乙酰葛根素对Aβ25-35诱导BV-2小胶质细胞Caspase-3表达的影响

目的 探究乙酰葛根素对β淀粉样蛋白(Aβ_25-35)诱导BV-2小胶质细胞形态及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法 用凝聚态Aβ_25-35诱导体外培养的BV-2小胶质细胞作为阿尔茨海默病炎症细胞模型,将细胞分为对照组、模型组、Caspase-3抑制剂(Z-DEVD-fmk)组以及乙酰葛根素低(0.1 μmol/L)、中(0.4 μmol/L)、高(1.6 μmol/L)剂量共6组,采用倒置相差显微镜观察小胶质细胞形态变化,应用Western blotting检测Caspase-3蛋白表达水平。结果 形态学结果显示,Aβ_25-35可激活小胶质细胞使其由静息态变为阿米巴样,Caspase-3抑制剂、乙酰葛根素可改善Aβ_25-35诱导的小胶质细胞形态改变。Western blotting结果显示,与对照组相比,模型组Caspase-3表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,Caspase-3抑制剂、乙酰葛根素各剂量组Caspase-3表达均显著降低(P<0.01);与Caspase-3抑制剂组相比,乙酰葛根素低、中剂量组Caspase-3表达均显著升高(P<0.01),高剂量组则无统计学意义。结论 乙酰葛根素可抑制Aβ诱导BV-2小胶质细胞激活,其机制可能与降低Caspase-3表达有关,且以高剂量组效果较好。     

铅暴露加重Aβ1-42处理的小胶质细胞活化和小胶质细胞中的铜离子蓄积

目的 探讨铜离子在铅(Pb)加重Aβ_1-42处理的小胶质细胞活化及神经元损伤中的作用,以揭示铅加重阿尔兹海默症(AD)样变的调控机制。方法 将BV2细胞分为Control组(不予任何处理)、Aβ_1-42组(5、10、15、20μmol/LAβ_1-42处理12 h)、Pb组(5、10、15、20μmol/L Pb处理12 h)和Aβ_1-42+Pb组(10μmol/L Aβ_1-42+10μmol/L Pb处理12 h)。CCK8检测细胞活力,相差显微镜观察细胞形态学改变,细胞免疫荧光检测iNOS释放及氧化应激情况,ELISA检测小胶质细胞的炎性因子释放情况,Western blot检测CTR1和ATP7A蛋白表达量,ICP-MS检测细胞铜含量。结果 15μmol/L和20μmol/L的Aβ_1-42处理BV2细胞12 h可降低其生长活力(P<0.05和P<0.01);与对照组相比,10μmol/L Aβ_1-42处理BV2细胞12...     

β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞的炎性上清对神经元凋亡的影响

目的 研究β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞的炎性上清对神经元凋亡的影响.方法 用浓度为125 hmol/L的Aβ1-42诱导的小胶质细胞炎性上清干预神经元,检测Bcl-2、Caspase-3、PARP的表达及神经元凋亡的情况.结果 炎性上清液干预组Caspase-3(14.2±1.8)、Bcl-2阳性细胞数(10.6±0.8)明显高于Aβ1-42干预组(2.2±0.6,5.0±0.3)(P＜0.01),吖啶橙免疫荧光结果显示炎性上清液处理组与Aβ1-42直接干预组48 h和72 h凋亡率比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Aβ1-42诱导小胶质细胞的炎性上清可以通过Caspase-3途径诱导神经元凋亡,小胶质细胞活化引起的慢性炎性过程是Aβ引起神经细胞凋亡的重要条件之一.

Abstract：

Objective To study the effects of neuronal apoptosis under the induction of β-amyloid inflammatory supernatant. Methods The neurons were intervened by β-amyloid-induced inflammatory supernatant at the concentration of Aβ1-42 at 125 nmol/L. And the expressions of Bcl-2, caspase-3, PARP and neuronal apoptosis were detected. Results The caspase-3 ( 14. 2 ± 1.8 ), Bcl-2 ( 10. 6 ± 0. 8 ) positive cells of microglia inflammatory supernatant stimulated group were significantly elevated than the control(2. 2 ± 0. 6,5. 0 ± 0. 3, P ＜ 0. 01 ). Nuclear chromatin was uniform yellow-green fluorescent. And there was significant difference of neuronal apoptosis between microglia inflammatory supernatant group and Aβ1-42directly stimulated group. Conclusion Neuronal apoptosis is induced by caspase-3 in β-amyloid inflammatory supernatant. One of the important causes is chronic inflammatory process of activated microglia by Aβ.     

