Effect of albendazole on glycolysis of cisplatin-resistant ovarian cancer cells

[目的]探讨阿苯达唑(albendazole,A BZ)对人耐顺铂卵巢癌SKOV-3/DDP细胞糖酵解的影响.[方法]通过溴化二甲噻唑二苯四氨唑(MTT)比色法检测ABZ对卵巢癌SKOV-3/DDP细胞体外增殖的影响,求得抑制率分别为0％、25％、50％、75％时所对应的ABZ的浓度,实验分为对照组、IC25组、IC50组和IC75组,每组给予相应浓度的ABZ处理,并且按照ABZ作用时间再将每组分为12、24、36h亚组.按照分组,在设定的时间点,分别用比色法测定己糖激酶(hexokinase,HK)和丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)活性,用酶标仪法测定乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)的活性,用RT-PCR法测定Akt mRNA和Myc mRNA的表达.[结果]经过不同浓度的ABZ处理SKOV-3/DDP细胞发现,ABZ能抑制SKOV-3/DDP细胞体外生长(P＜0.05),呈剂量依赖性,抑制率为0％所对应的ABZ浓度为0μmol/L,抑制率25％的浓度(I25)为(1.43±0.21)μnol/L,抑制率50％的浓度(IC50)为(8.64±0.74)μmol/L,抑制率75％的浓度(IC75)为(52.48±3.99)μmol/L.与对照组相比,经过ABZ处理的SKOV-3/DDP细胞的HK、PK、LDH活性明显降低(P＜0.05),且Akt基因和Myc基因的表达下调(P＜0.05).[结论]ABZ能够抑制SKOV-3/DDP细胞糖酵解酶活性,并能下调糖酵解相关基因的表达.     

阿苯达唑对耐顺铂肺癌细胞糖酵解、细胞周期及细胞凋亡的影响

目的研究阿苯达唑(ABZ)对人耐顺铂肺癌细胞(A549/DDP细胞)糖酵解、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法用MTT比色法检测ABZ对A549/DDP细胞增殖的影响,求得抑制率为0%、25%、50%、75%所对应的ABZ浓度,并按抑制率将实验分为对照组,25%抑制浓度(IC25)组、半数抑制浓度(IC50)组和75%抑制浓度(IC75)组,每组给予相应浓度的ABZ处理,并按作用时间再将每组分为12、24、36h亚组。按照分组,在设定时间点,用比色法测定己糖激酶(HK)和丙酮酸激酶(PK)活性,酶标仪法测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,RT-PCR法测定Akt和Myc mRNA表达,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果 ABZ抑制了A549/DDP细胞增殖,呈剂量依赖性,抑制率为0%、25%、50%、75%所对应的ABZ浓度分别为(0.00±0.00)μmol/L、(0.99±0.11)μmol/L、(5.73±0.65)μmol/L、(33.15±3.94)μmol/L。ABZ明显降低了A549/DDP细胞HK、PK、LDH的活性,且下调了Akt和Myc mRNA表达,细胞周期阻滞,凋亡明显。结论 ABZ能抑制A549/DDP细胞糖酵解酶活性,下调糖酵解相关基因表达,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡。     

阿苯达唑抑制P-糖蛋白表达对耐顺铂卵巢癌细胞耐药性的影响

目的探讨阿苯达唑(albendazole,ABZ)通过抑制人耐顺铂卵巢癌SKOV-3/DDP细胞P-糖蛋白(P-glycopro-tein,P-gp)的表达对细胞耐药性的影响。方法在体外,用溴化二甲噻唑二苯四氨唑(MTT)比色法检测ABZ对SKOV-3/DDP细胞增殖的影响,求得抑制率为0%、25%、50%、75%所对应的ABZ浓度,并按抑制率将实验分为对照组,25%抑制浓度(IC25)组、半数抑制浓度(IC50)组和75%抑制浓度(IC75)组,每组给予相应浓度的ABZ处理,并按作用时间再将每组分为12、24、36 h亚组。分别用流式细胞仪检测各组细胞表面P-gp的表达。将不同浓度的顺铂(cisplatin,DDP)、表阿霉素(epirubicin,EPI)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)按照分组,联合和序贯ABZ处理细胞后,采用MTT比色法检测SKOV-3/DDP细胞体外增殖情况。结果 ABZ作用SKOV3/DDP细胞后使P-gp表达下降,呈浓度和时间依赖性。联合和序贯ABZ均能降低DDP、EPI和5-Fu对SKOV-3/DDP细胞的作用浓度,有浓度和时间依赖性,且联合作用优于序贯作用。结论在体外ABZ通过抑制SKOV-3/DDP细胞P-gp表达提高细胞对DDP、EPI、5-Fu的敏感性,并能逆转细胞的耐药性。     

