结核、血吸虫抗体快速联检方法的建立与应用

目的 创建一种新的结核、血吸虫抗体快速联合检测方法,并评价其在疾病预防中的潜在应用价值.方法 以血吸虫虫卵可溶性抗原(SEA)和结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露糖(LAM)作为检测用抗原,分别点样在硝酸纤维素膜上,以胶体金-蛋白A结合物为检测标记物,采用自行设计的垂直流检测装置为抗原抗体反应体系,建立结核抗体、血吸虫抗体快速联合检测的金标免疫渗滤法(TB/Sj-DIGFA);用TS/Sj-DIGFA检测肺结核病人、血吸虫病人、健康人及流动人口血清样本,以敏感性、特异性等指标考核其诊断价值及应用价值.结果 TB/Sj-DIGFA检测36份肺结核病人血清和40份血吸虫病人血清的敏感性分别为94.4%(34/36)和100%(40/40);检测50人份健康人血清,对结核病和血吸虫病的特异性分别为80.0%(40/50)和100%(50/50).应用新创建的TB/Sj-DIGFA方法调查3120流动人口,查出结核抗体阳性675份,阳性率为21.6%(675/3120),血吸虫抗体阳性38人份,阳性率为1.22%(38/3120).结论 TB/Sj-DIGFA检测结核和血吸虫抗体具有较高的敏感性和特异性.该方法一次操作可同时完成结核和血吸虫2项特异性抗体测定,检测效率高,可节省大量人力和物力.     

金标渗滤法测定囊虫特异性抗体试剂盒的研制

目的 研制简易、快速、准确的囊虫病诊断试剂盒,并对其诊断价值进行考核评价。方法 以猪囊尾蚴的囊液粗提液为检测用抗原,以胶体金标记的金黄色葡萄球菌蛋白A（SPA）为探针,采用自行设计的渗滤装置制备金标渗滤法（DIGFA）检测试剂盒。检测不同病人血清中囊虫特异性IgG抗体,并以囊虫IgG抗体ELISA检测试剂盒考核其敏感性和特异性。结果 用金标试剂盒检测58人份囊虫病患者血清和100人份健康者血清,其敏感性为98.3％（57/58）;特异性为100％（100/100）。用该试剂盒检测25人份包虫病患者血清,6份呈弱阳性,交叉反应率为24％;检测30人份血吸虫病人血清,10人份肺吸虫病人血清,10人份肠道线虫病人血清,均无交叉反应。与ELISA试剂盒检测结果比较,符合率为98．7％,无显著性差异（χ^2=0．0545,P〉0．05）。结论 金标渗滤法快速检测囊虫特异性抗体试剂盒敏感性高、特异性强,可与ELISA法相媲美,且操作更为简便、快速,结果判读容易,特别适合临床检测和现场查病。     

斯氏肺吸虫成虫抗原皮内试验实用价值的探讨

目的:为探索检测斯氏肺吸虫病抗体简便易行的方法。方法:以肺吸虫成虫抗原对斯氏肺吸虫病人和其它人群进行皮内试验。结果:斯氏肺吸虫病人阳性检出率为99.7％,健康人群,蛔虫及鞭虫病人,结核病人及其它内科疾病病人均为阴性反应。结论:提示皮内试验用于斯氏肺吸虫病临床诊断和流行病学调查具有敏感性高,特异性强,操作简便易行等优点。     

生物蛋白芯片检测结核分枝杆菌抗体对结核病的诊断价值

目的 了解生物蛋白芯片检测结核分枝杆菌抗体对结核病的诊断价值.方法 使用蛋白芯片技术对163例病人血清的结核分枝杆菌抗体进行检测.结果 三项结核分枝杆菌抗体的敏感性为80.8%(63/78),特异性为77.6%(66/85).结论 生物蛋白芯片系统检查结核分枝杆菌抗体的敏感性的特异性比较高,可作为结核病的血清学诊助之一.     

