骨碎补对骨折愈合中TGF—β1表达的影响

目的：骨碎补是骨伤科常用的一味中药,为了进一步探讨其促进骨折愈合的机理,设计了该实验以期为临床运用骨碎补提供理论依据。方法：将36只SD大鼠随机分成三组：生理盐水组（A）、骨碎补组（B）、伤科接骨片组（C）。按标准骨折模型方法造模,不作任何外固定,分笼饲养,从手术后第二天开始灌胃给药,骨碎补组每天以骨碎补水煎液分早晚2次灌胃,伤科接骨片组每天给药2次,对照组同时给予等量生理盐水。于术后第7天、14天、21天每组分别处死动物4只,取出骨标本。骨标本制成切片测量骨痂厚度及TGF－β1免疫组化染色。结果：骨碎补组骨痂组织形成丰富,厚度明显优于对照组（P＜0.010;骨碎补组骨痂组织中TGF－β1表达量及阳性定位与伤科接骨片组相同,均明显强于对照组。结论：实验结果表明骨碎补能增加骨痂厚度,提高骨折愈合质量。增加TGF－β1在骨痂组织中的表达,可能是骨碎补促进骨折愈合的的机制之一。     

骨碎补对骨折愈合中血生化指标及TGF-β_1表达的影响

为了进一步探讨骨碎补促进骨折愈合的机理。将 36只 SD大鼠随机分成生理盐水组 (A)、骨碎补组 (B)和伤科接骨片组(C) 3组 ,造成骨折模型后 ,分别给于生理盐水、骨碎补水煎液、伤科接骨片混悬液。术后第 7、14和 2 1天每组各处死动物 4只 ,取血并取出骨标本 ,进行血生化指标检测及骨切片 TGF-β1 免疫组化染色。结果显示骨折愈合过程中 ,骨碎补组血钙、磷浓度乘积显著高于对照组 (P<0 .0 1) ,血清 AL P活性始终高于对照组 (P<0 .0 1)。骨碎补组骨痂组织中 TGF- β1 免疫组化染色明显强于对照组。根据实验结果 ,推测骨碎补促进骨折愈合的机理可能有以下几方面 :1提高血钙、磷的浓度乘积 ,促进钙磷沉积 ;2增强机体内成骨活动 ,提高血清 AL P的活性 ;3增加 TGF-β1 在骨痂组织中的表达 ,促进骨折愈合     

骨碎补对骨折愈合中TGF-β_1表达的影响

目的 :骨碎补是骨伤科常用的一味中药 ,为了进一步探讨其促进骨折愈合的机理 ,设计了该实验以期为临床运用骨碎补提供理论依据。方法 :将 3 6只 SD大鼠随机分成三组 :生理盐水组 (A)、骨碎补组 (B)、伤科接骨片组 (C)。按标准骨折模型方法造模 ,不作任何外固定 ,分笼饲养。从手术后第二天开始灌胃给药 ,骨碎补组每天以骨碎补水煎液分早晚 2次灌胃 ,伤科接骨片组每天给药 2次 ,对照组同时给予等量生理盐水。于术后第 7天、1 4天、2 1天每组分别处死动物 4只 ,取出骨标本。骨标本制成切片测量骨痂厚度及 TGF-β1 免疫组化染色。结果 :骨碎补组骨痂组织形成丰富 ,厚度明显优于对照组 (P<0 .0 1 ) ;骨碎补组骨痂组织中 TGF-β1表达量及阳性定位与伤科接骨片组相同 ,均明显强于对照组。结论 :实验结果表明骨碎补能增加骨痂厚度 ,提高骨折愈合质量。增加 TGF-β1 在骨痂组织中的表达 ,可能是骨碎补促进骨折愈合的机制之一。     

