免疫印迹法检测宫颈液基细胞中HPV16、18 E6表达

采用免疫印迹方法检测宫颈鳞癌30例、腺癌8例、宫颈上皮内瘤变（CIN）52例和16例正常宫颈液基细胞中HPV16、18 E6表达.结果表明,宫颈液基细胞中HPV16、18 E6癌基因的过度表达与子宫颈癌及CINⅡ～Ⅲ密切相关,为阐明子宫颈癌病因和发病机制以及预测CIN进一步发展的可能性提供了理论依据.     

宫颈液基薄层脱落细胞联合HPV及p16检测在宫颈癌早期筛查中的临床意义

目的：探讨薄层液基脱落细胞检查（TCT）、高危型乳头状瘤病毒（HPV）DNA检测及脱落细胞p16蛋白免疫细胞化学检测在宫颈癌早期筛查中的应用价值。方法对TCT、HC2- HPV- DNA检测至少一项异常的815例患者,利用剩余细胞学标本进行p16免疫组化检测,同时行阴道镜及病理组织学检查进行对照。结果 HC2- HPV- DNA的阳性率和宫颈脱落细胞中p16表达阳性率随着宫颈病变严重程度的增加而明显升高（P＜0.01）。HC2- HPV- DNA＋TCT检测提高了宫颈癌及癌前病变的检出率,p16免疫细胞化学检查则提高了检测的特异度。结论在TCT和HC2- HPV- DNA检测的基础上,联合应用脱落细胞p16免疫细胞化学染色,可提高宫颈癌早期筛查的准确性。     

高危型HPV 16/18感染与宫颈上皮内瘤变的相关性

目的探讨高危型人乳头状瘤病毒（HPV）16／18感染与宫颈上皮内瘤（CIN）的关系。方法用膜式液基薄层细胞学（TCT）技术筛查与病理学诊断相结合,对宫颈炎和宫颈上皮内病变一级及其以上（≥CIN1）病例各200例进行HPV16／18型荧光定量PCR检测。结果宫颈病变≥CIN1组阳性病例69例,阳性率34．5％;宫颈炎对照组阳性．病例16例,阳性率8．0％,两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论高危型HPV16／18感染与宫颈上皮内瘤变密切相关。     

朗格汉斯细胞与宫颈癌及HPV16 E6的关系

目的:研究宫颈组织中朗格汉斯细胞(LC)的数量、形态及分布特点与宫颈癌及人乳头瘤病毒(HPV)16E6的关系.方法:用免疫组织化学技术(SP染色法)对标本的朗格汉斯细胞进行检测,以直接PCR法检测HPV16E6并对E6基因测序.结果:40例宫颈鳞癌,16例宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ/Ⅲ级与14例正常宫颈组织中,S-100蛋白阳性LC数量在正常组、CINⅡ/Ⅲ组、宫颈癌组中依次增加(P=0.000),与宫颈癌的临床分期呈负相关(R=-0.552,P=0.000),随宫颈癌组织分化程度降低而减少(P=0.039),与淋巴结转移无关(P=0.245).HPV16 E6在正常对照组、CINⅡ/Ⅲ组和浸润癌组中的阳性率依次上调(P=0.000).HPV16 E6(+)组中LC数量比HPV16E6(一)组少(P=0.011).LC的表达在HPV16 E6原型组和在HPV16 E6 D25E突变株组中无统计学差异(P=0.813).结论:LC功能缺陷与宫颈癌的发生有关.     

