TNFα诱导KS62／VCR和K562细胞凋亡及逆转其耐药作用的实验研究

目的　探讨肿瘤坏死因子 α(TNFα)体外诱导 K5 6 2 / VCR及 K5 6 2细胞凋亡 ,及其逆转 K5 6 2 / VCR细胞多药耐药 (MDR)的作用机制。方法　以光镜、电镜、流式细胞仪观察细胞凋亡 ;流式细胞仪检测 P- gp和 bcl- 2表达。MTT检测药物敏感性。结果　 (1) TNFα浓度 >10 0 U/ m l,作用时间 >4 8小时 ,2株细胞均可见典型凋亡现象 ,以 K5 6 2 / VCR细胞明显。 (2 )以 TNFα10 0 0 U/ ml处理后 ,K5 6 2 / VCR和 K5 6 2细胞凋亡率分别为 2 9.4 %和10 .7%。 (3) K5 6 2 / VCR经 TNFα10 0 0 U/ ml处理 72小时 P- gp表达率从 93.6 %降至 82 .4 % ,bcl- 2表达率从32 .9%降至 7.0 %。 (4 ) K5 6 2 / VCR和 K5 6 2细胞分别经 TNFα10 0 U/ ml和 10 0 0 U/ ml处理后 ,VCR、Ara- C和VP- 16的药物敏感性增加 (P<0 .0 5 )。结论　 (1) TNFα可诱导 K5 6 2 / VCR和 K5 6 2细胞凋亡 ,以前者更加敏感 ,且存在时间和剂量依赖性。 (2 )高浓度 TNFα可下调 bcl- 2表达 ,但不显著改变 P- gp表达。 (3) TNFα能增加 K5 6 2 /VCR和 K5 6 2细胞对 VCR、Ara- C和 VP- 16的药物敏感性 ,以 K5 6 2 / VCR细胞更明显。 (4 ) TNFα逆转 K5 6 2 / VCR多药耐药是通过诱导细胞凋亡 ,降低 bcl- 2表达 ,而非下调 P- gp表达途径实现     

氯丙嗪对耐药细胞系K_(562)/AO_2多药耐药逆转作用的研究

目的 :研究氯丙嗪对耐药细胞系K562 /AO2 多药耐药逆转作用。方法 :应用免疫组化观察K562 /AO2 细胞系的耐药蛋白表达情况 ,用MTT法测定不同浓度的氯丙嗪对K562 /AO2 细胞系耐药逆转作用 ,用流式细胞术测定不同浓度的氯丙嗪与K562 /AO2 细胞作用后细胞内罗丹明的蓄积情况 ,用半定量RT PCR法测定氯丙嗪对K562 /AO2 细胞多药耐药基因 (mdr 1)mRNA表达的影响。结果 :K562 /AO2 细胞不但P gp表达阳性 ,而且肺耐药相关蛋白 (lungresistanceelatedprotein ,LRP)表达也阳性 ;氯丙嗪能增强多柔比星对K562 /AO2 细胞的杀伤作用 (单用ADM组、氯丙嗪 0 75 μg/mL ADM组、氯丙嗪 1 5μg/mL ADM组和氯丙嗪 3 μg/mL ADM组对K562 /AO2 的抑制率分别为 5 2 %、 2 5 9%、3 9 1%和 74 8% ) ;增加K562 /AO2 细胞内罗丹明的蓄积 (对照组、氯丙嗪 0 75 μg/mL组、氯丙嗪1 5 μg/mL组和氯丙嗪 3μg/mL组细胞内的荧光强度的均值分别为 1 87、 10 2 8、 48 75和65 63 ) ;对K562 /AO2 细胞mdr 1mRNA表达无明显影响 (对照组mdr 1和 β actin的面积比为0 41,氯丙嗪组为 0 42 )。结论 :氯丙嗪对K562 /AO2 细胞的耐药有较强的逆转作用 ,并呈剂量依赖关系     

