脑温不同对大鼠缺血脑组织c-fos和bcl-2表达的影响

目的 :研究脑缺血后不同脑温对相关基因表达的影响 ,探讨亚低温脑保护作用的机制。方法 :Sprague -Dawley(SD)大鼠 ,随机分为常温 (37- 38℃ )脑缺血、亚低温 (31- 32℃ )脑缺血、高温 (41- 4 2℃ )脑缺血和假手术组 ,每组 12只动物。脑缺血动物模型采用改良的Pulsinelli四动脉阻断法。脑组织中Fos和bcl- 2蛋白的检测采用链菌素亲生物素 -过氧化酶连接法 (SP)免疫组织化学技术。结果 :常温脑缺血再灌注可诱导Fos蛋白的表达 ,亚低温可使Fos蛋白的表达提早而增多 ,高温却使脑缺血时Fos蛋白的表达减少。常温脑缺血再灌注可诱导大脑皮质bcl- 2蛋白表达 ;亚低温增加bcl- 2蛋白表达 ;高温减少bcl- 2蛋白表达。结论 :脑缺血后即时开始亚低温可增加Fos和bcl- 2蛋白的表达 ,是亚低温脑保护作用的机制 ;脑缺血后高温则加剧脑缺血损伤     

L-NAME对大鼠局灶性脑缺血灌注损伤Fos蛋白表达的影响

目的观察一氧化氮含量的变化对缺血再灌注损伤后Fos蛋白表达的影响。方法采用线拴法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,利用NADPH组化和Fos蛋白免疫组化双标技术研究NOS抑制剂L－NAME对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑皮层Fos蛋白表达的影响。结果缺血60min再灌注3h后损伤侧脑组织皮质一氧化氮合酶阳性神经元较正常增多并深染,Fos蛋白表达增加,L－NAME（3mg／kg）治疗组脑皮质神经元Fos蛋白的表达量较对照组减少,L－NAME（10mg/kg）治疗组脑皮质神经元Fos蛋白的表达量较对照组明显减少,同时也可见给予L－NAME后脑组织皮质内NOS阳性神经元无论在数量上还是在细胞着色、胞体突起均明显减少。结论c－fos基因表达也可能部分参与了NO的致神经细胞损伤过程。     

全身亚低温对全脑缺血再灌注大鼠脑保护作用与Bcl-2、Bax表达变化的关系

目的　研究 Bcl- 2、Bax及海马锥体细胞形态在全脑缺血再灌注后的表达及全身亚低温对其表达变化的影响 ,探讨亚低温脑保护作用的机制。方法　采用四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型 ,分别进行 Bcl-2、Bax免疫组织化学及 H- E染色。结果　与常温组相比 ,全身亚低温组死亡细胞数明显减少 (P<0 .0 1) ;Bcl- 2蛋白免疫反应强度峰值增高 ,持续时间延长 ;Bax蛋白免疫反应强度峰值减低 ,持续时间缩短。结论　 33℃全身亚低温并持续 4 h,对缺血性锥体细胞损害有较好的保护作用。增强 Bcl- 2蛋白的表达 ,延长其表达持续时间 ,而减弱 Bax表达 ,同时缩短其表达持续时间 ,可能是亚低温保护缺血性脑组织损害的分子机制之一。     

纳洛酮对大鼠脑缺血bcl-2和c-fos蛋白表达的影响

目的探讨纳洛酮对脑缺血再灌注的神经保护机制.方法采用线栓法制造的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,通过免疫组化法检测脑缺血不同再灌注时间以及经纳洛酮(5 mg/kg)预处理后bcl-2和c-fos蛋白的表达.结果脑缺血30 min再灌注6h,bcl-2和c-fos蛋白表达显著增加;再灌注24h,bcl-2蛋白持续增高,而c-fos蛋白基本降至正常.表明纳洛酮可显著上调脑缺血后bcl-2蛋白的表达,抑制c-fos蛋白的表达.结论纳洛酮的神经保护机制可能与其上调bcl-2蛋白,抑制c-fos蛋白表达有关.     

