人端粒酶反转录酶基因转染对人胎儿表皮干细胞增殖的影响

目的 探讨外源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因转染对人胎儿表皮干细胞增殖的影响.方法 采用脂质体转染法,将含有hTERT基因的质粒pIRES2-EGFP-hTERT和卒载体质粒pIRES2-EGFP分别导人体外培养的人胎儿表皮干细胞,并用G418筛选法进行抗性克隆的筛选.用RT-PCR和Western blot检测表皮十细胞hTERT mRNA及其蛋白的表达,端粒重复序列扩增法(TRAP)-ELISA检测其端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞周期.结果 非转染组和空载体质粒转染组表皮干细胞弱表达hTERT mRNA和蛋白,而质粒转染组表皮干细胞强表达hTERT mRNA和蛋白;与非转染组和窄载体质粒转染组比较,质粒转染组表皮干细胞端粒酶活性的表达量显著升高,G_0/G_1期细胞比例明显下降,而S、G_2/M期细胞比例升高,增殖指数增加.结论 外源性hTERT基因转染能有效增强体外培养的人表皮干细胞hTERT mRNA和蛋白的表达及端粒酶活性,细胞增殖能力明显增强.     

KAI1基因外源性过表达对胆管癌细胞层黏素受体的影响

目的研究KAI1基因外源性过表达对胆管癌细胞层黏素受体(LNR)表达的影响。方法体外培养人胆管癌QBC939细胞,分为两组:转染空载体pIRES2-EGFP对照组和转染重组真核载体pIRES2-EGFP-KAI1实验组。采用脂质体转染法分别将空载体和重组真核载体转染到QBC939细胞,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株。通过RT-PCR、Western blotting和细胞免疫组化法,分别检测KAI1、LNR的mRNA及蛋白表达水平。结果实验组的KAI1 mRNA、蛋白表达量(分别为0.49±0.071、.06±0.05)均显著高于对照组(分别为0.22±0.02、0.59±0.02,P<0.01);实验组的LNR mRNA、蛋白表达量(分别为0.38±0.04、0.29±0.03)均显著低于对照组(分别为0.73±0.05、0.68±0.02,P<0.05)。与对照组比较,实验组KAI1蛋白在胞质的着色明显增强、LNR着色减弱。结论体外胆管癌QBC939细胞过表达KAI1可导致LNR mRNA和蛋白表达下调。     

ATM基因对60Co γ射线照射后AT细胞hTERT表达的影响

目的研究外源性ATM基因对电离辐射照射的毛细血管扩张-共济失调症（ataxia tehngiectasia，AT）患者皮肤的成纤维细胞系AT细胞（AT5BIVA）hTERT mRNA和蛋白表达的影响。方法以正常人皮肤的成纤维细胞系GM细胞（GM0639）为对照，应用RT-PCR与Western blot实验方法，观察经0、1、3和5Gy（剂量率1．0Gy／min）^60Coγ射线照射后，AT细胞、空载体AT细胞、ATM^＋-AT细胞和GM细胞的hTERT mRNA和蛋白表达的变化。结果未照射时，除GM细胞外，其余各细胞均有hTERT mRNA和蛋白的表达；ATM^＋-AT细胞的hTERT mRNA和蛋白表达量较AT细胞明显下降（P〈0．05）；ATM^＋-AT细胞的hTERT mRNA和蛋白表达量仍然明显高于GM细胞的hTERT mRNA表达量。在1～5Gy剂量范围内，AT、空载体AT、ATM^＋-AT和GM细胞的hTERT mRNA和蛋白表达量呈剂量依赖性增加；在相同照射剂量点，ATM^＋-AT细胞的hTERT mRNA表达量较AT细胞均有明显降低（P〈0．05）。结论电离辐射可诱导细胞hTERT mRNA和蛋白的表达；并且细胞hTERT mRNA和蛋白表达量呈剂量依赖性增加；外源性ATM基因可下调AT细胞hTERT mRNA和蛋白的表达。推测端粒酶参与电离辐射诱导DNA损伤的修复。     