白血病细胞多药耐药与细胞凋亡的关系

目的 :探讨白血病细胞多药耐药 (MDR)与细胞凋亡的关系。方法 :在体外用化疗药物阿霉素 (ADM)诱导白血病细胞株 K5 6 2 MDR的产生 ,用 As2 O3诱导细胞的凋亡 ,采用流式细胞仪检测细胞表面 P糖蛋白 (P- gp)的表达 ;荧光定量 PCR检测 MDR1 m RNA;通过流式细胞仪检测Anexin- V判断凋亡细胞数量的多少 ;观察 MDR与细胞凋亡的关系。结果 :5 μm ol/ L 的 ADM能诱导 K5 6 2细胞 MDR的产生 ,随着作用时间的延长 ,P- gp/ MDR1 m RNA的表达逐渐升高 ;P- gp/MDR1 m RNA的表达与细胞凋亡呈负相关 (r=0 .6 8,P<0 .0 1 ) ;在 As2 O3作用下 ,细胞凋亡增加的同时 ,P- gp的表达下调。结论 :抗癌药物能诱导白血病细胞 MDR的产生 ,细胞的耐药性与凋亡抑制相关 ,诱导细胞的凋亡能减低白血病细胞的 MDR。     

康莱特注射液对多药耐药人白血病细胞株作用的实验研究

目的　观察康莱特注射液 (KL T)对耐药人白血病细胞 K5 6 2 /adr和 K5 6 2 /vcr的作用。方法　 (1) MTT法检测耐药细胞对 KL T及多种化疗药物的敏感性 ,观察 KL T对紫杉醇 (泰素 )、泰索帝、乐沙定的化学增敏作用。(2 )运用流式细胞仪检测 KL T作用过程中细胞的凋亡及 P- gp蛋白表达情况。结果　 (1)人白血病耐药细胞对 KL T有轻度抗性。 (2 ) KL T能明显增强多药耐药细胞对化疗药物的敏感性 ,其逆转作用呈剂量依赖关系。 (3) KL T能诱导人白血病细胞凋亡。(4 ) KL T不能降低耐药细胞 P- gp蛋白表达。结论　 KL T能明显逆转多药耐药人白血病细胞株的耐药性 ,并能诱导其凋亡 ,KL T的化学增敏作用机制可能与 P- gp蛋白表达无关。     

耐药人肺癌细胞模型D6/MVP的建立及其生物学特性

目的　培养建立耐药肺癌细胞模型D6 /MVP并研究其生物学特性。方法　应用人肺癌细胞株D6 (简称D6细胞 ) ,采用MVP(MMC +VDS +DDP)大剂量间歇诱导法 ,建立耐药人肺癌细胞模型D6 /MVP(简称D6 /MVP细胞 ) ,观察该细胞的生长规律 ;用MTT法鉴定其对多种抗癌药物的多药耐药性 ;以流式细胞技术检测其细胞周期分布、细胞表面多药耐药基因 (MDR)的表达产物P 糖蛋白 (P gp)、多药耐药相关蛋白 (MRP)及谷胱甘肽硫转移系统 (GSH/GST)的表达等。结果　经MTT法鉴定 ,D6 /MVP细胞较D6细胞的MVP半数致死浓度 (IC50 )增大 13.3倍。经流式细胞仪检测 ,D6 /MVP细胞倍增时间明显延长 ,S期细胞减少 ,G2 期细胞增多 ;P gp和MRP的表达显著升高 (P <0 .0 1) ,而GSH/GST的表达无明显变化 (P <0 .0 5 )。结论　D6 /MVP细胞是一个明确的多药耐药细胞模型 ,具有耐药细胞的基本生物学特性。     