亚低温对局灶性脑缺血-再灌注大鼠脑皮质脑源性神经营养因子表达及神经元凋亡的影响

目的 观察局灶性脑缺血-再灌注后亚低温干预对大鼠脑源性神经营养因子表达及神经元凋亡的影响，并探讨脑源性神经营养因子在亚低温脑保护机制中的作用。方法 采用线栓法制备成年雄性SD大鼠左侧大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血-再灌注改良模型，缺血时间2h。随机分为常温缺血组和亚低温缺血组。常温时大鼠脑温控制于36．5℃～37．5℃，肛温为35．9℃～36．9℃；亚低温时脑温维持于32．5℃～33．5℃，肛温为32．2℃～33．1℃。两组大鼠分别于脑缺血一再灌注及亚低温干预后2、6、24和72h进行神经功能缺损评分，并同时行三苯基氯化四唑（1TC）染色、HE染色、TUNEL染色、免疫组化染色及免疫组化与TUNEL双重染色，从而评估大鼠神经功能缺损状况；检测脑梗死体积及脑源性神经营养因子表达水平；观察组织病理学变化和神经元凋亡数量。结果 与常温缺血组相比，亚低温缺血组大鼠神经功能缺损评分低（P〈0．01），脑梗死体积小（P〈0．01），缺血灶周围脑皮质中的脑源性神经营养因子表达水平增高（P〈0．01），而且神经元凋亡数量少（P〈0．01）。在脑源性神经营养因子免疫组化染色呈阳性反应的神经元细胞核中，未发现TUNEL染色阳性者。结论 亚低温干预治疗可促进缺血灶周围的脑皮质对脑源性神经营养因子的表达，从而抑制神经元凋亡，减少大鼠脑梗死体积，改善神经功能缺损体征。     

大鼠脑缺血再灌注后ICAM-1的表达与白细胞浸润关系的研究

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织中细胞间粘附分子－1（ICAM－1）的表达与白细胞浸润的关系，并探讨亚低温的治疗作用。方法 采用大鼠大脑中动脉阻断（MCAO）模型，经免疫组化及HE染色，测定ICAM－1表达阳性微血管数及白细胞计数。结果 （1）脑缺血再灌注后，脑缺血坏死周边区的微血管内皮细胞表达ICAM－1及白细胞浸润增多，并于24h达到高峰，二者之间呈正相关（P＜0．01）；（2）缺血早期进行亚低温治疗能明显减轻缺血再灌注后ICAM－1的表达及减少白细胞浸润（P＜0．01）。结论 脑缺血再灌注后ICAM－1可介导白细胞和内皮细胞的粘附；亚低温干预治疗可减轻缺血再灌注后脑组织的损害。     

亚低温通过抑制两种凋亡通路对大鼠脑缺血再灌注损伤发挥保护作用

目的探讨亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后胱冬酶(caspase)依赖性及非依赖性两种凋亡通路的影响。方法线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(M CAO)及再通模型,分为假手术组、常温及亚低温脑缺血再灌注组,应用RT-PCR技术检测再灌注后不同时相缺血侧皮层凋亡诱导因子(A IF)及caspase-3 mRNA的表达。结果脑缺血2h再灌注2~4h,A IF及caspase-3 mRNA表达开始增加,随着再灌注时间的延长表达逐渐增强,至再灌注24h达高峰。每一再灌注时间点亚低温组与常温组A IF及caspase-3 mRNA表达均有显著差异,亚低温组mRNA表达均低于相应常温组。结论亚低温不仅降低caspase依赖性通路中的关键蛋白酶—caspase-3的mRNA的表达,而且降低caspase非依赖性通路中的关键蛋白—A IF的mRNA的表达,亚低温通过抑制两种凋亡通路对大鼠脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后半暗带区iNOS诱导细胞凋亡的影响

目的通过研究亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达和细胞凋亡的影响，探讨亚低温脑保护的可能机制。方法雄性SD大鼠54只随机分为假手术组、常温缺血组和亚低温组。线栓法制备大脑中动脉闭塞再灌注模型。于缺血后48h取脑组织，邻片行HE染色，检测各组不同脑区iNOS蛋白表达和细胞凋亡情况，免疫双重染色研究iNOS蛋白表达与细胞凋亡间的关系，同时行NO含量测定。结果常温缺血组皮质缺血半暗带（IP）区iNOS免疫反应较强，TUNEL阳性细胞也主要位于皮质IP区，免疫双重染色发现TUNEL阳性细胞中存在着iNOS蛋白表达。亚低温组IP区iNOS蛋白表达明显下调，NO产生减少．IP区细胞凋亡的数目也减少。结论亚低温可能通过抑制IP区iNOS蛋白表达，减少NO产生．阻遏细胞凋亡，从而起到脑保护作用。     

