胶质源性神经营养因子对大鼠脊髓不完全损伤后运动功能的保护作用

目的：探讨胶质源性神经营养因子（GDN）对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的影响。方法：动物分为对照组、假手术组、生理盐水（NS）组及GDNF组,改良Allen方法致脊髓不完全损伤,蛛网膜下腔分别给予NS及GDNF20μl,伤后1d ,3d,7d,10d,14d及21d评定下肢运动功能（Tarlov评分及Rivlin斜板）。结果：假手术组与对照组、假手术组自身无明显变化（P＞0．05）,NS组及GDNF组伤后运动功能明显障碍。NS组14d、GDNF组7d以后脊髓功能明显改善,10d以后GDNF组运动功能改善显著超过NS组（P＜0．01）。结论：GDNF能够救损伤脊髓运动神经元,促进不完全脊髓损伤运动功能的恢复。     

银屑病患者骨髓基质细胞分泌干细胞因子和粒细胞集落刺激因子的水平

背景:课题组在前期研究中发现银屑病患者骨髓造血细胞活性存在异常.目的:观察银屑病患者骨髓基质细胞分泌干细胞因子和粒细胞集落刺激因子的水平.设计、时间及地点:病例一对照观察,于2007-10/2008-08在太原市中心医院皮肤科实验室完成.对象:选择太原市中心医院皮肤科临床及病理确诊为寻常型锹屑病的门诊患者24例,男16例,女8例;年龄16-59岁;另取血液科骨穿后经筛选的正常骨髓20例作为对照组,性别、年龄与银屑病患者匹配.方法:采用密度梯度离心法分离银屑病患者与对照组骨髓单一核细胞,通过贴壁法培养骨髓基质细胞,收集传了3代后又培养72 h的骨髓基质细胞及培养上清.主要观察指标:流式细胞仪检测细胞表面标志并用ELISA法榆测上清液中干细胞因子和粒细胞集落刺激因子的水平.结果:流式细胞仪检测结果显示,90%以上细胞表面抗原高表达CD29,而CD34、CD45及HLA-DR表达阴性,即骨髓基质细胞纯度在90%以上.银屑病组骨髓基质细胞培养上清液的干细胞因子和粒细胞集落刺激因子表达均显著高于对照组(P＜0.01).结论:银屑病患者骨髓基质细胞分泌干细胞因子和粒细胞集落刺激因子存在异常,提示银屑病患者骨髓造血微环境发生了改变.     

粒细胞集落刺激因子对脑缺血大鼠骨髓干细胞分布及脑保护作用的影响

目的 研究人重组粒细胞集落刺激因子(rG-CSF)对骨髓干细胞(BMSCs)在脑缺血大鼠血液和脑组织中的分布变化及抗脑缺血损伤的影响.方法 将106只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(10只)、模型组(48只)、rG-CSF组(48只),后两组再分为术后2、3、7、14 d亚组,每个亚组12只.用改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型.rG-CSF组于术前3 d和术后2 d皮下注射rG-CSF 10μg/kg,假手术组和模型组给予等量生理盐水,均每日1次.术后各时间点进行神经功能评分;取腹主动脉血,测定外周血白细胞计数(WBC)及CD34+细胞计数;观察脑组织病理改变;并用免疫组化法测定脑组织CD34+细胞表达.结果 ①制模后2 d大鼠神经功能评分即显著降低,随后逐渐升高;rG-CSF组术后7 d和14 d神经功能评分(分)较模型组显著增高(7 d:11.86±0.69比10.53±0.76,14 d:13.38±0.52比12.38±0.52,均P<0.01).②制模后2 dSb周血WBC和CD34+细胞计数即显著增加,3 d达峰值,7 d和14 d降低;除14 d CD34+细胞计数外,rG-CSF组其余时间点WBC和CD34+细胞计数均较模型组明显增加[WBC(×109/L)2 d:11.75±1.76比8.07±1.27,3 d:13.07±1.70比10.88±1.78,7 d:8.63±1.36比5.58±1.57,14 d:6.98±0.98比4.87±0.92;CD34+细胞计数(个/μl)2 d:8.83±2.14比3.17±0.75,3 d:13.50±1.87比5.00±1.55,7 d:5.33±1.21比2.33±1.21,P<0.05或P<0.013.③制模后2 d大鼠脑组织CD34+细胞表达即明显增强,7 d达峰值,14 d降低;rG-CSF组各时间点CD34+表达[吸光度(A)值]均较模型组显著增加(2 d:43.21±4.41比22.04±2.95,3 d:45.79±1.76比25.69±2.44,7 d:52.09±2.86比33.04±2.62,14 d:29.73±1.99比16.91±2.95,均P<0.01).④rG-CSF组脑组织病理损伤较模型组减轻,以14 d改善明显.结论 脑缺血可引起BMSCs进入外周血及向脑组织归巢,其在外周血和脑组织的变化呈先增多再减少的特点,分别于缺血后3 d和7 d达峰值;rG-CSF可使进入外周血和脑组织的BMSCs明显增加.BMSCs动员对脑缺血损伤的保护作用明显,且随动员后时间的延长呈增强趋势.

