ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移

目的：探讨细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路在RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移中的作用.方法：流式细胞术检测MDA-MB-231细胞表面RANK蛋白的表达;western-blot检测RANKL刺激后磷酸化ERK（P-ERK）及ERK的表达;Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变.结果：MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强.RANKL刺激后MDA-MB-231细胞P-ERK表达升高,PD98059抑制RANKL诱导的细胞迁移.结论：ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移.     

c-Src参与RANKL诱导的乳腺癌BT-474细胞迁移的机制研究

目的:核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)/核因子κB受体活化因子(RANK)通路在肿瘤骨定向性迁移中发挥重要的作用,但具体信号传导机制尚不清楚。本文探讨非受体酪氨酸激酶c-Src在RANKL诱导的乳腺癌BT474细胞迁移中的作用。方法:Western blot检测BT-474细胞表面受体RANK蛋白的表达及RANKL刺激后细胞p-Src及c-Src的表达;Transwell法测定细胞迁移能力。采用SPSS 16.0统计学软件分析实验数据。结果:BT-474细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导BT-474细胞迁移能力增强。应用RANKL的圈套受体OPG可阻断RANKL诱导的细胞迁移。RANKL刺激后BT-474细胞p-Src表达升高,应用c-Src激酶抑制剂PP2可显著抑制RANKL诱导的细胞迁移。结论:c-Src信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌BT-474细胞迁移。     

c-Src参与RANKL诱导的乳腺癌BT-474细胞迁移的机制研究

目的：核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）/核因子κB受体活化因子（RANK）通路在肿瘤骨定向性迁移中发挥重要的作用,但具体信号传导机制尚不清楚。本文探讨非受体酪氨酸激酶c-Src在RANKL诱导的乳腺癌BT474细胞迁移中的作用。方法：Western blot检测BT-474细胞表面受体RANK蛋白的表达及RANKL刺激后细胞p-Src及c-Src的表达;Transwell法测定细胞迁移能力。采用SPSS 16.0统计学软件分析实验数据。结果：BT-474细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导BT-474细胞迁移能力增强。应用RANKL的圈套受体OPG可阻断RANKL诱导的细胞迁移。RANKL刺激后BT-474细胞p-Src表达升高,应用c-Src激酶抑制剂PP2可显著抑制RANKL诱导的细胞迁移。结论：c-Src信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌BT-474细胞迁移。     

RANKL/RANK通路介导神经母细胞瘤细胞迁移的机制探讨

目的:探讨RANKL/RANK通路对神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）SH-SY5Y细胞系细胞侵袭和转移的作用机制。方法:通过pcDNA3.1+-RANKL和siRNA-RANKL转染NB SH-SY5Y细胞系过表达或沉默外源基因RANKL;细胞增殖实验(cell counting kit-8,CCK-8)检测外源基因RANKL转染NB SH-SY5Y细胞系对细胞增殖的影响;划痕试验检测外源基因RANKL转染NB SH-SY5Y细胞系对细胞迁移的影响;Western blot实验检测外源性基因RANKL转染NB SH-SY5Y细胞系后细胞内基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9,MMP9）、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）表达变化。结果:通过pcDNA3.1+-RANKL和siRNA-RANKL对NB SH-SY5Y细胞系转染外源性RANKL基因后三组NB细胞增殖能力无统计学差异;RANKL基因过表达后NB SH-SY5Y细胞迁移能力增强（P<0.01）,RANKL沉默后NB SH-SY5Y细胞迁移能力减弱（P<0.01）;RANKL基因过表达后NB SH-SY5Y细胞内MMP9、MMP2表达增强（P<0.05、P<0.001）,RANKL沉默后NB SH-SY5Y细胞内MMP9、MMP2表达减弱（P<0.05、P<0.01）。结论:RANKL/RANK通路介导NB细胞迁移,并可能通过抑制细胞内MMP2、MMP9表达实现。     

