Hsp70-肿瘤抗原肽复合物修饰的DC疫苗体内外特异性抗瘤作用

目的 :探讨树突状细胞 (DC)及Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的体内外特异性抗瘤作用。方法 :采用一定的生化技术 ,从H2 2肝癌细胞中提取肿瘤抗原肽 ,并在体外与Hsp70进行结合 ;采用细胞培养技术 ,培养rmGM CSF、rmIL 4诱导的小鼠骨髓细胞 ,体外获取大量的DC ,后者经Hsp70 肿瘤抗原肽复合物修饰后刺激小鼠脾淋巴细胞 ,通过MTT法进行检测淋巴细胞的激活 ;收集上述刺激传代培养的淋巴细胞 ,检测其对H2 2瘤细胞和艾氏腹水癌细胞的杀伤功能 ;采用H2 2瘤细胞肌肉接种和H2 2瘤细胞、艾氏腹水癌细胞腹腔接种 ,对接种小鼠给予经体外修饰的DC回输 ,观察其抑制肿瘤的效果。结果 :Hsp70 肿瘤抗原肽复合物可使DC成熟 ,大量分泌IL 12、TNF α、IL 1β等细胞因子 ,并能够使DC激活小鼠脾淋巴细胞 ;激活后传代培养的淋巴细胞对H2 2瘤细胞能够特异性地杀伤 ,而对艾氏腹水癌细胞无效 ;经Hsp 70 肿瘤抗原肽复合物修饰后的DC可作为一种有效的瘤苗 ,体内能特异性地抑制小鼠H2 2肿瘤生长。结论 :Hsp70 肿瘤抗原肽复合物能够很好地修饰体外诱导获取的DC ,使后者成为一种有效的瘤苗 ,体外能够特异性地激活淋巴细胞 ,体内有效地抑制肿瘤生长     

树突状细胞负载肝癌抗原肽疫苗体外诱导特异性免疫学反应的研究

目的：研究树突状细胞(dendritic cell，DC)负载肝癌抗原肽EPVTKAEML体外诱导特异性CTL的能力及其抑癌效果。方法：用顺序特异引物聚合酶链反应技术(PCR—SSP)选择HLA—B7表型供者，从脾组织中分离、培养DC-EPVTKAEML特异性CTL。用^51Cr释放法检测CTL的杀伤活性，并用抗HLA-1分子单抗(mAb)进行杀伤抑制实验。结果：找到4例HLA-B7杂合子供者，用DC负载HLA-B7限制的抗原肽EPVTKAEML可诱导特异性CTL反应，对肝癌细胞HHCC有较强的杀伤作用。结论：DC负载抗原肽EPVTKAEML在体外可诱发较强的特异性免疫反应。     

负载甘露糖化抗原的DC诱导的特异性杀伤

目的：探讨甘露糖化肿瘤疫苗在抗肿瘤免疫中的作用。方法：纯化出目的蛋白HER-2／neu胞外配体第2结构域（RLD2），并对其进行糖基化修饰，自外周血单核细胞诱导产生CD83^＋的DC，利用DC表面的甘露糖受体，使DC负载甘露糖基化的目的抗原mRLD2（mL2），并致敏T淋巴细胞，观察CTL特异性杀伤SKBR-3细胞的效果。结果：较之未进行糖基化修饰的目的蛋白RLD2（T2），mL2能促进DC的成熟，并能诱导出具有更强杀伤效力的CTL。结论：本实验的结果为开展新型甘露糖化肿瘤疫苗的研制提供了理论依据。     

尿酸对HBV表位肽S28-39负载DC诱导免疫效应的影响

目的 观察尿酸对由HBV表面抗原表位肽负载的树突状细胞诱导免疫效应的影响.方法 以负载肽S28-39的小鼠骨髓来源树突细胞,联合尿酸(uric acid, UA)尾静脉注射接种小鼠,每周1次,共2次.分为DC对照组,联合尿酸组,尿酸对照组,正常对照组.流式细胞仪法检测特异性CTL活性;ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清液IFN-γ水平.结果 体内S28-39特异性CTL,以联合尿酸接种组杀伤活性最强;联合尿酸接种组脾细胞IFN-γ分泌较对照组增高.结论 尿酸能够增强乙肝表位肽负载的树突细胞诱导的S28-39特异性CTL杀伤活性;能促进免疫小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ.尿酸具有增强负载S28-39树突细胞诱导的细胞免疫效应的活性.     