Abstract：

Objective To explore the influence of recombination granulocyte colony stimulating factor (rG-CSF)on mobilization and distribution of bone marrow stem cells (BMSCs) in blood and brain tissue,and its role in protecting brain in rats with cerebral ischemia.Methods One hundred and six SpragueDawley(SD)rats were divided into sham-operated group (n=10),model group(n=48),rG-CSF group (n=48) according to the method of random digital table,and rats in model and rG-CSF groups were divided into four subgroups:i.e.2,3,7 and 14 days subgroups,with 12 rats in each subgroup.Middle cerebral artery occlusion(MCAO)model was reproduced with nylon thread.In rats of rG-CSF group rG-CSF (10 btg/kg)was administered by subcutaneous injection 3 days before and 2 days after operation respectively,once a day.Rats in sham-operated and model groups were administered with normal saline in the same volume,once a day.At the corresponding time after operation,general neural function score(GNFS)of rats was measured.Blood was collected through abdominal aorta,then white blood cell (WBC) and CD34+ cells in peripheral blood were counted.Brain pathologic changes were observed,and expression of CD34+ cells in rats brain tissue was determined by using immunohistochemical method.Results ①GNFS was lower obviously in 2-day model group compared with that in sham-operated group,and then increased gradually.At 7 days and 14 days after operation,GNFS in rG-CSF group was higher significantly than that in model group (7 days:11.86±0.69 vs.10.53±0.76,14 days:13.38±0.52 vs.12.38±0.52,both P<0.01).②WBC and CD34+ cells in peripheral blood in model group increased obviously,with the highest level appeared at 3 days and lowered at 7 days and 14 days.Increase of WBC and CD34+ cells in rats of rG-CSF group was more obvious than that of model group at each time point except CD34+ in 14 days group [WBC (×109/L)2 days:11.75±1.76 vs.8.07±1.27,3 days:13.07±1.70 vs.10.88±1.78,7 days:8.63±1.36 vs.5.58士1.57,14 days:6.98士0.98 vs.4.87士0.92;CD34'(cells/t~1)2 days:8.83±2.14 vs.3.17±0.75,3 days:13.50±1.87 vs.5.00±1.55,7 days:5.33±1.21 vs.2.33±1.21,P<0.05 or P<0.01].③Expression of CD34+ cells in the brain of rats in 2-day model group increased significantly,and the highest level appeared at 7 days and decreased at 14 days.Absorbance (A) value of CD34+ cells expression in rat brains of each rG-CSF group was more significant than that in model group(2 days:43.21±4.41 vs.22.04±2.95,3 days:45.79±1.76 vs.25.69±2.44,7 days:52.09±2.86 vs.33.04±2.62,14 days:29.73±1.99 vs.16.91±2.95,all P<0.01).④ The signs of injury to brain in pathological examination were less obvious in 14 days rG-CSF group.Conclusion BMSCs could be induced to enter peripheral blood and "home" to brain tissue after cerebral ischemia.It was showed that BMSCs increased in number at first and then decreased in peripheral blood and brain,the peak number was found on 3rd day in peripheral blood and 7th day in brain.Mobilization with rG-CSF could increase the number of BMSCs in peripheral blood and brain tissue.The effect of mobilization of BMSCs on protecting brain was significant after cerebral ischemia,and effect appeared to be more pronounced with prolongation of mobilization.     