肾上腺髓质素对卵巢癌细胞迁移影响及其机制的探讨

目的:观察外源性肾上腺髓质素(AM)对卵巢癌细胞HO8910迁移的影响,并探讨其作用机制.方法:外源性应用AM后,采用划痕实验观察卵巢癌细胞系HO8910的迁移功能,并且利用蛋白质印迹法检测ERK1/2及p-ERK1/2蛋白的表达,以了解AM对ERK1/2蛋白及其活性的影响.结果:外源性给予AM(100 nmol/L)的细胞12 h迁移率为(62.61±4.51)％,阴性对照细胞的迁移率为(29.23±4.15)％,AM可以促进卵巢癌细胞HO8910的迁移,P=0.001.提前应用ERK1/2抑制剂PD98059的细胞在外源性AM(100 nmol/L)的刺激下迁移率为(37.97±3.44)％,比单纯应用AM刺激的细胞迁移率降低,P=0.002.外源性给予AM(100 nmol/L)可以促进卵巢癌细胞的ERK1/2蛋白磷酸化.结论:AM促进卵巢癌细胞的迁移,与细胞的ERK1/2活化相关,可能为卵巢癌迁移的治疗提出一个新的研究方向.     

水通道蛋白3在表皮生长因子诱导的乳腺癌细胞迁移中的作用机制研究

目的研究水通道蛋白3（aquapofin3,AQm）与表皮生长因子（EGF）诱导的乳腺癌细胞迁移之间的关系,并对其可能的机制进行初步探索。方法采用Westernblot法检测4种乳腺癌细胞MDA—MB-231、T47D、MCF-7、ER—ZR-70中的AQP3与EGFR的表达情况,选取高表达的细胞株进行EGF诱导,观察细胞迁移（划痕愈合实验）及AQP3表达的变化。施加CuSO。（AQm抑制剂）后观察细胞迁移及AQP3表达的变化。为进一步证明EGF通过哪条通路来调节AQF3的表达,采用LY294002（P13K／AKT通路抑制剂）及U1026（MAPK／ERK1／2通路抑制剂）分别进行阻断,观察AQP3的表达变化。结果Western blot检测发现迁移性强的MDA—MB-231细胞具有EGFR和AQP3的高表达。针对此细胞用不同浓度的EGF进行诱导,发现AQ1Y3的反应性表达与伤口愈合程度呈现一致的趋势（r=0．885,P〈0．01）,采用不同浓度的CuSO。对AQP3的表达进行抑制,MDA—MB-231细胞的伤口愈合程度明显下降（r=0．959,P〈0．01）。采用LY294002阻断P13K／AKT通路后,AQm表达下降,而U1026作用后AQP3表达无明显变化。结论在乳腺癌细胞中存在AQP3表达;在EGF诱导的乳腺癌细胞迁移中,AQP3的反应性表达起到重要的作用,而EGF可能通过P13K／AKT通路来调节AQP3的表达。     

ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移

目的:探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移中的作用.方法:流式细胞术检测MDA-MB-231细胞表面RANK蛋白的表达;western-blot检测RANKL刺激后磷酸化ERK(P-ERK)及ERK的表达;Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变.结果:MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强.RANKL刺激后MDA-MB-231细胞P-ERK表达升高,PD98059抑制RANKL诱导的细胞迁移.结论:ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移.     

ILK与HSP90相互作用对乳腺癌细胞迁移影响及其机制的探讨

目的:研究ILK与HSP90的相关性及其在肿瘤侵袭转移中的作用.方法:免疫共沉淀方法检测ILK与HSP90的相互作用;用反义ILK质粒转染乳腺癌细胞,建立稳定表达反义ILK的细胞系;蛋白质印迹法检测细胞内源性ILK的表达;细胞增殖实验和划痕实验观察细胞增殖和迁移情况;蛋白质印迹法检测E-cadherin、MMP-9以及β-catenin的表达.结果:在IEC18和MA891细胞中均检测到ILK与HSP90α和HSP90β的相互作用;反义ILK在抑制细胞内源性ILK表达的同时促进HSP90β的表达;与对照组细胞相比,反义ILK使MA891细胞生长速度减慢、运动迁移能力下降;其在增加E-cadherin表达的同时抑制MMP-9以及细胞核β-catenin的表达.结论:乳腺癌细胞中存在ILK与HSP90的相互作用,反义ILK通过抑制Wnt/β-catenin信号通路关键分子β-catenin的核积累而抑制乳腺癌细胞迁移.     

