138例慢性髓系白血病衍生9号染色体缺失的研究

为研究慢性髓系白血病（CML）患者衍生9号染色体[der（9）]部分序列缺失情况,对138例CML患者的骨髓应用R显带技术进行核型分析,并应用bcr-abll双色双融合DNA探针荧光原位杂交（FISH）检测der（9）部分序列缺失。结果表明,138例核型检查中Ph阳性126例（91．3％）,其中典型Ph染色体易位122例;Ph阴性12例（8．7％）。FISH检测发现23例（16．7％）der（9）缺失。典型Ph染色体易位122例中20例为典型Ph染色体易位,占典型Ph染色体易位患者的16．4％,变易Ph易位4例中3例为变异易位,占变异易位患者的75％。变异易位患者中的der（9）缺失发生率明显高于典型易位患者;其中慢性期20例,占慢性期的17．2％;急变期3例,占急变期的17．6％,慢性期与急变期患者der（9）缺失的发生率无显著性差异（P〉0．05）。结论：CML患者der（9）部分缺失的发生率为16．7％,FISH技术可有效检测der（9）缺失,der（9）缺失的发生率与cML的分期无相关性。     

404例慢性粒细胞白血病的染色体核型研究

目的探讨慢性粒细胞白血病(CML)不同时期骨髓细胞染色体核型的变化特点及临床意义。方法采用短期培养法制备骨髓细胞染色体标本,应用R显带技术对该院404例CML患者的骨髓染色体核型进行回顾性分析。结果 404例患者中Ph染色体阳性376例(93.1%),Ph染色体阴性但bcr/abl阳性28例(6.9%)。376例Ph染色体阳性患者中,具有典型Ph易位者360例,具有变异易位者16例(复杂变异易位14例,简单变异易位2例)。16例变异易位患者慢性期10例,急变期6例。伴额外染色体异常者80例(19.8%),其中慢性期32例,占CML慢性期患者(304例)的10.5%,以-Y、+8为主;急变期48例,占急变期患者(100例)的48%,以i(17)、+8、+Ph最多见。CML急变期伴额外染色体异常的比例高于慢性期(P0.01)。结论 Ph染色体是CML的细胞遗传学标志,Ph染色体可表现为典型易位和变异易位,变异易位在慢性期和急变期都可出现。CML急变期伴额外染色体异常的比例高于慢性期,CML病程出现额外染色体异常预示病程进入加速或急变期。     

135例非单纯Ph染色体的慢性髓系白血病细胞遗传学分析

本研究探讨135例非单纯Ph染色体慢性髓系白血病（CML）的染色体检查结果并进行细胞遗传学分析：135例CML染色体均采用骨髓细胞直接法和／或短期培养法制备，应用R显带技术对其进行显带分析。结果表明：经染色体检测的1210例的CML中135例有非单纯Ph染色体异常。本组135例非单纯Ph染色体CML中，慢性期87例、加速期21例、急变期27例.87例慢性期患者中，14例伴简单变异易位，22例伴复杂变异易位，其余的伴其他染色体异常，其中伴8号染色体三体4例，伴双Ph4例，伴i（17）5例；在21例加速期患者中，伴8号染色体三体4例，伴双Ph4例，伴i（17）3例；在27例急变期患者中，2例伴简单变异易位，3例伴复杂变异易位，其余的伴其他染色体异常，其中伴8号染色体三体5例，伴双Ph5例，伴i（17）2例。本组常见额外染色体异常检出率高低依次为＋Ph、＋8、i（17）、-Y、＋19和＋21。本组有16例伴简单变异易位，25例伴复杂变异易位。结论：CML是起源于多能干细胞的恶性血液病．染色体核型分析对CML的诊断、预后、发病机制的探讨和治疗方案的选择都具有重要的价值。     

1193例慢性粒细胞白血病细胞及分子遗传学分析

目的了解国内慢性粒细胞白血病（CML）不同病期染色体核型及其演变和ber—abl融合基因特点。方法对1193例CML患者的染色体核型及524例CML患者的ber-abl融合基因资料进行回顾性分析。染色体的检测采用R显带技术，融合基因检测采用RT-PCR技术。结果在所有病例中，Ph染色体阳性（Ph^＋）患者占98．07％，Ph^-患者占1．93％。在Ph^＋患者中，95．64％为典型Ph染色体阳性，4．36％为变异型Ph染色体阳性。11．88％的典型Ph^＋患者发生染色体核型演变。急变期、加速期和慢性期染色体核型演变的发生率分别为49．04％、27．78％及7．94％。在所有典型Ph^＋患者中，发生染色体核型演变后最常见的附加染色体异常类型为＋Ph（14．62％），＋8（10．77％）和-21（7．69％）。急变期和加速期最常见的附加染色体异常类型为＋Ph（28．57％），＋8（16．67％）和＋19（7．14％）；慢性期最常见的附加染色体异常为-21（10．26％），＋Ph（8．97％）和＋8（8．97％）。附加染色体异常联合出现类型以＋Ph与＋8的联合最多（3．60％）。在所有524例检测过融合基因的标本中，h3a2（＋）为54．01％，b2a2（＋）为27．67％。结论国内CML患者染色体的核型及演变可能有着自己的特点。     