MHC I类分子呈递抗原的途径与肽疫苗研制的进展

主要组织相容性复合体Ｉ类分子主要呈递内源合成抗原，供ＣＤ８＾＋细胞毒Ｔ淋巴细胞识别，抗原呈递转运子与肽相互作用是特异性抗原肽转运和呈递的关键。外源性抗原通过树突状细胞和巨噬细胞等只性抗原呈递细胞加工处理后也可被ＭＨＣＩ类分子呈递。     

抗原基因修饰的树突状细胞诱导机体产生特异性免疫应答的实？…

目的：探讨腺病毒介导的肿瘤抗原基因修饰的树突状细胞体内免疫后对抗原特异性抗肿瘤免疫反应的诱导作用。方法：以β－ｇａｌ为模拟抗原,以转染有ＬａｃＺ基因并稳定表达βｇａｌ的淋巴瘤细胞Ｅ２２为肿瘤细胞模型,用携带编码β－ｇａｌ的ＬａｃＺ基因的重组腺病毒载体转染小鼠骨髓ＤＣ,检测转染的效率及ＬａｃＺ基因修饰ＤＣ刺激Ｔ细胞增殖的能力,观察皮下免疫ＬａｃＺ基因修饰ＤＣ后小鼠引流区淋巴结细胞数量和组分的变化以及     

MUC1模拟表位肽致敏DC对宫颈癌荷瘤小鼠肿瘤生长及免疫微环境的影响

目的：研究黏蛋白1(MUC1)模拟表位肽致敏树突状细胞(DC)对宫颈癌荷瘤小鼠生长和免疫微环境的影响。方法：培养小鼠骨髓细胞,诱导并刺激DC成熟,MUC1模拟表位肽处理构建负载MUC1模拟表位肽的DC。构建稳定表达MUC1的宫颈癌U14细胞株的荷瘤BALB/c小鼠模型,随机分为3组：空白对照组(注射0.2 ml生理盐水)、DC组(注射2×10⁵个未加MUC1模拟表位肽的DCs)和DC+MUC1组(注射2×10⁵个负载MUC1模拟表位肽的DCs),免疫1周后进行二次免疫。治疗前和二次免疫1周后测量肿瘤体积;二次免疫1周后取小鼠肿瘤组织称重并计算抑瘤率;取小鼠外周血,流式细胞术检测CD3⁺T、CD4⁺T、CD8⁺T细胞、CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg水平;ELISA检测小鼠血清IL-6、IL-10、TGF-β、VEGF浓度。结果：与治疗前比较,空白对照组、DC组和DC+MUC1组肿瘤体积增大(P<0.0...     

人外周血树突状细胞递呈可溶性肿瘤抗原触发抗瘤免疫的体外研究

考察人外周血树突状细胞递呈可溶性肿瘤抗原激发抗瘤免疫作用,应用改良Ｓｔｅｉｎｍａｎ法分离纯化人外周血ＤＣ,同时将ＭＤＡ,３ＡＯ及Ｗｉｓｈ三种瘤细胞制成可溶性肿瘤抗原,将二者于体外共育,分析ＤＣ表面标记的改变及某些细胞因子产生的水平,并检测其对肿瘤细胞杀伤作用的影响。     

