异常瘢痕成纤维细胞在低血清及白介素1β作用下的细胞凋亡研究

目的 明确低血清及白介素1β（IL-1β）对瘢痕疙瘩,增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞诱导细胞凋亡的作用。方法 对6例瘢痕疙瘩、6例增生性瘢痕及6例正常皮肤标本采用细胞培养、免疫组织化学及凝胶电泳方法,通过检测Bax,Bcl-2蛋白及特异性DNA梯形条带,对不同成纤维细胞在低血清中及IL-1β作用后的细胞凋亡进行了研究。结果 （1）在低血清中,瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞的Gax/Bcl-2蛋白表达比值没有明显改变,但增生性瘢痕成纤维细胞出现程度较轻的细胞凋亡,而瘢痕疙瘩成纤维细胞未见明显细胞凋亡;正常皮肤成纤维细胞出现细胞凋亡,且Bax/Bcl-2比值升高,表明发生细胞凋亡,（2）IL-1β作用下,三者成纤维细胞均发生凋亡,瘢痕疙瘩和增生性瘢痕凋亡比正常皮肤严重。但Bax/Bcl-2比值在瘢痕疙瘩升高,在正常皮肤降低。增生性瘢痕无明显变化。结论 不同的成纤维细胞特性存在差异。     

异常瘢痕成纤维细胞在低血清及白介素1_β作用下的细胞凋亡研究

目的　明确低血清及白介素 1β(IL - 1β)对瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞诱导细胞凋亡的作用。方法　对 6例瘢痕疙瘩、6例增生性瘢痕及 6例正常皮肤标本采用细胞培养、免疫组织化学及凝胶电泳方法 ,通过检测Bax、Bcl 2蛋白及特异性DNA梯形条带 ,对不同成纤维细胞在低血清中及IL 1β作用后的细胞凋亡进行了研究。结果　①在低血清中 ,瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞的Bax Bcl 2蛋白表达比值没有明显改变 ,但增生性瘢痕成纤维细胞出现程度较轻的细胞凋亡 ,而瘢痕疙瘩成纤维细胞未见明显细胞凋亡 ;正常皮肤成纤维细胞出现细胞凋亡 ,且Bax Bcl 2比值升高 ,表明发生细胞凋亡。②IL 1β作用下 ,三者成纤维细胞均发生凋亡 ,瘢痕疙瘩和增生性瘢痕凋亡比正常皮肤严重 ,但Bax Bcl 2比值在瘢痕疙瘩升高 ,在正常皮肤降低 ,增生性瘢痕无明显变化。结论　不同的成纤维细胞特性存在差异。     

TRADD基因转染增生性瘢痕与瘢痕疙瘩成纤维细胞并诱导其凋忘的实验研究

目的 探讨含有TRADD基因的重组腺病毒转染增生性瘢痕成纤维细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞,对纤维细胞凋亡特性的影响.方法 利用分子克隆技术将TRADD基因转入Adeasy腺病毒载体中,经TNF预处理后,用重组腺病毒转染正常皮肤成纤维细胞、增生性瘢痕成纤维细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞,观察其对3种细胞凋亡率的影响.利用生长曲线、流式细胞仪检测转染前后3种成纤维细胞凋亡的情况.结果 含有TRADD基因的腺病毒载体转染增生性瘢痕成纤维细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞后,细胞生长速度变慢,流式细胞仪显示细胞凋亡率增加.结论 在TNF预处理的情况下,TRADD能提高增生性瘢痕成纤维细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡率.     

Fas Mcab对病理性瘢痕成纤维细胞生物学活力的影响

目的　探讨FasMcab对病理性瘢痕成纤维细胞生物学活力的影响。方法　以体外培养的病理瘢痕成纤维细胞为研究对象 ,应用MTT法 ,3H -TDR核苷掺入法 ,观察了FasMcab对增生性瘢痕成纤维细胞活力的影响 ;应用流式细胞仪检测FasMcab作用下 ,增生性瘢痕和瘢痕疙瘩两类成纤维细胞的凋亡率。结果　①低浓度FasMcab对增生性瘢痕成纤维细胞的活力具有促进作用 ;②FasMcab在 4 μg/ml的浓度下可迅速诱导增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡 ,但在相同条件下对瘢痕疙瘩成纤维细胞不具有诱导凋亡的作用。结论　瘢痕疙瘩成纤维细胞对FasMcab诱导的凋亡存在抗性。深入研究抗性产生的原因将有助于揭示病理性瘢痕增生的形成机理。     