反义hTERT对胃癌细胞SGC7901 VEGF及其受体表达的影响

目的研究反义hTERT对胃癌细胞SGC7901 VEGF及其受体表达的影响,探讨其对肿瘤发展和转移的影响.方法以端粒酶逆转录酶组分hTERT cDNA为模板构建反义hTERT逆转录病毒表达载体,包装重组逆转录病毒后感染胃癌SGC7901细胞,用半定量RT-PCR检测基因转染前后VEGF-C及其受体Flt-4 mRNA表达水平的变化,免疫组化法检测VEGF-C、Flt-4蛋白表达.结果反义hTERT稳定转染后SGC7901细胞VEGF-C及其受体VEGFR-3（Flt-4） mRNA和蛋白表达均受到明显抑制.结论反义hTERT可有效抑制胃癌细胞VEGF-C及其受体Flt-4的表达,阻断肿瘤血管和淋巴途径转移.     

细胞色素C依赖的线粒体途径在hTERT干扰促进肝癌HepG2细胞凋亡中的作用

目的检测靶向RNAi抑制hTERT基因对HepG2肝癌细胞凋亡的促进作用及其与线粒体凋亡途径的关系,探讨hTERT干扰促进细胞凋亡的可能机制。方法收集第20代hTERT基因RNAi真核表达载体稳定转染细胞、对照细胞（转染空载体质粒）及未转染HepG2细胞,采用Western blot检测线粒体、胞质细胞色素C（cyt C）的表达及细胞内caspase-9、Bcl-2、Bax和hTERT的表达。结果与未转染细胞和对照细胞相比,转染细胞hTERT、Bcl-2和线粒体cyt C表达明显减少,Bax和胞质cyt C表达明显增加;未转染细胞及对照细胞仅见约46kD的前caspase-9条带,转染细胞可见46kD前caspase-9条带和35kD caspase-9 p35亚基条带。结论RNAi靶向抑制hTERT基因可通过抑制Bcl-2表达和促进Bax表达引起线粒体cyt C释入胞质,激活caspase-9促进HepG2肝癌细胞凋亡。     

高糖抑制平滑肌细胞胶原合成参与糖尿病静脉病变发生

目的观察糖尿病大鼠大隐静脉（SV）的组织学改变,通过高糖处理静脉平滑肌细胞（SMCV）观察其活性及其Ⅰ型胶原（COL Ⅰ）、Ⅲ型胶原（COL Ⅲ）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)表达变化,探讨其表达异常的可能机制。 方法用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射构建糖尿病大鼠模型,对其SV进行HE染色、Masson染色观察其组织形态改变;体外培养SMCV,分别给与高糖、正常糖浓度培养,CCK8法检测其活性,RT-qPCR法、Western Blot（WB）法分别检测其细胞内COLⅠ、COLⅢ、MMP2、TIMP1 mRNA及蛋白表达,ELISA法检测细胞外COL Ⅰ、COLⅢ的表达。 结果糖尿病大鼠SV管壁中膜变薄（P<0.05）、管腔面积增大（P>0.05）、胶原含量减少（P>0.05）。高糖刺激后SMCV细胞活性降低（P<0.05）,细胞内COLⅠ mRNA无明显变化,COLⅢ mRNA表达下降（P<0.05）,TIMP1 mRNA表达升高（P<0.05）,MMP2 mRNA表达下降（P<0.05）。此外,高糖刺激后细胞内COLⅠ蛋白表达显著降低,COLⅢ蛋白表达无明显差异,TIMP1表达下降,MMP2表达升高,细胞外COLⅠ蛋白表达显著降低（P<0.05）,COLⅢ表达降低但无统计学差异,COLⅠ/COLⅢ表达比例下降（P<0.05）。 结论本研究证实糖尿病下肢静脉中膜变薄,管腔增大,胶原减少。高糖可能是通过转录后机制调控MMP2/TIMP1水平,影响SMCV细胞COLⅠ/COLⅢ的表达,抑制其胶原合成,参与静脉病变的发生。     

