HBV对肝癌细胞中MIA2表达的影响

目的探讨黑色素瘤抑制蛋白2(MIA2)在肝癌细胞中的表达水平与乙型肝炎病毒(HBV)感染状态的关系。方法培养人肝癌细胞株HepG2和持续表达乙肝病毒的人肝癌细胞株HepG2.2.15,采用细胞免疫组织化学和蛋白免疫印迹检测(Western blotting)2种细胞株中MIA2蛋白表达水平差异。结果 MIA2蛋白在HepG2.2.15细胞株中的表达水平较HepG2细胞株减低,差异有统计学意义。结论 MIA2蛋白在HBV阳性肝癌细胞中表达水平减低,提示HBV感染可能通过抑制MIA2的表达导致肝癌发生。     

SELDI-TOF-MS检测正常肾细胞株与肾癌细胞株的差异表达蛋白

目的分析体外培养的正常肾细胞株和肾癌细胞株的蛋白质表达差异。方法运用表面增强激光解吸离子化蛋白质芯片（SELDI-TOF-Ms）技术检测常规体外培养的正常肾细胞株（HK-2）和肾癌细胞株（786-0）。2种细胞株均用IMAC3（固定金属亲和）和WCX2（弱阳离子交换）2种芯片检测。采用PBSIIC型蛋白质芯片阅读机读取数据，Ciphegenproteinchip3．1软件采集数据，BiomarkerWizard软件分析2种细胞株的蛋白差异。结果SELDI-TOF-MS技术检测发现体外培养的肾癌细胞株与正常肾细胞株的蛋白质存在差异表达，共有15个蛋白质水平发生变化。IMAC3芯片发现差异峰6个，WCX2芯片发现差异峰9个。结论肾癌细胞株与正常肾细胞株之间的蛋白质谱有差异蛋白表达。     

Apaf-1通过wnt/β-catenin信号通路调控肝癌的机制研究

目的 研究Apaf-1基因在wnt/β-catenin信号通路中的作用及在肝癌细胞中的调控表达机制.方法 通过TOP-flash实验验证Apaf-1基因在wnt/β-catenin信号通路中调控作用机制;采用实时定量PCR方法检测各种肝癌细胞株(HepG2、H HCC、HB611)及正常肝细胞株(LO2)中Apaf-1基因的表达量;构建Apaf-1 RNA干扰质粒,转染到HepG2中并检测转染效率,检测相关基因及蛋白表达.结果 TOPflash实验发现Apaf-1可以抑制wnt/β-catenin信号通路,并且这种抑制作用具有剂量依赖效应;在肝癌细胞株中,Apaf-1表达量较正常肝细胞表达量降低,且在HepG2细胞株中表达量最低;在肝癌细胞株(HepG2)中RNA干扰Apaf-1基因,Apaf-1基因的的表达量显著降低,wnt信号通路下游基因及蛋白(β-catenin、Cyclin A、CDK2、wnt5a、STAT3、EGFR、APC)的表达量均显著性升高或降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Apaf-1基因通过wnt/β-catenin信号通路在肝癌细胞的生成过程中具有重要功能.     

MicroRNA在HepG2肝癌细胞表达差异谱的研究

目的 建立HepG2人肝癌细胞株与LO2正常肝细胞株microRNA(miRNA)表达的差异谱,为研究miRNA在肝细胞癌变机制中的作用提供新线索.方法 体外培养HepG2人肝癌细胞和LO2人正常肝上皮细胞,Trizol法抽提细胞总RNA,Ambion′s miRNA Isolation Kit进一步分离miRNA;利用基因芯片技术,将细胞miRNA与哺乳动物miRNA芯片杂交,采用LuxScan3.0 图像软件和SAM version 2.1进行数据分析.结果 HepG2细胞与LO2细胞表达的miRNA中有146个存在着明显差异(fold change >4.0),其中80个低表达和66个高表达,最高fold change达36倍,部分miRNAs与肿瘤关系密切,其中has-miR-224为肝癌癌变相关miRNA.结论 HepG2较LO2细胞miRNA低表达数多于高表达数,反映其基因表达数量更丰富,细胞代谢和增殖更活跃;部分miRNAs可能参与肝细胞癌变分子机制.     