载体介导的RNA干扰技术抑制肝癌耐药细胞MDR1表达的研究

目的 :构建含多药耐药基因MDR1的短发夹状RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)表达质粒 ,观察对肝癌耐药细胞Bel 740 2 /R的MDR1mRNA的抑制作用。方法 :利用分子克隆技术 ,将含MDR1的双链DNA ,与经双酶切后的载体PGE 1连接 ,构建pshRNA MDR1重组质粒 ,在脂质体的介导下转染肝癌耐药细胞株Bel 740 2 /R ;RT PCR分析MDR1mRNA的表达 ,MTT法检测细胞对药物的敏感性 ,流式细胞仪检测细胞内罗丹明 12 3 (Rh12 3 )的潴留和P gp的表达。结果 :PCR和DNA测序证实了表达质粒构建成功 ,并能明显地抑制MDR1mRNA的表达 ;对盐酸表柔比星和顺铂的半数抑制浓度IC50明显降低 ,P <0 0 5 ;P gp的表达阳性率降低了 5 7 3 % ;细胞内Rh12 3的浓度显著增高 ,P <0 0 5。结论 :构建的pshRNA MDR1表达质粒能有效地降低肝癌耐药细胞MDR1mRNA和P gp的表达。     

卵巢癌细胞拓扑替康耐药机制的探讨

目的　探讨人卵巢癌细胞对拓扑替康 (TPT)的耐药机制。方法　流式细胞仪检测卵巢癌TPT耐药细胞与亲本细胞的胞内罗丹明 (Rh12 3)荧光强度 ,RT PCR法检测各膜转运蛋白 (P gp、MRP、BCRP)的基因表达。将包含BCRPmRNA翻译起始位点的反义寡核苷酸 (ASODN)片段转染进耐药细胞 ,分别检测耐药细胞经体外转染后 ,BCRP的基因表达及胞内Rh12 3荧光强度的改变。结果　耐药株的胞内Rh12 3荧光强度是亲本细胞的 31.19% (P <0 .0 1)。耐药株中无P 糖蛋白 (P gp)的基因表达 ;多药耐药相关蛋白 (MRP)基因有极微弱表达 ,相对表达值为 0 .0 5 7;而BCRP基因在耐药株中高表达 ,相对表达值为 0 .6 6 ,亲本细胞不表达BCRP基因。将ASODN转染进耐药细胞后 ,BCRP的基因表达显著下降了 5 9.4 2 % (P <0 .0 5 ) ,胞内Rh12 3荧光强度由 5 .4 2增加到 16 .6 3(P <0 .0 5 )。结论　BCRP的高表达致胞内化疗药物浓度减少 ,是卵巢癌细胞对TPT耐药的主要原因。     

板蓝根组酸活性单体-5b逆转肝癌细胞耐药的实验研究

目的 :研究板蓝根组酸活性单体 5b对肝癌耐药细胞BEL 74 0 4 /ADM逆转作用及机制。方法 :利用BEL 74 0 4细胞的多药耐药模型BEL 74 0 4 /ADM ,应用MTT法、免疫组化法和高效液相色谱法(HPLC)观察板蓝根组酸活性单体 5b对BEL 74 0 4 /ADM多药耐药逆转。结果 :板蓝根组酸活性单体 5b能降低肝癌耐药细胞BEL 74 0 4 /ADM对ADM的耐药性 ,细胞MDR ,p gp的表达改变不明显 ,其细胞内ADM的含量明显增高。结论 :板蓝根组酸活性单体 5b能逆转肝癌耐药细胞BEL 74 0 4 /ADM对ADM的耐药性 ,其逆转作用可能与降低P gP药物外排功能、增加细胞内药物浓度有关。     

K562/VCR单克隆多药耐药亚细胞系的建立

目的　建立耐药性较为均一的 K5 6 2 / VCR多药耐药 (MDR)亚细胞系 ,为更好研究多药耐药性的产生以及逆转机制提供良好的实验材料。方法　采用三种不同的培养方法和有限稀释法对 K5 6 2 / VCR MDR细胞系进行亚克隆培养 ,并用流式细胞仪 (FCM)测定 p170的表达情况。结果　加用培养上清或滋养细胞存在的条件下 ,亚克隆效率明显高于无条件培养液 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1)。建立的单克隆 MDR亚细胞系 6株 ,FCM分析证实 p170呈不同程度的表达 ,其中表达最高者为 31.4 % (K5 6 2 / VCR A5 - A1)。结论　 (1)耐药细胞系的亚克隆培养需要条件培养液或滋养细胞的支持 ,后者较前者更为有效。 (2 )成功建立了 6株 K5 6 2 / VCR单克隆多药耐药亚细胞系     