重组人粒细胞集落刺激因子修复大鼠动脉损伤

背景:有研究显示大鼠皮下注射粒细胞集落刺激因子后,外周血CD34 细胞明显增高。并发现运用粒细胞集落刺激因子不仅动员了骨髓干细胞,而且加速损伤血管段的再内皮化,抑制了新生内膜增生。目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子对大鼠损伤动脉的再内皮化及抑制新生内膜增生作用。设计:随机对照动物实验。单位:南京医科大学附属南京第一医院。材料:实验于2005-12/2006-04于南京市第一医院完成。选用40只雄性SD大鼠,8～12周龄SPF级,体质量200～250g,购于国家啮齿类实验动物种子中心上海分中心。重组人粒细胞集落刺激因子购于山东齐鲁制药有限公司,2F动脉取栓导管购于Edwards Lifesciences公司,CD34单克隆抗体、CD45单克隆抗体购于联科生物有限公司。方法:用Excel软件随机将大鼠分成治疗组及对照组,每组20只。治疗组给予皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(100μg/kg),1次/d,共8d。对照组皮下注射等量生理盐水,1次/d,共8d。治疗5d后,腹腔注射麻醉大鼠,颈外动脉做一切口,将2F动脉取栓导管插入至左颈总动脉分叉处,注入200μL空气使球囊扩张,然后回拉球囊至肩胛舌骨肌处,回抽空气后重新送回导管,反复3次后拔出导管,结扎颈外动脉。①治疗前和治疗5d后,所有大鼠均取1mL静脉血进行白细胞和CD34 细胞计数。②球囊损伤后14和28d,每组分别麻醉后处死大鼠10只,取左颈总动脉。每组各5只用于暴露动脉内膜腔,应用图形分析软件计算再内皮化面积,再内皮化面积=未被伊文氏蓝着色区域/损伤总面积;每组另有5只,取左颈总动脉,取血管横切面,经HE染色后用图像分析软件计算新生内膜与中膜比(I/M),评估新生内膜增生程度。③采用免疫组化方法检测血管内膜CD31 与vWF (Ⅷ因子)细胞,推测损伤后内皮修复程度。主要观察指标:①大鼠外周血白细胞及CD34 细胞表达。②球囊损伤后血管再内皮化程度。③新生内膜增生程度(新生内膜与中膜比)。④血管内膜CD31 与vWF (Ⅷ因子)细胞检测结果。结果:纳入SD大鼠40只均进入结果分析。①外周血白细胞及CD34 细胞表达:治疗5d后,治疗组大鼠白细胞总数高于对照组[(27.60±2.45)×109L-1,(10.11±1.81)×109L-1,P<0.01],CD34 细胞数量高于对照组(38.31×107L-1,3.14×107L-1,P<0.01)。②血管再内皮化程度:球囊损伤后14和28d,治疗组再内皮化面积分别为(68.3±8.3)%,(97.6±4.1)%,高于对照组[(33.8±6.3)%,(76.1±5.2)%,P<0.01]。③新生内膜增生程度:球囊损伤后14,28d,治疗组新生内膜与中膜比分别为0.39±0.11,0.45±0.09,均低于对照组(0.87±0.15,1.26±0.16,P<0.01),治疗组血管新生内膜增生程度被显著抑制。④血管内膜CD31 与vWF (Ⅷ因子)细胞检测:球囊损伤后28d,治疗组血管内膜被接近于连续完整的CD31 与vWF 细胞覆盖,对照组血管内膜仅见零星、分散的CD31 与vWF 细胞。结论:重组人粒细胞集落刺激因子可促进大鼠血管损伤后外周血中CD34 细胞表达及血管内膜再内皮化,抑制新生内膜增生。     