L-选择素在肝癌细胞株HepG2中的表达

目的:观察L-选择素在人正常肝细胞株(L-02)和人肝癌细胞株(HepG2)中的表达。方法:应用RT-PCR法检测肝癌细胞株HepG2、正常肝细胞株L-02中L-选择素mRNA表达情况;应用流式细胞术检测HepG2细胞、L-02细胞中L-选择素的蛋白表达。结果:L-选择素mRNA在HepG2细胞中有表达,而在正常肝细胞株L-02细胞中无表达;HepG2细胞L-选择素的表达量为(10.09±0.51)%,而在L-02细胞中则无表达。结论:L-选择素在HepG2细胞中有表达而在L-02细胞中不表达。     

蛋白质组学技术对肝癌细胞株HepG2的G2/M期细胞的热激蛋白的鉴定

目的：采用蛋白质组学技术鉴定肝癌细胞株HepG2的G2／M期细胞内的热激蛋白。方法：提取肝癌细胞株HepG2的G2／M期细胞的蛋白质，采用双向电泳的方法分离蛋白质，应用图像扫描仪及质谱（MALDI—TOF—MS）分析鉴定HepG2的G2／M期细胞表达的蛋白质。结果：采用双向电泳技术分离，并用质谱成功鉴定出HepG2的G2／M期细胞的热激蛋白。结论：肝癌细胞株HepG2的G2／M期细胞内的热激蛋白的成功鉴定，为探讨HSP在细胞生长和增殖中的作用奠定了基础，并为临床上肿瘤的治疗提供参考依据。     

运用SELDI蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达

目的运用SELDI(Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization)蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达,从而为从蛋白质水平研究HSV-1感染的致病机制奠定基础。方法常规培养Vero细胞,感染HSV-1,孵育12 h、24 h、48 h后用细胞裂解液裂解细胞。裂解上清经蛋白定量后应用IMAC3(固定金属亲和)和WCX2(弱阳离子交换)芯片,SELDI-TOF-MS技术检测细胞感染HSV-1前后蛋白质表达的差异。结果感染24 h细胞出现明显细胞病变效应(CPE),感染12 h质谱分析即可见蛋白的差异表达。共19个蛋白表达水平发生变化,其中IMAC3芯片发现差异峰9个,WCX2芯片发现差异峰10个。结论 SELDI蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达方法简便,敏感性高,从而为从蛋白质水平研究HSV-1感染的致病机制,HSV-1与宿主细胞的相互作用,及抗感染治疗靶位的寻找奠定了一定的基础。     

P300/CBP相关因子在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的：检测P300/CBP相关因子（P300/CBP-associated factor,PCAF）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达情况,分析其与肝癌临床病理特征之间的相关性。方法：收集40例HCC及对应癌旁组织,运用RT-PCR、免疫组化技术检测PCAF在肝癌及对应癌旁组织中的表达情况,研究PCAF蛋白表达与肝癌临床病理特征之间的相关性;应用Western blot技术检测人正常肝细胞LO2和肝癌细胞HepG2和SMMC-7721中PCAF蛋白的表达。结果：PCAF mRNA及蛋白在肝癌组织中的表达低于对应的癌旁组织（P=0.000）;PCAF蛋白低表达与肿瘤肝内转移（rs=0.413,P=0.037）、门脉侵犯（rs=0.589,P=0.011）和高TNM分期（rs=0.513,P=0.029）相关;人肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721中PCAF 蛋白的表达较正常肝细胞株LO2降低（P=0.000）。结论：肝癌细胞系及肝癌组织中PCAF表达下调,且PCAF的表达下调与肝癌的恶性病理特征相关。     

p115和MIF在肝癌细胞和正常肝细胞的表达情况

目的:研究人肝癌低分化SMCC-7721细胞株,高分化HepG2细胞株和人正常肝细胞株LO2的高尔基体转运蛋白p115和巨噬细胞移动抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)的表达情况.方法:采用RT-PCR方法检测3组细胞株中p115和MIF的mRNA表达水平.用...     