肺癌多药耐药因子共表达相关性及临床意义的研究

目的　探讨多药耐药因子在肺癌中表达与共表达的水平、相关性及临床意义。方法　采用免疫组化SABC技术检测 60例肺癌患者病理组织中P 糖蛋白 (P glycoprotein ,P gp)、多药耐药相关蛋白 (mul tidrug resistance associatedprotein ,MRP)、肺耐药蛋白 (lungresistanceprotein ,LRP)、谷胱甘肽 S转移酶π(GlutathioneS transferase ,GST π)等多药耐药因子的表达水平。结果　①P gp、MRP、LRP、GST π阳性表达率分别为 5 3 .3 %( 3 2 /60 ) ,63 .3 %( 3 8/60 ) ,70 .0 %( 4 2 /60 ) ,80 .0 %( 4 8/60 )。②耐药因子在不同病理类型中表达有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,在NSCLC中表达高于SCLC ;在不同TNM分期、不同分化程度间表达无显著性差异 (P >0 .0 5 )。③各耐药因子之间阳性共表达的结果分别为P gp +MRP :41.6%,P gp +LRP :3 5 .0 %,MRP +LRP :5 3 .3 %,MRP +GST π :5 0 .0 %,LRP +GST π :5 8.3 %,P gp +GST π :45 .0 %,P gp +MRP +LRP+GST π :2 0 .0 %。其中P gp与MRP间具有相关性 (rs=0 .75 6,P <0 .0 1) ,P gp与LRP间具有相关性 (rs=0 .689,P <0 .0 1) ,MRP与LRP间具有相关性 (rs=0 .669,P <0 .0 1) ,MRP与GST π间具有相关性 (rs=0 .5 46,P <0 .0 1) ,LRP与GST π间具有相关性 (rs=0 .848,P <0     

诺美孕酮逆转乳腺癌耐药细胞株多药耐药性的研究

目的 研究诺美孕酮（NOM）对乳腺癌耐药细胞株（MCF7／ADR）多药耐药性（MDR）的影响,探讨其调节机制。方法 应用MTT法,研究NOM对MCF7／ADR药物敏感性的影响。采用半定量逆转录聚合酶联反应（RT－PCR）和免疫细胞化学染色,分析耐药基因MDR1、谷胱甘肽S转移酶Pi(GSTπ）、拓扑异构酶Ⅱα（Topo Ⅱα)和多药耐药相关蛋白（MRP）表达的变化。通过流式细胞技术观察NOM对MCF7／ADR细胞内药物积累和细胞周期的影响。结果 NOM对MCF7／ADR的MDR具有明显的逆转作用,在20,10和5μmol/L浓度时的逆转倍数分别为21,12和8倍,逆转强度明显高于前身化合物甲地孕酮,而与维拉帕米相当。5μmol/L NOM处理MCF7／ADR后,MDRI的mRNA表达水平明显降低,呈现时间依赖性变化;P糖蛋白（P－gp)和GSTπ蛋白的变化符合相应mRNA表达的变化;MRP和Topo Ⅱα基因表达未见明显变化。用NOM 20,10和5μmol/L分别处理2h后,ADR在细胞内的积累分别增加到2．7倍、2．3倍和1．5倍。同时,NOM可明显加强ADR对MCF7／ADR细胞在G2M期的阻滞作用。结论 NOM具有较强的逆转MCF7／ADR细胞MDR的作用,其逆转机制为多种途径,包括时间依赖性下调MDRI和GSTπ基因的表达,增加细胞内药物积累,加强ADR对MCF7／ADR在G2M期的阻滞作用等。     