不同时期亚低温对短暂性脑缺血后海马神经元调亡及Bcl—2／Bax的影响

目的 观察不同时期亚低温（33℃）对短暂性全脑缺血的神经保护作用及对Bcl-2/Bax表达的影响。方法 40只SD大鼠随机分成常温组、即刻亚低温组、延迟亚低温组和对照组,采用大鼠短暂性脑缺血模型,尼氏体染色观察存活神经元,TUNEL法检测凋亡神经元,免疫组化检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 即刻亚低温可上调海马CA1、CA3区Bcl-2/Bax比值,减少细胞凋亡,延迟亚低温仅对CA3区有此作用。结论 亚低温对缺血后神经元有保护作用,该作用与低温开始时间有关。     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后MMP-9表达和细胞凋亡的影响

目的 通过研究亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达和细胞凋亡的影响,探讨亚低温脑保护的可能机制.方法 将雄性SD大鼠39只分为假手术组、常温缺血组和缺血期亚低温组.制作大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血2h再灌注48h,HE染色观察各组大鼠脑组织形态学改变;采用TTC染色法观察梗死体积;TUNEL法检测细胞凋亡;免疫组化法检测MMP-9表达.结果 亚低温减轻脑缺血组织病理学损伤,明显缩小脑梗死体积(P<0.05).常温下缺血侧脑组织可见大量TUNEL阳性细胞和MMP-9免疫阳性细胞,主要位于皮质缺血半暗带区.亚低温减少脑缺血后TUNEL阳性细胞数目(P<0.05),明显下调MMP-9蛋白表达(P<0.05).结论 亚低温可能通过下调脑缺血再灌注后MMP-9表达,抑制细胞凋亡,从而发挥确实的脑保护作用.     

病变侧亚低温对大鼠局脑缺血再灌注后Akt、Survivin表达的影响

目的 通过检测Akt及Survivin蛋白的表达,探讨亚低温对局脑缺血再灌注后神经元存活的影响.方法 用线拴法制作大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）局脑缺血再灌注模型,将44只SD大鼠随机分成假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组,缺血组分别缺血2,6 h再灌注4,24,72 h,1周,2周后处死,亚低温组于缺血后13～14 min实施病灶侧亚低温持续4 h.免疫组织化学法检测Akt、Survivin 蛋白的表达.结果 相同缺血再灌注时间点,亚低温组比常温组缺血侧Akt、Survivin、表达水平显著增高（P＜0.05）.结论 病灶侧亚低温通过促进缺血半暗带脑组织Akt、Survivin表达的核内移,从而抑制神经元凋亡,促进脑缺血后神经功能恢复.     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶表达的影响

目的研究亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP-1)不同时空表达的影响,进一步探讨亚低温脑保护作用的分子机制。方法线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,分假手术组、假手术 亚低温组、模型组及模型 亚低温组。应用Western blotting和免疫组化技术分别检测再灌注后不同时相缺血侧皮层PARP-1蛋白的表达与裂解。结果模型组PARP-1蛋白表达量随再灌注时间的延长逐渐增加,至再灌注24h达高峰,然后逐渐减少,再灌注72h时仍高于假手术组的水平;模型组PARP-1蛋白出现裂解,随再灌注时间的延长,裂解逐渐增强。每一相同再灌注时间点,模型 亚低温组PARP-1蛋白表达量和裂解片段含量均低于模型组。结论PARP-1的过度表达和裂解是局灶性脑缺血再灌注神经元死亡的重要分子机制。亚低温可通过抑制PARP-1的过度表达及减少PARP-1的裂解而发挥脑保护作用。     