槲皮素联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨槲皮素单独及联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法选取对数生长期的卵巢癌SKOV-3细胞作为研究对象,实验分6组:阴性对照组(生理盐水),槲皮素低(25μmol/L)、中(50μmol/L)、高剂量组(100μmol/L),顺铂组(10μmol/L),联合组(槲皮素50μmol/L+顺铂10μmol/L)。采用MTT法检测不同浓度槲皮素单独及联合顺铂对SKOV-3细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测槲皮素作用于SKOV-3细胞Bcl-2及MtP53蛋白表达水平的变化。结果与阴性对照组相比,槲皮素可明显抑制SKOV-3细胞的增殖,并具有显著的时间和剂量依赖关系,槲皮素高剂量组在72 h的抑制率可达63.49%(P<0.05);流式细胞仪分析发现槲皮素可使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少(P<0.05),提示其将细胞周期阻滞于G1期;槲皮素还可明显诱导SKOV-3细胞凋亡,高剂量组的凋亡率可达29.51%;槲皮素作用后,Bcl-2及MtP53表达则明显降低(P<0.05)。结论槲皮素在体外可抑制SKOV-3细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,其机制可能与降低凋亡相关蛋白MtP53和Bcl-2的蛋白表达水平有关;槲皮素与顺铂联用有协同作用。     

唑来膦酸对肺腺癌细胞的生长及化疗敏感性研究

目的:本研究主要探讨第三代双磷酸盐类药物唑来膦酸在体外对人肺腺癌细胞株A549生长的影响,进一步研究唑来膦酸与顺铂(DDP)对A549细胞的生长抑制是否具有协同作用。方法:采用MTT法检测不同剂量的唑来膦酸对人肺癌细胞株A549的生长作用,检测唑来膦酸单药及联合DDP对人肺腺癌细胞A549的增殖抑制,采用流式细胞术分析唑来膦酸联合DDP对细胞周期及凋亡的影响。结果:唑来膦酸对A549细胞的抑制效应与药物剂量及作用时间均成正比。单用唑来膦酸(1、10μmol/L)对A549细胞的生长抑制率分别为(20.69±2.69)%、(44.05±4.03)%,单用DDP(0.5mg/L)组的抑制率为(13.58±3.13)%。唑来膦酸(1、10μmol/L)联合DDP(0.5mg/L)作用A549细胞72h时,对A549细胞的生长抑制率分别为(44.23±3.77)%、(60.9±3.03)%,联合用药组与单药组相比差异有显著性(P<0.01)。唑来膦酸作用A549细胞72h的IC50值为25μmol/L。流式细胞术分析显示,单用唑来膦酸(1、10μmol/L)的细胞凋亡率分别为(16.94±1.95)%、(24.03±0.44)%,单用DDP(0.5mg/L)组的细胞凋亡率为(9.08±1.31)%。唑来膦酸(1、10μmol/L)联合DDP(0.5mg/L)时,引起的细胞凋亡率分别为(32.22±1.68)%、(39.22±7.00)%,联合用药组的凋亡率明显高于单药组(P<0.01)。唑来膦酸单药或者联合DDP均表现将A549细胞明显阻滞于S期(DNA合成期)。结论:唑来膦酸对肺癌细胞株有生长抑制作用,呈时间、剂量依赖性效应,其IC50值为25μmol/L。唑来膦酸可以干扰DNA合成,与DDP有协同作用。     

白藜芦醇对体外培养的人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株(SKOV-3/DDP)活性影响免疫研究