血清阿拉伯糖甘露糖脂IgG抗体检测在诊断泌尿系统结核病中的价值

目的探讨检测阿拉伯糖甘露糖脂IgG抗体(LAM-IgG)诊断泌系统结核的临床应用价值。方法纳入泌尿系统结核病患者59例(结核组)和非结核性泌尿系统疾病患者32例(对照组),采集血液标本,应用斑点免疫金渗滤试验检测LAM-IgG。结果结核组LAM-IgG阳性38例(64.4%),对照组无LAM-IgG阳性病例。LAM-IgG诊断泌尿系统结核病的特异性为100%,敏感性为64.4%。结论检测血清LAM-IgG对诊断与鉴别诊断泌尿系统结核病有高度特异性和较高敏感性,具有应用价值。     

结核分枝杆菌三种特异性抗体ELISA检测方法的建立

目的 建立以结核分枝杆菌特异性蛋白ESAT6、CFP10-ESAT6、ESAT6-PPE68为包被抗原检测结核病人血清中特异性抗体的间接ELISA检测方法。方法 利用本室构建并纯化的结核分枝杆菌特异性抗原蛋白ESAT6、CFP10-ESAT6、ESAT6-PPE68,建立结核分枝杆菌特异性抗体检测的间接ELISA检测方法:ESAT6-ELISA、CFP10-ESAT6-ELISA、ESAT6-PPE68-ELISA。并与PPD-ELISA同时检测220例结核病人血清、30例非结核呼吸疾病病人血清和50例健康人群血清,分别对三种方法的敏感性与特异性进行统计学分析。结果 ESAT6-ELISA的敏感性为25%,特异性为95%;CFP10-ESAT6-ELISA的敏感性为45%,特异性为93%;ESAT6-PPE68-ELISA的敏感性为48%,特异性为85%。结论 三种结核分枝杆菌特异性抗体检测方法的敏感性均低于PPD-ELISA,但三种结核分枝杆菌特异性抗体检测方法的特异性均高于PPD-ELISA,其中CFP10-ESAT6-ELISA检测的效果最佳,PPE68可作为结核特异性诊断的候选抗原。     

应用ELISA技术测定结核病人特异性IgG抗体的研究

结核病的临床表现复杂,常用的结核菌素(OT)试验进行鉴别诊断常不令人满意,Nassau等用ELISA检测结核分枝杆菌抗体,证明某些类型结核病人,在活动期内有一定量抗体出现,并认为测定体内抗体水平作为对结核病的辅助诊断和观察疗效有一定意义。Grange进一步证明,活动性结核病人体内升高的特异性抗体IgG类。并认为结核病的血清学诊断以检测特异性的IgG为主。对此,我们应用ELISA来测定抗精制蛋白衍生物(PPD)的特异性IgG,以观察结核病人的特异性抗体水平。现将实验方法与结果报告     

免疫法测结核抗体与痰涂片镜检法的比较

目的比较免疫法检测结核抗体与痰涂片镜检法找结核杆菌,评价其方法学的优越性。方法应用结核分枝杆菌抗体(Ig G)试剂盒检测结核Ig G抗体和痰涂片镜检法找结核杆菌,并对结果进行分析。结果血清结核抗体诊断结核病的敏感性为64.4%(143/222),特异性为98.5%(197/200),阳性预测值为97.9%(143/146),阴性预测值为71.4%(197/276),抗酸菌涂片镜检法敏感性为16.2%(36/222),血清结核抗体的敏感性显著高于抗酸菌涂片镜检法,差异有统计学意义(P0.05)。在结核病组中,痰涂片阳性患者,血清结核抗体阳性率为83.3%(30/36);痰涂片阴性患者,血清结核抗体阳性率为60.8%(113/186)。结论血清结核抗体诊断结核病,具有快速、简便,敏感性高和特异性较强等优点,是临床早期诊断结核病的有效方法。     

金标免疫渗滤法（DIGFA）快速检测血吸虫循环抗原的研究

目的建立一种简便、快速的血吸虫病诊断方法。方法在已建立的检测血吸虫抗体的DIGPA基础上，以抗血吸虫重组蛋白SVLBP多抗为捕捉抗体，金标抗SEA多抗为覆盖抗体，建立快速检测病人血清中血吸虫循环抗原的双夹心DIGFA。结果用该法检测了急性血吸虫病病人血清30人份和慢性血吸虫病病人血清38人份，其阳性检出率分别为100％和52．6％；120人份流行区健康人血清全为阴性；100人份非流行区健康人群血清的阴性符合率为100％，与10例华支睾吸虫病病人血清无交叉反应；15例肺吸虫病病人血清有1例阳性，交叉反应率为6．7％；与双夹心ELISA的符合率为97.4％，经x^2检验表明两法检测效果无显著性差异。结论用DIGFA检测血吸虫循环抗原具有较高的敏感性和特异性，并且方法简便、快速、不需特殊仪器设备，有广阔的应用前景。     