粒细胞集落刺激因子与干细胞因子合用对急性心肌梗死模型大鼠心功能的影响

背景:骨髓干细胞动员以其无创伤、无免疫排斥反应,不需要干细胞提取、培养、扩增等工作倍受青睐。目的:观察联合应用粒细胞集落刺激因子和干细胞因子对大鼠急性心肌梗死的治疗作用。设计:随机对照观察。单位:锦州医学院药理教研室实验室。材料:选用32只成年雄性SD大鼠,体质量(200±20)g,购自锦州医学院实验动物中心。重组人粒细胞集落刺激因子(北京双鹭制药),重组人干细胞因子(成都地奥有限公司)。方法:实验于2005-07/11在锦州医学院药理教研室实验室进行。①5mg/kg盐酸异丙基肾上腺素左下腹腔注射复制急性心肌梗死模型,3h后将大鼠随机分为4组,每组8只。综合治疗组:用生理盐水稀释浓度至10mg/L的重组人粒细胞集落刺激因子1mL/kg和重组人干细胞因子1mL/kg皮下注射,连续5d。粒细胞集落刺激因子组:单用生理盐水稀释浓度至10mg/L的rhG-CSF1mL/kg皮下注射,每只大鼠和综合治疗组大鼠注射药品差量用生理盐水(1mL/kg)补足,连续5d。干细胞因子组:单用生理盐水稀释浓度至10mg/L的人干细胞因子1mL/kg皮下注射,每只大鼠和综合治疗组大鼠注射药品差量用生理盐水(1mL/kg)补足,连续5d。对照组:单用生理盐水(2mL/kg)皮下注射。②分别于造模后第14d和28d,摸球法从每组大鼠中抽取4只麻醉,自左心室心尖部插入内充肝素钠的塑料管至左心腔,用Medlab-u18c生物信号采集处理系统描记左心室峰压,左心室舒张末压,左室内压最大上升/下降速度,并同步记录心率。拔出气管插管,立即剪掉心脏,剪掉心房及右心室,微量天平称重,计算左心室质量/体质量,评估心肌重塑情况,将组织块切片,光镜下观测大鼠心肌病理形态及梗死面积。采用细胞图像分析仪病理图文分析每组大鼠心肌梗死面积。主要观察指标:各组大鼠左心功能指标、心肌梗死面积、心率和心室重塑情况及大鼠心肌病理形态。结果:纳入大鼠32只全部进入结果分析,无脱落。①大鼠左心功能指标比较结果:综合治疗组大鼠造模14,28d后左心室收缩压、左心室舒张末压、左心室内压最大上升/下降速度高于其他3组,造模28d时上述各指标均高于14d,差异有统计学意义(P<0.05),粒细胞集落刺激因子组两时间点上述指标均大于干细胞因子组及对照组(P<0.05)。②大鼠两时间点心肌梗死面积、心率和心室重塑情况:综合治疗组大鼠造模14,28d后心肌梗死面积及左心室重量小于其他3组,造模后28d心肌梗死面积小于14d(P<0.05),粒细胞集落刺激因子组两时间点上述指标均小于干细胞因子组与对照组。③大鼠心肌病理形态改变:造模后14及28d,综合治疗组和粒细胞集落刺激因子组均未见明显心肌瘢痕组织,有新生毛细血管生长,粒细胞集落刺激因子组毛细血管密度小于综合治疗组,均有成纤维细胞浸润。干细胞因子组和对照组可见瘢痕组织呈散在的灶性分布,有成堆或散在分布的淋巴细胞,其核小、深染、胞浆少,细胞间胞浆融合,新生肉芽组织增生不明显。结论:粒细胞集落刺激因子和干细胞因子合用对急性心肌梗死大鼠缺血损伤心肌的保护和再生作用优于单用,可改善急性心肌梗死大鼠的心室功能。     

粒细胞集落刺激因子动员骨髓干细胞治疗大鼠急性脑梗死

目的:探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠脑梗死的治疗效果。方法:采用线栓法制备大鼠脑梗死模型,于术后24 h进行神经病学评分分级,入选2分及以上的大鼠共20只,被随机分为给药组和对照组,每组10只。给药组腹腔注射G-CSF 10μg.kg-1.d-1;对照组腹腔内注射等量生理盐水均连用10 d。两组分别均于术前、术后10、20和27 d进行神经病学评分分级,于术前及术后10 d和27 d进行体重测定,并计算体重减轻率。术后27 d,将大鼠麻醉后处死取脑,进行氯化三苯四唑(TTC)染色,计算脑梗死容积与全脑容积比值。结果:术前两组体重比较差异无统计学意义(P>0.05);术后10 d和27 d,给药组大鼠体重减轻率显著小于对照组〔(-13.15±0.05)%比(-16.46±0.06)%,(9.72±0.10)%比(-8.97±0.05)%,P均<0.01〕;术后10 d,两组神经病学分级评分比较差异无统计学意义(P>0.05);术后20 d和27 d,给药组神经病学分级评分〔(1.30±0.48)分和(0.60±0.52)分〕显著低于对照组〔(2.20±0.92)分和(1.70±0.68)分,P<0.05和P<0.01〕;术后27 d,给药组脑梗死容积与全脑容积比值显著小于对照组〔(12.99±3.55)%比(22.87±2.12)%,P<0.01〕。结论:脑梗死急性期1~10 d给予G-CSF可以有效减轻大鼠缺血性脑梗死程度,减少脑梗死体积,促进大脑神经功能的恢复。     

重组人粒细胞集落刺激因子治疗急性脑梗死74例疗效观察

目的探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)治疗急性脑梗死的疗效。方法74例急性脑梗死患者分为治疗组和对照组,每组37例。两组均按急性脑梗死常规方法治疗,治疗组在此基础上加用rhG-CSF。两组于治疗前、治疗后3个月时分别进行中国卒中量表(CSS)评定,并观察rhG-CSF治疗期间的不良反应。结果治疗后两组CSS评分均改善(P<0.05),且治疗组优于对照组(P<0.05)。rhG-CSF治疗期间未出现明显不良反应。结论rhG-CSF治疗急性脑梗死安全有效。     