肿瘤相关抗原GCF2高水平表达的肝癌细胞株的筛选

目的 筛选出肿瘤相关抗原GCF2高表达的人肝癌细胞株,为进一步探讨GCF2对肝癌发生发展的可能作用奠定基础.方法 选择4种人肝癌细胞株(BEL-7404、HepG2、SMMC-7721和QGY-7703)及1种成人正常肝细胞株(HL-7702),培养后分别制作细胞爬片及提取蛋白后,采用免疫细胞染色技术和Western blot的方法筛选出GCF2表达量高的细胞株.结果 免疫细胞染色显示,GCF2在5种细胞中的胞核及胞质中均有表达.GCF2蛋白在肝癌细胞BEL-7404、HepG2、SMMC-7721和QGY-7703的表达要强于正常肝细胞HL-7702,其中以BEL-7404的表达量最高.通过Western blot检测,BEL-7404的GCF2相对表达量为0.875±0.134,较其他细胞株高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 BEL-7404细胞中GCF2蛋白水平的相对表达量最高,可以作为下一步探讨GCF2在肝癌发生发展的可能作用的实验材料.     

干扰素对人肝癌细胞株HepG2.2.15凋亡的影响

目的：探讨肝癌细胞株HepG2.2.15通过低表达Fas逃避免疫监视,以及干扰素α(IFN-α)通过上调Fas 表达对细胞凋亡的影响。方法：用流式细胞术检测肝癌细胞株HepG2.2.15的 Fas表达及IFN-α对其Fas表达的影响;用激活性Fas单克隆抗体CH11诱导细胞凋亡的方法,研究肝癌细胞对Fas介导凋亡的抵抗以及IFN α对肝癌细胞凋亡的影响。结果：① HepG2.2.15细胞低表达Fas,经浓度分别为2000、1000、　500U/ml的IFN-α作用后,Fas表达均显著增加(P均<0.001),且Fas表达率随IFN-α浓度的增加而增加;②CH11不能诱导HepG2.2.15细胞凋亡,IFN-α上调细胞Fas表达后,由CH11诱导的细胞凋亡增加(P均<0.01),且凋亡率随IFN-α浓度的增加而增加。结论：肝癌细胞HepG2.2.15能抵抗Fas介导的凋亡,IFN-α可通过上调细胞Fas表达,促进CH11诱导的肝癌细胞凋亡。     

纺锤体检查点蛋白BubR1在肝癌组织和肝癌细胞株HepG2中的表达

目的观察纺锤体检查点蛋白BubR1在人类肝癌组织、正常肝组织以及肝癌细胞系（HepG2）、正常肝细胞系（LO2）有丝分裂期表达水平的差异,以探讨BubR1蛋白在肝癌发生中的作用。方法用荧光定量PCR和Westernblot检测BubRl基因在肝癌组织、正常肝组织,以及在2种细胞中用Nocodazole处理前后的mRNA和蛋白的表达水平。结果BubR1基因在正常组织中的表达高于肝癌组织,在Nocodazole处理前2种细胞中表达无显著差异,在处理后2种细胞中表达均增高,但在L02细胞中上调水平大于HepG2细胞。结论BubR1基因低表达可能在肝癌的发生过程中起重要作用。     