屈洛昔芬与他莫昔芬对K562/A02耐药性影响的比较

目的:比较屈洛昔芬 (droloxifene,DRO)和他莫昔芬 (tamoxifen,TAM)对K562/A02耐 药性的逆转作用。方法:应用 MTT法、RT PCR和免疫细胞化学 染色观察细胞毒活性和MDR1、 GSTpi耐药基因表达变化,采用流 式细胞仪测定细胞内多柔比星 (ADR)浓度。结果:在20、10和5 mmol/L浓度时,DRO和TAM均 显著逆转K562/A02的耐药性, DRO和TAM的逆转倍数相比较 差异无统计学意义。MDR1和 GSTpi的mRNA和蛋白表达在 DRO和TAM处理后第2天开始 降低,第5天出现明显降低。20 mmol/L浓度的DRO和TAM分别 孵育K562/A02,可使其细胞内 ADR积累分别增加2.9和3.0 倍。结论:DRO与TAM类似,有 较强的逆转活性,可明显抑制 MDR1和GSTpi基因的表达及增 加细胞内ADR的积累。     

The synergistic reversal effect of multidrug resistance by quercetin and hyperthermia in doxorubicin-resistant human myelogenous leukemia cells

Purpose: This study aimed to evaluate the multidrug resistance (MDR) reversal activity of quercetin (Que) in combination with hyperthermia (HT) in human myelogenous leukemia cells K562/A.

Methods: The cytotoxicity of Que alone and the effect of Que and HT to doxorubicin (Dox) cytotoxicity were determined using MTT assay in K562 and K562/A cells. K562/A cells was heated with or without Que pretreatment, and the protein and mRNA levels of heat shock protein 70 (HSP70) and P-glycoprotein (P-gp) were determined by flow cytometry (FCM) and RT-PCR, respectively. Intracellular accumulation of Dox, cell cycle and apoptosis were monitored with FCM.

Results: Que alone inhibited cell growth in a dose-dependent manner in K562 and K562/A cells. Either Que or HT alone had a weak reversal effect on Dox resistance, however, combination HT and Que showed a much more significant reversal effect on Dox resistance (reverse fold 9.49). The elevated protein expression and mRNA level of HSP70 and P-gp in response to HT were inhibited by Que. Pretreatment with Que caused the cells to accumulate Dox 8.3-fold higher than in control cells. In addition, Que induced apoptosis and G2/M arrest in a dose-dependent manner, and the combination of Que and HT was found to have a synergistic efeect on apoptosis.

Conclusions: Que pretreatment could significantly inhance the MDR reversal activity of HT in resistant cell line, by sensitizing the cell to reversing MDR activity of HT.     

The synergistic reversal effect of multidrug resistance by quercetin and hyperthermia in doxorubicin-resistant human myelogenous leukemia cells

PURPOSE: This study aimed to evaluate the multidrug resistance (MDR) reversal activity of quercetin (Que) in combination with hyperthermia (HT) in human myelogenous leukemia cells K562/A. METHODS: The cytotoxicity of Que alone and the effect of Que and HT to doxorubicin (Dox) cytotoxicity were determined using MTT assay in K562 and K562/A cells. K562/A cells was heated with or without Que pretreatment, and the protein and mRNA levels of heat shock protein 70 (HSP70) and P-glycoprotein (P-gp) were determined by flow cytometry (FCM) and RT-PCR, respectively. Intracellular accumulation of Dox, cell cycle and apoptosis were monitored with FCM. RESULTS: Que alone inhibited cell growth in a dose-dependent manner in K562 and K562/A cells. Either Que or HT alone had a weak reversal effect on Dox resistance, however, combination HT and Que showed a much more significant reversal effect on Dox resistance (reverse fold 9.49). The elevated protein expression and mRNA level of HSP70 and P-gp in response to HT were inhibited by Que. Pretreatment with Que caused the cells to accumulate Dox 8.3-fold higher than in control cells. In addition, Que induced apoptosis and G2/M arrest in a dose-dependent manner, and the combination of Que and HT was found to have a synergistic effect on apoptosis. CONCLUSIONS: Que pretreatment could significantly enhance the MDR reversal activity of HT in resistant cell line, by sensitizing the cell to reversing MDR activity of HT.     