目的研究白藜芦醇对体外培养的人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株(SKOV-3/DDP)活性影响。方法采用四甲基偶氮蓝(MTT)法检测白藜芦醇浓度为2.5、5、10、20、40、80μg/m L情况下,24h、48h、72h、96h对SKOV-3/DDP细胞体外增殖的影响,并将其设为观察组;对照组为只含10%小牛血清的无菌RPMI 1640培养基。比较两组对SKOV-3/DDP增殖抑制率。结果观察组24h、48h、72h、96h的增殖抑制率均显著高于对照组(P0.05)。结论白藜芦醇对SKOV-3/DDP细胞株的体外增殖具有较好的抑制作用,值得临床进一步推广应用。     

阻断ErbB4受体对人胆管细胞癌QBC939细胞系增殖与转移的影响

目的:通过体外培养人胆管癌QBC939细胞系,阻断ErbB4受体,检测肿瘤生物学行为的改变,从而探讨人类第4表皮生长因子(ErbB4)受体介导人胆管细胞癌肿瘤生物学行为的分子机制.方法:体外培养人胆管癌QBC939细胞系细胞,分别加入终浓度为0μmol/L,1μmol/L,5μmol/L,10μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L,100μmol/L的AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用CCK-8法测量各组胆管癌细胞增殖情况,然后利用SPSS软件计算AG1478对人胆管癌QBC939细胞的半数抑制浓度(IC50值);根据IC50值选择使用0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用划痕实验检测各组胆管癌细胞迁移能力的变化.分别使用0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L浓度AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用Transwell小室法实验检测各组胆管癌细胞侵袭能力的变化.结果:AG1478以浓度依赖方式抑制QBC939细胞增殖,其IC50值为:49.14μmol/L;AG1478抑制ErbB4受体后,胆管癌QBC939细胞的迁移、侵袭能力减弱.结论:在体外抑制ErbB4受体能使胆管癌肿瘤细胞生长、迁移、侵袭能力减弱;ErBb4在胆管癌的发生、发展中具有重要的作用,ErbB4可能成为胆管癌分子治疗的新靶点.     

齐墩果酸诱导人乳腺癌细胞凋亡及与细胞内Ca2+水平关系的研究

目的研究齐墩果酸对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖抑制和诱导凋亡的作用,并探讨凋亡发生与细胞内Ca2 浓度([Ca2 ]i)变化的关系.方法25～125μmol/L浓度梯度的齐墩果酸处理MCF-7细胞24h,用MTT比色法测定细胞增殖能力.50μmol/L,75μmol/L和100μmol/L齐墩果酸处理细胞24h,用末端脱氧核苷转移酶介导dUTP末端标记法和Annexin Ⅴ流式细胞仪法检测凋亡细胞.75μmol/L齐墩果酸处理细胞24 h,用Fura-2荧光负载方法测定[Ca2 ]i的变化.结果从50μmol/L齐墩果酸浓度起对MCF-7细胞的增殖抑制率显著升高(P＜0.05和P＜0.01),呈剂量依赖性,半增殖抑制浓度(IC50)为88.36μmol/L.75μmol/L和100μmol/L齐墩果酸使细胞凋亡率显著升高(P＜0.01);齐墩果酸处理组的[Ca2 ]i也明显高于对照组(P＜0.01).结论齐墩果酸具有抑制MCF-7细胞增殖和诱导调亡的作用;其诱导凋亡可能依赖于细胞内Ca2 水平上调.     

灯盏花素对肝癌细胞 HepG2 和结肠癌细胞 Caco2 的体外抗肿瘤活性筛选

观察灯盏花素对人肝癌细胞（HepG2）和人结肠癌细胞（Caco2）的体外增殖抑制影响。方法以不同浓度的灯盏花素分别处理 HepG2 和 Caco2 细胞 24、48和 72 h 后采用 MTT 法检测灯盏花素对 2 种细胞活力的影响,以半数抑制浓度（IC50）及治疗指数（TI）作为评价其抗肿瘤活性及安全性指标。结果 灯盏花素对 HepG2 表现高浓度抑制作用,浓度为 20 000μmol/L 时,对 HepG2 细胞 24、48和 72 h 的抑制率分别为37%、63%和 69%;对 Caco2 细胞呈浓度依赖性,浓度为 5 000μmol/L时,对 Caco2 细胞 24、48和 72 h 的抑制率分别为72%、95%和 92%。灯盏花素对 HepG2 24h的 IC50 值为 24320.5μmol/L;48h的 IC50 值为 30 667.7μmol/L;72 h 的 IC50 值为 15 586.1μmol/L。对 Caco2 细胞 24 h 的 IC50 值为 11 417.0μmol/L;48 h 的 IC50 值为832.2μmol/L;72 h 的 IC50 值为 1 369.2μmol/L。结论 灯盏花素对 HepG2 和 Caco2 细胞均有不同程度的抑制作用,对 Caco2 的抑制效果更明显。     