hTERT基因转染对人胚胎成纤维细胞端粒长度、端粒酶活性及其亚单位的影响

为了探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位 (hTERT)基因转染对人胚胎成纤维细胞 (hEFs)端粒长度、端粒酶活性及其亚单位的影响 ,采用基因重组技术构建hTERT全长cDNA正义荧光真核表达载体 ,并采用脂质体法将正义重组质粒pIRES2 EGFP hTERT及空载质粒pIRES2 EGFP分别转染原代培养hEFs,检测转染细胞端粒长度、端粒酶活性及端粒酶亚单位的变化。结果显示 ,外源性hTERT基因转染细胞 (hEF hTERT)端粒酶活性较未转染细胞 (hEFs)及空载体转染细胞 (hEF EGFP)显著增加 (P <0 0 1) ,hEF hTERT、hEFs及hEF EGFP端粒长度分别为 6 0kb、5 3kb及 5 4kb ,端粒酶亚单位中除hTERT在mRNA和蛋白水平表达均增加外 ,hTR和TP1mRNA无明显变化。以上结果提示 ,外源性hTERT基因转染能使原代培养的hEFs端粒酶活化 ,端粒长度不再继续缩短 ,hTERT在mR NA和蛋白水平表达增加     

真核表达东方马脑炎病毒衣壳蛋白Capsid抑制IFNγ应答基因转录

目的克隆东方马脑炎病毒（EEEV）衣壳蛋白（Capsid）基因,构建其真核表达载体,检测该基因在293细胞中的表达,并初步研究其对干扰素（IFN）应答基因表达的影响。方法构建包含EEEV capsid基因的真核表达载体pcDNA3-Flag-capsid,以威格拉斯脂质体转染293细胞进行瞬时表达,Western印迹检测其表达情况;应用定量PCR比较IFN效应基因Gbp1,Gbp2和Isg15在pcDNA3-Flag-capsid和空载体转染细胞中mRNA表达差异。结果构建了EEEV Capsid真核表达质粒,并且该质粒能够在293细胞中有效表达,同时定量PCR结果表明,与空载体转染对照组相比,外源导入EEEV Capsid抑制IFN应答基因Gbp1,Gbp2和Isg15的转录。结论真核表达EEEVCapsid抑制细胞内IFN应答基因的表达,为研究EEEV致病机制奠定基础。     

喉癌细胞hTERT启动子介导基因治疗研究

目的研究喉癌细胞中端粒酶活性、端粒酶逆转录酶（hTERT）表达和hTERT启动子活性的关系，以及hTERT启动子介导喉癌基因治疗的可行性。方法将含hTERT启动子的质粒转染不同放射敏感性喉癌细胞（Hep2和Hep2R），通过报告基因评价启动子活性，RT-PCR检测hTERT mRNA表达，PCR—ELISA法检测端粒酶活性。构建质粒phTERTp-HRP，用RT-PCR和酶活性分析评价辣根过氧化物酶（HRP）表达，以克隆形成实验评价phTERTp-HRP／吲哚乙酸（IAA）对克隆形成率和放射敏感性的影响。结果Hep2R的端粒酶活性、hTERT mRNA表达水平和hTERT启动子活性分别是Hep2的1．37、1．43和1．81倍。hTERT启动子活性与hTERT mRNA表达水平和端粒酶活性之间显著正相关（P〈0．01）。转染phTERTp-HRP后，Hep2R细胞中HRP mRNA表达和HRP活性水平分别是Hep2细胞的2．1倍和1．8倍。0．5mmol／L IAA处理后，SERSF2分别为1．24（Hep2R）和1．20（Hep2），无IAA和有IAA组存活曲线参数α分别为0．020、0．090（Hep2R）和0．042、0．099（Hep2）。结论hTERT启动子可用于不同放射敏感性喉癌细胞的基因治疗。hTERTp—HRP／IAA基因治疗有望用于喉癌细胞的靶向杀伤和放射增敏。     

S100 A4对子宫内膜癌细胞顺铂化疗敏感性影响分析

目的分析靶向沉默S100A4基因对子宫内膜癌细胞顺铂化疗敏感性的影响。方法病毒转染子宫内膜癌KLE细胞株并获得稳定细胞株;聚合酶链反应检测转染后子宫内膜癌细胞中S100A4 mRNA的表达;Western blot印迹法检测转染后子宫内膜癌细胞中S100A4蛋白的表达水平;CCK8法检测转染后子宫内膜癌细胞的增殖变化。结果阴性对照组、shRNA干扰实验组、过表达实验组3组之间光密度值两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。阴性对照组、shRNA干扰实验组、过表达实验组的S100A4相对表达水平两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。空白对照组、shRNA干扰实验组的S100A4蛋白表达水平明显低于阴性对照组,过表达实验组的S100A4蛋白表达水平明显高于阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。空白对照组、阴性对照组、shRNA干扰实验组、过表达实验组的IC50值两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论靶向沉默S100A4基因可抑制肿瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,增强子宫内膜癌细胞对顺铂的敏感性。     