Tamoxifen促进大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复

目的:探讨Tamoxifen对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的影响。方法:采用改良Allen法建立大鼠脊髓挫伤模型,并随机分为假手术组、对照组和干预组,观察各组大鼠体重变化以及受损脊髓节段组织含水量变化,采用BBB评分评估大鼠后肢运动功能。结果:脊髓损伤后对照组和干预组大鼠体重较假手术组有所降低(P<0.01),对照组受损节段组织含水量明显增加(P<0.05),后肢运动功能恢复缓慢;干预组受损节段组织含水量较对照组有所减少(P<0.05),肢体运动功能的恢复更为明显(P<0.01)。结论:Tamoxifen可以减轻大鼠脊髓损伤后组织水肿,促进瘫痪肢体的运动功能恢复。     

粒细胞集落刺激因子对骨髓造血细胞及外周血细胞的影响

目的了解粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对骨髓造血细胞及外周血细胞的影响。方法对50例化疗后接受G-CSF治疗的肿瘤患者进行骨髓、外周血细胞计数、形态观察及分类。结果 G-CSF治疗后,患者骨髓早幼粒细胞平均比例达20.5%,最高达67.0%,细胞颗粒明显增多,其余阶段粒细胞颗粒明显增多增粗,碱性磷酸酶阳性比例平均达97%,平均积分为368。55%的患者外周血幼稚粒细胞增多;红系、巨核系细胞比例及形态无明显变化。结论 G-CSF主要影响骨髓粒细胞系统,对红系、巨核系影响不大;明确G-CSF对骨髓造血的影响可减少误诊,提高检验质量。     

国产与进口粒细胞集落刺激因子动员外周血造血干细胞的效果对照

为评估国产重组人粒细胞集落刺激因子在动员外周造血干细胞的效果,选择2001/2005收治的20例自体外周血造血干细胞移植患者,男11例,女9例,其中急性髓细胞白血病11例,急性淋巴细胞白血病5例,恶件淋巴瘤3例,多发性骨髓瘤1例.根据患者对约价承受能力分为2组:国产重组人粒细胞集落刺激因子动员组、进口重组人粒细胞集落刺激因子动员组,每组各10例,除急性髓细胞白血病采用大剂量阿糖胞昔动员外,其他均应用大剂量环磷酰胺动员,当白细胞降全低谷开始回升时加国产与进口重组人粒细胞集落刺激因子,白细胞升至5×109L-1以上开始采集外周血造血干细胞.所有患者均移植成功,两者在给药剂量、用约天数,采集干细胞质量、造血功能重建及药物毒副反应等方面差异均无显著性意义.     

不同波形电针对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响

目的:比较不同波形电针对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响,并初步探讨相应机制。方法:将48只健康成年大鼠均制成T9水平脊髓损伤模型,随机分为疏密波电针组(A组)、连续波电针组(B组)、断续波电针组(C组)、造模组(D组)4组,每组12只。于术后第1天、第3天、第7天对各组大鼠进行后肢功能的BBB评分、斜板试验、血清中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性测定。结果:大鼠脊髓损伤后第1天,A、C组BBB评分优于造模组(P<0.05),斜板试验角度A组优于造模组(P<0.05)和C组(P<0.01);第3天,BBB评分A、B、C组优于造模组(P<0.05),斜板试验角度A组显著优于造模组(P<0.05);第7天,BBB评分A、B、C组优于造模组(P<0.05),斜板试验角度A、B、C组均优于造模组(P<0.05),其余两组间比较无显著性差异。大鼠脊髓损伤后第1天,SOD活性A、B、C组较造模组明显增高(P<0.05),MDA含量较造模组显著降低(P<0.01);第3天,A、B、C组较造模组SOD活性显著升高(P<0.05),A组明显高于C组(P<0.05),A、B、C组MDA含量低于造模组(P<0.05);第7天,A、B、C组SOD活性优于造模组(P<0.05),MDA含量低于造模组(P<0.05),其余两组间比较无显著性差异。结论:三种波形电针对于脊髓损伤大鼠运动功能的恢复均具有促进作用,其中疏密波能明显通过促进脊髓损伤大鼠神经的再生和修复,加快自由基的清除,加强血液循环,减少脊髓损伤的继发损伤等方面促进脊髓损伤大鼠运动功能的恢复。     

