308 nm单频准分子光对人黑素细胞膜凋亡、周期和KIT蛋白表达的影响

目的 探讨308 nm单频准分子光对体外培养的人黑素细胞凋亡、细胞周期和KIT蛋白表达的影响。方法 在流式细胞仪上采用AnnexinⅤ检测0，20，40，80，160，300 mJ/cm2剂量308 nm单频准分子光照射后24 h黑素细胞的凋亡；采用碘化丙啶检测80 mJ/cm2照射后24 h细胞周期的变化。实时荧光PCR和Werstern印迹分别检测0，20，40，80，160，300 mJ/cm2剂量照射后24 h黑素细胞c-kit mRNA和KIT蛋白的表达。结果 照射后24 h，在小于160 mJ/cm2剂量下，黑素细胞凋亡无明显增加，但300 mJ/cm2时的凋亡率与对照相比较明显增加（P < 0.05）。80 mJ/cm2剂量照射后24 h，S期细胞数明显高于其对照，分别为29.06% ± 0.75%和22.64% ± 0.07%；低剂量308 nm单频准分子光照射后24 h，c-kit mRNA表达呈先增加后减少的趋势，80 mJ/cm2时达高峰，KIT蛋白的表达与mRNA的表达趋势一致。结论 低剂量308 nm单频准分子光（80 mJ/cm2）促进黑素细胞增殖和KIT的表达。     

308nm准分子光对人角质形成细胞的凋亡、细胞周期和干细胞因子表达的影响

目的探讨单频308 nm准分子光对角质形成细胞的凋亡、细胞周期和干细胞因子表达的影响。方法采用MTT法确定最适能量密度，用流式细胞仪检测单频308nm准分子光对角质形成细胞的凋亡和细胞周期的影响。RT-PCR和蛋白质印迹分别检测单频308nm准分子光对角质形成细胞干细胞因子基因转录和蛋白表达水平的影响。结果用400mJ／cm^2单频308nm准分子光照射角质形成细胞后24h和48h，细胞凋亡明显增加（P〈0.05），48h时S期细胞虽有增加，但无统计学意义（P=0．059）。干细胞因子mRNA和蛋白表达均增加，在照射后12h左右达高峰。且蛋白表达随着照射剂量的增加而增加，但mRNA的表达未随剂量的增加而改变。结论单频308nm准分子光可导致角质形成细胞凋亡，促进干细胞因子的表达，这可能是准分子光治疗白癜风的机制之一。     

308nm准分子激光对角质形成细胞分泌细胞因子的影响

目的探讨308nm准分子激光对人角质形成细胞(HKC)增殖及分泌细胞因子的影响。方法CCK-8法检测不同剂量准分子激光照射后12h及24h对HKC增殖的影响;ELISA法检测细胞培养上清液中干细胞生长因子(SCF)、集落细胞生长因子(GM-CSF)、成纤维细胞生长因子(bFGF)的浓度;DNA Ladder法检测准分子激光照射后HKC晚期凋亡情况。结果细胞活力与照射剂量呈负相关,照射后12h的细胞活力与24h相比差异有显著性(P=0.001);308nm准分子激光剂量在100～300mJ/cm2时,HKC分泌SCF,GM-CSF,bFGF的增加呈剂量依赖性,与对照组(0mJ/cm2)比较差异有显著性(P<0.001),6h后分泌的SCF,GM-CSF,bFGF开始增加,24h后达到峰值。准分子激光照射可诱导HKC出现晚期凋亡。结论308nm准分子激光可能通过诱导角质形成细胞分泌SCF,GM-CSF,bFGF等促进黑素细胞增殖分化的细胞因子,使白癜风皮损复色。     

皮肤科学基础

人肝细胞生长因子对体外培养的黑素细胞生物学活性的影响；308nm单频准分子光对人黑素细胞凋亡、周期和KIT蛋白表达的影响;益母草鲜汁对皮肤黑色素抑制作用的实验研究;表没食子儿茶素没食子酸酯对体外培养的人毛囊生长和毛乳头细胞增殖的影响;含额外拷贝ERG3B基因烟曲霉的表型分析     