二氢青蒿素诱导乳腺癌细胞凋亡的分子机制初探

48 h凋亡相关蛋白tbid和Caspase-8表达增强,且呈一定剂量依赖关系.结论: DHA能显著抑制人乳腺癌细胞T47D生长,影响细胞周期,诱导细胞凋亡,其分子机制可能与促使Bim、tbid和Caspase-8表达增强的内源性凋亡途径有关.     

PI3K/Akt信号通路在RANKL诱导的MCF-7乳腺癌细胞迁移中的作用

目的 核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)能促进表达RANK的上皮癌细胞迁移至骨,与乳腺癌骨转移密切相关.本文探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphoinositide3-kinase/serine/threonine protein kinase PI3K/Akt)信号通路在RANKL诱导的乳腺癌MCF-7细胞迁移中的作用.方法 流式细胞仪检测MCF-7细胞表面RANK蛋白的表达;Transwell法测定RANKL刺激后MCF-7细胞迁移能力的改变;Western-blot检测MCF-7细胞RANKL刺激后p-Akt及Akt的表达.SPSS 16.0软件分析实验数据.结果 MCF-7细胞表达RANK 蛋白,RANKL诱导MCF-7细胞迁移能力显著增强,RANKL的圈套受体OPG可阻断RANKL诱导的细胞迁移.RANKL刺激后MCF-7细胞p-Akt表达在1、5分钟时一过性升高,PI3K抑制剂LY294002显著抑制RANKL诱导的细胞迁移.结论 PI3K/Akt信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞系MCF-7迁移.     

PI3K/Akt信号通路在RANKL诱导的MCF-7乳腺癌细胞迁移中的作用

目的：核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）能促进表达RANK的上皮癌细胞迁移至骨,与乳腺癌骨转移密切相关。本文探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶（phosphoinositide3-kinase/serine/threonine protein kinase PI3K/Akt）信号通路在RANKL诱导的乳腺癌MCF-7细胞迁移中的作用。方法：流式细胞仪检测MCF-7细胞表面RANK蛋白的表达;Transwell法测定RANKL刺激后MCF-7细胞迁移能力的改变;Western-blot检测MCF-7细胞RANKL刺激后p-Akt及Akt的表达。SPSS 16.0软件分析实验数据。结果：MCF-7细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MCF-7细胞迁移能力显著增强,RANKL的圈套受体OPG可阻断RANKL诱导的细胞迁移。RANKL刺激后MCF-7细胞p-Akt表达在1、5分钟时一过性升高,PI3K抑制剂LY294002显著抑制RANKL诱导的细胞迁移。结论：PI3K/Akt信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞系MCF-7迁移。     