119例慢性髓细胞白血病急变期核型分析

为了探讨慢性髓细胞白血病急变期（CML-BC）核型变化规律及意义，应用R显带技术对119例CML-BC患者的核型资料进行分析，并在其中随机选出28例以荧光原位杂交法（FlSH）检测衍生9号染色体[der（9）]是否缺失．结果表明：124例核型检查中Ph阴性11例（8．9％），P11阳性113例（91．1％），其中典型易位104例（83．9％），单纯变异易位4例（3．2％），复杂变异易位5例（4．0％）；Ph阴性CML-BC中72．6％伴有附加染色体异常，主要类型是：i（17q）、＋14，Ph阳性者72．3％伴有附加染色体异常，主要类型是：＋Ph、＋8、i（17q）；Ph阴性CML-BC急变时间为2-66月，平均29．0月，Ph阳性者急变时间为1-127月，平均34．2月，两组比较无统计学差异（P〉0．05）；FlSH检测发现5例（5／28，17．9％）der（9）缺失。结论：慢性髓细胞白血病急变期附加染色体异常多见，FlSH技术可有效检测der（9）缺失．     

荧光原位杂交和常规细胞遗传学在慢性粒细胞白血病研究中的应用

目的：应用荧光原位杂交（FISH）和染色体核型分析技术,探讨慢性粒细胞白血病（CML）细胞遗传学特点与临床预后的相关性。方法：采用骨髓细胞直接法和（或）短期培养法制备染色体标本,采用热变性姬姆萨显带技术（RHG）进行染色体核型分析。荧光染色体原位杂交技术检测40例CML患者的BCR／ABL融合基因。回顾分析282例CML的临床及细胞遗传学资料。结果：常规细胞遗传学（CC）分析表明,282例患者中268例Ph染色体阳性,占95．04％;14例Ph染色体阴性,占4．96％。其中250例Ph阳性细胞为100％,占90．32％。12例Ph阳性细胞为30％～99％,占4．48％,核型显示正常与Ph嵌合状态。6例核型为复杂变异异位,占2．24％。41倒除Ph染色体外,还出现额外染色体异常,占15．30％,分别为双Ph,＋8,＋22,-Y,i（17q）等,其中28例为加速或急变患者,占68．29％。应用FISH技术检测,BCR／ABL融合基因阳性34例（舍14例Ph染色体阴性中的8例）,占85％;BCR／ABL阴性6例,占15％。结论：在常规细胞遗传学分析的基础上,选用分子遗传学FISH技术可以明显提高染色体异常的检出率及准确率。细胞遗传学对于CML的正确诊断、指导临床治疗、判断预后具有重要价值。     

慢性髓性白血病细胞染色体检测的临床意义

目的 探讨慢性髓性白血病（CML）染色体变化对CML病情度预后判断的意义。方法 用直接法或短期24h培养法常规R显带后分析97例CML患者骨髓单个核细胞核型并统计分析其与患者预后关系。结果 97例CML患者中,Ph^1染色体（＋）者92例（94．8％）;Ph^1（-）者5例（5．2％）,其中有4例Ph^1（-）bcr／abl（＋）,1例Ph^1（-）／bcr／abl（-）。加速期、急变期患者17例（17．2％）中有15例出现新的染色体异常。表现为＋8、＋19、＋Ph^1、-Y、i（17q）、del（7）（q22）。加速期、急变期患者额外染色体出现频率显著高于慢性期患者。结论 CML患者染色体畸变频率增高厦非随机同时出现额外染色体提示患者预后不佳。     