FasMcab对病理性瘢痕成纤维细胞生物学活力的影响

目的 探讨FasMcab对病理性瘢痕成纤维细胞生物学活力的影响。方法 以体外培养的病理瘢痕成纤维细胞为研究对象，应用MTT法，^3H－TDR核苷掺入法，观察了FasMcab对增生性瘢痕成纤维细胞活力的影响；应用流式细胞检测FasMcab作用下，增生性瘢痕和瘢痕疙塔两类成纤维细胞的凋亡率。结果 ①低浓度FasMacb对增生性瘢痕成纤维细胞的活力具有促进作用；②FasMcab在4μg/ml的浓度下可迅速诱导增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡，但在相同条件下对瘢痕疙成纤维细胞不具有诱导凋亡的作用。结论 瘢痕疙瘩成纤维细胞对FasMcab诱导的凋亡存在抗性。深入研究性产生的原因将有助寺揭示病理性瘢痕增生的形成机理。     

FasMcab对病理性瘢痕成纤维细胞生物学活力的影响

目的探讨FasMcab对病理性瘢痕成纤维细胞生物学活力的影响.方法以体外培养的病理瘢痕成纤维细胞为研究对象,应用MTT法,3H-TDR核苷掺入法,观察了FasMcab对增生性瘢痕成纤维细胞活力的影响;应用流式细胞仪检测FasMcab作用下,增生性瘢痕和瘢痕疙瘩两类成纤维细胞的凋亡率.结果①低浓度FasMcab对增生性瘢痕成纤维细胞的活力具有促进作用;②FasMcab在4μg/ml的浓度下可迅速诱导增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡,但在相同条件下对瘢痕疙瘩成纤维细胞不具有诱导凋亡的作用.结论瘢痕疙瘩成纤维细胞对FasMcab诱导的凋亡存在抗性.深入研究抗性产生的原因将有助于揭示病理性瘢痕增生的形成机理.     

异泽兰黄素通过PDGFβ/ERK信号通路抑制增生性瘢痕生长的机制探讨

目的:探讨异泽兰黄素(Eupatilin)介导PDGFβ对增生性瘢痕成纤维细胞增殖抑制作用的分子机制。方法:应用组织贴壁法从增生性瘢痕和正常皮肤组织中分离增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞,Westernblot法检测PDGFβ在增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞中的表达,通过脂质体转染pcDNA3.1-PDGFβ构建PDGFβ过表达增生性瘢痕成纤维细胞,CCK8法检测过表达PDGFβ对异泽兰黄素抑制增生性瘢痕成纤维细胞活力的影响,流式细胞仪检测过表达PDGFβ对异泽兰黄素促进增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响,Westernblot法检测过表达PDGFβ对异泽兰黄素调控细胞内p-ERK、Bcl2和Bax蛋白表达的影响。结果:免疫组化和Westernblot结果表明,与正常皮肤组织和成纤维细胞比较,增生性瘢痕组织和成纤维细胞中PDGFβ高表达;CCK8结果显示,与空载对照组(pcDNA31-control)比较,PDGFβ过表达组瘢痕成纤维细胞活力显著升高(P0.05);流式细胞术检测结果表明,与对照组pcDNA3.1-control+Eupatilin比较,pcDNA3.1-PDGFβ+Eupatilin组增生性瘢痕成纤维细胞凋亡率显著降低(P0.05);Westernblot结果显示,PDGFβ过表达能显著促进p-ERK和Bcl2的表达增加,抑制Bax蛋白表达(P0.05),与对照组相比具有显著统计学差异。结论:异泽兰黄素可抑制增生性瘢痕PDGFβ蛋白的表达,通过抑制PDGFβ/ERK通路诱导细胞凋亡。     

激素治疗瘢痕的机理研究

目的　明确类固醇治疗瘢痕的具体作用机理。　方法　用细胞培养、免疫组织化学及分子生物学技术对 6例瘢痕疙瘩 ,6例增生性瘢痕患者及 6例正常人皮肤的成纤维细胞在激素作用下的细胞凋亡进行了研究 ;同时对 6例激素局部注射后的在体增生性瘢痕的成纤维细胞的增殖、生物合成及细胞凋亡进行了研究。　结果　 (1)激素可以诱导体外培养的不同成纤维细胞的凋亡 ,同时伴有Bax/Bcl 2蛋白比率的升高。 (2 )局部注射激素可以通过抑制PDGF基因表达而抑制瘢痕成纤维细胞的在体增殖。 (3)局部注射激素可以通过抑制转录而抑制前胶原基因表达从而抑制在体瘢痕成纤维细胞的I、III型胶原合成。 (4)激素局部注射可引起瘢痕c myc和p5 3基因表达增高从而诱导在体瘢痕的细胞凋亡。　结论　激素治疗瘢痕的疗效是通过抑制增殖及生物合成促进细胞凋亡而实现的。     