转染beclin 1基因诱导自噬对三阴性乳腺癌BT-549细胞生长的影响

目的探讨转染beclin1基因诱导三阴性乳腺癌BT-549细胞发生自噬及其对细胞生长的影响。方法将BT-549细胞分为4组,包括空白组、空载体组、脂质体组和目的基因组,并以MDA—MB-231细胞作为阳性对照组。采用Lipofectamine^TM 2000携带含有beclin1基因的质粒转染BT-549细胞,分别于转染后24、36、48、60h用荧光显微镜观察转染效率;于转染后48h利用RT-PCR检测各组细胞beclin 1 mRNA表达情况;转染后各组细胞分别在含10％胎牛血清1640培养基和无胎牛血清1640培养基内培养,并分别于24、48、72、96h和12、24、36、48h采用MTT法检测细胞的增殖率和存活率;各组细胞在无胎牛血清1640培养基内培养24h后,采用流式细胞仪检测其细胞凋亡和细胞周期情况;各组细胞在无胎牛血清1640培养基内生长36h后,经吖啶橙染色观察并比较发生自噬的细胞数。MTT数据按重复测量的方差分析进行统计,其余计量资料按单因素方差分析进行统计,计数资料按照R×C表资料的χ^2检验进行统计分析。结果48h时携带目的基因的质粒经脂质体转染BT-549细胞的效率最高;目的基因组细胞beclin 1 mRNR水平显著高于空白组、脂质体组、空载体组和阳性对照组（P〈0．01）;在含10％胎牛血清1640培养基内,目的基因组细胞的增殖率显著低于空白组（F=112．1,P=0．00）,而在无胎牛血清1640培养基内,目的基因组细胞36h和48h的存活率显著高于空白组（F=37．5,P=0．00）;目的基因组细胞的凋亡比例增加（F=3914．4,P=0．00）,且细胞处于G0／G1期的比例升高（F=258．8,P=0．00）;目的基因组细胞发生自噬的数量显著增加（χ^2=7．7,P=0．00）。结论向三阴性乳腺癌BT-549细胞转染beclin 1基因,可提高细胞的自噬水平。该作用可抑制细胞在正常培养环境下的增殖,但对低营养环境下的细胞存活具有保护作用。     

DKK1对乳腺癌细胞迁移侵袭能力影响的研究

  目的  探讨Dikkopf 1（DKK1）对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响。  方法  采用免疫组织化学方法检测DKK1在乳腺癌组织中的表达,并通过免疫荧光对DKK1在细胞中的定位进行分析;DKK1过表达的真核表达载体转染乳腺癌细胞MDA231,应用Western blot检测转染后乳腺癌细胞MDA231中DKK1蛋白表达水平。划痕实验检测转染后MDA231细胞的迁移能力,Transwell实验检测MDA231细胞侵袭能力的改变。  结果  免疫组织化学检测到乳腺癌组织原发病灶及转移病灶DKK1表达明显高于对应的癌旁组织（P < 0.05）。DKK1表达的阳性率在有淋巴结转移组织中明显比无淋巴结转移组织中低。免疫荧光结果显示DKK1主要呈细颗粒状散在分布于细胞质中。Western blot检测表明DKK1过表达明显。过表达DKK1的MDA231细胞迁移和侵袭能力明显比阴性对照组和空白组低。  结论  DKK1的表达与乳腺癌细胞迁移和侵袭能力呈负相关。      

壳聚糖纳米粒介导人表皮生长因子受体2小干扰RNA抑制乳腺癌细胞迁移

目的以壳聚糖纳米粒作为人类表皮生长因子受体2小干扰RNA（HER-2siRNA）的载体转染人乳腺癌细胞SK—BR-3,观察HER-2沉默对其体外迁移能力的影响。方法采用离子凝胶法制备壳聚糖．HER．2siRNA纳米粒,原子力显微镜观察纳米粒的形态。分4组进行转染,分别加入转染试剂壳聚糖-HER-2siRNA纳米粒（实验组）、Lipofectamine^TM2000和HER-2siRNA（阳性对照组）、壳聚糖-阴性对照siRNA纳米粒（阴性对照组）和空白壳聚糖纳米粒（空白组）。-步法逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot鉴定HER-2在SK—BR-3细胞中的表达变化。Transwell小室法检测HER-2siRNA对细胞体外迁移能力的影响。统计分析采用单因素方差分析、K—WH秩和检验。结果成功制备了壳聚糖-siRNA纳米粒,呈球形,大小约100nm。实验组能有效抑制HER-2mRNA和蛋白的表达以及SK—BR-3细胞的体外迁移能力,与阴性对照组和空白组相比差异有显著的统计学意义（P均=0．000）。结论壳聚糖纳米粒介导的HER-2siRNA能有效抑制人乳腺癌细胞SK—BR-3中HER-2的表达及其体外迁移能力。