糖基化修饰的DC疫苗特异性抗骨髓瘤活性的体外研究

目的：探讨经过糖基化修饰改造过的肿瘤相关糖抗原冲击树突状细胞（DC）制备的DC疫苗特异性抗骨髓瘤作用。方法：采用化学方法及肿瘤细胞的生物工程法使骨髓瘤细胞表达新肿瘤相关抗原N-丙酰多聚唾液酸（NPrPSA）；在无血清培养条件下，采用GM—CSF／IFN-α及TNF-α从MM患者外周血单核细胞诱导培养DC。然后用表达新抗原的肿瘤细胞冲击DC制备DC疫苗，将其刺激T细胞后，通过LDH释放法观察其对骨髓瘤细胞的杀伤效力，并采用ELISA法测定了T细胞分泌细胞因子IFN-γ的能力。结果：糖基化修饰的CD138^＋Npr—DC组LDH释放率较CD138^＋未修饰DC组明显增高（P〈0．01）。CD138^＋Npr—DC组T细胞分泌IFN-γ与CD138^＋未修饰DC组相比亦明显增加（P〈0．05），而CD138^＋Npr—DC组与CD138^-未修饰DC组之间无统计学意义（P〉0．05）。结论：糖基化修饰的DC疫苗可以有效地激活Th1细胞免疫应答，分泌高水平的细胞因子IFN-γ；可诱导出较普通DC疫苗更明显的抗骨髓瘤作用，并具有一定的安全性。     

Effects of oestradiol administration via different routes on the lipid profile in women with bilateral oophorectomy

To determine the influence of various oestrogenenic administrations on lipid response, 63 women with total abdominal hysterectomy and bilateral anexectomy were studied before and 6 and 12 months after receiving 17β-oestradiol by different means. The effect on the levels of lipids and lipoproteins of the 2 mg/24 h administration of oestradiol valerate was compared with 1.5 mg/day of percutaneous 17β-oestradiol and 0.05 mg/day of transdermic oestradiol. The treatments were given continuously over a year. The oestradiol valerate produced a statistically significant increase (P < 0.05) of the HDL-C levels both after 6 and 12 months (10.6% vs. 11.6%). A significant increase was also observed (P < 0.05) in the Apo Al levels during the treatment (18 and 25%). On the other hand, unfavorable side effects with oestradiol were not produced, either percutaneous or transdermic, on lipid plasmatic or lipoprotein levels. These data show the benefit of oral oestrogenic therapy and the maintenance of the lipid profile in percutaneous and transdermic therapies in oophorectomized women.     

乳凝集素对脐带血树突状细胞功能的调节作用

目的研究乳凝集素(lactadherin)对未成熟树突状细胞吞噬功能以及对成熟树突状细胞刺激初始T细胞增殖能力等方面的调节作用。方法 ficoll密度梯度离心法分离脐带血单个核细胞,加入细胞因子IL-4、GM-CSF、TNF-α(成熟组应用)诱导分化为树突状细胞(dendritic cell,DC),阳性对照组分别在第0天或第5天起加入lactadherin,各组均培养至第7天时收集细胞,流式细胞仪检测各组未成熟DC吞噬FITC-DEXTRAN的能力,MTT法检测各组成熟DC刺激初始T细胞增殖能力的变化。结果同时加入lactadherin诱导培养时,未成熟DC对抗原(FITC-DEXTRAN)的吞噬功能增强,在培养第0天时即加入lactadherin组培养完成后吞噬功能增强更为明显;成熟组DC刺激初始T细胞增殖的能力也较无lactadherin组明显增强(P<0.001),且以第5天加入组培养完成时刺激增殖作用更为显著。结论 lactadherin能够增强DC细胞的免疫功能,包括未成熟时的抗原吞噬摄取和成熟时刺激T细胞增殖,激活适应性免疫应答等。     

树突状细胞体外定向诱导扩增及其分离纯化

目的：探讨定向诱导及纯化树突状细胞（ＤＣ）的方法，为进一步研究树突状细胞的功能、特性及临床应用提供技术方法。方法：利用免疫磁珠江（ＭＡＣＳ）分离纯化脐血ＣＤ３４细胞，在液体培养体系中加入ＦＬ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦα、ＩＬ－４ｅｙ ＳＣＦ，培养１２ｄ后光镜检测细胞形态及流式细胞仪分析表达标志；利用抗估状细胞单克隆抗体（Ｘ－１１）及免疫磁珠分离纯化树突状细胞，流式细胞仪检测纯化后ＤＣ的纯度。结果：经体     