“接骨灵”对家兔骨折愈合相关血生化学指标的影响

本实验取家兔８０只,雌雄各半,制备骨折模型后,按体重随机分为５组,药组内服接骨灵（分高、中、低剂量组）、伤科接骨片;空白对照组不用任何药物。骨折后２ｗ、４ｗ、６ｗ分别经耳缘静脉采血,行血清碱性磷酸酶、血钙及血磷含量检查,观察其对骨折愈合的影响。实验结果提示：接骨灵能够增加血清磷酸酶的活性,降低血钙,升高血磷和钙磷乘积,从而说明其具有促进骨折愈合的作用。     

生骨紫金丹在骨折愈合过程中对TGF—β1和bFGF影响的实验研究

目的：探讨生骨紫金丹的作用机理，为其进一步临床应用提供依据。方法：将Wistar大鼠72只造骨折模型后随机分为模型空白组，生骨紫金丹组，阳性对照组。于造模后第2周、3周、4周取局部骨痂制成石蜡切片，以免疫组化技术显示TGF—β1和bFGF，进行图象定量分析。结果：在骨折愈合过程，骨痂中可见TGF—β1和bFGF的阳性表达，灰度测定结果显示在第2周、3周TGF—β1和bFGF的阳性表达强度生骨紫金丹组和阳性对照组与模型空白组有高度显著性差异（P〈0．01）。结论：生骨紫金丹能促进TGF—β1和bFGF的表达，促进骨折愈合。     

芪术颗粒对大鼠肝纤维化模型TGF—β1、EGF表达的影响

目的观察芪术颗粒对肝纤维化模型大鼠肝组织TGF-β1、EGF表达的影响.方法人血白蛋白免疫致敏法建立大鼠肝纤维化模型,用芪术颗粒治疗3个月,取肝组织用原位杂交方法检测TGF-β1、EGF的表达信号,MPEAS-500型图像分析仪进行图像分析.结果芪术颗粒治疗组TGF-β1、EGF表达较模型组弱,信号面积比分别为1.85±0.94和2.51±1.03,明显低于模型组的3.56±1.29和3.89±1.26.结论芪术颗粒通过抑制TGF-β1、EGF的基因表达,使胶原蛋白合成减少,从而减轻肝纤维化的程度.     

祛瘀接骨丸对兔胫骨骨折愈合过程中生化指标的影响

目的 观察祛瘀接骨丸对家兔胫骨骨折模型愈合过程中血清钙（Ca）、磷（P）及碱性磷酸酶（AKP）的影响,研究祛瘀接骨丸促进骨折愈合的机制.方法 采用健康大耳白色家兔36只,制成双侧胫骨中1/3标准骨折模型,按随机原则分为对照组和实验组,分别予0.9％氯化钠注射液、祛瘀接骨丸灌胃治疗,于术后10d、20d、30 d定期检查血中Ca、P、AKP含量.结果 术后10d实验组与对照组比较,血清生化指标差异无统计学意义（P＞0.05）;术后20 d和30 d,实验组血清生化指标中,AKP活性增强（P＜0.05）,P含量显著升高（P＜0.05）,Ca、P乘积明显升高（P＜0.05）.结论 祛瘀接骨丸能增强AKP活性,促进成骨细胞活动,提高Ca、P乘积,促进钙盐沉积,从而促进骨折愈合.     

“接骨灵”对家兔骨折愈合相关血生化学指标的影响

本实验取家兔 80只 ,雌雄各半 ,制备骨折模型后 ,按体重随机分为 5组 ,给药组内服接骨灵 (分高、中、低剂量组 )、伤科接骨片 ;空白对照组不用任何药物。骨折后 2 w、4 w、6w分别经耳缘静脉采血 ,行血清碱性磷酸酶、血钙及血磷含量检查 ,观察其对骨折愈合的影响。实验结果提示 :接骨灵能够增加血清磷酸酶的活性 ,降低血钙 ,升高血磷和钙磷乘积 ,从而说明其具有促进骨折愈合的作用。     