A型肉毒毒素对增生性瘢痕成纤维细胞的影响

目的：探讨h型肉毒毒素（BTXA）对体外培养增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响，以期指导临床治疗。方法：体外培养3例不同部位增生性瘢痕成纤维细胞，应用流式细胞技术（FCM）检测在常规浓度5U／0．1ml BTXA作用72h成纤维细胞的凋亡情况；光镜检测细胞形态学变化；并用透射电镜（TEM）观察细胞超微结构的变化。结果：常规浓度BTXA可以诱导体外培养的成纤维细胞发生凋亡现象，不同部位的增生性瘢痕成纤维细胞空白对照组与加药组凋亡率比较具有统计学意义（P〈0．05）。透射电镜也相应观察到凋亡细胞的典型结构变化。结论：h型肉毒毒素对增生性瘢痕具有一定的治疗前景，其疗效可能是通过促进成纤维细胞凋亡，减少胶原分泌来实现的。     

γ-干扰素对增生性瘢痕成纤维细胞影响的实验研究

目的观察γ干扰素对增生性瘢痕及成纤维细胞的作用，探索γ干扰素治疗增生性瘢痕的依据。方法取１０例患者增生性瘢痕标本，培养增生性瘢痕的成纤维细胞，取第１代细胞，分为实验组和对照组。实验组加入γ干扰素１００Ｕ／ｍｌ，作用５天，并观察成纤维细胞的细胞计数、肌成纤维细胞分化比例及细胞凋亡率。结果实验组成纤维细胞计数、肌成纤维细胞分化比例下降，细胞凋亡率增加，与对照组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论γ干扰素抑制成纤维细胞生长，抑制向肌成纤维细胞分化，促进成纤维细胞凋亡。     

增殖细胞核抗原在增生性瘢痕组织中的表达与分布

目的　研究增殖细胞核抗原 (PCNA)在增生性瘢痕组织中的表达水平和分布特点 ,探讨该组织中细胞增殖的特征。方法　利用PCNA单克隆抗体 ,对 12例增生性瘢痕、8例成熟瘢痕及其配对的正常皮肤 ( 2 0例 )进行免疫组织化学染色 (SABC法 )。结果　在增生性瘢痕组织中 ,PCNA标记率 ( 4 5 4± 12 3 )明显高于正常皮肤 ( 13 5± 4 1)和成熟瘢痕 ( 17 4± 6 2 ) ,差异有非常显著意义(P <0 0 1) ;而后两者间差异无显著意义。其中表皮角朊细胞和真皮成纤维细胞的细胞核内可见阳性颗粒。结论　增生性瘢痕组织中表皮角朊细胞和真皮成纤维细胞均增殖活跃 ,两者与细胞外基质过度沉积均有密切关系 ;PCNA是判断细胞增殖状态的良好指标 ,是诊断增生性瘢痕的客观依据     

5,7,4′-三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖细胞核抗原表达及细胞周期的影响

目的 观察5,7,4′-三羟基异黄酮(genistein)对增生性瘢痕成纤维细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)及细胞周期的影响,探讨5,7,4′-三羟基异黄酮抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖的机制.方法 分离培养人增生性瘢痕成纤维细胞,分别加入25、50、100 μmol/L浓度的5,7,4′-三羟基异黄酮共培养48 h,免疫细胞化学法观察成纤维细胞PCNA蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期的变化.结果 各组5,7,4′-三羟基异黄酮作用后细胞PCNA的表达均降低(P＜0.05),50 μmol/L及100 μmol/L浓度组的抑制作用最为显著(P＜0.01);随药物浓度的增加,G0～G1期细胞比例逐渐下降,G2～M期细胞比例增加,表明细胞分裂受到抑制;100 μmol/L组的S期细胞数量比例也有增加,并于G1期前出现亚二倍体凋亡峰.结论 5,7,4′-三羟基异黄酮可通过影响细胞分裂与DNA合成抑制瘢痕增生.     