宫颈HPV感染与CINⅠ转归关系的临床研究

目的探讨宫颈人乳头状瘤病毒（human papillomavirus,HPV）感染与宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelialneoplasia,CIN）Ⅰ级转归的关系,从而为预测CINⅠ级的转归及制定个体化治疗方案提供依据。方法 32例CINⅠ级患者随访观察,活检前宫颈HPV检测,随访3个月、6个月阴道镜下活检病理学检查。结果高危型HPV感染组转归为正常发生率低于低危型HPV感染组及HPV阴性组（16.67%,78.57%,83.33%）,差异有统计学意义（P〈0.05）;高危型HPV感染组进展为CINⅡ级以上发生率率高于HPV阴性组及低危型HPV感染组（16.67%;0.00%;0.00%）,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论宫颈HPV感染类型是影响CINⅠ级转归的重要因素,但HPV感染类型是否可作为一项预测指标及作为制定CINⅠ级患者治疗方案的主要因素还需进一步研究     

原位杂交检测宫颈活检组织HPV感染的临床意义

目的探讨原位杂交（ISH）检测宫颈活检组织中人类乳头瘤病毒（HPV）感染对宫颈癌早期诊断的临床意义。方法对128例宫颈活检的石蜡标本,分别行常规检测和ISH-HPV检测。结果①二种方法检测慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变（CIN）、宫颈鳞状细胞癌（SCC）HPV感染检出率分别为2.5%与8.9%、37.5%与55.0%和66.6%与90.0%,检出率SCC〉CIN〉慢性宫颈炎,ISH法明显优于常规检测法（χ2=7.5625,P〈0.01）。②在所检测的128例宫颈活检组织标本中,21～30岁患者的HPV感染率明显高于其它年龄组。结论慢性宫颈炎、CIN、宫颈鳞状细胞癌与HPV6/11/16/18/31/33密切相关,随着病变程度的加重,HPV感染的检出率明显升高。ISH方法对早期宫颈HPV感染患者在分子病理学水平作出准确、特异、快速的诊断,同时具有细胞阳性定位功能。通过HPV感染的检测,可以积极预警年轻人群中宫颈癌的发生。     

cyclin E、p16ink4、ki67在宫颈脱落细胞中的表达及其与HPV16/18感染的相关性分析

目的：研究cyclin E、p16ink4、ki67在宫颈脱落细胞中的表达水平及其与HPV16/18感染的相关性,探讨其对宫颈癌高危人群筛查的意义.方法：采用免疫组织化学方法对78例宫颈脱落细胞标本进行cyclin E、p16ink4、ki67检测,同时应用多重引物PCR技术检测HPV16/18.结果：cyclin E、p16ink4、ki67在宫颈癌细胞中的表达水平较ASCUS差异均有统计学意义（P＜0.005）;各级宫颈癌细胞中HPV16的阳性率较ASCUS差异均有统计学意义（x2=25.27,P＜0.005）,随着宫颈上皮细胞的损伤程度加重而阳性率升高,差异也有统计学意义（P＜0.01）.p16ink4和ki67在宫颈癌细胞中的表达水平与HPV16高度相关（rs=1.0,P＜0.05）;而cyclin E的表达与HPV16相关性较小（rs=0.4,P＜0.05）.HPV18的阳性例数较少,在各项分析中差异均无统计学意义（x2=3.68,P＞0.05）.结论：cyclin E、p16ink4及ki67在宫颈癌细胞中的高度表达与HPV16感染有关,它们均可能作为有价值的诊断指标应用于宫颈癌高危人群筛查,且cyclin E对宫颈癌的早期诊断意义更大.     

宫颈癌及其癌前病变组织中HPV16 E6蛋白的表达及意义

目的：探讨宫颈癌及其癌前病变组织中16型人乳头瘤病毒（HPV16）E6蛋白的表达及其意义.方法：用免疫组化SP法对15例正常宫颈组织、14例低级别宫颈上皮内瘤变（LCIN）、11例高级别宫颈上皮内瘤变（HCIN）以及61例浸润性宫颈癌标本进行了HPV16 E6蛋白表达的检测.结果：HPV16 E6蛋白在正常宫颈上皮、CINⅠ～Ⅱ、CINⅢ及浸润性宫颈鳞癌中的阳性表达率分别为0（0/15）、7.14%（1/14）、36.36%（4/11）、59.02%（36/61）.高级别CIN和浸润性宫颈癌中HPV16 E6蛋白阳性率明显高于正常宫颈组织和低级别CIN（P〈0.05）,HPV16 E6蛋白表达与宫颈癌临床分期、组织分化和淋巴结转移无关（P〉0.05）.结论：HPV16 E6蛋白的检测可能可作为宫颈癌前病变转归的指标.     

