聚合酶链反应扩增伤寒患者粒细胞中伤寒沙门菌DNA

目的建立适用于临床应用的血中伤寒沙门菌（Ｓ．ｔｙｐｈｉ）ＤＮＡ扩增的方法。方法分离患者粒细胞，采用裂解法制备模板ＤＮＡ，单管套式聚合酶链反应扩增Ｓ．ｔｙｐｈｉ鞭毛基因。结果６例血培养阴性而临床拟诊伤寒及２３例由血培养确诊的伤寒患者粒细胞均获得了３４３ｂｐ的扩增产物，其他３４例发热待查患者粒细胞无扩增产物出现。连续１１０稀释Ｓ．ｔｙｐｈｉＤＮＡ，最低可检测到４０ｆｇＤＮＡ（约１０个菌）。扩增产物的ＤＮＡ序列测定结果也证实了３４３ｂｐ的扩增产物是Ｓ．ｔｙｐｈｉ鞭毛基因。结论该方法是一项简便、省时、灵敏和特异的实验室诊断伤寒的新技术，尤其对培养阴性的伤寒患者可提供早期、快速的实验室诊断，套式扩增反应在同一反应管中完成，能有效避免标本间的污染。     

聚合酶链反应扩增STY3671基因鉴别伤寒与甲型副伤寒沙门菌

目的 评价伤寒沙门菌基因STY3671用于特异性检测该血清型沙门菌的可能性。 方法 根据伤寒沙门菌与甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白质组比较得到的伤寒沙门菌特异性蛋白点编码基因STY3671的序列设计引物,提取伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌以及其他非伤寒沙门菌血清型菌株的基因组DNA进行PCR检测, 对引物特异性和灵敏性进行分析。 结果 检测的184株伤寒沙门菌均得到807 bp长度片段,部分菌株扩增产物测序结果与伤寒沙门菌标准株CT-18一致。146株甲型副伤寒沙门菌以及其余163株其他血清型沙门菌均未扩增出该片段。 结论 STY3671基因能够作为特异性检测伤寒沙门菌的靶标,能够区别于甲型副伤寒沙门菌及其他常见非伤寒沙门菌血清型,在发热患者的伤寒沙门菌感染诊断、尤其使用血液标本检测中具有良好的潜在价值。     

利用实时荧光定量-聚合酶链反应方法检测粪便标本中的伤寒沙门菌

目的 建立针对粪便标本中伤寒沙门菌的检测方法,评价该方法的特异性、敏感性及检测下限,以提高感染人群粪便标本中伤寒沙门菌的检出率。 方法 根据伤寒沙门菌特异基因STY1633设计特异性引物,优化反应条件,建立实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qPCR)反应体系。利用92株常见的非伤寒病原菌及44株伤寒沙门菌的染色体DNA评价该方法的特异性和灵敏性,并对伤寒沙门菌的粪便模拟标本进行检测下限评价,同时利用10份伤寒患者粪便标本及48份其他病原所致发热和/或伴腹泻的患者粪便标本进行特异性、敏感性验证。 结果 利用本方法检测的伤寒沙门菌纯菌及伤寒患者标本均扩增阳性,其余的非伤寒沙门菌、致腹泻的其他5种肠道致病菌及引起发热症状的8种常见非肠道病原菌纯菌及相应患者标本均扩增阴性。在对纯伤寒沙门菌DNA检测中,qPCR法的最低检测限为500 fg/反应,相当于97个拷贝/反应。以粪便模拟样品提取DNA为模板的检测中,增菌前检测下限达104 cfu/g,增菌后可达50 cfu/g。 结论 基于STY1633基因的实时荧光定量PCR方法在检测粪便中的伤寒沙门菌中具有很好的特异性、灵敏度,为伤寒沙门菌的快速诊断及某些不明原因发热及腹泻症状的病原初步鉴定提供了新的简便型手段,对于伤寒的早期诊断及预防控制提供了技术支持。     

