊乱会导致自身免疫性疾病、免疫缺陷、恶性肿瘤等.