树突状细胞疫苗在妇科肿瘤免疫治疗中的研究进展

树突状细胞(DC)具有摄取、加工、处理和呈递抗原以及激活初始T淋巴细胞的功能,是体内功能最强的专职抗原递呈细胞,也是免疫应答的关键细胞.近年来研究发现,体外经肿瘤抗原刺激的DC回输到病人体内,能诱导机体产生细胞毒性T淋巴细胞,从而发挥特异性肿瘤杀伤作用.根据这一发现研制的DC疫苗目前在妇科肿瘤免疫治疗中已取得重要进展,...     

没食子儿茶素没食子酸酯对中波紫外线辐射后树突状细胞功能的影响

目的 观察没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）对中波紫外线（UVB）辐射后树突状细胞（DC）功能的影响并探讨其可能的机制。方法 分离外周血单核细胞，经细胞因子诱导DC成熟后，再使用不同剂量的UVB照射DC，将经EGCG处理或未处理的DC与淋巴细胞进行混合培养，72h后用MTF法检测DC刺激淋巴细胞增殖能力；用流式细胞术分析DC表面CDS0、CD86、HLA-DR、CD40分子表达的变化；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测DC培养24h后上清液中IL-10及IL-12分泌水平。结果UVB以剂量依赖的方式抑制DC刺激同种异体淋巴细胞增殖能力，并以剂量依赖的方式抑制DC表面共刺激分子的表达；使用浓度为200μg／ml的EGCG处理DC后，各剂量组UVB所致的免疫抑制作用均可得到部分改善，与单纯照光组相比，UVB＋EGCG组的抑制率分别比同剂量UVB组减少了60．0％、60．4％、59．2％、40．8％及12．2％，当EGCG浓度大于100μg／ml时，EGCG对DC表面共刺激分子的表达有促进作用；UVB照射对DCIL-12及IL-10因子的分泌未有显著影响，经EGCG处理并照射UVB的DCIL-12分泌水平显著降低，但IL-10分泌水平显著提高（P〈0．05）。结论 EGCG具有调节中波紫外线辐射后DC细胞免疫功能的作用，其作用与促进DC表面共刺激分子表达及影响其IL-12及IL-10分泌有关。     

间充质干细胞调节树突状细胞相关功能的研究进展

树突状细胞(DCs)作为体内最强大的抗原提呈细胞,是适应性免疫应答的始动者,在较多疾病的发生发展过程中起着重要作用.间充质干细胞(MSCs)是具有多向分化潜能的成体干细胞,由于其强大的自我修复、抑制炎症以及免疫调节作用已成为研究的热点.大量的研究表明MSCs能通过影响DCs的成熟及功能,达到缓解疾病的目的.通过对MSCs调节DCs功能调节的深入研究有望取得疾病治疗的新进展.     

Systemic administration of antigen-loaded CD40-deficient dendritic cells mimics soluble antigen administration

The decision to mount a T cell response to antigen (Ag) is dependent on the cellular context in which the Ag is presented. Activated dendritic cells (DC) are potent stimulators of immune responses, an ability which is linked to their high expression of several costimulatory molecules. In contrast, resting DC have been implicated in the generation of self tolerance, presumably due to their reduced costimulatory capacity. However, the precise molecular basis for the choice between Ag-induced immunity and unresponsiveness remains unclear. We show here that CD40 plays an important rolein this decision. Systemic administration of Ag-loaded, CD40-deficient DC failed to induce a productive primary T cell expansion and rendered mice relatively unresponsive to subsequent immunization with Ag in adjuvant. Using a TCR-transgenic T cell transfer system, we found that CD40(-/-) DC triggered an initial T cell activation that could not be sustained, resulting in loss of Ag-reactive T cells and reduced cytokine production by those T cells that did persist. Furthermore, administration of CD40(-/-) DC that had been loaded with a central nervous system autoantigen was found to protect mice from autoimmune pathology. These data implicate the CD40:CD40L interaction as a key checkpoint in the development of T cell immunity rather than tolerance.     