液基细胞学联合p16用于早期宫颈病变诊断的研究进展

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,其发病率仅次于乳腺癌,位居第二,占癌症患者总数的15％,每年约37万余新发病例,20万人死亡.中国宫颈癌发生率及死亡率占全世界的1/3,且近年来呈现上升趋势.宫颈癌的发生和发展是一个多因素、多步骤的长期过程,是多个因素共同作用的结果,涉及多个基因的改变而引发细胞增殖失控,与癌基因的激活、抑癌基因的失活有关.多项研究表明,宫颈癌的发病与人类乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)有关,不同HPV亚型所引起宫颈癌的病理类型、病情演变速度以及预后也不同.病因学研究证实,宫颈癌的发生与高危型人类乳头状瘤病毒(High-risk human papillomavirus,HR-HPV)感染有关,HR-HPV感染的宫颈癌及癌前病变组织中出现p16INK4A异常表达,p16INK4A与HPV感染在宫颈病变中的关系,已成为近年来研究的热点.     

人乳头瘤病毒16型在宫颈上皮内瘤变和宫颈浸润癌中的感染状态

目的:探讨人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型在宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和宫颈浸润癌患者中的感染状态.方法:分别采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)方法及核酸分子快速导流杂交基因芯片...     

人乳头瘤病毒16型E6蛋白真核表达载体的构建及表达

目的构建在哺乳动物细胞中表达的人乳头瘤病毒16型早期蛋白6真核表达载体pcDNA3．1（-），E6，为研究HPV16 E6蛋白在细胞永生化作用中的机制奠定实验基础。方法用聚合酶链反应（PCR）扩增E6基因。将PCR产物纯化后与pUCm-T载体连接，经蓝白斑筛选、双酶切鉴定及序列分析后，亚克隆至pcDNA3．1（-）真核表达载体中；阳性克隆经双酶切鉴定后转染RAW264．7巨噬细胞，Western blotting鉴定其在RAW264，7细胞中的表达。结果重组载体经酶切、PCR及测序证明插入片断序列正确无误，转染RAW264．7细胞后可在细胞中表达HPV16E6蛋白。结论成功构建的HPV16E6真核表达载体pcDNA3，1（-）／E6能在RAW264．7细胞中表达E6蛋白。     

HPV16相关宫颈癌组织中MUC16和E6表达的关系

目的:探讨人乳头瘤病毒(HPV)16相关宫颈癌组织中粘蛋白抗原16(MUC16)与E6表达的关系。方法:以HPV16 E6阳性和阴性的宫颈癌细胞系和宫颈鳞状细胞癌(简称鳞癌)组织(184例)为研究对象,采用Western blot和免疫组化方法检测HPV16 E6和MUC16的表达。结果:Western blot结果显示:C-33A细胞中HPV16 E6无表达,Ca Ski细胞和Si Ha细胞中可见HPV16 E6表达;C-33A细胞中MUC16的表达低于Ca Ski细胞和Si Ha细胞(P<0.05),Ca Ski细胞和Si Ha细胞中MUC16的表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果显示:HPV16E6阳性的宫颈鳞癌组织中MUC16的表达高于HPV16 E6阴性的宫颈鳞癌组织(χ2=43.670,P<0.001)。结论:宫颈癌细胞系和鳞癌组织中MUC16与E6表达可能有关。     

Telomerase expression in normal human fibroblasts by introduction of human papillomavirus type16(HPV16) E6 and E7 genes