异钩藤碱脂质体逆转人肺腺癌细胞A549／DDP对顺铂耐药的研究

目的研究异钩藤碱脂质体(Isorhynchophylline Liposomes,IR-L)在体外对人肺腺癌细胞系A549/DDP对顺铂(DDP)的逆转作用。方法采用MTT法检测药物细胞毒性作用及耐药细胞逆转倍数,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定细胞内顺铂浓度。结果IR-L无细胞毒浓度组(2.0μg/mL)使A549/DDP细胞对DDP的IC50由16.81 mg/L降至3.36 mg/L;低细胞毒浓度组(7.0μg/mL)的IC50降至2.34 mg/L;两组均明显提高DDP在A549/DDP细胞内的浓度,从0.92μg/L分别提高到4.62μg/L和6.89μg/L。结论IR能部分逆转A549/DDP细胞的MDR,其作用机制可能与增加细胞内药物浓度有关。     

热疗联合三代铂类药物对卵巢癌细胞株SKOV3的影响

目的 探讨热疗分别联合三代铂类药物即顺铂（DDP）、卡铂（CBP）、奥沙利铂（OXA）对卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响及其可能机制。方法 SKOV3细胞采用热疗（42 ℃）或常温（37 ℃）联合不同浓度的DDP（终浓度分别为0、1.25、2.5、5.0、10.0、20.0 μg/mL）、CBP及OXA（终浓度均为0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μg/mL）处理, MTT法检测对SKOV3细胞增殖的影响,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测SKOV3细胞经相应处理后核苷酸切除修复交叉互补组基因(excision repair cross-complementing group 1, ERCC1)、凋亡抑制基因（Survivin）的表达变化。结果 DDP、CBP、OXA对卵巢癌细胞株SKOV3的增殖呈抑制作用,并呈剂量依赖性（P<0.05）,42 ℃热疗能增强铂类药物对SKOV3细胞株的增殖抑制作用; DDP、CBP、OXA对卵巢癌细胞株增殖的半数抑制浓度（IC50）分别为（7.271±0.096） μg/mL、（37.609±0.779）μg/mL、（28.328±0.698） μg/mL,42 ℃热疗联合上述铂类药物后IC50分别为（2.075±0.244） μg/mL、（19.591±0.453） μg/mL、（19.089±0.424） μg/mL,增敏倍数分别为2.075±0.244、1.92±0.044、1.484±0.039（P<0.05）,其中对DDP的增敏效果最显著;在三代铂类药物中,热疗均能下调ERCC1 mRNA的表达（P<0.05）,且CBP下调最显著;热疗联合CBP、OXA作用于SKOV3时均能下调Survivin mRNA的表达（P<0.05）,其中OXA组更显著,但DDP联合热疗对Survivin mRNA表达的影响差异无统计学意义（P>0.05）。结论 热疗联合三代铂类药物能增强铂类药物对SKOV3细胞的增殖抑制作用,增加肿瘤细胞对铂类药物的敏感性,其增敏机制可能与下调ERCC1 mRNA和Survivin mRNA表达有关。     