β-七叶皂甙钠对大鼠脊髓损伤后肢体运动功能的影响

目的：观察β-七叶皂甙钠治疗大鼠急性脊髓损伤后肢体运动功能的变化，探讨β-七叶皂甙钠对大鼠急性脊髓损伤的保护和促进修复作用。方法：实验于2003—12／2004—03在解放军第二军医大学长海医院骨科实验室完成。45只SD大鼠随机分为正常对照组11只，模型对照组12只，10mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组11只，20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组11只。按Allen改良法制备脊髓损伤动物模型，10mg／（kg&;#183;d）和20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组分别在术后腹腔注射β-七叶皂甙钠注射液10mg／（kg&;#183;d）和20mg／（kg&;#183;d）&;#176;模型对照组和正常对照组在术后注射等量生理盐水，共持续10d。用斜板试验法和BBB评分法观察大鼠脊髓损伤后运动功能的变化。结果：1只10mg／kg β-七叶皂甙钠治疗组大鼠在术后第2天和1只正常对照组大鼠在术后第1天由于饲养不当死亡，其余43只大鼠均进入结果分析。①各组大鼠斜板试验临界角度：在术后第7，14，21天时10mg／（kg&;#183;d）和20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组明显高于模型对照组[第7天：（37．88&;#177;1．76）&;#176;，（38．94&;#177;2、15）&;#176;，（35、48&;#177;1、23）&;#176;；第14天：（44、39&;#177;1．87）&;#176;．（45、96&;#177;1．81）&;#176;，（39．48&;#177;1．23）&;#176;；第21天：f44．75&;#177;2．11）&;#176;，（46．66&;#177;1-46）&;#176;，（41、42&;#177;0．98）&;#176;，t=2.27～4．67，P〈0．05～001]。20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组与10mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组基本一致。②各组大鼠BBB评分结果：在术后第7，14，21天时10mg／（kg&;#183;d）和20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组明显高于模型对照组[第7天：（7．20&;#177;0．98），（7．51&;#177;0．85），（4．46&;#177;0．90）分；第14天：（10．43&;#177;0．90），（10．98&;#177;0．59），（6．54&;#177;0．73）分；第21天：（10．78&;#177;0．96），（11．67&;#177;0．49），（7．90&;#177;0．54）分，t=2．54～8．6，P〈0．05～0．011。20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组与10mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组基本一致。结论：β-七叶皂甙钠可以增加大鼠实验性急性脊髓损伤后运动功能的恢复谏度及最终恢复稃唐．     

β-七叶皂甙钠对大鼠脊髓损伤后肢体运动功能的影响

目的:观察β-七叶皂甙钠治疗大鼠急性脊髓损伤后肢体运动功能的变化,探讨β-七叶皂甙钠对大鼠急性脊髓损伤的保护和促进修复作用。方法:实验于2003-12/2004-03在解放军第二军医大学长海医院骨科实验室完成。45只SD大鼠随机分为正常对照组11只,模型对照组12只,10mg/(kg·d)β-七叶皂甙钠治疗组11只,20mg/(kg·d)β-七叶皂甙钠治疗组11只。按Allen改良法制备脊髓损伤动物模型,10mg/(kg·d)和20mg/(kg·d)β-七叶皂甙钠治疗组分别在术后腹腔注射β-七叶皂甙钠注射液10mg/(kg·d)和20mg/(kg·d)。模型对照组和正常对照组在术后注射等量生理盐水,共持续10d。用斜板试验法和BBB评分法观察大鼠脊髓损伤后运动功能的变化。结果:1只10mg/kgβ-七叶皂甙钠治疗组大鼠在术后第2天和1只正常对照组大鼠在术后第1天由于饲养不当死亡,其余43只大鼠均进入结果分析。①各组大鼠斜板试验临界角度:在术后第7,14,21天时10mg/(kg·d)和20mg/(kg·d)β-七叶皂甙钠治疗组明显高于模型对照组[第7天:(37.88±1.76)°,(38.94±2.15)°,(35.48±1.23)°;第14天:(44.39±1.87)°,(45.96±1.81)°,(39.48±1.23)°;第21天:(44.75±2.11)°,(46.66±1.46)°,(41.42±0.98)°,t=2.27～4.67,P<0.05～0.01]。20mg/(kg·d)β-七叶皂甙钠治疗组与10mg/(kg·d)β-七叶皂甙钠治疗组基本一致。②各组大鼠BBB评分结果:在术后第7,14,21天时10mg/(kg·d)和20mg/(kg·d)β-七叶皂甙钠治疗组明显高于模型对照组[第7天:(7.20±0.98),(7.51±0.85),(4.46±0.90)分;第14天:(10.43±0.90),(10.98±0.59),(6.54±0.73)分;第21天:(10.78±0.96),(11.67±0.49),(7.90±0.54)分,t=2.54～8.6,P<0.05～0.01]。20mg/(kg·d)β-七叶皂甙钠治疗组与10mg/(kg·d)β-七叶皂甙钠治疗组基本一致。结论:β-七叶皂甙钠可以增加大鼠实验性急性脊髓损伤后运动功能的恢复速度及最终恢复程度。     