用已构建的含有     

高危型人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测在宫颈人乳头瘤病毒阳性人群中的分流价值

目的 探讨高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)E6/E7mRNA检测在宫颈人乳头瘤病毒DNA阳性人群分流管理中的临床应用价值。方法 2014年1月~2015年7月因宫颈疾病在温州医科大学第三临床学院妇科门诊就诊的宫颈HPV-DNA阳性患者共970例,随机选取336例,均行HPVE6/E7mRNA及宫颈细胞学(TCT)检测,并追踪其病理学结果 。分析HPVE6/E7mRNA拷贝数与病理分级及宫颈细胞学结果 的关系,预测其对CINⅡ+的诊断价值。结果 鳞癌(squamouscell cancer,SCC)组拷贝数最高,无上皮内病变或恶性病变(negative for intraepithelial ledion or malignancy,NILM)组拷贝数最低,宫颈癌组HPVE6/E7mRNA阳性率及拷贝数最高,宫颈炎性改变组阳性率及拷贝数最低。不同细胞学诊断级别间HPVE6/E7mRNA水平比较,细胞学异常组(包括atypical squamous cells of undetermined significance,ASCUS,low-grade squamous intraepithelial lesion LISL,high-grade squamous intraepithelial lesions HISL,SCC)的表达水平高于NILM组,差异有统计学意义(F=28.99,P<0.01),不同宫颈组织病变程度级别间HPVE6/E7mRNA水平比较,CINⅡ+(histological dysplasia or cancer)的表达水平高于CINⅡ-,差异有统计学意义(F=40.154,P<0.01)。Spearman等级相关提示宫颈细胞学诊断级别及宫颈病理级别同HPVE6/E7mRNA拷贝数呈正相关,相关系数分别为(r=0.408,P<0.01;r=0.699,P<0.01)。结论 随着宫颈病变程度的加重,HPVE6/E7mRNA拷贝数逐渐增加,对宫颈HPV-DNA阳性患者的分流有一定的意义,对宫颈癌有一定的筛查价值。     

肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌的表达及其与HPV感染的关系

目的探讨肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌中的蛋白表达以及人乳头瘤病毒(HPV)16E6、E7和HPV18E6/E7感染对其表达的影响。方法采用免疫组化SP法检测70例浸润性宫颈癌、15例原位癌、20例正常宫颈组织中KAI1蛋白的表达,采用PCR扩增-琼脂糖凝胶电泳法检测浸润性宫颈癌组织中HPV16E6、E7和HPV18E6/E7的DNA状况。结果宫颈浸润癌及原位癌组织中的KAI1蛋白表达与正常宫颈上皮中的表达相比明显下调(P<0.05),原位癌与浸润癌中的表达差异无统计学意义;HPV16E6、E7和HPV18E6/E7在浸润性宫颈癌中的阳性率分别为67.1%、54.3%和12.9%,HPV16E6、E7和HPV18E6/E7感染与宫颈癌中的KAI1蛋白表达无相关性。结论肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌中呈下调表达,HPV16E6、E7和HPV18E6/E7感染不影响其表达。     

HPV16E6和p53在口腔癌中的表达及相关性研究

目的 探讨HPV16E6和抑癌基因p53在口腔癌中的表达,及其与口腔癌临床分期、病理分级的相关性.方法 用免疫组织化学方法检测149例口腔癌、88例口腔癌癌前病变和49例癌周正常组织标本中HPV16E6和p53的表达,统计口腔癌不同临床分期和病理分级中HPV16E6和p53的阳性表达率.结果 口腔癌组织、口腔癌癌前病变组织和口腔癌癌周正常组织中HPV16E6的阳性表达率分别为79.9％ (119/149)、38.6％ (34/88)和2.0％ (1/49),p53的阳性表达率分别为24.2％(36/149)、55.7％(49/88)和91.8％ (45/49).随着临床分期和病理分级的增加,HPV16E6阳性表达率明显增加,而p53阳性表达率却明显减少(P＜0.05).结论 HPV16E6蛋白的表达升高和p53蛋白的表达降低可能会导致口腔癌的发生和发展.检测患者口腔癌组织中HPV16E6和p53的表达可用于评定口腔癌的恶性程度.     