成人与儿童急性淋巴细胞白血病细胞遗传学大样本对比分析

本研究对566例成人急性淋巴细胞白血病（aALL）和586例儿童急性淋巴细胞白血病（cALL）的细胞遗传学进行对比分析。对所有患者均进行了细胞遗传学分析,部分患者进行了FISH检测。结果表明：aALL与cALL的染色体异常存在明显的差异。aALL中异常核型占62．0％,染色体异常较多见的为t（9;22）（q34;q11）、亚二倍体、超二倍体（47—50）、abn（6q）、abn（9p）、-7等,预后不良的占多数。cALL中异常核型占39．2％,染色体异常较多见的为高超二倍体、亚二倍体、TEL／AML1（＋）、＋8、超二倍体（47—50）、＋21等,预后良好的占多数。其中异常核型、总亚二倍体、总超二倍体（47—50）、t（9;22）（q34;q11）、-7、abn（7q）、abn（14q32）、＋Ph在aALL中的发生率明显高于eALL;cAu．正常核型（N）、高超二倍体、＋8、＋21＊2、TEL／AML1（＋）的发生率明显高于aALL。Ph（＋）在aALL中的检出率为20．5％,伴有附加异常的占63．8％。Ph（＋）aALL附加异常中＋Ph、-7、i（9q＋）、9p-、＋8、＋21、＋x、6q-、abn（14q32）、＋14出现的比例较高。Ph（＋）在cALL中的检出率为4．4％,明显低于aALL（P：0．000）,伴有附加异常的占42．3％,附加异常中abn（9p）、abn（7p）、-7、17p-、＋21出现的比例较高。结论：本组病例染色体数目异常及结构异常几乎涉及到每一条染色体,复杂核型多见。aALL与cALL的染色体异常存在明显的差异。     

伴复杂核型异常的髓系恶性血液病8号染色体异常分析

为研究伴复杂核型异常（complex chromosome abnormalities，CCA）的髓系恶性血液病的8号染色体异常，采用常规染色体分析和多重荧光原位杂交技术检测81例伴CCA的髓系恶性血液病患者的染色体异常，其中急性髓系白血病（AML）25例、慢性髓系白血病（CML）35例和骨髓增生异常综合征（MDS）21例。结果表明：81例标本中CCA涉及所有染色体，而8号染色体异常发生率为35．8％（29／81），其中AML为56％（14／25）、CML为28．6％（10／35）、MDS为23．8％（5／21），CML加速期、急变期发生率分别为20％（1／5）、33．3％（9／27）。29例伴8号染色体异常的髓系恶性血液病中有15例为非平衡易位，占51．7％。结论：8号染色体异常是伴CCA的髓系恶性血液病中常见的染色体异常，可能与疾病进展相关，多为不平衡性易位。     

Ph染色体阳性慢性粒细胞白血病衍生9号染色体缺失的FISH研究

目的分析105例Ph^＋慢性粒细胞白血病（CML）患者衍生9号染色体[der（9）]部分序列的缺失（以下简称缺失）情况，同时探讨该缺失与易位类型及临床预后的联系。方法所有患者均采用骨髓细胞直接法和（或）短期培养法制备染色体，采用R显带技术进行核型分析。应用bcr-abl双色双融合DNA探针对骨髓间期细胞进行荧光原位杂交（FISH）检测以发现有无der（9）部分序列的缺失，随访患者并收集临床资料。结果105例Ph^＋CML患者中，典型Ph染色体易位76例，变异Ph染色体易位29例。16例（15．2％）患者伴有缺失，其中典型Ph染色体易位12例（占典型易位总数的15．8％），变异Ph染色体易位4例（占变异易位总数的13．7％）。变异Ph染色体易位与典型Ph染色体易位患者的缺失发生率差异无统计学意义（P〉0．05）。在伴有缺失的患者中，所有Ph^＋中期和间期细胞均伴有缺失，只有伴有5’abl和3’bcr同时缺失的3例患者同时存在单纯5’abl或3’bcr缺失的间期细胞杂合。伴有缺失的患者同不伴有缺失的患者在外周血白细胞计数、血红蛋白含量及血小板计数上差异无统计学意义。随访结果表明，伴有缺失的患者的中位生存期（34个月）比不伴有缺失的患者的中位生存期（76个月）明显缩短，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论der（9）缺失在我们研究的Ph^＋CML患者中的发生率约为1／6．该类患者中位生存期较短．提示它是一个不良的预后指标。     

The spectrum of molecular alterations in the evolution of chronic myelocytic leukemia.