大鼠脊髓半切伤后运动功能的可修复性

目的观察大鼠脊髓半切后运动功能恢复腹角神经元神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)变化,探讨其损伤恢复机制。方法运用免疫组化ABC方法监测不同时段脊髓半切伤后腹角神经元NT-3的表达。结果对照组可见NT-3反应阳性细胞分布于胶质的大神经元和小神经元,胞质、胞核均染色,胶质细胞阳性,24h后,神经元NT-3免疫反应为～,阳性细胞数为5.00±0.07,7d后神经元NT-3免疫反应为,阳性细胞数为7.90±0.27,均较正常显著增加(P<0.01,F=5.27)。结论NT-3不仅参与正常腹角神经元生理过程,而且在脊髓修复中起重要作用。     

神经生长因子干预大鼠脊髓损伤模型白质轴突计数和运动功能恢复的变化

背景:有实验已证实多种神经营养因子具有促进损伤神经元存活、分化和轴突再生的作用,使损伤后的脊髓组织结构完整性能得到最大的保存。目的:观察神经生长因子对大鼠脊髓损伤后神经再生和运动功能的影响。设计:随机对照观察。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科。材料:选用30只成年健康雄性Wistar大鼠(同济医学院动物实验中心)。方法:实验于2004-01/2005-01在华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科完成。采用随机抽签法将大鼠分为治疗组和对照组,每组15只。①造模:应用改良Allen’s打击法致伤脊髓。②干预措施:造模后,治疗组大鼠给予蛛网膜下腔注射含1μg神经生长因子的生理盐水0.05mL,1次/d,共3周;对照组大鼠注射等体积的生理盐水,1次/d,共3W。③斜板试验:在造模前和治疗后3d和1,2,3周分别应用改良Rivlin法(斜板试验)测定大鼠运动功能值。④形态学观察:造模后2天和3周,分别取7只治疗组大鼠和8只对照组大鼠进行NF200免疫组织化学检测与轴突计数。主要观察指标:大鼠造模前、治疗后3d及1,2,3周斜板试验结果以及大鼠造模后2d和3周白质区轴突计数。结果:①治疗组大鼠脊髓损伤后斜板试验结果在术后1,2,3周时分别为(45.2±3.2),(51.2±3.8),(53.4±4.6)°,明显高于对照组(37.2±2.8),(42.6±3.5),(44.5±5.6)°,差异有显著性(P<0.05)。②治疗后3周,对照组白质内可见少量、散在不均匀的NF200着色点。治疗组白质内可见大量均匀的NF200着色点。治疗组大鼠脊髓损伤后3W白质内轴突计数明显高于对照组(363.6±34.2,187.5±32.1,P<0.05)。结论:神经生长因子对脊髓损伤后的神经再生有一定的促进作用,并有助于功能恢复。     

不同频率重复经颅磁刺激对脊髓损伤大鼠运动功能的影响

目的:研究不同频率重复经颅磁刺激(rTMS)对不完全性脊髓损伤(SCI)大鼠运动功能的影响。方法:65只SD雌性大鼠随机分为正常组、模型组、磁刺激5Hz组、10Hz组和20Hz组,每组13只。用Allen重物坠落法将模型组和磁刺激组制作成不完全性脊髓损伤模型。术后24h开始对磁刺激组实施rTMS治疗,刺激频率分别为5Hz、10Hz、20Hz,刺激强度均为90%运动阈值,刺激5s,间歇10s,共500个脉冲。每天1次,每周5d,连续4周,对照组不给予刺激。于术后第4周分别给予BBB行为学评分;检测运动诱发电位(MEP),记录潜伏时及波幅;并应用免疫组织化学法和Western blot法检测脊髓损伤处生长相关蛋白43(GAP-43)的表达情况。结果:BBB评分结果显示20Hz组大鼠分值最高,10Hz组次之,两者与模型组比较差异均有显著性意义(P<0.01);10Hz组大鼠的MEP潜伏时最短,20Hz组次之,两者与模型组比较差异有显著性意义(P<0.01);免疫组织化学及Western blot结果均显示10Hz组GAP-43表达量最高,20Hz组次之,两组与模型组比较差异均有显著性意义(P<0.01,P<0.05)。结论:高频rTMS可促进不完全性脊髓损伤大鼠运动功能恢复,以10Hz频率为佳。     