缺氧诱导因子-1α基因沉默逆转卵巢癌细胞SKOV3/DDP耐药性的机制

目的：观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)沉默后人卵巢癌细胞顺铂耐药株SKOV3/DDP 的HIF-1α、多药耐药基因1 （MDR1）和B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）mRNA及蛋白产物的表达,探讨HIF-1α逆转SKOV3/DDP耐药性的机制。方法：体外培养卵巢癌细胞株SKOV3（敏感组）及其顺铂耐药株SKOV3/DDP（耐药组）,部分耐药株转染HIF-1α干扰质粒 pshRNA-HIF（转染组）及对照质粒pshRNA-Control（对照组）。RT-PCR法检测各组细胞HIF-1α、MDR1和Bcl-2 mRNA表达量;Western blotting和免疫组织化学法测定HIF-1α、P-gp（MDR1基因编码蛋白）和Bcl-2蛋白的表达量。结果：RT-PCR检测,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2 mRNA表达量明显低于耐药组（P<0.05)。Western blotting检测,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2蛋白表达量明显低于耐药组(P<0.05) ;免疫组织化学法,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2蛋白表达量明显低于耐药组(P<0.05);MDR1、Bcl-2 mRNA及蛋白在敏感组与转染组的表达量差异无统计学意义（P>0.05）。HIF-1α表达与MDR1、Bcl-2 mRNA表达量均呈正相关关系（r=0.908,P=0;r=0.916,P=0);HIF-1α表达与P-gp、Bcl-2蛋白表达呈正相关关系(r=0.773,P=0.003;r=0.862,P=0）。结论：HIF-1α沉默逆转人卵巢癌细胞顺铂耐药株SOV3/DDP耐药性可能与MDR1和Bcl-2表达降低有关联。
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氯化钴对人卵巢癌SKOV3细胞顺铂敏感性的影响

目的：观察氯化钴（CoCl₂）作用于人卵巢癌SKOV3细胞株后对SKOV3细胞顺铂敏感性的影响,并阐述其可能机制。方法：体外培养SKOV3细胞株,随机分为对照组、CoCl₂组、顺铂（DDP）组和CoCl₂联用DDP （联合）组,CoCl₂组细胞以200 μmol·L^-1 CoCl₂作用4 h后换普通细胞培养基培养20 h,DDP组细胞以含10 mg·L^-1 DDP的细胞培养基培养24 h,联合组细胞以200 μmol·L^-1 CoCl₂作用4 h后更换含10 mg·L^-1 DDP的细胞培养基继续培养20 h。MTT法检测各组细胞存活率,免疫荧光法检测各组细胞中低氧诱导因子1α（HIF-1α）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）阳性表达强度,Rhod 2-AM荧光探针检测各组细胞线粒体钙离子（Ca²⁺）水平,免疫蛋白印迹（Western blotting）法观察凋亡相关蛋白细胞色素C （cyto C）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase3）和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved caspase3）蛋白表达水平,Muse^®凋亡试剂盒检测各组细胞凋亡率。结果：与对照组比较,CoCl₂组细胞存活率无明显变化（P>0.05）,其余2组细胞存活率明显下降（P<0.05）;且联合组高于DDP组（P<0.05）。与对照组比较,CoCl₂组和联合组细胞中HIF-1α阳性表达强度明显增强（P<0.05）;DDP组和联合组细胞中iNOS阳性表达强度明显增强（P<0.05）。与对照组比较,DDP组和联合组细胞Ca²⁺水平升高（P<0.05）;且DDP组高于联合组（P<0.05）。与对照组比较,CoCl₂组细胞中cyto C、caspase3和cleaved caspase3蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）,DDP组细胞中cyto C、caspase3和cleaved caspase3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;且联合组低于DDP组（P<0.05）。与对照组比较,DDP组细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;联合组细胞凋亡率较DDP组降低（P<0.05）。结论：CoCl₂可以通过抑制DDP诱导的人卵巢癌SKOV3细胞株iNOS表达增强来减少线粒体途径凋亡的发生,降低其顺铂敏感性。     

~（125）I标记反义肽核酸对SKOV3细胞CerbB-2 mRNA和Her-2蛋白表达的抑制作用

目的探讨利用脂质体转染125I标记的CerbB-2反义肽核酸（asPNA）阻断人卵巢癌细胞株SKOV3中CerbB-2mRNA翻译并抑制Her-2蛋白表达的作用。方法 （1）125I用CH-T法标记CerbB-2-asPNA,测定其标记率和放化纯。（2）分对照组、非标记分子探针组和125I标记反义肽核酸组,运用RT-PCR法检测各组细胞CerbB-2mRNA的翻译。（3）运用流式细胞仪检测各组细胞的Her-2蛋白表达率。结果 （1）125I标记CerbB-2-asPNA的标记率为（56.90±4.38）%,放射化学纯度为（87.00±0.99）%,放射性浓度为3.7MBq/ml,化学浓度为5.00μmol/L。（2）125I标记CerbB-2-asPNA作用SKOV3细胞24h后,SKOV3细胞CerbB-2在mRNA水平上明显下降,与SKOV3细胞对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。（3）125I标记CerbB-2-asPNA作用SKOV3细胞24h后,细胞的Her-2蛋白表达率降低幅度较大,与SKOV3细胞组对比,两者间差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 125I-L-CerbB-2-asP-NA对人卵巢癌细胞株SKOV3CerbB-2基因表达在mRNA翻译和蛋白表达水平上均有抑制作用。     