5-溴汉防己甲素与汉防己甲素对K562/A02细胞多药耐药性逆转作用的比较

背景与目的:5-溴汉防己甲素(5-bromotetrandrine,BrTet)是汉防己甲素(tetrandrine,Tet)的溴化产物,具有逆转P-糖蛋白(P-glyeoprotein,P-gp)介导的肿瘤多药耐药(muhidrug resistance,MDR)的作用。本研究旨在比较BrTet与Tet对人白血病细胞K562/A02多药耐药的逆转作用。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)法检测不同浓度BrTet对K562细胞和K562/A02细胞的增殖抑制效应;检测阿霉素(adfiamycin,ADM)对K562细胞和K562/A02细胞增殖的抑制作用,以及加用BrTet、Tet时上述抑制作用的变化,并计算半数抑制浓度(IC50)及逆转倍数。Westernblot法检测各组细胞P-gp的表达,流式细胞仪检测各组细胞内ADM的蓄积。结果:K562/A02细胞对ADM的耐药倍数为49.51倍。2.0μmol/L及更低浓度的BrTet和1.5μmol/L及更低浓度的Tet对K562细胞和K562/A02细胞抑制率均小于10%,无明显细胞毒性作用。加入1.0μmol/L的Tet后,K562/A02细胞对ADM的耐药倍数为12.17倍。加入0.25、0.5和1.0μmol/L的BrTet后,K562/A02细胞对ADM的耐药倍数分别为17.88、9.97和4.24倍。1.0"mol/L的BrTet和Tet分别使K562/A02细胞内ADM浓度提高了69.0%和51.6%,使P-gp表达分别下调了51.1%和43.73%,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:BrTet及Tet均可逆转K562/A02细胞耐药,且前者较后者逆转作用更强,逆转机制与抑制P-gp的表达、增加细胞内抗肿瘤药物浓度有关。     

Reversal of P-glycoprotein mediated multidrug resistance by a newly synthesized 1,4-benzothiazipine derivative,JTV-519

A newly synthesized 1,4-benzothiazipine derivate, 4-[3-(4-benzylpiperidin-1-yl) propionyl]-7-methoxy-2,3,4,5-tetrahydro-1, 4-benzothiazepine monohydrochloride (JTV-519) was examined for its ability to reverse P-glycoprotein (P-gp) and multidrug resistance protein 1 (MRP1) mediated multidrug resistance (MDR) in K562/MDR and KB/MRP cells, respectively. JTV-519 at 3 microM reversed the resistance of K562/MDR cells to vincristine (VCR), taxol, etoposide (VP16), adriamycin (ADM) and actinomycin D and at 0.5 or 1 microM reversed their resistance to STI571. JTV-519 at 10 microM enhanced the accumulation of ADM in K562/MDR cells to the level in parental K562 cells and inhibited the efflux of ADM from K562/MDR cells. Photoaffinity labeling of P-gp with 3H-azidopine was almost completely inhibited by 500 microM JTV-519. JTV-519 at 3 microM also partially reversed the resistance of KB/MRP cells to VCR and at 500 microM partially inhibited the photoaffinity labeling of MRP1 with (125)I-II-azidophenyl agosterol A (125I-azidoAG-A). These results suggest that JTV-519 reversed the resistance to the anti-cancer agents in P-gp and MRP1 overexpressing multidrug-resistant cells by directly binding to P-gp and MRP1, and competitively inhibiting transport of the anti-cancer agents.     

肝癌多药耐药细胞株的建立及其多药耐药机理的研究

 为建立人肝癌多药耐药细胞株并研究其多药耐药的机理，本文应用BEL－7402细胞株，通过不断提高培养液中阿霉素（Doxorubicin）的浓度，长期筛选培养，得到肝癌多药耐药株BEL7402/DoX。经MTT法检测BEL－7402对长春新碱（VCR）等8种抗癌药的抗性提高了27－1100倍不等。以流式细胞技术检测了此细胞株表面MDR1蛋白P－gp、多药耐药相关蛋白MRP及谷胱甘肽硫转移系统（GSH/GST）的表达；用RT－PCR方法检测了MDR及MRP基因表达水平。发现BEL7402/Dox细胞表面P－gp表达为93.5～97.4％；MRP的表达为84.7～90.2％；RT－PCR证实此细胞株中有MDR及MRPmRNA的高表达；未发现GSH/GST的表达升高。     