体外诱导负载TGF-β1基因的兔关节滑膜细胞向软骨细胞分化

目的 探讨体外诱导负载TGF-β1基因的兔关节滑膜细胞向透明软骨细胞分化的可行性,为组织工程学修复关节软骨损伤提供体外实验依据.方法 体外培养扩增B型滑膜细胞并纯化,构建pcDNA3.1-TGF-β1,用Lipofectamine 2000法转染,转染pcDNA3.1-TGF-β1组为实验组,转染pcDNA3.1(+)空质粒组为对照组,未转染组为空白组.转染后48 h行G418筛选,RT-PCR检测TGF-β1的瞬时表达,同时取阳性细胞爬片,行抗TGF-β1免疫组织化学染色;G418维持筛选,每2 d取部分细胞计数,连续12 d,绘制生长曲线,转染后3周,每周取部分细胞爬片行抗TGF-β1和抗Ⅱ型胶原免疫组织化学染色.图像分析采用Image-Pro Plus V6.0软件分析处理,实验数据采用SPSS 13.0行统计学处理,组间两两比较采用方差分析.结果 实验组转染后转染率为18%,转染后生长曲线显示细胞早期生长活性下降,细胞数量在转染后第4天降低到3.6×104/ml,第3天RT-PCR检测到TGF-β1阳性片段,抗TGF-β1免疫组织化学染色见细胞内阳性颗粒,对照组及空白组均为阴性;细胞转染后第3周,实验组抗TGF-β1及抗Ⅱ型胶原免疫组织化学染色仍见细胞内阳性颗粒,对照组及空白组为阴性;图像分析结果表明,转染后第7天实验组抗TGF-β1的PU值为(19.04±1.26),对照组及空白组PU值分别为(4.07±0.65)和(3.23±0.56),差异有统计学意义(P<0.05);转染后14 d实验组抗Ⅱ型胶原的PU值为(13.74±1.27),对照组及空白组PU值分别为(4.62±0.56)和(3.93±0.38),差异有统计学意义(P<0.05).结论 脂质体法重组pcDNA3.1-TGF-β1基因可成功转染兔关节滑膜细胞,转染后细胞成功表达TGF-β1,并分泌Ⅱ型胶原蛋白,表现出透明软骨细胞样生理特征,滑膜细胞有望成为一种良好的软骨组织工程的种子细胞.     

hTERT启动子调控caspase 3基因的特异性表达及其抑癌作用

目的：探讨端粒酶催化亚基(KFERT)启动子调控caspase3(半胱天冬酶-3)基因在端粒酶阳性肿瘤细胞中表达的特异性及在体内外的抑癌作用。方法：构建hTERT启动子调控的caspase3基因的真核表达载体，通过RTPCR、瞬时转染、MTT法、流式细胞术和动物实验方法，检测hTERT启动子调控caspase3基因表达对肿瘤细胞生长的影响。结果：hTERT启动子调控caspase3基因在端粒酶阳性肿瘤细胞HepG2中有明显表达，而在正常人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblast，HEL)中未见表达；caspase3表达能对端粒酶阳性肿瘤细胞HepG2、HeLa、Glc和A549细胞的增殖产生明显抑制作用，抑制率为10．5％-37．9％；同时也可以诱导HepG2、HeLa、Glc和A549细胞发生凋亡，凋亡率为15．39％-35．19％；而对端粒酶阴性的正常细胞HEL没有明显的影响。动物实验结果显示，hTERT启动子调控的caspase3基因转染对HepC2细胞的体内增殖具有抑制作用。结论：hTERT启动子调控的caspase3基因表达载体是一种有应用潜力的肿瘤基因治疗载体。     

