生长因子与视网膜色素上皮细胞免疫调节

眼后节的免疫炎症反应是由多种趋化因子、炎前因子和抗炎因子相互作用的复杂过程。RPE(retinal pigment epithelium)细胞是眼后节细胞因子的主要来源,并在炎症中作为细胞因子的靶目标。通过调节RPE细胞分泌的细胞因子有望调节眼后节的免疫炎症反应,维持视网膜结构功能的完整及内环境的稳定,清除入侵病原体和异体抗原.维持良好的视功能。本文就参与RPE细胞免疫调节的细胞因子和细胞因子对眼后节免疫炎症反应的影响综述如下。     

视网膜色素上皮细胞诱导活化淋巴细胞的凋亡

目的 观察视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞对体外抗原特异性活化淋巴细胞的影响，探索RPE细胞在眼免疫赦免中的作用。 方法 建立RPE与抗原特异性T淋巴细胞系和静止淋巴细胞之间的共培养系统。使用基因组DNA电泳、DNA末端标记和流式细胞技术检测凋亡的诱导情况。 结果 与RPE共培养的抗原特异性活化淋巴细胞出现凋亡征象。随着时间的延长，凋亡细胞的数量逐渐增加。定量分析表明：共育24小时的凋亡细胞占5.95％；48小时占9.38%；72小时占17.95%。与此相反，RPE对于静止的T细胞则不具有显著诱导凋亡的作用。 结论 RPE细胞具有诱导入侵淋巴细胞凋亡的能力。这种现象作为免疫反应的限制机制，在眼后节免疫赦免的维持和保护眼免受免疫性炎症反应中可能具有重要的意义。 (中华眼底病杂志, 1999, 15: 241-244)     

眼内免疫调节因子

眼免疫郝免是一个主动的调节过程，除了眼部解剖特征以及眼实质细胞构成性表达Fas配体，膜结合性补体之外，其局部的免疫抑制微环境在眼免疫郝免的形成中起了重要的作用。眼微环境中含有多种潜在的免疫调节因子，其免疫抑制活性成分可分成相对分子质量为3000－5000和小于3000两部分。这些细胞因子通过调节眼部抗原递呈，抑制炎症因子等作用诱导前房相关免疫偏离，从而避免眼发生免疫性炎症。     

细胞因子与眼眶成纤维细胞

细胞因子的主要功能是作为细胞间信号传递分子、介导和调节机体免疫应答和炎症反应.眼眶成纤维细胞是Graves眼病自身免疫反应的靶细胞,受局部浸润淋巴细胞分泌的细胞因子的刺激后可大量增殖并分泌大量葡萄糖胺聚糖.作为免疫炎症反应中的效应细胞,眼眶成纤维细胞在接受适宜刺激后可强烈表达某些细胞因子,通过旁分泌和自分泌方式作用于眼眶,加剧炎症反应,维持眼眶免疫反应的持续性.通过对近几年的相关文献进行分析总结,探讨细胞因子与眼眶成纤维细胞之间的关系在Graves眼病中的作用.     

白细胞介素1与增生性玻璃体视网膜病变

增生性玻璃体视网膜病变本质上属于眼组织对创伤的过度愈合反应，是与炎症和免疫有关的以时相为特征的程序化过程。炎症早期的一些细胞因子如白细胞介素1，在增生性玻璃体视网膜病变中对视网膜色素上皮细胞等细胞移行、增殖、分泌胶原和膜形成等过程产生重要的作用。本主要对视网膜色素上皮细胞IL－1的表达、IL－1对RPE的影响及其在增生性玻璃体视网膜病变发生发展过程中的作用加以综述。     

细胞因子对视网膜色素上皮细胞Cadherin表达的影响

目的探讨细胞因子对视网膜色素上皮（RPE）细胞钙黏附素（Cadherin）表达的影响及可能的调节机制。方法取体外培养的第2代兔眼RPE细胞，加入不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、肿瘤坏死凶子“（TNFα）、血小板源生长因子（PDGF）、肝细胞生长因子（HGF）共同培养12h后，用流式细胞技术定性、定量观察这4种细胞因子对RPE细胞膜上Cadherin表达的影响。结果正常兔RPE细胞可表达Cadherin，经各种细胞因子诱导后的RPE细胞Cadherin表达均明显下调，尤以4种细胞因子联合作用时表达下调最明显，其表达水平与细胞因子浓度呈剂量递减关系。不同浓度各组细胞因子与空白对照组比较，Cadherin表达具有显著统计学差异（P〈0．05）。同浓度不同细胞因子组间Cadherin表达具有显著统计学差异（P〈0．05）。结论正常兔RPE细胞可表达Cadherin，细胞因子bFGF、TNFα，PDGF、HGF能诱导RPE细胞Cadherin表达减弱，减弱的程度与剂量有关。     