放疗对人肝癌HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:探讨放疗对人肝癌HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:采用6MV-X射线照射细胞,提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳,观察细胞发生凋亡的情况,并采用免疫组织化学染色观察人肝癌细胞株中Bax和Bcl-2蛋白的表达。同时观察细胞周期改变情况。结果:照射后48h,2Gy、4Gy和6Gy出现明显DNA降解("梯形结构"),但对照组及8Gy和10Gy无"梯形结构"出现。Bax和Bcl-2蛋白的表达在时间和剂量之间存在交互作用(F=1.733,P=0.042;F=1.700,P=0.048)。4Gy照射剂量作用细胞48h后,HepG2细胞中Bax表达显著上调,而Bcl-2表达明显降低。4GyX线照射后培养6h,即可观察到G2/M期、S期阻滞,G2/M期阻滞峰值为正常的56倍,在6~48h阻滞"崩溃",细胞被释放,再度进入细胞周期或死亡。结论:6MV-X射线照射HepG2细胞,可诱使其产生凋亡,其机制可能通过促进Bax蛋白表达和抑制Bcl-2蛋白的表达来诱导肝癌细胞凋亡。4Gy照射引起的G2期阻滞释放可能与凋亡水平上调有关。     

赶黄草木脂素及黄酮类成分抑制肝癌细胞增殖的作用

目的:研究赶黄草中木脂素类及黄酮类成分体外抑制肝癌细胞增殖的作用。方法:采用MTT法评价赶黄草中8个木脂素(1~8)和5个黄酮(9~13)体外抗人肝癌细胞SMMC-7721和Hep G2增殖的活性以及对正常肝细胞LO_2活力的影响。运用Image-i T DEAD Green/Hoechst 33342荧光双染和高内涵成像分析化合物1对SMMC-7721细胞的影响。结果:化合物1、6、8~11可抑制SMMC-7721的增殖,6、9、11、13可抑制Hep G2的增殖。除化合物11以外,以上化合物对正常肝细胞LO_2均无明显细胞毒作用,且化合物3、4、5、13还可促进LO_2增殖。结论:赶黄草中部分木脂素及黄酮类成分不仅具有抑制肝癌细胞增殖的作用,而且对正常肝细胞无毒作用,甚至可保护正常肝细胞,表现出较好的选择性。     

肝癌组织及肝癌细胞株中TRAIL受体的检测

目的:检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)受体在原发性肝癌(PHC,简称肝癌)组织及肝癌细胞株HepG2及SMMC7721中的表达,以期选出与肝癌组织中TRAIL受体表达相近的细胞株。方法:收集原发性肝癌组织30例,以常规方法培养人肝癌细胞株HepG2及SMMC7721,以半定量RT-PCR法,对TRAIL受体的表达作半定量检测。结果:30例肝癌组织及HepG2细胞中均有TRAIL受体DR4(deathrecptor4)、DR5、DcR1(decoy receptor1)、DcR2的表达,而SMMC7721细胞中不表达DcR1;半定量结果显示肝癌组织及HepG2中DR4及DR5的表达量明显高于DcR1及DcR2;肝癌组织中4对受体间的表达量存在相关性,HepG2细胞中DR4的表达与DcR1及DcR2间存在相关性。结论:HepG2中TRAIL受体的表达类似于肝癌组织。     

放疗联合热疗诱导肝癌HepG2细胞凋亡及其与Bcl-2和Bax蛋白表达关系的研究

目的探讨放疗联合热疗诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其与Bcl-2和Bax蛋白表达的关系。方法将体外培养的肝癌HepG2细胞随机分为未治疗对照组、单纯放疗组、单纯热疗组、放疗联合热疗组,采用流式细胞术检测细胞的凋亡情况,免疫组化法检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果 4组肝癌HepG2细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中单纯热疗组、单纯放疗组及放疗联合热疗组较未治疗对照组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);放疗联合热疗组较单纯热疗组和单纯放疗组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。4组肝癌HepG2细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达和Bax/Bcl-2比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中单纯热疗组、单纯放疗组及放疗联合热疗组较未治疗对照组Bcl-2蛋白阳性表达率明显降低,Bax蛋白阳性表达率明显升高,Bax/Bcl-2明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);放疗联合热疗组较单纯热疗组和单纯放疗组Bcl-2蛋白阳性表达率明显降低,Bax蛋白阳性表达率明显升高,Bax/Bcl-2明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论放疗联合...     