补肾活血方对实验性骨折愈合过程中IGF—1的影响

目的 观察补肾活血方对实验性骨折愈合过程中血清胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）的影响。方法 选择７月龄ＳＤ大鼠,随机分为治疗组和对照组,每组各１２只。手术方法建立骨折实验模型后,治疗组动物每次给服补肾活血方药液２０ｇ．ｋｇ＾－１,连续２８天。对照组给服等容量生理盐水。分别于药后１４、２８天检测血清ＩＧＦ－１浓度,并进行骨痂组织骨密度（ＢＭＤ）测定,骨痂组织力学强度测试。结果 血清ＩＧＦ－１浓度在     

鹿茸对实验型骨折愈合过程中TGF-β1的表达影响

目的:观察应用鹿茸对骨折愈合过程中TGF-β1的表达变化,探讨其促进骨折愈合的机理.方法:将60只雄性大鼠随机分为4组,生理盐水组A、伤科接骨片组B、鹿茸低剂量组C、鹿茸高剂量组D.按标准模型方法造模,不作任何固定,分笼饲养,术后第2d灌药,于术后7、14、21d分别将每组处死5只大鼠,取出骨标本,制成切片.测量骨痂厚度,利用免疫组化染色及图像分析测定TGF-β1表达强度.结果:在骨折愈合过程中,实验组和对照组的骨痂厚度及骨痂组织中TGF-β1的含量存在着差异,实验组和伤科接骨片组的染色峰值出现在第2周,对照组出现在第3周.结论:高剂量鹿茸能够增加和加快TGF-β1在骨痂组织中表达,并能提高大鼠骨折端骨痂厚度,提高骨折愈合质量,可能为鹿茸促进骨折愈合的机制之一.     

补肾复方含药血清对大鼠成骨细胞OPG、ODF表达的影响

为研究补肾复方对大鼠成骨细胞OPG、ODF表达影响。以补肾活血方、补肾健脾方、龟鹿二仙膏、金匮肾气丸、六味地黄丸、左归丸6种补肾中药复方及生理盐水给体重为250g左右的大鼠灌胃,提取含药血清;采用酶消化法从初生2天SD大鼠头盖骨中分离出成骨细胞,用含药血清及生理盐水进行成骨细胞传代培养;取第2代细胞,培养至细胞铺满培养瓶约80%时,更换含药血清培养液24小时;用含药血清培养液24小时后终止培养,提取总RNA,应用RT-PCR方法观察六种补肾复方对大鼠成骨细胞OPG、ODF表达影响。结果显示补肾活血方、补肾健脾方、金匮肾气丸、六味地黄丸和左归丸含药血清培养的大鼠成骨细胞OPG的表达量高于生理盐水对照组,龟鹿二仙膏含药血清培养的大鼠成骨细胞OPG的表达量低于生理盐水对照组,其中补肾活血方组、补肾健脾方组大鼠成骨细胞OPG表达量明显高于生理盐水对照组,统计学有显著性差异(P<0.05)。6种补肾复方含药血清培养的大鼠成骨细胞ODF表达量均低于生理盐水对照组,其中补肾活血方组、补肾健脾方组和金匮肾气丸组大鼠成骨细胞ODF表达量明显低于生理盐水对照组,统计学有显著性差异(P<0.05)。表明补肾活血方、补肾健脾方含药血清能增加大鼠成骨细胞OPG表达量,降低大鼠成骨细胞ODF表达量。     