心衰患者心肌组织中钠氢交换体1 mRNA的表达与血清胶原的相关性研究

目的观察心衰患者心肌组织中钠氢交换体1（sodium-hydrogen exchanger 1,NHE1）的表达及其与血清胶原的相关性,探讨NHE1在心衰发生和发展中的作用及其与心肌纤维化的相互关系。方法设心衰组及正常对照组,心衰组按NYHA分级分成心功能Ⅰ级、Ⅱ级及Ⅲ级3个亚组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测受试者心肌组织中NHE1 mRNA的表达水平,采用放射免疫分析法分别测定血清Ⅰ型前胶原羧基端肽Ⅰ（PⅠCP）和Ⅲ型前胶原氨基端肽（PⅢNP）含量。结果心衰组PⅠCP、PⅢNP含量较正常对照组明显升高,随着心功能的逐渐恶化,心衰组PⅠCP、PⅢNP含量呈上升趋势,各组间表达总体上有差异（P〈0.05或P〈0.01）,PⅠCP、PⅢNP含量与NHE1 mRNA的△Ct值呈显著负相关。结论心衰患者心肌组织中存在NHE1 mRNA的高水平表达,血清PⅠCP、PⅢNP含量显著增加,提示NHE1可能在心衰的发生和发展过程中起着重要作用。     

人胰岛素样生长因子-Ⅰ转染脂肪间质干细胞向软骨细胞分化

目的 探讨人胰岛素样生长因子Ⅰ(hIGF-Ⅰ)转染脂肪间质干细胞(ADSCs)的效果及表达情况,探寻转染后ADSCs向软骨细胞分化的可能性. 方法 从兔颈后脂肪分离培养ADSCs,检测其生长特性.用Lipofectamine 2000介导将质粒pcDNA3.1+hlGF-Ⅰ转染ADSCs,转染后4～72 h、传代后和稳定转染后,分别用倒置显微镜观察细胞的生长情况,计算转染效率.ELISA检测上清液中hlGF-Ⅰ的浓度变化.免疫组化检测Ⅱ型胶原的表达.RT-PCR检测hIGF-Ⅰ mRNA和Western blot检测hIGF-Ⅰ蛋白表达情况.流式细胞仪检测细胞周期分布情况.结果细胞接种后4 h开始贴壁,呈长梭形,24 h时增多,呈集簇状分布.转染后增生活跃,倍增时间缩短.转染72 h后分泌hIGF-Ⅰ达高峰,为32.45 ng/ml,稳定转染后hIGF-Ⅰ保持恒定为28.36 ng/ml.转染后细胞出现多种形态共存.免疫组化证实有大量Ⅱ型胶原形成.hIGF-ⅠmRNA和hIGF-Ⅰ蛋白呈阳性表达.细胞周期中s期增加,与未转染组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论稳定转染后ADSCs可较长时间分泌较高浓度的hIGF-Ⅰ,能促进ADSCs的增殖、分化,并可形成软骨样物质.     

丙型肝炎病毒NS4B调控肝细胞增殖的相关机制研究

目的研究丙型肝炎病毒非结构蛋白4B（HCV-NS4B）对肝细胞IGF-Ⅱ、P16表达的影响,探讨HCV-NS4B对肝细胞增殖的影响及相关机制。方法转染载体PCXN2或PCXN2-NS4B至LO2肝细胞中,以正常LO2肝细胞为空白对照利用MTT法绘制空白载体PCXN2组及PCXN2-NS4B组细胞生长曲线,流式细胞仪检测各组细胞周期;利用放射免疫法测定各组的IGF-Ⅱ水平,RT-PCR检测P16的表达情况。结果 （1）PCXN2-NS4B质粒转染入LO2细胞并有稳定表达。（2）PCXN2-NS4B组与PCXN2组比较,细胞生长速度增加。（3）PCXN2组G0/G1期细胞比例高于PCXN2-NS4B组,而S期及G2/M细胞比例低于后者（P〈0.05或P〈0.01）。（4）空白对照组、PCXN2两组IGF-Ⅱ水平差异无统计学意义（P〉0.05）,但均显著低于PCXN2-NS4B组（P〈0.01）。（5）空白对照组、PCXN2两组P16表达差异无统计学意义,但均显著高于PCXN2-NS4B组（P〈0.01）。结论 PCXN2-NS4B质粒转染入肝细胞后有稳定表达,HCV-NS4B可能通过促进IGF-Ⅱ的表达及抑制P16表达而促进肝细胞异常增殖。     