顺铂对肝癌细胞株HepG2增殖和SATB1表达的影响

目的:观察特异AT序列结合蛋白1(special AT-rich sequence-binding protein 1,SATB1)在不同肝癌细胞株中的表达情况,并探讨顺铂对肝癌细胞株HepG2的细胞形态及SATB1表达的影响。方法:半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HepG2、BEL-7402、SMMC-7721三种肝癌细胞株中SATB1 mRNA的表达情况;HepG2细胞株中加入终浓度为2.5、5.0和10.0μg/ml顺铂培养24 h,倒置显微镜下观察细胞形态变化。结果:SATB1在肝癌细胞株BEL-7402、SMMC-7721、HepG2中均有表达,差异无统计学意义(P0.05)。HepG2细胞与顺铂共培养24 h后,倒置显微镜下可见细胞形态明显改变,细胞数减少,损伤、死亡的细胞增多。SATB1 mRNA的表达随着顺铂浓度的增加而减少,其中5.0、10.0μg/ml顺铂组SATB1 mRNA的表达量与对照组差异均有统计学意义(P0.05)。结论:SATB1在三种肝癌细胞株中均有表达,顺铂可抑制HepG2细胞增殖和SATB1的表达,从而达到抑制肝癌细胞生长的目的。     

Expression of TRAIL and its receptors in primary hepatic carcinoma and apoptosis-inducing effect of HrsTRAIL on hepatoma cell line HepG2

Objective： To investigate the expression of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand（TRAIL） and its receptors in primary hepatic carcinoma （PHC） and the apoptosis-inducing effect on hepatoma cell line HepG2. Methods： TRAIL and its receptors were detected by semiquantitive RT-PCR in 30 PHC and para-carcinoma tissues and two hepatoma cell lines of HepG2 and SMMC-7721. HepG2 cells were treated with human recombinant soluble TRAIL protein （HrsTRAIL） and then the viability of HepG2 cells was measured by microculture tetrazolium dye（MTT） assay and apoptosis index was demonstrated by fluorescence-activated cell sorting （FACS）. Results：TRAIL and its receptors were detectable in all PHC and para-carcinoma tissues and hepatoma cell line HepG2. TRAIL, death receptor 4 （DR4）, DR5, and decoy receptor 2 （DcR2） but not DcR1 were detectable in hepatoma cell line SMMC-7721. The expression patterns of TRAIL receptors in HepG2 were quite similar to PHC specimens. The semiquantitive results showed that the expression level of TRAIL and DcR were lower but DR was higher in hepatoma tissues than in para-carcinoma tissues. In PHC tissues, the expressions of DR were higher than DcR, while there was no difference in para-carcinoma tissues. HrsTRAIL had potent antitumor activity in a time- and dose-dependent manner. After co-incubations of the HepG2 cells in the presence of HrsTRAIL at concentration 1 000 ng/ml for 24 hours, the viability of HepG2 cells decreased to 45% and the apoptosis index reached 51%. Conclusion ：TRAIL and its receptors were expressed in both PHC tissues and para-carcinoma tissues but the expression levels were different. The lower expression of TRAIL in PHC tissues suggested that insufficient apoptosis occured in the development of PHC. High expression of DR in PHC tissues may be a self-defense mech- anism and may afford a theory of HrsTRAIL therapy for PHC. HrsTRAIL may be a potential cytotoxic drug for PHC, and it can kill majority of HepG2 cells, but minority of HepG2 were resistant to TRAIL-inducing apoptosis.