黄芩苷对中波紫外线所致HaCaT细胞凋亡、细胞周期变化及p16、原癌基因c-myc蛋白表达的影响

目的:观察中波紫外线(UVB)辐射引起的人表皮角质形成细胞株HacaT细胞凋亡、细胞周期及p16、c-myc蛋白水平的影响及传统中药黄芩苷(baicalin)对它的干预作用.方法:以200 mg/L黄芩苷预处理HacaT细胞,以流式细胞仪检测经0、30、60和90 mJ/cm2的UVB照射后24 h细胞周期和凋亡率变化;以Western blot方法检测90 mJ/cm2 UVB照射后p16、c-myc 蛋白的表达水平.结果:UVB照射可诱导HaCaT细胞产生凋亡,凋亡率呈剂量依赖性增加;30 mJ/cm2 剂量下细胞可出现明显S期阻滞,随UVB剂量增大,S期细胞数量相对下降;照光后p16、c-myc蛋白水平均有所增高.加入黄芩苷处理可抑制UVB引起的上述变化.结论:黄芩苷可明显抑制UVB引起的凋亡与细胞周期阻滞以及p16、c-myc蛋白表达,证实该药具有有效的光保护作用.     

治疗剂量308nm准分子光对小鼠皮肤的致癌性

目的 探究常规治疗剂量308nm准分子光长期照射对小鼠皮肤的致癌性。方法 将96只昆明小鼠根据308nm准分子光照射时间(4周、8周、12周、16周、20周和24周)不同分为6组,每组8只,每个时间组均设正常对照组;参考人非增生性皮肤病变治疗剂量,初始照射剂量60mJ/cm2,1次/周,再根据治疗反应逐渐增加治疗剂量。照射结束后观察小鼠皮肤组织病理变化(HE染色)和免疫组化法检测P53蛋白表达。结果 正常对照组小鼠皮肤组织病理无明显改变,P53阳性表达率随照射时间增加无明显变化(P>0.05);308nm准分子光照射16周后,部分小鼠皮肤开始出现角质形成细胞的非典型增生及鳞状细胞癌病理表现,P53蛋白阳性表达率随照射时间延长而逐渐增加(P<0.05);照射16周、20周和24周时,308nm准分子光组阳性率均高于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 308nm准分子光对小鼠皮肤具有一定致癌性,致癌风险同照射时间呈正相关。     

宽谱中波紫外线对人表皮黑素细胞非经典Wnt通路的作用研究

目的 探讨宽谱中波紫外线（BB-UVB）照射对黑素细胞增殖率、酪氨酸酶活性、黑素含量的影响。 方法 分别用0、10、20、30、40、50、100、200、300 mJ/cm2 BB-UVB照射原代培养的黑素细胞,采用CCK8法测定黑素细胞增殖率、多巴比色法测定酪氨酸酶活性、NaOH溶解法测定黑素含量。分别用0、30、50、100 mJ/cm2 BB-UVB照射黑素细胞,实时荧光定量PCR检测非经典Wnt通路相关基因mRNA的表达。100 mJ/cm2 BB-UVB照射黑素细胞,用Western 印迹检测作用前后非经典Wnt通路相关基因蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用独立样本t检验。 结果 与对照组相比,10 ~ 300 mJ/cm2 BB-UVB照射后,细胞增殖率均逐渐降低,BB-UVB剂量 > 100 mJ/cm2时细胞存活率 < 50%,同时,10 ~ 100 mJ/cm2 BB-UVB照射后酪氨酸酶活性逐渐增加,100 mJ/cm2 BB-UVB组黑素含量明显增加,差异有统计学意义（均P < 0.05）。30、50、100 mJ/cm2 BB-UVB照射后,WIF-1 mRNA的表达均较对照组逐渐减少,JNK、MITF、RAC1、TYR的表达均较对照组逐渐升高,而30、50 mJ/cm2 BB-UVB组WNT5A mRNA表达量均较对照组降低,100 mJ/cm2 BB-UVB组WNT5A mRNA表达量则明显升高（P < 0.05）。100 mJ/cm2 BB-UVB照射后,WIF-1蛋白的表达量较对照组降低,WNT5A、JNK、MITF、RAC1、TYR蛋白表达较对照组升高（P < 0.05）。 结论 紫外线照射降低黑素细胞增殖率,提高黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量。WIF-1基因可能抑制黑素生成。WIF-1基因表达降低可能通过非经典通路Wnt蛋白的综合作用激活JNK/MITF/TYR通路,最终促进黑素合成。     