聚合酶链反应检测伤寒少门菌

用ＰＣＲ技术通过两对引物扩增伤寒沙门菌鞭毛抗原基因ＶＩ区一段特异性ＤＮＡ片段，并用非伤寒沙门菌作对照，结果仅伤寒沙门菌为阳性。实验表明，经二次扩增，当反应体系中达１０＾１／ｍｌ个伤寒沙门菌时，即可检出。     

荧光探针杂交聚合酶链反应检测沙门菌

近来,国内外文献中报道了一种新的荧光标记探针杂交与聚合酶链反应(ＰＣＲ)扩增相结合的检测方法[14],该方法快速、敏感、特异,并能自动化操作,但由于试剂盒和配套自动荧光ＰＣＲ检测仪价格昂贵,使之不能被很好的应用。鉴此,我们在参考文献的基础上,改进方法,在国内现有仪器设备上,建立了荧光探针杂交ＰＣＲ同步检测方法,报告如下。一、材料和方法1菌种:13株致病性沙门菌及7株非沙门菌为临床分离株。2主要试剂和试验器材:ＴａｑＭａｎＳａｌｍｏｎｅｌｌａＰＣＲＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎＤｅｔｅｃｔｉｏｎＫｉｔ(ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ…     

应用聚合酶链反应法检测食品中的沙门菌

目的建立食品中沙门菌聚合酶链反应（PCR）的快速检测方法。方法根据沙门菌invA基因序列设计引物;氯化镁孔雀绿选择性增菌0到8h后,煮沸法提取DNA,用PCR扩增电泳。结果PCR法能特异性检测出食品中的沙门菌,扩增片段为389bp,增菌前的检出限为10^2CFU／g,增菌后为2CFU／25g。结论应用PCR检测沙门菌具有快速、特异、灵敏和简便的特点。     

聚合酶链反应扩增伤寒患者粒细胞中伤寒沙门菌DNA

目的 建立适用于临床应用的血中伤寒沙门菌（Ｓ．ｔｙｐｈｉ）ＤＮＡ扩增的方法。方法分离患者粒细胞，采用裂解法制备模板ＤＮＡ，单管套式聚合酶链反应扩增Ｓ．ｔｙｐｈｉ鞭毛基因。结果 ６例血培养阴性而临床拟诊伤寒及２３例由血培养确诊的伤寒患者粒细胞均获得了３４３ｂｐ的扩增产物，其他３４例发热待查患者粒细胞无扩增产物出现，连续１：１０稀释Ｓ．ｔｙｐｈｉＤＮＡ，最低可检测得到４０ｆｇＤＮＡ（约１０个菌）扩增产     

利用双重TaqMan荧光定量聚合酶链反应技术鉴别诊断粪便标本中的伤寒和甲型副伤寒沙门菌

目的建立针对粪便标本中伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌的检测方法,评价该方法的特异性、敏感性及检测下限,以提高感染人群粪便标本中两种病原的检出效率。方法分别根据伤寒沙门菌特异基因STY1633及甲型副伤寒沙门菌特异基因SPA4289设计特异性引物及探针,优化反应条件,建立双重TaqMan荧光定量聚合酶链反应(dual taqman fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)体系。利用44株伤寒沙门菌、30株甲型副伤寒沙门菌、88株其他血清型沙门菌染色体DNA及引起发热的其他病原菌,评价该方法的特异性和灵敏性,并对伤寒沙门菌及甲型副伤寒沙门菌的粪便模拟标本进行检测下限评价,同时利用10份伤寒患者、20份甲型副伤寒患者及48份其他病原所致发热和/或伴腹泻的患者粪便标本进行特异性、敏感性验证。结果利用本方法检测的伤寒、副伤寒沙门菌纯菌及伤寒、甲型副伤寒患者标本扩增阳性,其余的非伤寒沙门菌、致腹泻的其他5种肠道致病菌及引起发热症状的8种常见非肠道病原菌纯菌及相应患者标本均扩增阴性。在对纯伤寒沙门菌DNA及甲型副伤寒沙门菌DNA检测中,双重TaqMan荧光定量PCR法的最低检测限分别为1 pg/反应(194拷贝/反应)及2.5 pg/反应(485拷贝/反应)。以粪便模拟样品提取DNA为模板的检测中,增菌前伤寒沙门菌检测下限达102cfu/g,增菌后可达1 cfu/g;增菌前甲型副伤寒沙门菌检测下限达104cfu/g,增菌后可达10 cfu/g。结论本研究建立了特异性好、灵敏度高的检测粪便中伤寒沙门菌及甲型副伤寒沙门菌的双重TaqMan荧光定量PCR方法,为伤寒及甲型副伤寒疾病的同时快速诊断及鉴别诊断、某些不明原因发热及腹泻症状的病原的初步鉴定提供了简易手段。     