As2S2诱导K562细胞凋亡的分子机制初步研究

目的　探索As2 S2 对K5 6 2细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法　细胞凋亡的检测用流式细胞分析、基因组DNA电泳、细胞形态学观察等方法 ,Westernblot方法用于蛋白表达的检测 ,基因表达的变化用半定量RT PCR方法。结果　 3～ 5 μmol L的As2 S2 作用 4 8～ 72h即可诱导K5 6 2细胞凋亡。 3μmol LAs2 S2 作用 72h时 ,细胞凋亡率达 (34.4± 3.3) % ;5 μmol LAs2 S2 作用 4 8,72h时 ,细胞凋亡率分别为 (2 1.8± 3.6 ) %和 (4 6 .0± 5 .2 ) %。 5 μmol LAs2 S2 作用下 ,As2 S2 可降低Bcr Abl和JAK2的蛋白含量。As2 S2 从基因水平上调bax表达 ,下调c myc表达。As2 S2 作用后 ,Caspase 3被激活。As2 S2 也能诱导慢性粒细胞性白血病 (CML)患者单个核细胞凋亡。结论　As2 S2 可诱导CML细胞凋亡 ,Bcr Abl含量的降低可能起了很重要的作用。bax表达的增加、c myc表达的减少、JAK2蛋白含量的降低以及Caspase 3激活也可能参与了该细胞凋亡机制。     

马钱子碱对白血病K562/A02细胞多药耐药性的逆转作用

目的：研究马钱子碱（vauqueline）对人白血病K562/A02细胞多药耐药性的逆转作用。方法：采用噻唑蓝（MTT）法检测马钱子碱的细胞毒作用;采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹（Western blot）分别检测非细胞毒浓度（IC10）的马钱子碱对K562/A02细胞MDR1 （multidrug resistance gene 1）、多药耐药相关蛋白（multidrug resistance-associated protein,MRP）、拓扑异构酶Ⅱ（topoisomeraseⅡ,TopoⅡ）、谷胱苷肽-S-转移酶（glutathione s-transferase,GST-π）mRNA及其蛋白表达的影响。结果：非细胞毒浓度（IC10）的马钱子碱作用后,K562/A02细胞中MDR1mRNA及P-gp表达降低（P<0.01）。而MRP、TopoⅡ、GST-π mRNA及其蛋白的表达无明显变化（P>0.05）,同时马钱子碱能增加化疗药物在白血病细胞内的积累。结论：马钱子碱能部分逆转K562/A02细胞的耐药性,其作用机制可能与下调K562/A02细胞MDR1 mRNA的表达,导致细胞膜上P-gp的表达量减少,化疗药物从细胞内溢出减少有关。     

Targeting P-glycoprotein expression and cancer cell energy metabolism: combination of metformin and 2-deoxyglucose reverses the multidrug resistance of K562/Dox cells to doxorubicin

P-glycoprotein (P-gp) is one of the major obstacles to efficiency of cancer chemotherapy. Here, we investigated whether combination of metformin and 2-deoxyglucose reverses the multidrug resistance (MDR) of K562/Dox cells and tried to elucidate the possible mechanisms. The combination of metformin and 2-deoxyglucose selectively enhanced the cytotoxicity of doxorubicin against K562/Dox cells. Metformin was not a substrate of P-gp but suppressed the elevated level of P-gp in K562/Dox cells. The downregulation of P-gp may be partly attributed to the inhibition of extracellular signal-regulated kinase pathway. The addition of 2-deoxyglucose to metformin initiated a strong metabolic stress in both K562 and K562/Dox cells. Combination of metformin and 2-deoxyglucose inhibited glucose uptake and lactate production in K562 and K562/Dox cells leading to a severe depletion in ATP and a enhanced autophagy. Above all, P-gp substrate selectively aggravated this ATP depletion effect and increased cell apoptosis in K562/Dox cells. In conclusion, metformin decreases P-gp expression in K562/Dox cells via blocking phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase. P-gp substrate increases K562/Dox cell apoptosis via aggravating ATP depletion induced by combination of metformin and 2-deoxyglucose. Our observations highlight the importance of combination of metformin and 2-deoxyglucose in reversing multidrug resistance.