顺铂诱导肿瘤裂解物致敏DC抗肿瘤作用研究

目的探讨用顺铂（DDP）诱导卵巢癌细胞株（SKOV3）获得的肿瘤细胞裂解物以致敏树突状细胞（dendriticc ells,DCJ诱导的OTL对肿瘤细胞的杀伤作用。方法分离健康者外周血单个核细胞,培养Dc,分为三组。顺铂组：用顺铂诱导卵巢癌细胞株获得细胞裂解物致敏Dc;冻融组：用冻融法获得细胞裂解物致敏Dc;空白组：不做任何处理。成熟的Dc与T细胞混合培养获得特异性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T Iymphocyte,CTL）。流式细胞仪（flowcyLometry,FCM）检测三组Dc表型,CTL亚群比例,MTT检测CTL对SKOV5的杀伤效果。结果顺铂组Dc的分子表面标志cD86、cD40表达分别为（76j5±j99）％、（7120±686）％,显著高于空白组（P〈005）,而与冻融组相比差异无统计学意义;两组Dc诱导的特异性CTL,其亚群cD8＋T、GD矿T比值[（8（]42±46I）％、（955±224）％]明显著于空白组（P〈0.05）;帧铂组诱导的CTL对SKOV3的杀伤率随着E/T比例（20：1,40：1,80：1）的增加而逐步渐增高,杀伤率[（4566±3.16）、（5016±344）％、（5882±406）％]显著高于冻融组[（39．71±477）％、（4700±402）％、（5376±478）％]与空白组[（3794±374）％、（41¨±504）％、（4808±377）％]。结论DDP诱导SKOV3来获得的肿瘤裂解物致敏DG能有效激活抗肿瘤免疫反应,提示化疗与生物治疗联合治疗可能是治疗卵巢癌潜在有效的方法。     

维拉帕米逆转人食管鳞状细胞癌细胞株对顺铂耐药性的研究

目的 观察维拉帕米逆转人食管癌细胞株对顺铂耐药程度,探讨维拉帕米逆转耐药与多药耐药蛋白P-gp的关系。 方法 CCK-8法测5-氟尿嘧啶、阿霉素、顺铂对2种食管癌细胞株(KYSE-150、KYSE-510)的IC₅₀值(IC₅₀1);联合维拉帕米的IC₅₀值(IC₅₀2),以IC₅₀1/IC₅₀2结果判定维拉帕米逆转耐药能力。实时荧光定量PCR测各组多药耐药基因hMDR-1表达。Western-blotting测各组P-gp表达。 结果 阿霉素、顺铂在KYSE-150的IC₅₀值为7.33±0.67、3.23±0.06均小于KYSE-510的IC₅₀值11.57±0.98、17.25±0.08,5-氟尿嘧啶在KYSE-150的IC₅₀值24.33±1.67大于KYSE-510的IC₅₀值14.67±1.02。联用维拉帕米后,各组IC₅₀值均下降,提示维拉帕米提高药物敏感性。其中,顺铂组加入维拉帕米后,KYSE-510的IC₅₀值变化较大(4.7倍)提示逆转敏感,KYSE-150的IC₅₀值变化较小(1.84倍)提示逆转耐受。应用维拉帕米前后,各组hMDR1/P-gp表达没有明显变化。 结论 KYSE-510对维拉帕米联合顺铂逆转敏感,而KYSE-150逆转耐受。维拉帕米逆转人食管癌细胞株耐顺铂不是通过改变hMDR1/P-gp的数量,而可能通过阻碍hMDR1/P-gp作用或其他未知机制来实现。      