重组华支睾吸虫26kDaGST蛋白用于检测特异抗体的研究

目的 评价重组华支睾吸虫26kDaGST蛋白(rCs26GST)在华支睾吸虫病血清学诊断上的价值。方法使用rCs26GST抗原,以酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫增强化学发光法(immuno-enhanced chemilmninescence,immuno-ECL)检测华支睾吸虫病者、其它寄生虫感染者及健康人血清特异性IgG和IgE抗体,分析rCs26GST抗原用于检测的敏感性和特异性。结果使用rCs26GST抗原,ELISA法检测了30份华支睾吸虫感染者血清、肺吸虫病人血清15份、日本血吸虫病人血清20份、无寄生虫感染的健康人血清40份,华支睾吸虫感染者血清IgG的阳性检出率为73．3％(22／30),健康人、肺吸虫病和日本血吸虫病人的阴性率分别为92．5％(37／40)、80．0％(12／15)、85．0％(17／20)。hnmuno-ECL法检测华支睾吸虫感染者血清rCs26GST-特异性IgE的阳性检出率为867％(26／30),肺吸虫病为26．7％(4／15),日本血吸虫病人和阴性对照组的血清未测出,此法的特异度是95．5%。结论 rCs26GST蛋白用于血清特异性IgG和IgE抗体的检测具有较高的敏感性和特异性,可用于华支睾吸虫病的血清学诊断,组合成“鸡尾酒”式的复合诊断抗原之一。     

金标免疫渗滤法检测猫狗血清中抗肺吸虫IgG

目的探索简易、快速的猫、狗肺吸虫病免疫诊断方法。方法以肺吸虫成虫可溶性抗原点样于固相硝酸纤维素膜上,以胶体金-protein A为检测标记物,采用自行设计的渗滤装置,检测猫、狗血清中抗肺吸虫IgG抗体。结果检测7份肺吸虫感染猫血清和6份感染狗血清均为阳性,检测25份健康猫血清和27份健康狗血清均为阴性。结论金标免疫渗滤法快速检测猫、狗血清中肺吸虫特异性IgG,不仅操作简便、快速,结果判读容易,不需特殊仪器设备,而且敏感特异,有潜在的诊断价值,值得进一步开发应用。     

金标免疫渗滤法检测卫氏并殖吸虫循环抗原的研究

目的：建立一种快速，简便，检测卫氏并殖吸虫病患者血清循环抗原（CAg)的新方法。方法：对抗体夹心金标免疫渗滤法（DAS－DIGFA）以抗卫氏并殖吸虫成虫多克隆抗体为包被抗体，加待检血清后再加免疫金标的抗卫并殖吸虫成虫单克隆抗体，阳性者出现红色斑点，结果：用DAS－DIGFA检测59例卫氏并殖吸虫病患者清，其阳性率为96．6％（57／59）；检测正常人血清20例，肺结核病患者血清20例，丝虫病患者血清27例，囊虫病患者血清20例和血吸虫病者血清26例，除1例血吸虫病患者血清阳性外，余均为阴性，特异性为99．1％（112／113）。结论：DAS－DIGFA是一种快速，简便，敏感和特异的检测卫氏并殖吸虫病患者血清中循环抗原的新方法。     

卫氏并殖吸虫成虫的特异性诊断抗原

目的：寻找诊断并殖吸虫病的特异性抗原。方法：应用SDS-PAGE和Western blot对卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析。结果：卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS-PAGE后显示14条蛋白带，其中相对分子质量为53000、3l000、25000、16000、11000是主带；相对分子质量为53000和34000的条带可与华支睾吸虫病患者血清反应；108000、94000、65000的条带可与血吸虫病患者血清反应；58000、53000、43000的条带可与旋毛虫感染的大鼠血清、小鼠血清及旋毛虫病患者血清反应。37000的蛋白带只能被斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和并殖吸虫病患者血清所识别，而不与华支睾吸虫病、血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清、旋毛虫病患者血清、正常大鼠、小鼠血清及正常人血清发生交叉反应。结论：卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为37000的蛋白组分为卫氏并殖吸虫成虫的特异性抗原，可用于并殖吸虫病的免疫学诊断及血清流行病学调查．     

rSj26-Sj32-Immunogold-Dipstick试剂对慢性日本血吸虫病的诊断价值研究

目的研究rSj26-Sj32-Immunogold-Dipstick试剂对慢性日本血吸虫病的诊断价值。方法用rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)Immunogold-Dipstick法检测慢性日本血吸虫病患者血清,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊性棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核患者和健康人血清作为对照,比较两种抗原检测抗体效果的差异。结果该法检测慢性日本血吸虫病的敏感性和特异性分别为92.50%和97.67%,诊断该病的阳性预告值、阴性预告值及诊断效率分别为97.37%、93.33%和95.18%,并且与其他疾病患者血清均无交叉反应。结论 rSj26-Sj32-Immunogold-Dipstick试剂可用于慢性日本血吸虫病的免疫诊断。     