90Sr治疗增生性瘢痕的基础与临床研究

目的 探讨90Sr防治瘢痕增生的作用机制并观察临床疗效. 方法 用90Sr敷贴器按照0、5、10,15 Gy剂量照射体外培养的人增生性瘢痕Fb.照射后24、48、72 h,流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率变化,ELISA法检测细胞培养上清液中Ⅰ型腔原浓度.评价348例增生性瘢痕患者、40例瘢痕疙瘩患者及114例外科手术后瘢痕预防患者应用90Sr照射治疗的效果,并经HE染色对比正常皮肤组织、增生性瘢痕组织、经90SR照射治疗的增生性瘢痕组织中Fb数目.对数据进行单因素方差分析和q检验. 结果 (1)剂量为10、15 Gy的90Sr照射后24、48 h,细胞凋亡率呈逐渐上升趋势,至照射后72 h两者凋亡率相近.剂量为5 Gy的90Sr照射后48 h细胞凋亡率明显高于照射后24 h,但照射后72 h细胞凋亡率迅速下降,与剂量为10、15 Gy时比较差异均有统计学意义(F值均为916.711,P值均小于0.01).(2)照射后24h,90Sr照射剂量为5、10 Gy时,细胞各周期的百分比相近;90Sr照射剂量为15 Gy时,S期细胞明显增多[(48.1±1.0)％,F值均为200.277,P值均小于0.01].剂量为10 Gy及15 Gy的90Sr照射后72 h,细胞明显阻滞在S期,S期细胞百分比分别为(85.7±5.2)％、(73.0±8.4)％,与照射剂量为0 Gy和5 Gy时比较差异均有统计学意义(F值均为111.105,P值均小于0.01).(3)同一照射时相点下,照射剂量越大,Ⅰ型胶原浓度越低(F值为5044.449～8234.423,P值均小于0.01).同一照射剂量下,随着时间推移,Ⅰ型胶原浓度有不同程度的增加(F值为333.395～2973.730,P值均小于0.01).(4)临床病例观察显示,90Sr照射病理性瘢痕或术后瘢痕预防患者后,显效率及有效率累计88.45％.HE染色显示,90Sr照射治疗的人增生性瘢痕Fb数目[每200倍视野(86±20)个]少于未经照射治疗者[每200倍视野(198±65)个,F=208.405,P＜0.05]. 结论 90Sr抑制瘢痕的生长是其对瘢痕Fb和ECM共同作用的结果,且临床疗效显著.     

增殖瘢痕成纤维细胞接触后增殖及生物合成特性对异常瘢痕形成的机理

目的 为明确不同异常瘢痕成纤维细胞在体外完全接触后其增殖活性及生物全成功能的特性。方法 以瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤（各6例）为材料，通过细胞培养、免疫组织化学及分子生物学等方法，对不同成纤维细胞在细胞接触及未接触时通过检测增殖细胞核内抗原、P16、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及前胶原基因表达对成纤维细胞的增殖、抑制及生物合成进行了研究。结果 瘢痕疙瘩成纤维细胞接触表现为细胞交叉重叠及较高的增殖活性及旺盛的生物合成功能，提示其失去了接触性抑制及密度抑制。皮肤成纤维细胞接触后则增殖及生物合成功能明显下降。增生性瘢痕成纤维细胞接触后表现为旺盛的生物合成功能，但其增殖活性处于瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞之间。结论 不同瘢痕成纤维细胞接触后增殖及生物合成的特性可能是形成不同瘢痕的机理之一。     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响

目的：研究苦参碱（Matrine,Mat)对人增生性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响。方法：将Mat作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,利用透视电镜、扫描电镜观察细胞的形态变化。结果：Mat可使增生性瘢痕成纤维细胞的超微结构的发生变化;细胞内粗面质网减少,核糖体有部分脱粒,解聚现象,溶解体酶,核染色质浓缩集聚至核膜周边,出现凋亡早期的改变,细胞外表面较用药前光滑,合成分泌的基质明显减少,结论：Mat在体外能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的功能并引起其超微结构发生改变。     

雷公藤提取物抑制增生性瘢痕成纤维细胞的实验研究

目的　为雷公藤提取物 (LLZ)治疗烧伤后增生性瘢痕提供实验依据。　方法　体外培养增生性瘢痕成纤维细胞 ,培养液中加入不同浓度的LLZ(5× 10 -3 、5× 10 -4、5× 10 -5、5× 10 -6g/L) ,2 4h后观察细胞形态、增殖活性及药物雷公藤提取物的细胞毒性。　结果　不同浓度的LLZ均能改变成纤维细胞形态 ,减少细胞数量 ,同时可明显降低细胞增殖活性。　结论　LLZ对烧伤后增生性瘢痕成纤维细胞形态和增殖均有明显的抑制作用 ,此作用并非毒性所至。     