抗肿瘤树突状细胞疫苗研究进展

近代肿瘤学的新发展主要在于其对抗原提呈过程的新认识 ,大多数抗原都需要经过抗原提呈细胞(ａｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌｓ ,ＡＰＣｓ)的摄取、加工、内化 ,产生短链多肽并与主要组织相容性复合体 (ｍａｊｏｒｈｉｓｔｏ ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙｃｏｍｐｌｅｘ ,ＭＨＣ)结合后表达于细胞膜表面才能被Ｔ细胞受体所识别 ;同时 ,ＡＰＣｓ与Ｔ细胞之间通过共刺激分子的结合发出第二信号 ,从而更加有效地促进Ｔ细胞的活化、增殖。因此 ,在抗肿瘤免疫过程中 ,ＡＰＣｓ的功能越来越受到人们的重视。近年来 ,作为抗原提呈能力最…     

胚胎干细胞诱导发育为树突状细胞的研究

目的：探讨胚胎干细胞（ESC）诱导分化为树突状细胞（DC）的实验方法，实现体外大规模扩增高纯度DC用于临床免疫治疗。方法：E14小鼠胚胎干细胞系在GM-CSF与IL-3联合作用下经胚胎体（EB）诱导分化为DC。不成熟DC （im-DC）流式细胞仪检测CD11c、CD80、CD86、MHC II-DR表达。用磷酸脂多糖（LPS）促进DC的成熟，收获细胞后观察细胞形态及摄片并做扫描电镜检查，分析细胞表型并与不成熟DC细胞表型做对比，异体淋巴细胞增殖实验行功能检测。结果：ES细胞来源DC呈典型DC形态学表现。im-DC CD11c、CD80、CD86、MHC-II表达低,m-DC CD11c、CD80、CD86、MHC-II的表达均较前明显升高。功能检测发现，ES细胞来源的DC具有强烈的激发同种异体淋巴细胞增殖的作用，证实ES细胞来源的DC具备正常的免疫学功能。结论：使用GM-CSF联合IL-3能成功诱导E14胚胎干细胞发育为DC。故ES细胞可作为DC来源的一条新途径，对于体外大规模制备DC用于免疫过继治疗提供了一个较好的方法。     

Influence of autologous dendritic cells on the in-vitro expansion and functions of peripheral blood NK cells

Abstract

Context: Allogeneic reactive NK cells were previously shown to exert a graft-versus-leukemia (GVL) effect during allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, as well as reduce the incidence of graft-versus-host disease (GVHD).

Objective: We used autologous immature DCs as feeder cells for the in-vitro expansion of NK cells and studied the function of the NK cell cultures.

Materials and methods: NK cells were cultured for 15 days in the presence of autologous, immature DCs. Fold expansion, killing activity and expression of IFN-γ, perforin and granzyme B were evaluated.

Results: The highest NK cell expansion efficiency was observed when the ratio of NK cells:DCs was 2:1 and when cells were cultured in a contact-dependent manner. The killing activity of NK cells was highest when the NK:DC ratio was 10:1. NK cell cultures exhibited a significant upregulation in the mRNA expression of IFN-γ, perforin and granzyme B when the ratio of NK cells to DCs was 10:1.

Discussion: We successfully amplified NK cells using autologous immature DCs derived from human peripheral monocytes after induction as feeder cells. The use of autologous immature DCs for ex-vivo expansion of NK cells can be clinically applied to overcome limitations, such as the small number of NK cells in peripheral blood, and the high cost of NK cell sorting. Transfusion of allogeneic reactive NK cells has been suggested as a potential adjunctive therapeutic strategy after transplantation.

Conclusion: Autologous immature DCs can be used as feeder cells for ex-vivo expansion of functional NK cells.