体外培养的成年兔眼色素上皮细胞屏障功能的研究

目的 研究体外培养的成年兔眼视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞的血-视网膜外屏障功能.方法 对成年兔眼RPE 细胞进行原代培养,免疫组织化学通过MNF116和S-100鉴定细胞纯度.将细胞接种于铺有层粘连蛋白的Transwell滤膜上,分别于培养过程中不同时间点进行跨膜电阻测定,待电阻达到平台期后对膜切面行透射电子显微镜观察;并通过细胞ZO-1免疫荧光化学法了解紧密连接的形成情况.结果 成功原代培养了兔眼RPE 细胞并且无其他细胞污染.接种于Transwell后,RPE 细胞TER值3周达到最高值约88.14 Ω·cm2,维持1周并开始下降.透射电镜可见细胞表面有大量微绒毛并形成紧密连接.ZO-1免疫荧光化学结果可见细胞形态基本呈多边形,紧密连接基本形成.结论 成年兔眼RPE细胞通过培养于铺有层粘连蛋白的Transwell滤膜上可以成功建立细胞屏障功能模型.     

白细胞介素1与增生性玻璃体视网膜病变

增生性玻璃体视网膜病变本质上属于眼组织对创伤的过度愈合反应 ,是与炎症和免疫有关的以时相为特征的程序化过程。炎症早期的一些细胞因子如白细胞介素 1 ,在增生性玻璃体视网膜病变中对视网膜色素上皮细胞等细胞移行、增殖、分泌胶原和膜形成等过程产生重要的作用。本文主要对视网膜色素上皮细胞IL 1的表达、IL 1对RPE的影响及其在增生性玻璃体视网膜病变发生发展过程中的作用加以综述     

人视网膜色素上皮细胞吞噬过程中细胞内钙离子浓度的变化

视网膜色素上皮（retina pigment epithelium，RPE）细胞具有复杂的结构和特殊的生理机能，RPE吞噬脱落的视细胞外节膜盘（ROS）是视网膜的主要功能之一，这对视细胞外节的更新及维持正常视觉功能至关重要。该功能障碍时引起ROS堆积而导致严重的视网膜疾病，目前对这类疾病尚无有效的治疗手段。RPE细胞不同的吞噬机制目前尚未阐明。本研究通过对RPE细胞不同吞噬过程中细胞内钙离子变化的测定，探讨RPE细胞吞噬时钙离子信号传导通路的作用，从而进一步了解跨膜信号传导系统在RPE细胞的特异性吞噬过程中所起的作用。     

视网膜色素上皮细胞移植的研究

视网膜色素上皮细胞（RPE）是位于视网膜感光器细胞和和脉络膜之间的一层单层细胞。本文介绍了RPE细胞的分离、培养和内、外路两种不同的手术方法。从术后活体和组织学检查表明，视网膜下腔是一免疫赦免区域。通过对首次异体移植培养的胎儿RPE细胞病例的临床随访显示，所移植的RPE细胞在黄斑区均能存活，并且具有注视功能。术后囊样黄斑水肿是最主要的并发症，是宿主免疫排斥反应的结果。因此预防和处理移植物的免疫排斥，是手术成功的关键。     

眼免疫赦免的细胞和分子基础

眼的免疫赦免是一极其复杂和动态的免疫调节过程。这一机制是眼生物进化过程的一种生理适应，对于维持视觉器官的完整性、免受免疫性炎症反应的破坏，以及为眼组织移植提供适宜的微环境起着重要的作用。就眼免疫赦免和前房相关免疫偏离（ＡＣＡＩＤ）中的眼局部因素、维持眼免疫赦免的细胞和分子基础等问题进行了讨论。     

视网膜色素上皮细胞钙通道的研究现状

视网膜色素上皮(RPE)细胞对保护和维持视觉功能极为重要。RPE细胞的这些功能与钙通道及激活后的钙离子内流密切相关。RPE细胞钙通道的结构决定了其功能特征、蛋白质磷酸化、钙调蛋白及钙反馈调节的特性,由此形成的信号传递对许多生理活动进行精确调控。     