卫氏肺吸虫重组抗原的制备及初步应用研究

目的：纯化重组细菌Pw-1／pRSET B／BL21的表达产物肺吸虫重组抗原，复性后以ELISA法检测肺吸虫病患者、其他寄生虫病患者和正常人血清，评价其敏感性、特异性和应用前景。方法：通过分步洗涤及透析对细菌重组蛋白进行初步纯化．进一步做快速液相层析纯化，比较前后两法的纯化效果。初步纯化产物经氧化／还原型谷胱苷肽复性后即为重组蛋白抗原(以下简称重组抗原)。用该重组抗原，以ELISA法检测肺吸虫、血吸虫、肝吸虫、囊虫和包虫病患者以及正常人血清中相应抗体，并与卫氏肺吸虫粗抗原做比较。结果：经分步洗涤及透析纯化后的重组抗原纯度已较高，快速液相层析进一步纯化效果不明显。以初步纯化后经复性的重组抗原进行ELISA法检测肺吸虫病患者血清，敏感性为91．07％，与其他寄生虫病患者和正常人血清均无交叉反应；粗抗原检测肺吸虫病患者血清敏感性虽为100％，但与其他寄生虫病患者和正常人血清交叉反应率分别为：血吸虫病11．43％，肝吸虫病4．84％，囊虫病3．22％，包虫病5．88％，正常人为2．5％。结论：研究制备的重组抗原应用于肺吸虫病的免疫诊断特异性较高。     

儿结核病结核抗体检测的诊断价值

目的：探讨结核菌纯蛋白衍化物(PPD)及抗脂肪阿拉伯酸甘露聚糖抗体(LAM-IgG)对小儿结核病的诊断价值。方法：检测66例结核病患儿血清抗LAM-IgG和PPD试验,并与30例非结核病患儿进行对照。结果：小儿结核病PPD试验阳性率为59.1%,抗LAM-IgG阳性率为69.7%,两者差异无显著性(P＞0.05)。PPD试验对非重症结核病阳性率(79.5%)明显高于重症结核(18.2%)(P＜0.005);而抗LAM-IgG重症结核病阳性率(70.5%)与非重症结核病(68.2%)相近(P＞0.05)。PPD试验对非结核病患儿的假阳性率(36.7%)明显高于抗LAM-IgG试验(3.3%)(P＜0.01)。结论：PPD试验对非重症结核病诊断价值优于重症结核病;抗LAM-IgG检测对重症结核病的诊断优于PPD试验,对非结核病的假阳性率较低。     

酶免疫转移印渍试验(EITB)分析斯氏狸殖吸虫成虫抗原

本文应用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离斯氏狸殖吸虫成虫抗原,并通过转移电泳至硝酸纤维薄膜(NC)上,然后用酶联免疫试验观察成虫抗原蛋白与感染斯氏狸殖吸虫的病人、犬及大鼠血清的反应,检测和识别特异性虫体抗原蛋白。实验结果呈示;虫体抗原经SDS-PAGE分离、染色后可显示20余条蛋白区带;分子量分别为22、24、26KD的抗原蛋白对人体和动物的斯氏狸殖吸虫感染具有诊断价值。     

免疫组化技术对斯氏狸殖吸虫成虫免疫诊断相关抗原的初步研究

目的初步分析斯氏狸殖吸虫成虫表膜和肠相关抗原,探讨肺吸虫病的免疫诊断的特异性诊断抗原。方法斯氏狸殖吸虫成虫制备成15μm的冰冻切片,肺吸虫患者血清识别斯氏狸殖吸虫成虫特异性抗原,采用免疫金标记和免疫酶标记检测技术对抗原进行定位,激光共聚焦显微镜技术进行半定量分析以及免疫透射电镜对其细微结构的观察。分实验组和对照组。结果肺吸虫患者血清识别的斯氏狸殖吸虫成虫抗原定位于虫体的表膜和肠腔,表膜抗原半定量分析平均灰度值为80.65,肠腔抗原半定量分析平均灰度值为71.26,电镜下可见胶体金附着于肠腔和表膜的双层结构。结论肺吸虫患者血清识别的斯氏狸殖吸虫成虫抗原都为表膜相关抗原和肠相关抗原,因此与肺吸虫病免疫诊断相关的诊断抗原为虫体表膜和肠上皮产生的相关蛋白。