荧光探针杂交-聚合酶链反应检测沙门菌的研究及应用

目的建立一种快速检测沙门菌的荧光探针杂交-聚合酶链反应(PCR)方法.方法利用Taq DNA聚合酶的5'-3'核酸外切酶活性降解特异性杂交于模板上的荧光标记探针,导致荧光强度的改变,通过检测荧光强度分析PCR扩增产物.结果选用13株常见致病性沙门菌和7株非沙门菌进行特异性分析,所有沙门菌的荧光△RQ值介于3～8之间,而所有非沙门菌的荧光△RQ值均小于1;在敏感性分析中,采用菌落CFU计数法,最低限度可检测到每PCR扩增体系中含2.25 CFU的沙门菌;与传统细菌培养鉴定方法对照,对40份各种标本进行沙门菌的检测,结果该方法的特异性为100%,敏感性为93.1%,两种方法的符合率为95%.结论用荧光探针杂交-PCR检测沙门菌,是一种快速、敏感的方法.     

荧光探针杂交—聚合酶链反应检测沙门菌的研究及应用

目的：建立一种快速检测沙门菌的荧光探针杂交－聚合酶链反应（PCR）方法，方法：利用Taq DNA聚合酶的5‘-3‘核酸外切酶活性降解特异性杂交于模板上的荧光标记探针，导致荧光强度的改变，通过检测荧光强度分析PCR扩增产物。结果：选用13株常见致病性沙门菌和7株非沙门菌进行特异性分析，所有沙门菌的荧光ΔRQ值介于3－8之间，而所有非沙门菌的荧光ΔRQ值均小于1，在敏感性分析中,采用菌落CFU计数法，最低限度可检测到每PCR扩增体系中含2．25CFU的沙门菌，与传统细菌培养鉴定方法对照，对40份各种标本进行沙门菌的检测，结果该方法的特异性为100％，敏感性为93．1％，两种方法的符合率为95％，结论：用荧光探针杂交PCR检测沙门菌，是一种快速，敏感的方法。     

鼠伤寒沙门菌对喹诺酮类耐药机制研究与基因分型

目的 检测鼠伤寒沙门菌（STM）对喹诺酮类药物的耐药性及耐药机制分析。方法 收集2004年7月1日至10月31日武汉地区4所医院门诊腹泻患者的可疑稀便分离培养出STM33株；琼脂稀释法测其对喹诺酮类药物的最低抑菌浓度（MIC）；抽提细菌基因组DNA，聚合酶链反应（PCR）检测喹诺酮类抗菌药物作用于STM的靶位点；REP-PCR对33株STM进行基因分型。结果 33株STM中有24株对环丙沙星产生较高耐药性（MIC4～16μg/ml），24株耐药株中gyrA位点全都发生突变点，且双重突变占92％，parC位点发生突变率为91．6％；5株STM耐药株（MIC≥8μ/ml）parE和gyrB位点发现有碱基插入；基因分型达9种。结论 武汉地区社区内STM对喹诺酮类药物的耐药性严重，其主要机制是喹诺酮类耐药决定区（QRDR）的基因突变，特别是多个位点同时突变导致高水平耐药；提示有社区流行趋势。     

162株伤寒沙门菌耐药性的检测

１６２株伤寒沙门菌耐药性的检测杨华富，程淑芹（江苏省卫生防疫站，南京２１０００９）关键词：伤寒沙门菌，耐药性为了解我省伤寒沙门菌的耐药情况，我们从本省扬州、苏州、无锡、南通、镇江、淮阴、南京等地区选择近年来分离的１６２株伤寒沙门菌临床株（或流行株）作...     