补肾方对成骨细胞生长因子TGF—β1mRNA表达的影响

为探讨补肾方对成骨细胞转化生长因子－β（TGF-β1）mRNA表达的影响，将体外分离培养的新生SD大鼠的颅骨成骨细胞加入不同浓度的7能中药密骨片药液（100－10000μg.ml^-1）及阳性对照药物重组碱性成纤维细胞生长因子（rbFGF）。24小时后，利用自行制备的地高辛标记的鼠TGF－β1cDNA探针进行成骨细胞的核酸分子原位杂交分析，以其细胞内杂交阳性颗粒的平均光密度值代表TGF－β1mRNA的表达水平。结果显示随着密骨片药液浓度的增加，成骨细胞内TGF－β1mRNA表达明显高于阴性对照组；但500和1000μg.ml^-1的密骨片药液组的TGF－β1光密度值与5ng.ml^-1的bFGF组比较无明显差异9P＞0．05）。表明补肾中药密骨片可刺激成骨细胞TGF－β1的分泌和合成，从而促进骨形成和抑制骨吸收。这可能是该方能有效地防治骨质疏松的疗效机理之一。     

补阳还五汤对骨折模兔血液成份和血清生化的影响

为探讨补阳还五汤促进骨折愈合的机制,选新西兰大白兔60只,随机分为对照组及实验组。实验组人工折骨造模,并分别于造模后第7、14、2、35、49天进行成份及血清生化含量测定。结果显示实验组血液成份与对照组相比,在各观察时间段内均无统计学差异;而血清生化指标比较,实验组血清钙浓度于术后7、14、21、49天高于对照组,碱性磷酸酶浓度在术后第7、14、2、35天高于对照组（P＜0．05或P＜0．01）。表明补阳还五汤可能是通过提高血清钙及碱性磷酸酶的含量,促进骨折愈合的。     

含药血清对成骨细胞矿化结节及Ⅰ型胶原形成的影响

为了解骨康对成骨细胞及骨形成的影响,采用从新生大鼠颅骨中分离出的成骨细胞,用酶法建立成骨细胞体外培养体系,观到中药含药血清对成骨细胞矿化结节和Ⅰ型胶原的影响。结果发现成骨细胞培养加合药血清后,成骨细胞内Ⅰ型胶原表达升高。说明含药血清可促进成骨细胞合成Ⅰ型胶原,从而促进骨形成。     

辛伐他汀对成骨细胞一氧化氮合酶的影响

为观察辛伐他汀对成骨细胞一氧化氮合酶(NOS)表达及成骨能力的影响,探讨辛伐他汀刺激成骨细胞的作用机制.体外培养新生SD大鼠成骨细胞,A组加入辛伐他汀,B组加入辛伐他汀和一氧化氮生成抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME),C组作空白对照.检测成骨细胞中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达及碱性磷酸酶(ALP)活性,测定培养基中一氧化氮(NO)及骨钙素(BGP)含量.结果A组成骨细胞中eNOS mRNA表达及ALP活性,培养基中NO及BGP含量均高于C组,差异有显著性(P《0.05),B组与C组无明显差异.认为辛伐他汀的成骨作用可能与其促进成骨细胞NOS合成有关.     

INFLUENCE OF GUASHA ON THE EXPRESSION OF NOS, 5-HT AND HA IN LOCAL TISSUE

Objective: To investigate the influence of scraping therapy(Guasha) on the chemical expression of local tissue by using fluorescent immunohistochemical technique.Methods: Rats were used in this experiment.The skin on both sides of spinal column was exposed by shearing wool from the back of the rats.Subsequently, Guasha was carried out on the area along a side of spinal column from the rear to the front, the corresponding site of urinary bladder meridian in the human body.After shazhen(subcutaneous hemorrhage showed in scattered red spots on the skin) appeared, the local tissues of shazhen and the control of contralateral side were dissected following perfusion with 4% paraformaldehyde, and then 25% sucrose solution was used.Serial tissue sections were cut at a thickness of 20 mm on a cryostat.The chemical expression of the tissue was demonstrated by using fluorescent immunohistochemical staining for nitrogen monoxide synthetase(NOS), 5-hydroxytryptamine(5-HT) and histamine(HA).Results: The positive labeling of NOS, 5-HT and HA strongly expressed on the tissues with shazhen, but weakly on the tissues of the control.Comparatively, these chemical elements on the tissues with shazhen were significantly higher than that of the control.Conclusion: These results indicate that Guasha plays a role in up-regulating the level of NOS, 5-HT and HA in the local tissue.Therefore, it suggests that these chemical elements may be of important biological effect during the process of Guasha.     