用PCR检测新疆部分女性尖锐湿疣与宫颈上皮内瘤变组织HPV的初探

应用多重引物人乳头瘤病毒(HPV)6b、11、16、18型聚合酶键反应(PCR)技术检测74例新疆南疆、北疆部分地区女性下生殖道尖锐湿疣(CA)与宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中人乳头瘤病毒DNA(HPV DNA).其中在南疆检测出CA17例,CIN Ⅲ级20例,在北疆检测出CA22例,CINⅠ～Ⅲ级2例,CINⅢ级13例.结果:总HPV DNA检出率分别为94.1%、90.0%、90.9%、86.7%.CIN与CA患者的HPVDNA检出率在地区性方面无显著性差异(P>0.05).在南、北疆患者CA组织中HPV6b、11、16、18型检出率分别为89.7%、12.8%、5.1%.CIN组织中HPV6b、11型检出率为0%,HPV16、18型检出率分别为65.7%、20%.提示CA与HPV6b、11型感染有关,CIN则与HPV16、18型密切相关.并且在南、北疆CA与CIN患者所感染的HPV亚型无地理分布差异(P>0.05).CIN组织中,HPV16、18型检出率较国内外报道高,值得重视;CA组织中,检出HPV高危型(HPV16、18型)7例,其中1例伴宫颈不典型增生Ⅰ～Ⅱ级,这些病例应继续密切随访.     

p16~(INK4a)与HPV16/18-E6在宫颈组织中的表达及其临床意义

目的 研究p16INK4a与HPV在不同宫颈组织中的表达及其临床意义,以寻求预测宫颈癌前病变及宫颈癌进展及预后的生物学标记.方法 选取不同的宫颈组织.采用免疫组织化学方法检测宫颈组织上HPV16/18-E6和p16INK4a的表达,并结合临床资料进行分析.结果 HPV16/18-E6和p16INK4a在正常宫颈组织、慢性宫颈炎组织和宫颈上皮内瘤变组织CIN Ⅰ级上呈阴性表达或弱表达,在CIN Ⅲ级和宫颈癌组织上表达明显增强(P＜0.01).p16INK4a在宫颈癌上的表达和宫颈癌的病理分化和肌层浸润程度有明显的相关性(P＜0.01).结论 HPV16/18-E6和p16INK4a在宫颈CIN Ⅲ和宫颈癌上的表达有明显的相关性.p16INK4a和HR-HPV联合检测可提高对宫颈癌前变及宫颈癌的早期诊断率.     

RNA干涉抑制宫颈癌HPV16 E6基因的研究

目的采用RNA干涉（RNAi）技术干扰宫颈癌HPV16 E6基因转录,通过体外和体内实验了解其特异性抑制HPV16 E6基因的效率。方法设计合成针对HPV16 E6的小干扰RNA（siRNA）,借脂质体转染宫颈癌CaSki细胞,通过测定转染后不同时间点的细胞凋亡率、HPV16 E6mRNA及蛋白表达变化了解基因抑制的效率。体内实验中建立子宫颈癌荷瘤裸鼠模型,将E6 siRNA直接注入瘤体,观察肿瘤体积的变化,肿瘤切片HPV16 E6免疫组化染色,观察肿瘤坏死和细胞的凋亡。结果HPV16 E6siRNA转染细胞后24h、48h、5d和9d时凋亡率分别为7．7％、11．8％、37．4％和12．6％。RT-PCR显示转染后24h、48h、5d和9d HPV16 E6 mRNA量减少了77％、83％、59％和41％。Western blot显示转染后的HPV16 E6蛋白表达在24h、48h、5d明显减少,9d时有所恢复;流式细胞仪HPV16 E6蛋白定量测定结果显示,转染后24h、48h、5d和9d蛋白表达抑制率分别为79．7％、80．4％、71．3％和57．4％。体内实验瘤内注射HPV16 E6 siRNA明显抑制肿瘤的生长,HPV16 E6蛋白表达明显受抑,肿瘤组织坏死和细胞凋亡增加,重复给药较单次给药效果更好。结论体内和体外实验均表明RNA干涉HPV16 E6基因的效果具有特异性和高效性。