基于单基因的实时荧光定量反转录-聚合酶链反应定性检测猪霍乱沙门菌

目的 建立基于单基因的猪霍乱沙门菌的实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)检测方法。方法 通过对猪霍乱沙门菌基因组及其他血清型沙门菌基因组、人类基因组的生物信息学比对及普通PCR检测分析,获得猪霍乱沙门菌特有而其他细菌及人类基因组中不存在的特异基因SC 1242,针对该基因设计特异性引物,通过优化反应条件,建立检测该靶基因的rRT-PCR方法,利用123株多种血清型沙门菌及非沙门菌菌株RNA评价该方法的特异性及敏感性。同时对猪霍乱沙门菌全血模拟标本进行敏感性检测。结果 利用该方法检测20株猪霍乱沙门菌均为阳性,其余菌株均扩增阴性。对纯菌RNA检测中,rRT-PCR的最低检测限度为50 fg/反应,约为96个拷贝/反应。在以全血模拟样品提取核酸为模板的检测中,敏感性达90 cfu/ml。结论 rRT-PCR方法检测猪霍乱沙门菌特异性好、灵敏度高,对猪霍乱沙门菌的早期诊断具有潜在应用价值。     

实时荧光定量聚合酶链反应检测沙门菌（A～F群）方法的建立和应用

目的 建立实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测沙门菌,评价其优越性.方法 根据沙门菌保守的HilA基因序列合成引物和探针,建立快速检测沙门菌的实时荧光定量PCR.结果 所建立的实时荧光定量PCR具有简便、快速、敏感性高、特异性强、抗干扰性好和可重复性强等特点,与实际应用检测结果相符.结论 建立的实时荧光定量PCR可用于口岸食品和公共场所从业人员的沙门菌检测.     

实时荧光定量聚合酶链反应检测沙门菌(A～F群)方法的建立和应用

目的建立实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测沙门菌,评价其优越性。方法根据沙门菌保守的H ilA基因序列合成引物和探针,建立快速检测沙门菌的实时荧光定量PCR。结果所建立的实时荧光定量PCR具有简便、快速、敏感性高、特异性强、抗干扰性好和可重复性强等特点,与实际应用检测结果相符。结论建立的实时荧光定量PCR可用于口岸食品和公共场所从业人员的沙门菌检测。     

利用荧光定量聚合酶链反应快速检测沙门菌

沙门菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一,其病原沙门菌属肠杆菌科,包括那些可引起食物中毒、胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。人畜感染后可呈无症状带菌状态,也可表现为有临床症状的致死疾病。     

斑点酶联免疫吸附试验检测伤寒沙门菌特异性抗体

为提高伤寒沙门菌抗体检测的敏感性和特异性，我们用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）测定伤寒沙门菌包膜抗原Ｖｉ，菌体抗原Ｏ９和鞭毛抗原Ｈｄ的特异性抗体，并与肥达反应相比较，效果满意，报告如下。１　材料与方法１．１　研究对象　血培养检出伤寒沙门菌患者血清１４例，双份血清肥达反应效价升高４倍以上的伤寒患者血清２例，疑似伤寒发热病人血清２０例，非伤寒发热病人血清４０例，健康对照血清４０例。１．２　试剂１．２．１　羊抗人辣根过氧化物酶标抗体　购自华美生物工程公司。１．２．２　沙门菌属诊断血清　购自…