丹参和川芎嗪对瘢痕成纤维细胞DNA含量及细胞周期进程的影响

应用流式细胞光度分析法测定丹参和川芎嗪对体外培养的瘢痕成纤维细胞ＤＮＡ相对含量和细胞周期时相变化，发现药物在一定浓度作用下，ＤＮＡ指数无明显变化；丹参使Ｃ２Ｍ期细胞分布增多，Ｇ２Ｍ期延长；川芎嗪使Ｇ２Ｍ期细胞分布增多，Ｇ２Ｍ期、Ｓ期延长；药物使细胞群体倍增时间延长，与浓度呈明显直线正相关。认为，丹参能抑制细胞的有丝分裂，川芎嗪能抑制细胞的ＤＮＡ合成、复制和有丝分裂，细胞周期均停滞于Ｇ２Ｍ期     

细胞信号传导在激素和干扰素诱导的增殖瘢痕成纤维细胞凋亡中的作用

目的 探讨对瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞在激素和干扰素α-2b(IFNα-2b)作用后是否产生凋亡,以及相关细胞信号传导通路的激活或抑制是否一致.方法 对6例瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及6例皮肤标本,采用细胞培养、免疫组织化学、凝胶电泳及FACE ELISA方法通过检测Bax和Bcl-2蛋白表达、特异性DNA梯状条带以及激活(磷酸化)的ERK1/2和JNK的吸光度A值,对不同成纤维细胞在地塞米松(0.1 mg/ml)和干扰素α-2b(1000U/ml)作用后的细胞凋亡及相关细胞信号传导通路进行了研究.结果 地塞米松可通过激活ERK1/2和JNK细胞传导通路诱导三类不同来源成纤维细胞发生细胞凋亡;干扰素α-2b不能诱导这三类不同来源成纤维细胞发生明显细胞凋亡,且IFN α-2b抑制增殖瘢痕的ERK1/2通路,而对JNK通路无影响,其不引起正常皮肤成纤维细胞ERK1/2和JNK通路的变化.结论 激素类药物和干扰素α-2b对瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞的作用机制不同.     

P物质抑制剂辣椒素和bFGF抗体对增生性瘢痕成纤维细胞增殖协同抑制作用的实验研究

目的：探讨P物质抑制剂-辣椒素及bFGF抗体单独或联合使用对体外培养的人体增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法：体外培养12例增生性瘢痕组织的成纤维细胞,分别加入不同浓度的辣椒素或/和bFGF抗体,培养24h后观察细胞形态学变化,并用MTT法检测细胞增殖抑制率。结果：所有不同浓度的辣椒素（2.5,5,20,40,60,80mg/L）均能使细胞皱缩、坏死,抑制细胞增殖,其抑制作用随剂量增大而增加。中高浓度bFGF抗体（40,80mg/L）也可促使细胞皱缩、坏死,抑制细胞增殖,其抑制作用也随剂量增大而增加。辣椒素与bFGF抗体联合应用对成纤维细胞抑制作用较单独使用效果更显著（P﹤0.05）。结论：辣椒素及bFGF抗体可抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,其抑制作用随浓度增加而增加,两者联合使用有协调作用,本研究结果可能在增生性瘢痕的治疗提供新的思路和手段。     

蛋白糖基化抑制剂对病理性瘢痕成纤维细胞Fas蛋白的表达与功能的影响

目的 研究N-糖链合成抑制剂衣霉素对病理性瘢痕成纤维细胞Fas蛋白的表达与诱导凋亡功能的影响.方法 瘢痕疙瘩及增生性瘢痕各5例,以健康皮肤为对照,免疫组织化学法检测组织中成纤维细胞Fas蛋白表达;组织块贴壁法培养成纤维细胞;Western Blot法及流式细胞术检测衣霉素处理及未处理各组成纤维细胞Fas蛋白水平的表达及凋亡率的变化.结果 病理性瘢痕及健康皮肤成纤维细胞胞质及胞膜中均可见Fas蛋白表达;增生性瘢痕、瘢痕疙瘩及健康皮肤成纤维细胞Fas蛋白糖基化水平依次降低,3组成纤维细胞在Fas单克隆抗体(Fas monoelonal antibody,FasMcAb)作用后凋亡率与Fas蛋白糖基化成正相关,衣霉素可明显降低病理性瘢痕成纤维细胞Fas蛋白糖基化水平,但对健康皮肤成纤维细胞Fas蛋白糖基化水平抑制作用不明显.结论 FasMcAb诱导病理性瘢痕成纤维细胞凋亡与成纤维细胞Fas蛋白糖基化水平成正相关,而衣霉素可显著降低成纤维细胞Fas蛋白糖基化水平.