亚低温对局灶性脑缺血再灌注后不同时间点Akt、NF-κB变化规律的影响

目的 通过检测Akt及NF-κB蛋白的表达，探讨亚低温对局脑缺血再灌注后神经元存活的影响。方法 用线拴法制作大鼠大脑中动脉闭塞（MCA0）局脑缺血再灌注模型，将44只SD大鼠随机分成假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组，缺血组分别缺血2h、6h，再灌注4h、24h、72h、1周、2周后处死，亚低温组于缺血后13～14min实施病灶倒亚低温持续4h。免疫组织化学法检测Akt、NF—κB蛋白的表达。结果 相同缺血再灌注时闾点，亚低温组比常温组缺血侧Akt表达水平显著增高（P〈0．05），NF—κBP65核内移明显降低（P〈0．01）。结论 病灶侧亚低温通过促进缺血半暗带脑组织Akt表达，抑制NF—κB的核内移，从而抑制神经元凋亡，促进脑缺血后神经功能恢复。     

病变侧亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经元存活的影响

目的 通过检测Survivin及NF-κB蛋白的表达,探讨亚低温对局灶性脑缺血再灌注后神经元存活的影响.方法 用线拴法制作大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）局灶性脑缺血再灌注模型,将164只SD大鼠随机分成假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组,缺血组分别缺血2h、3h、6h、8h再灌注4h、24h、72h、1周、2周后处死,亚低温组于缺血后13～14 min实施病灶侧亚低温持续4h.免疫组织化学法检测Survivin、NF-κB蛋白的表达.结果 相同缺血再灌注时间点,亚低温组比常温组缺血侧Survivin表达水平显著增高（P＜0.05）,NF-κB P65核内移明显降低（P＜0.01）.结论 病灶侧亚低温通过促进缺血半暗带脑组织Survivin表达,抑制NF-κB的核内移,从而抑制神经元凋亡,促进脑缺血后神经功能恢复.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后bcl-2蛋白在大脑皮质的表达

目的观察bcl-2蛋白在大鼠局灶性脑缺血再灌注（FCIR）后表达的变化。方法大脑中动脉内线栓法（MCAO）建立缺血再灌注（IR）模型，用免疫组化（SP）法观察bcl-2蛋白不同时间的表达。既染色观察各个时间点细胞形态学变化。结果脑缺血2h再灌注2h bcl-2表达升高（P〈0．01），IR 6h达到高峰，IR 12h开始下降。结论随着脑缺血再灌注时间延长脑损伤加重，bcl-2蛋白表达减少，bcl-2蛋白表达增加对细胞存亡有重要意义。     

亚低温对脑缺血再灌注后缺血核心区皮质内MCP-1作用的实验研究

目的观察缺血过程中亚低温对大鼠脑缺血再灌注后缺血核心区皮质内单核细胞趋化蛋白(MCP)-1mRNA和蛋白质含量的影响。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分为常温组(37℃)和亚低温组(32～33℃),以半定量逆转录PCR(RT-PCR)法测定MCP-1mRNA的表达,ELISA法测定缺血2 h再灌注不同时间缺血核心区脑皮质内MCP-1含量的变化,2,3,5三苯基四氮唑(TTC)染色法观察脑皮质梗死灶的变化并对大鼠进行神经病学评分。结果缺血2hMCP-1mRNA表达明显升高,再灌注后16h达高峰,此后仍维持较高水平的表达,直至再灌注后48 h;MCP-1含量于再灌注后6h开始升高,至48h逐渐达到高峰。亚低温能显著抑制再灌注后6h和16 hMCP-1mRNA的表达(P <0.05),但对再灌注后24h和48hMCP-1mRNA的表达无影响(P >0.05);亚低温能显著抑制再灌注后6h及48h脑皮质内MCP-1含量的升高(P <0.05)。亚低温组的脑梗死灶面积和神经病学评分较相应时间点的常温组明显减小。结论抑制缺血再灌注后脑皮质内MCP-1mRNA的表达和蛋白质分泌可能是亚低温发挥脑保护作用的重要途径之一。     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后HIF-1α及凋亡相关蛋白变化的影响