308nm准分子激光诱导T淋巴细胞凋亡的研究

目的:探讨308 nm准分子激光对T淋巴细胞直接和间接诱导凋亡的作用及转化生长因子β1(TCF-β1)在诱导T淋巴细胞凋亡中的作用.方法:308 nm准分子激光分别照射角质形成细胞和体外分离的活动期白癜风患者外周血T淋巴细胞;ELISA检测照射后24h及48 h角质形成细胞培养上清中的TGF-β1浓度;流式细胞仪检测照射后48 h的T淋巴细胞凋亡情况;建立Transwell细胞共培养系统(角质形成细胞位于上室,T淋巴细胞位于下室),308 nm准分子激光照射Transwell上室,照射后48 h检测T淋巴细胞凋亡情况;照射前加入不同浓度的抗TGF-β1抗体(25、250、2 500 pg/L),于照射后48 h采用流式细胞仪分别检测T淋巴细胞凋亡情况.结果:308 nm准分子激光诱导角质形成细胞分泌TGF-β1的增加呈剂量依赖性;流式细胞仪检测结果显示:准分子激光可直接诱导T淋巴细胞凋亡;准分子激光照射Transwell上室可间接诱导T淋巴细胞凋亡;照射前加入抗TGF-β1抗体.可抑制308 nm准分子激光的诱导凋亡作用.结论:308 nm准分子激光直接照射可诱导T淋巴细胞凋亡,也可作用于角质形成细胞间接诱导T淋巴细胞凋亡.TGF-β1在308 nm准分子激光诱导T淋巴细胞凋亡中起重要作用.     

中波紫外线对HaCaT细胞凋亡、细胞周期变化及p16、c-myc蛋白表达的影响及阿魏酸干预作用研究

目的观察传统中药川芎的有效成份阿魏酸(ferulic)对中波紫外线(UVB)辐射引起的人表皮角质形成细胞系HaCaT细胞凋亡、细胞周期及对p16、c-myc蛋白水平变化的影响,以探讨其光保护作用与机制。方法培养HaCaT细胞,以不同剂量UVB和200mg/mL浓度的阿魏酸处理细胞,以流式细胞仪检测0、30、60和90mJ/cm~2的UVB照射后24h细胞周期和凋亡率变化;以Western blot方法检测30mJ/cm~2UVB照射后p16、c-myc蛋白的表达水平。结果UVB照射诱导HaCaT细胞产生凋亡,凋亡率呈UVB剂量增加而升高;30mJ/cm~2剂量下细胞可出现明显S期阻滞,但高剂量时S期细胞数量相对下降;照光后p16、c-myc蛋白水平均增高。加入阿魏酸处理可抑制UVB引起的上述改变。结论阿魏酸可明显抑制UVB引起的凋亡与细胞周期阻滞以及p16、c-myc蛋白表达。     

308nm准分子激光照射兔耳最小红斑量

目的:明确308 nm准分子激光照射兔耳最小红斑量(Minimum Erythema Dose,MED)。方法:应用308 nm准分子激光照射30只兔子左耳,分别给予单次单剂量150、300、450、600、900、1350mJ/cm~2,右侧作对照。计算30只兔耳激光照射24、48、72 h后的MED平均值,并观察96 h后组织病理和透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)下超微结构的改变。结果:经308 nm准分子激光照射后,24、48和72 h后MED平均值均为(300+55.39)mJ/cm~2,其中86.6%(24只兔)MED值为300 mJ/cm~2。照射96 h后MED区较未照射区的组织病理:表皮和真皮层增厚,真皮水肿、毛细血管扩张,血管周围大量炎症细胞浸润,可见红细胞外渗。TEM:MED区照射96 h后胶原纤维变性、排列紊乱,纤维细胞细胞器凝聚呈团块状变性;血管周围可见炎症细胞浸润,红细胞外渗;部分血管管腔狭窄,血管内皮细胞和周细胞细胞核形态异型。96 h后红斑逐渐消退,10~14天内消失,病理和TEM均未见大面积坏死。结论:308 nm准分子激光是一种高效稳定和安全的光源。     

外阴Pinkus纤维上皮瘤

报告1例外阴Pinkus纤维上皮瘤。患者女，71岁。左大阴唇外侧斑块10余年。皮肤科检查见左大阴唇外侧一2cm&#215;2cm灰黑色浸润性斑块．质地中等，边缘清楚，表面散在红色点状糜烂面，无明显渗液。皮损组织病理检查：棘层下方大量基底样细胞增生．增生的细胞呈条索状嵌入真皮增生的纤维间质中，彼此吻合形成网状，基底细胞胞核大而深染，胞质少，呈嗜碱性，表皮基膜完整，真皮内有以淋巴细胞为主的大量炎性细胞浸润。诊断：外阴Pinkus纤维上皮瘤。