熏洗方对大鼠骨折后期僵硬关节滑膜Ⅲ型胶原mRNA及TGFβ1表达的影响

为探讨熏洗方治疗大鼠骨折后期关节僵硬的作用机理.以Wistar大鼠制作骨折后期关节僵硬模型,用dot blot杂交法和ELISA法分别测定踝关节滑膜Ⅲ型胶原mRNA表达水平及TGF-β1含量.结果显示模型组Ⅲ型胶原mRNA及TGFβ1水平明显升高,与正常对照组比较差异有显著性(P＜0.01,P＜0.05);功能组和中药组Ⅲ型胶原mRNA、TGFβ1水平明显降低,与模型组比较差异有显著性(P＜0.01);中药组Ⅲ型胶原mRNA、TGFβ1水平显著低于功能组(P＜0.05).表明大鼠骨折后期关节僵硬滑膜Ⅲ型胶原mRNA及TGFβ1水平异常改变;降低Ⅲ型胶原mRNA及TGFβ1水平可能是熏洗方治疗骨折后期关节僵硬的重要机制之一.     

针刺影响慢性脊髓损伤大鼠脊髓组织神经生长因子及其受体的表达

为探索针刺治疗慢性脊髓损伤的作用机理,采用大鼠后路渐进性脊髓压迫动物模型,然后手术减压,并进行电针治疗.观察联合行为评分(CBS)、体感诱发电位和神经生长因子(NGF)及其受体的免疫组化变化.结果发现脊髓损伤后NGF和TrkA在神经元及胶质细胞表达增强,经过电针治疗后,NGF和TrkA在神经元和胶质细胞的表达下降;体感诱发电位检测和CBS评分显示,电针组明显优于减压组,电针组与减压组比较统计学差异具有显著性(P＜0.05).表明电针治疗促进脊髓损伤大鼠的行为功能恢复是通过内源性神经生长因子及其受体TrkA介导起作用的.     

活骨胶囊含药血清对软骨细胞金属蛋白酶分泌的影响

为研究活骨胶囊对软骨细胞金属蛋白酶分泌的影响作用,取24孔软骨细胞培养板分为含空白兔血清组、兔血清对照组、活骨胶囊组、西乐葆组及兔血清 IGF-1 3ng·ml-1组、兔血清 IGF-1 10ng·ml-1组,除空白兔血清组外其他各组各孔中同时分别加入100U·ml-1 IL-1β,培养5天后收集各孔上清液,采用ELISA法检测MMP-1、MMP-13、TIMP-1水平.结果表明活骨胶囊含药血清可调节由IL-1β诱导软骨细胞产生的MMP及TIMP-1分泌水平,使其处于平衡状态.     

针刺影响大鼠慢性脊髓损伤神经递质的表达

为探讨针刺治疗慢性脊髓损伤的作用机理 ,采用大鼠后路渐进性脊髓压迫法造成动物模型 ,然后手术减压 ,并进行电针治疗。通过观察联合行为评分 (CBS)及胆碱乙酰转移酶 (Ch AT)的免疫组化检测 ,对实验动物进行评价。结果脊髓损伤后 Ch AT免疫组化染色阳性细胞数减少 ,CBS升高 ;经过电针治疗后 ,Ch AT阳性细胞数增多 ,CBS也下降。电针组与减压组比较 ,在统计学上具有显著差异 (P<0 .0 5 )。表明电针治疗可以促进脊髓损伤大鼠脊髓神经元合成 Ch AT,从而合成更多的运动神经递质乙酰胆碱 ,加速实验动物的行为功能的恢复