目的观察病变侧亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后HIF-1α和Bcl-2蛋白变化的影响。方法用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)局灶脑缺血再灌注模型,随机分为正常组、假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组,于缺血2h再灌注3h、6h、12h、24h、72h、7d后处死,其中亚低温组于缺血后30min实施病灶侧脑亚低温并持续4h。处死前进行神经功能缺陷评分、HE染色、免疫组化检测HIF-1α和Bcl-2的表达。结果 (1)神经功能缺陷评分:亚低温缺血组大鼠各时间点均明显低于常温缺血组(P0.05);(2)HIF-1α的表达:再灌注3h表达显著增高,至24h左右达高峰,其后又随之下降,亚低温缺血组各时间点表达与常温缺血组无显著性差异(P0.05);(3)Bcl-2的表达:再灌注3h增多,随再灌注时间的延长,其表达逐渐增多(P0.05),6h达高峰,其后又随之下降,亚低温缺血组各时间点表达明显高于常温缺血组(P0.05)。结论 HIF-1α在脑缺血早期就发挥重要的保护作用。Bcl-2在脑缺血再灌注损伤过程中主要起抑制细胞凋亡的作用。亚低温能增加Bcl-2的表达;能明显减轻缺血所致的损伤,并能明显抑制细胞调亡;对大鼠缺血后神经功能的恢复有确切的疗效。     

局部亚低温对大鼠大脑中动脉闭塞后神经元凋亡的影响

目的研究局部亚低温对脑缺血后半胱天冬氨酸酶-3（caspase-3）、细胞凋亡诱导因子（AIF）和微管相关蛋白-2（MAP-2）表达的影响。并探讨亚低温脑保护的机制。方法采用改良的Longa法制备永久性大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型。低温组于缺血后立即给予贴敷式局部亚低温（33℃）治疗2h。于缺血后2、6、12、24h及3d、1周和2周取脑。进行HE染色，并采用SABC法进行免疫组化染色，检测大鼠脑缺血区caspase-3、AIF和MAP-2的表达。结果脑缺血后2h，脑梗死病灶周围区即出现caspase-3和AIF免疫阳性细胞，24h达高峰。之后开始逐渐减低，但在2周时仍可见少量免疫阳性细胞。caspase-3在缺血中心区和周围区均有表达，而AIF主要表达于脑梗死周围区。与常温组相比，低温组caspase-3和AIF表达显著减低，而MAP-2显著增加。结论亚低温能抑制caspase-3和AIF表达，促进MAP_2表达。并可抑制caspase介导的细胞凋亡，亦可抑制不依赖于caspase的AIF介导的细胞凋亡。     

17-β雌二醇对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2表达的影响

目的 观察雌激素对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后bcl-2表达的影响,探讨雌激素在脑缺血-再灌注损伤中 的脑保护作用机制。方法 用线栓法制作脑缺血再灌注损伤模型。缺血2h分别再灌注3h、6h、12h、24h后断头取脑,应用TTC 染色和免疫组化方法,观察脑梗死体积及bcl-2蛋白的表达。结果 ①雌二醇组神经功能评分明显低于手术对照组(P<0.01)。 ②雌二醇组脑梗死体积较手术对照组显著缩小(P<0.01)。③在损伤区皮质,雌二醇组bcl-2表达较手术对照组明显上调(P< 0.01);在纹状体区,元显著性差异(P>0.05)。结论 ①雌二醇能明显减轻脑缺血再灌注损伤所造成的行为障碍,缩小梗塞体 积。②雌二醇脑保护机制可能通过上调皮质抑凋亡基因bcl-2的表达。     

氟西汀预处理对大鼠脑缺血再灌注海马区BDNF和bcl-2表达的影响

目的探讨氟西汀对大鼠缺血后再灌注海马的影响及可能机制。方法将40只Wistar大鼠随机等分成4组：①单纯用药组（氟西汀灌胃20d）；②正常对照组（氯化钠灌胃20d）：③术前用药组（氟西汀灌胃20d制作脑缺血再灌注模型）；④单纯手术组（氯化钠灌胃20d制作脑缺血再灌注模型）．于实验终点进行苏木精-伊红染色及免疫组化检查．检测bcl-2和脑源性神经营养因子（BDNF）表达情况。结果与正常对照组比较，单纯用药组bcl-2检测指标无显著性差异（P〉0．05），BDNF表达显著性增多（P〈0．05）。术前用药组与单纯手术组比较，bcl-2表达无显著性差异（P〉0．05），BDNF表达显著性增高（P〈0．05）。结论氟西汀可以诱导增加BDNF表达．但不增加bcl-2的表达．从而减轻缺血后的再灌注损伤．产生神经保护作用。