降低B7-H3蛋白对受照肺癌细胞A549细胞周期和凋亡的影响

目的观察用小干扰RNA（siRNA）敲降B7-H3蛋白的表达对人肺癌细胞A549的细胞周期和凋亡的影响。 方法培养人肺癌A549细胞,将B7-H3蛋白siRNA瞬时转染于A549细胞（称为siB7-H3转染组）。实验分为4组,即对照组、siB7-H3转染组、照射组、照射+siB7-H3转染组。采用137Cs γ射线一次性照射,照射剂量为4 Gy;用Western blotting法和实时定量PCR分别检测B7-H3蛋白和mRNA的表达;流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的改变。 结果与对照组相比,siB7-H3转染组的B7-H3蛋白水平明显降低,mRNA表达量也明显低于对照组且差异有统计学意义（t=-4.222,P=0.013）。siB7-H3转染组细胞的G0/G1期细胞阻滞,S和G2/M期细胞数量减少;与对照组相比,照射组出现轻微的G0/G1期阻滞和明显的G2/M期细胞阻滞,照射+siB7-H3转染组的G0/G1、G2/M期均有明显的阻滞。照射后48 h,与对照组相比,照射组细胞的坏死率和凋亡率明显升高,siB7-H3转染组和照射+siB7-H3转染组的坏死率和凋亡率均无明显改变。 结论降低肺癌A549细胞中B7-H3蛋白表达水平可明显增加辐射诱导的G0/G1期阻滞,从而提示B7-H3表达水平的改变可能通过调节G0/G1细胞周期检查点而对肺癌细胞放射敏感性产生重要的调节功能。     

雌激素对骨质疏松性骨折愈合过程中基质mRNA表达的影响

目的：探索雌激素对骨质疏松性骨折愈合过程中基质I,II,III型胶原mRNA表达的影响,阐明雌激素促进骨质疏松性骨折愈合的机制。方法：选用168只2个月龄SD雌性大鼠,112只双侧卵巢切除（OVX）后,按雌激素替代治疗开始的时间,随机均分为长期激素替代治疗组（OVXE1组）和骨折后雌激素替代治疗组（OVXE2组）,其余56只为假手术组（S组）;1个月后所有大鼠在前肢左侧桡骨干制作1mm骨缺损的骨折愈合模型,右侧桡骨下端制作1mm骨缺损的骨折愈合模型,采用原位杂交技术,分析7,14,28,42,90,120,180d7个时间段雌激素对骨折修复过程中基质I,II,III型胶原mRNA表达的影响。结果：雌激素替代治疗下,骨基质I型胶原mRNA表达的量较雌激素缺乏时有一定的增加,但与S组比较差异仍有显著性意义;并且OVEX1组大于OVXF2组,III型胶原mRNA的表达变化则与之相反。结论（1）雌激素促进骨质疏松性骨折的愈合。（2）雌激素替代治疗开始的时间越早,越有利于骨折的愈合。     

人端粒相关蛋白T-STAR的克隆及其与端粒酶催化亚单位hTERT的相互作用研究

目的克隆人端粒相关蛋白T-STAR并研究其与端粒酶催化亚单位hTERT在哺乳细胞内的相互作用。方法构建表达载体pGBKT7-hTERT,以pGBKT7-hTERT为诱饵,采用酵母双杂交技术进行cDNA文库筛选;构建pVP16-T-STAR和pMhTERT重组载体,脂质体法将其与报告质粒共转染入胃腺癌细胞株SGC-7901,以pM-53 pVP16-T、pM3-VP16为阳性对照,以pM53 pVP16-CP为阴性对照;以pM-hTERT pVP16、pM pVP16-T-STAR、pM pVP16为交叉阴性对照。ELISA法检测报告基因CAT的表达。结果成功构建真核表达载体pGBKT7-hTERT,将获得的阳性克隆测序,并进行同源性比较证实为是已收录的人cDNA序列T-STAR。pGBKT7-hTERT和pVP16-T-STAR共转染之后,报告基因CAT的表达(A值为0.258)显著高于阴性对照(A值为0.002~0.015)。结论T-STAR与hTERT在胃癌细胞内发生了相互作用,T-STAR可能是人端粒相关蛋白新成员,通过hTER参与端粒酶活性的调控。