DNA from 135 patients with chronic myelogenous leukemia (CML) at various clinical stages and Philadelphia (Ph1) chromosome positive acute lymphoblastic leukemia was investigated for alterations in a variety of proto-oncogenes which have been implicated in the evolution of CML from its chronic phase to blast crisis. The most common genetic change found in the evolution of typical Ph1 chromosome positive CML to blast crisis was an alteration of the p53 gene involving either a rearrangement, a deletion, or a point mutation in the coding sequence of the gene. Alterations of the p53 gene were found in the myeloid and the rare megakaryocytic variant of blast crisis but were absent in the lymphoid leukemic transformants. Gross structural alterations were seen in 11 of 54 (20%) of myeloid or unknown phenotypes of blast crisis and in only 1 of 44 chronic phase cases. Eight examples of mutations in the open reading frame of the p53 gene at codons 49, 53, 60, 140, 202, 204, 238, and 239 were observed in blast crisis patients. Mutations in the N-RAS gene were rare in typical blast crisis (2 of 27 cases) but were found in megakaryocytic and Ph1 negative myeloid blast crisis. We concluded that heterogeneous alterations in the p53 gene and occasionally in the N-RAS genes accompany the evolution of chronic phase CML to blast crisis.     

慢性髓系白血病患者各期id4基因甲基化状态研究

本研究探讨id4基因在慢性髓系白血病（CML）不同时期甲基化状态及其与疾病进展的关系。采用甲基化特异的PCR（MS-PCR）方法对48例CML患者和10例正常人的骨髓标本进行id4基因启动子区甲基化状态检测。结果表明：id4基因在正常人及CML慢性期患者骨髓中呈现完全非甲基化状态,而在CML急变期（包括加速期）骨髓中id4甲基化率为66%,较正常人和CML慢性期明显增加,二者差异具有统计学意义（p〈0.05）。系列研究结果也显示,同一CML患者的id4基因甲基化状态在慢性期时是非甲基化的,而在加速期或急变期却为甲基化状态。结论：id4基因在CML慢性期呈非甲基化,在加速期或急变期则呈甲基化状态,因而检测id4基因甲基化程度有助于监测CML患者的病情演变,可作为CML疾病进展的标志。     

不典型慢性粒细胞白血病bcr-abl融合基因的RT-PCR研究

应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对30例慢性粒细胞白血病(CML)患者的bcr-abl融合基因进行了检测,并结合临床、血液学、细胞化学和细胞遗传学等指标对4例Ph~-CML进行了分析,其中的1例t(7;22)(q22,q24)易位为国内外首次报道。结果表明,Ph~-/bcr~ CML和具有变异型Ph染色体的CML与Ph~ CML之间有较多相近之处,如白细胞与血小板数较多,N-ALP较低,脾肿大明显,发病年龄较轻,易发生急变;Ph~-/bcr~-CML与Ph~ CML之间差异显著,如发病年龄较高,脾中度肿大,白细胞数多者较少,急变较少见。     

慢性粒细胞白血病急粒变与急淋变骨髓细胞形态学、免疫表型、细胞遗传学特征及预后差异分析

本研究旨在观察慢性粒细胞白血病（c池）急粒变及急淋变患者骨髓细胞形态学、免疫表型、细胞遗传学特征及预后差异，为分层诊治和预后判断提供实验学基础。回顾性分析西安交通大学医学院第一附属医院血液内科2009年1月-2014年1月期间收治的31例CML急变期临床资料，其中24例急粒变及7例急淋变，对患者外周血及骨髓原始细胞比例、嗜酸及嗜碱细胞百分比、免疫分型、细胞遗传学特征及预后进行差异分析。结果表明，CML急粒变患者外周血及骨髓原始细胞比例无明显差别，在外周血及骨髓中易见嗜酸及嗜碱细胞。慢性粒细胞白血病急淋变患者骨髓原始细胞比例高于外周血，且外周血及骨髓中嗜酸及嗜碱细胞少见。7例CML急淋变患者均为B系ALL，均表达CD10、CD19、CD34、nA—DR，淋系积分≥1．5分；2例同时伴髓系CD13及CD33表达，髓系积分均为1分。24例慢粒急粒变患者主要表达CD33、CD13、CD38、CD34、CD11b及HLA-DR，髓系积分≥2分，其中2例伴淋系积分别为0．5、1分。31例CML患者初诊时检测Ph染色体100％阳性，其中CML急粒变患者有3例同时检出其它染色体畸变。CML急粒变及急淋变患者总生存率无明显差异，但应用酪氨酸激酶抑制剂治疗者的总生存率高于未用酪氨酸激酶抑制剂治疗者。结论：CML急淋变患者外周血嗜酸及嗜碱细胞较CML急粒变患者少见，B系ALL多见，主要表达cD10及cD19；CML急粒变患者主要表达CD33、CD／3、CD38、CD34、CD11b及HLA-DR；慢粒急变期患者均可伴有其他系抗原表达，但一般积分小于2；CML急粒变患者常伴有Ph染色体以外的畸变；CML急粒及急淋变患者总生存率无明显差异，但应用酪氨酸激酶抑制剂治疗者总生存率优于未用酪氨酸激酶抑制剂者。     