Granulocyte-colony stimulating factor enhances bone fracture healing

BackgroundCirculating mesenchymal stem cells contribute to bone repair. Their incorporation in fracture callus is correlated to their bioavailability. In addition, Granulocyte-colony stimulating factor induces the release of vascular and mesenchymal progenitors. We hypothesized that this glycoprotein stimulates fracture healing, and analyzed the effects of its administration at low doses on bone healing.Methods27 adult male Sprague-Dawley rats underwent mid-femur osteotomy stabilized by centromedullar pinning. In a post (pre) operative group, rats were subcutaneously injected with 5 μg/kg per day of Granulocyte-colony stimulating factor for 5 days after (before) surgery. In a control group, rats were injected with saline solution for 5 days immediately after surgery. A radiographic consolidation score was calculated. At day 35, femurs were studied histologically and underwent biomechanical tests.Findings5 weeks after surgery, mean radiographic scores were significantly higher in the Preop group 7.75 (SD 0.42) and in the Postop group 7.67 (SD 0.52) than in the control group 6.75 (SD 0.69). Biomechanical tests showed femur stiffness to be more than three times higher in both the Preop 109.24 N/mm (SD 51.86) and Postop groups 100.05 N/mm (SD 60.24) than in control 32.01 N/mm (SD 15.78). Mean maximal failure force was twice as high in the Preop group 68.66 N (SD 27.78) as in the control group 34.21 N (SD 11.79). Histological results indicated a later consolidation process in control than in treated groups.InterpretationGranulocyte-colony stimulating factor injections strongly stimulated early femur fracture healing, indicating its potential utility in human clinical situations such as programmed osteotomy and fracture.     

经静脉移植人脐血间充质干细胞在鼠损伤脊髓的表达及神经功能修复

目的:采用Brdu免疫组化标记技术观察经静脉移植人脐血间充质干细胞进入损伤脊髓组织的表达情况,探讨其促进损伤脊髓神经功能恢复的作用。方法:实验于2003-10/2005-03在苏州大学生物技术研究所干细胞实验室完成。①选取健康成年Wistar大鼠60只,随机数字表法分为假手术组、模型对照组、干细胞移植组,20只/组。脐血标本来自苏州大学附属第一医院产科,产妇及其家属均签署知情同意书。②自脐带抽取新鲜脐带血50～60mL,分离培养人脐血间充质干细胞,调整细胞浓度为5×109L-1待用。在细胞移植前48h,体外进行Brdu标记。③模型对照组、干细胞移植组大鼠采用重物压迫法建立脊髓损伤模型。麻醉后取俯卧位,于T11节段处行背后方正中切口,剥离椎旁肌,咬除T11棘突及椎板,显露4mm×5mm硬脊膜,将55g重砝码放置于硬脊膜表面1min,然后逐层缝合伤口。假手术组仅显露硬脊膜,然后缝合伤口。④造模后5d,干细胞移植组大鼠自后肢大隐静脉缓缓注入人脐血间充质干细胞悬液0.2mL～0.3mL(1×106个)。模型对照组、假手术组给予等量生理盐水。⑤分别于细胞移植后1d、1,2,3周,采用BassoBeatlieBresnahan(BBB)评分法和斜板试验法测定各组神经功能情况。于细胞移植后1,3周制作冰冻切片,检测各组脊髓组织内脐血间充质干细胞的分布情况。结果:①神经功能检测结果:脊髓损伤细胞移植后3周内,模型对照组、干细胞移植组大鼠后肢运动功能均有所恢复,但干细胞移植组恢复较快,于术后1周BBB评分和斜板试验结果即明显优于模型对照组[(10.71±6.24),(5.13±3.36)分,t=2.39,P<0.05;(51.67±5.22),(46.63±3.72)度,t=3.39,P<0.01],并维持至术后3周[(17.29±4.03),(11.25±5.01)分,t=3.89,P<0.01;(65.77±8.06),(57.05±4.61)度,t=4.07,P<0.01]。②脊髓组织中人脐血干细胞的鉴定:假手术组、模型对照组脊髓组织中未见Brdu阳性表达区。干细胞移植组于移植后1周脊髓损伤区可见大量棕褐色Brdu阳性表达的人脐血间充质干细胞存在,并持续至移植后3周,而非损伤区则始终无阳性表达。结论:Brdu对脐血间充质干细胞具有良好的标记作用,经静脉移植的人脐血间充质干细胞能够进入脊髓损伤区,并可以促进损伤脊髓神经功能的修复。