姜黄素防治兔眼增生性玻璃体视网膜病变的实验研究

背景先前的系列研究表明,姜黄素可以诱导体外培养的兔视网膜色素上皮（RPE）细胞凋亡,抑制其RPE细胞的增生,且在玻璃体内应用后不良反应较小,具有防治增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的潜在价值。目的探讨姜黄素玻璃体内注射对RPE细胞诱导的兔眼PVR模型的防治效果。方法新西兰白兔20只40只眼,所有兔眼玻璃体注射前先抽取0．2ml玻璃体液,然后在兔眼玻璃体内注射0．1ml（2×10^6）同种RPE细胞,每只兔随机选取1只眼立即注入1mg／L的姜黄素0．1ml作为姜黄素组（20只眼）,对侧眼注入等量的含质量分数0．5‰DMSO的生理盐水作为对照组（20只眼）。注药后1、3、7、14、21、28d裂隙灯显微镜下观察角膜、房水、晶状体的透明度及眼前节炎症反应情况;使用间接检眼镜、眼底彩色照相和B型超声检查玻璃体视网膜情况。以视网膜脱离发生眼数作为检测指标,评价姜黄素对PVR的防治效果。结果玻璃体注药后1d、3d所有兔眼发生眼前节炎症反应,玻璃体轻中度混浊,但未见增生条带及视网膜脱离。玻璃体注药后7d,所有兔眼前节炎症反应基本消退,对照组14只眼（75％）玻璃体出现增生条带,姜黄素组2只眼（10％）玻璃体内出现增生条带,差异有统计学意义（P〈0．01）,但2组均未见视网膜脱离。注药后14d,对照组11只眼（55％）出现视网膜脱离,姜黄素组2只眼（10％）出现视网膜脱离,差异有统计学意义（P〈0．01）;注药后21d,对照组16只眼（80％）出现视网膜脱离,姜黄素组3只眼（15％）出现视网膜脱离;注药后28d,对照组19只眼（95％）出现视网膜脱离,姜黄素组3只眼（15％）出现视网膜脱离,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论姜黄素玻璃体腔内注射可以有效预防RPE细胞诱导的兔眼实验性PVR的发生发展。     

兔视网膜色素上皮细胞移植的实验研究

目的：探索用改良的二步酶法制备视网膜色素上皮（RPE）细胞悬液，经改良的内路法，不经玻璃体切割的情况下进行视网膜下间隙的移植，方法：用酶1（含220kU/L透明质酸酶和0．1％的胰蛋白酶）松解视网膜神经上皮细胞与RPE细胞之间的联接，再用酶II（含0．25％胰蛋白酶）从Bruch膜上离散RPE细胞，制成细胞悬液，用特制的注射针头，通过人为造成的局限性视网膜脱离区将其移植入受体视网膜下间隙，结果：术后2周供体RPE细胞层呈单层排列于受体视网膜下间隙，并存活，未见明显炎症反应，电镜观察，术后7周供体RPE细胞位于受体Bruch膜上并与受体感光细胞外节盘模型成镶嵌关系。结论：改良的内路法可以将供体RPE细胞成功移植在受体眼视网膜下间隙，并至少存活7周，改良的内路法渴望为视网膜移植的实验室研究提供一条可供借鉴的途径。     

视网膜色素上皮细胞在增生性玻璃体视网膜病变中的作用

增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)是在炎症和免疫功能细胞及多种活化因子对眼内细胞修复反应的调控过程中,由于过度促进细胞增殖、移行以及由细胞介导的胶原收缩而形成的。参与PVR的细胞目前已知的有5种,其中视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞是最主要的,本文将影响RPE细胞功能的各种影响因素及PVR的治疗进展作一综述。     

巨噬细胞条件培养基对视网膜色素上皮细胞产生白介素-6的影响

目的 探讨激活的巨噬细胞和未激活的巨噬细胞埘视网膜色素上皮(RPE)细胞分泌白介素-6(IL-6)的影响。方法 制备脂多糖(LPS)激活的和未激活的人腹腔巨噬细胞条件培养基(MφCM)，取50％体积分数的MφCM，分别施加于纯化培养的胎眼PRE细胞，作用48h，取细胞上清液，用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞上清液中IL-6的质量浓度。结果 脂多糖激活的巨噬细胞条件培养基(LMφCM)和未激活的巨噬细胞条件培养基(N-MφCM)均能促进RPE细胞分泌IL-6，其中L-MφCM的作用明显强于N-MφCM。结论 MφCM中含有促RPE细胞分泌IL-6的因子，提示巨噬细胞可能通过分泌细胞因子调节RPE细胞分泌IL-6。     