格列卫对慢性粒细胞白血病病人Ph染色体和bcr／abl融合基因表达影响

目的探讨格列卫治疗Ph染色体阳性慢性粒细胞白血病病人后骨髓Ph染色体及bcr／abl融合基因表达的变化。方法采用R显带和半定量RTPCR分别检测11例慢性粒细胞白血病病人服用格列卫前后骨髓标本中Ph染色体和bcr／abl基因的表达。结果用药后9例慢性期慢性粒细胞白血病病人,7例分别在用药3～24个月后染色体检查为Ph染色体阴性,1例用药1个月后其Ph染色体仍为阳性,后失访;1例用药2个月后Ph染色体阳性率为30％;1例急变期慢性粒细胞白血病病人用药6个月后其Ph染色体阳性率为70％;1例加速期慢性粒细胞白血病病人用药12个月后Ph染色体阳性率为60％。服用格列卫的CML病人Ph染色体转阴后仍能检测到bcr／abl基因的表达,但其表达水平较用药前明显降低,差异有显著性（t=3．77、5．13,P〈0．01）,随着用药时间的延长bcr／abl基因表达逐渐降低。结论格列卫能有效治疗Ph染色体阳性的慢性粒细胞白血病病人,并且对其预后具有重要的意义。     

慢性髓系白血病急变期分子遗传学研究进展

9号和22号染色体相互易位产生Ph染色体及BCR-ABL融合基因,几乎在所有慢性髓系白血病（CML）出现,BCR-ABL编码的蛋白具有持续增高的酪氨酸激酶活性,使白血病细胞异常增殖。急变期是CML的晚期,在此期间常常出现其它附加染色体和分子的改变。大量研究表明,BCR-ABL基因与其他失调的基因共同作用并异常激活下游的信号传导通路,促进了疾病的进展。酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼对大多数慢性期CML患者治疗效果显著。IRIS5年的临床试验显示：用伊马替尼治疗的98%患者达血液学完全缓解,92%患者达主要细胞遗传学缓解,87%患者达完全细胞遗传学缓解。然而,仍有少数慢性期和大多数进展期患者用伊马替尼治疗疗效欠佳。在耐药机制的研究中发现ABL激酶区点突变与临床耐药关系密切。第二代酪氨酸激酶抑制剂可改善伊马替尼耐药,本文就急性变的分子机制、伊马替尼耐药等做一综述。     

PY20抗体检测慢性髓系白血病细胞内酪氨酸磷酸水平的临床应用

本研究探讨PY20抗酪氨酸磷酸单克隆抗体检测在慢性髓系白血病（CML）诊断中的特异性及其临床应用的可能性。采用抗PY20和CD45抗体标记,通过流式细胞术检测28倒初诊CML患者治疗前后PY20阳性率,比较其与bcr—abl融合基因及Ph染色体结果的符合率。另外,随访监测7例异基因造血干细胞移植后CML患者的PY20阳性率、bcr—abl融合基因及Ph染色体的变化。结果表明：@28例初诊CML患者PY20在慢性期、加速期、急变期表达率分别为（40．31±1．22）％、（77．28±1．14）％,（78．12±1．32）％。CML慢性期PY20袁达率低于加速期或急变期（P〈0．05）,加速期和急变期之间无显著差异（P〉0．05）。②28例初诊CML患者经治疗后获得CR、PR、NR患者的PY20阳性率分别为（15．56±1．51）％、（38．73±2．31）％、（60．43％±2．04）％。CR患者PY20阳性率明显低于PR及NR的患者（P〈0．05）。PR患者低于NR患者（P〈0．05）。③初诊患者PY20与RT—PCRbcr-abl检测的阳性符合率为92．31％,阴性符合率为95．45％;PY20与Ph染色体检测的阳性符合率为88．46％,阴性符合率为95．46％。④7例患者移植后Ph染色体均为阴性,移植后bcr—abl融合基因持续阴性5例,持续阳性2例。此7例PY20细胞表达均为阴性。结论：①流式细胞术检测CML细胞酪氨酸磷酸化水平阳性率有较好的特异性及敏感性,可应用于CML的早期、快速辅助诊断。②PY20阳性率对CML分期、病情监测及疗效判断有一定的临床指导意义。⑧流式细胞术、RT—PCIR及染色体核型分析能相互补充提高CML的诊断率。