β1整合素反义寡核苷酸联合顺铂治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的研究

目的：探讨以β1整合素反义寡核苷酸（ASODN）治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的可行性.方法：常规体外培养SKOV3细胞,采用皮下注射法建立移植瘤裸鼠动物模型.32只荷瘤鼠随机分为ASODN组（A组）、ASODN联合顺铂（DDP）组（A＋D组）、DDP组和0.9％氯化钠注射液对照组（NS组）,每组8只,分组给药.以脂质体包裹的β1整合素ASODN直接移植瘤内注射,观察肿瘤生长情况,测瘤体积并计算抑瘤率.采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学方法分别检测β1整合素mRNA的表达.结果：A组肿瘤体积和抑瘤率分别为（316.10 ±21.77） mm3和48.15％,与NS组比较抑瘤率较高,肿瘤生长缓慢（P＜0.01）.而A＋D组肿瘤体积和抑瘤率分别为（178.70±40.67） mm3和70.37％,与DDP组、A组及NS组差异均有统计学意义（P ＜0.05 ～P＜0.01）.RT-PCR和免疫组织化学检测,A组和A＋D组肿瘤组织中β1整合素mRNA的表达均明显下调（P＜0.01）.结论：单用β1整合素ASDON或联用DDP均可有效抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织的生长,可能与其特异性下调β1整合素基因表达有关.特异性靶向β1整合素ASODN可用于卵巢癌的辅助治疗.     

miR-126调控SKOV3卵巢癌细胞周期的实验研究

目的探讨miR-126对卵巢癌细胞株的细胞周期和形态的影响,评价miR-126靶向调控卵巢癌增殖侵袭的作用。方法体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,通过慢病毒包装miR-126并转染卵巢癌SKOV3细胞系,将其分为三组：转染miR-126表达组（SKOV3/LV3-has-miR-126组）、转染阴性对照组（SKOV3/LV3NC组）和空白对照组（SKOV3组）,观察转染miR-126后细胞形态变化,并用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期,分析转染miR-126后细胞形态与细胞周期的改变情况。结果转染miR-126后卵巢癌细胞组短梭形细胞居多,片状伪足减少,这均不有利于肿瘤细胞的迁移。同时SKOV3组、SKOV3/LV3NC组、SKOV3/LV3-has-miR-126组S期细胞平均比例分别为（53.8±4.5）%、（55.2±4.2）%和（39.7±6.6）%,而G1细胞比例则分别为（43.2±13.2）%、（42.6±13.2）%和（55.6±13.2）%,可见SKOV3组和SKOV3/LV3NC组细胞S期和G1期细胞比例相近（P〉0.05）,而与其他两组比较,SKOV3/LV3-has-miR-126组的细胞S期增殖指数较低,而停留在G1的细胞比例则较高,两期比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论经miR-126转染后SKOV3卵巢癌细胞S期合成显著抑制,而G1期细胞明显增加,细胞伪足减少,提示转染miR-126的SKOV3卵巢癌细胞其增殖和侵袭能力降低。     

TRAIL对人卵巢癌SKOV3细胞生长及凋亡的影响

目的 研究TRAIL对卵巢癌SKOV3细胞生长及凋亡的影响。同时了解化疗药物对TRAIL受体表达的影响。方法 用MTT法和流式细胞仪检测不同浓度TRAIL蛋白和顺铂（DDP）联合用药对SKOV3细胞生长的影响;化疗药物处理后用RT—PCR方法检测细胞的TRAIL受体（DR4、DR5）表达的变化。结果 随着TRAIL蛋白浓度的升高,SKOV3细胞抑制率逐渐升高。TRAIL浓度达到10ng／mL及以上浓度时,TRAIL＋DDP联合组的抑制率比TRAIL组明显升高（P〈0．05）。流式细胞仪检测SKOV3正常对照组、TRAIL组和TRAIL＋DDP组细胞凋亡率分别为5．9％、13．4％、39．5％,各实验组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,TRAIL蛋白使细胞更多地停留在G0-G1期。RT—PCR检测发现DDP使SKOV3细胞DR5和DR4水平明显升高,分别为对照的1．95倍和1．54倍（P〈0．05）,而阿霉素、卡铂、5-FU处理后SKOV3细胞DR4、DR5表达无明显改变。结论 TRAIL蛋白单独使用对SKOV3细胞生长有抑制作用,肿瘤细胞凋亡率升高,TRAIL与DDP联合使SKOV3细胞抑制率明显升高,促凋亡作用更明显。DDP作用后SKOV3细胞DR4、DR5表达成倍增加。