Cyclosporine玻璃体腔内注射对异种视网膜色素上皮移植的排异抑制作用

目的 观察兔眼视网膜下腔植入人胚眼视网膜色素上皮（retinal pigment epithe-lium,RPE）后不同时期的眼底和组织学改变。研究环胞菌素A（Cyclosporines,CsA）玻璃体腔内注射能否抑制人胚眼RPE在兔眼视网膜下腔中诱导的异种移植排异反应。方法 人胚眼色素上皮片和浓缩色素上皮细胞悬液植入36只兔眼的视网膜下腔,其中16眼为对照组,用于观察排异的自然转规。分别7d(8眼）和30d(8眼）后获取组织标本。另20眼为实验组。RPE移植后,每周一次玻璃体腔内注射CsA 1mg(12眼）或CsA0.1mg(8眼）。视网膜和视神经的毒性反应使用ERG进行检查。结果 人胚眼RPE片和浓缩的RPE细胞均能在视网膜下腔短期存活。移植的RPE与视细胞结合良好并显示吞噬功能。排异反应发生时间约在术后10～30d。对照组中7d的排异发生率为0/8;30d排异发生率为7/8。排异发生后荧光造影中移植区为高荧光区,组织切片中显示有大量的组织细胞积聚。CsA1mg组30d排异发生率为0/12,0.1mg组为5/8。ERG波幅的下降与CsA剂量和注射次数呈正相关。结论 异种RPE视网膜下腔移植在无免疫抑制剂的条件下,只能短期存活。CsA玻璃体腔中注射能抑制异种RPE移植的排异反应但易引起明显的视网膜毒性反应。     

视网膜色素上皮细胞的损伤因素与治疗进展

视网膜色素上皮（RPE）细胞在维持视网膜和脉络膜的正常功能和组织结构方面发挥重要作用，许多因素可导致RPE细胞的损伤，如缺氧、物理因素、化学物质和药物、免疫因素、氧化应激等。RPE细胞的损伤可导致多种眼底疾病，引起视功能的损害或丧失。深入研究引起RPE细胞损伤的因素对各种RPE细胞相关性眼病的预防和治疗具有十分重要的意义。近年来相关的研究日益受到关注，对RPE细胞损伤的影响因素及治疗方法进行综述。     

结缔组织生长因子在体外人视网膜色素上皮 细胞损伤模型中的表达和促移行作用

目的观察结缔组织生长因子（CTGF）在视网膜色素上皮（RPE）细胞损伤模型中的表达及其对RPE细胞移行的影响。方法利用体外培养的单层近融合期人RPE细胞，采用棉签和角膜移植用环钻做圆形细胞刮伤区，建立体外RPE细胞损伤模型。链霉亲和素-生物素复合物（SABC）免疫组织化学和原位杂交（ISH）方法检测RPE细胞受创后不同时间CTGF的表达及其转录水平mRNA的变化。并计数进入缺损区的RPE细胞数，定量观察CTGF对RPE细胞移行的影响以及地塞米松对CTGF这一作用的影响。结果免疫组织化学和原位杂交结果显示,创伤后6 h，创伤边缘RPE细胞表达CTGF呈弱阳性反应; 随着创伤后时间延长,阳性信号逐渐增强；伤后24、48 h创伤边缘移行的RPE细胞呈CTGF强阳性表达。重组人CTGF因子（rhCTGF）呈剂量依赖性刺激RPE细胞移行，地塞米松对CTGF诱导的RPE细胞移行作用有显著抑制作用。结论CTGF参与了RPE细胞创伤修复过程，这在增生性玻璃体视网膜病变等眼内增生性疾病中可能有重要意义。(中华眼底病杂志,2005,21:306-309)     

肝细胞生长因子诱导实验性视网膜脱离的病理机制研究

目的 观察肝细胞生长因子（HGF）对视网膜色素上皮（RPE）细胞屏障功能的影响以及RPE内过度表达HGF导致视网膜脱离（RD）的病理机制。 方法 编码HGF（AdCMV.HGF）、绿色荧光蛋白（Ad CMV.GFP）的E1/E3缺失的腺病毒载体，以5×10⁴ 噬斑形成单位（pfu）/眼注射到成年有色兔的视网膜下。检查注射后3、7、14、28 d时的眼底及组织病理变化,利用免疫组织化学和酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测HGF在视网膜和玻璃体的表达水平。 结果 对照组注射Ad CMV.GFP眼显示GFP几乎仅表达于PRE单核细胞层，AdCMV.HGF注射眼在注射点处的PRE细胞出现强的HGF免疫阳性反应。玻璃体内HGF的表达水平在注射7 d后达到最高峰、28 d后降低到基础水平。在HGF的表达期内AdCMV.HGF注射眼出现慢性RD和脉络膜慢性炎症。在RD区域，视网膜下的空间内可见增生性的RPE细胞，部分实验兔眼还产生多层的细胞膜结构。 结论 RPE内过度表达的HGF能引发慢性浆液性RD，同时伴有视网膜下RPE增生。提示HGF可能作为治疗RD的作用靶点。(中华眼底病杂志，2007，23：193-197)