β-淀粉样蛋白对小胶质细胞分泌白细胞介素1β的影响

探讨阿尔茨海默病（AD）发病的免疫炎性机制。方法体外培养小胶质细胞，免疫细胞化学方法进行小胶质细胞鉴定；用0.1～20μg／ml聚集状态的β-淀粉样蛋白（Aβ）激活小胶质细胞，观察其形态变化．ELISA法检测培养基中白细胞介素1β（IL-1β）的浓度。结果0.1μg／ml Aβ1-12实验组，小胶质细胞形态无明显改变．培养基中IL-1β浓度无明显升高；1μg／ml和20μg／ml Aβ1-12实验组。小胶质细胞胞体变大，形态由分枝状转变成“阿米巴样”，培养基中IL-1β浓度升高；与对照组比较差异均有显著性意义（均P〈0．05）。结论Aβ可激活小胶质细胞，诱导其释放IL-1β，并呈剂量依赖性，提示小胶质细胞介导的免疫炎性机制在AD发病中起着重要的作用。     

β-淀粉样蛋白对小胶质细胞合成一氧化氮的影响

目的探讨β-淀粉样蛋白（amyloid beta-peptide,Aβ）诱导小胶质细胞活化后κ轻链核因子（nuclear factor-kappa B,NF-κB）的表达及一氧化氮（NO）水平的变化。方法Aβ干预纯化培养的小胶质细胞,观察其形态学变化,采用镉还原法测定NO水平,免疫细胞化学方法研究NF-κB的表达。结果500 nmol/L及1000 nmol/L Aβ干预组细胞形态呈“阿米巴样”,细胞核内NF-κB的表达增加（P〈0.05）,培养基中NO浓度升高（P〈0.05）。结论Aβ激活小胶质细胞NF-κB途径大量合成NO,可能参与阿尔茨海默病（Alzheimer＇s disease,AD）的致病过程。     

Aβ1-42单克隆抗体对阿尔茨海默病大鼠认知能力及脑组织Aβ和ChAT表达的影响

目的:探讨经颅内注射β-淀粉样蛋白(Aβ)142单克隆抗体(mAb)对阿尔茨海默病(AD)大鼠的疗效及机制.方法:30只SD大鼠分3组:AD模型组和治疗组各12只,生理盐水组6只.AD模型组和治疗组于侧脑室注入Aβ1-42蛋白片段建立AD大鼠模型,治疗组大鼠在注射后第14天于侧脑室内注入Aβ1-42 mAb,连用3 d...     

硫酸镁对脑损伤大鼠神经细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的 研究硫酸镁对创伤性脑损伤大鼠神经细胞凋亡及Caspase-3基因表达的影响。方法Wistar大鼠48只，随机分为6组，每组8只。采用Feeney法造成TBI模型。损伤组大鼠在致伤后5min内分别按不同剂量给予25％MgSO4腹腔注射。24h后检测细胞凋亡及Caspase-3表达情况。结果颅脑创伤后大鼠脑组织中神经细胞凋亡及Caspase-3基因表达均显著增加，使用MgSO4治疗后神经细胞凋亡显著减少，Caspase-3基因表达降低。不同剂量MgSO4组之间神经细胞凋亡与Caspase-3基因表达未见差异显著性。结论硫酸镁可显著抑制创伤性颅脑损伤大鼠神经细胞凋亡及Caspase-3基因活化，具有显著的脑保护作用。     

β淀粉样蛋白1-42对小胶质细胞产生一氧化氮作用的实验研究

目的：应用β淀粉样蛋白1-42（β-Amyloid，Aβ1-42）作用于小胶质细胞（microglia，MG），探讨其产生一氧化氮（nitric oxide，NO）的作用途径。方法：应用BV-2小胶质细胞作为体外小胶质细胞模型，测定加入Aβ1-42后细胞上清NO含量及细胞iNOS酶活力；流式细胞仪间接免疫荧光标记法观察Aβ1-42对iNOS蛋白表达的作用。结果：Aβ1-42可以刺激BV-2细胞产生NO、提高细胞iNOS酶活性、增加iNOS蛋白质表达，以上作用均具有时间及浓度依赖性。结论：Aβ1-42在体外可通过活化小胶质细胞，增加NO的表达及分泌，为进一步发挥神经元毒性作用创造条件。     

Aβ_(1-42)寡聚体诱导阿尔茨海默病动物模型的研究

阿尔茨海默病(AD)是一种世界性疾病,建立AD动物模型对于研究和治疗AD有重要意义。可溶性Aβ1-42寡聚体来自源淀粉样前体蛋白,与其他Aβ进行比较,Aβ1-42的神经毒性更强,在诱导AD动物模型时更接近于AD的病理状态,其能更全面地诠释AD的发病机制,该模型的建立为今后AD药物研究以及治疗奠定了基础。     

β-淀粉样蛋白25-35杏仁核注射对大鼠海马Caspase-3及P38MAPK mRNA表达的影响

目的 观察β-淀粉样蛋白(AB)25-35对大鼠海马Caspase-3及P38MAPK mRNA表达的影响.方法 雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠24只,随机分为正常对照、假手术、类阿尔茨海默病(AD)模型组,每组8只.类AD模型采用Aβ25-35片段单侧杏仁核注射建立.采用免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的表达,原位杂交法检测P38MAPK mRNA的表达.结果 类AD模型组大鼠的海马及额叶皮层Caspase-3及P38MAPK mRNA 表达的阳性细胞数均显著高于正常对照及假手术组(P值均＜0.01),光密度值亦均显著高于正常对照及假手术组(P值均＜0.05).结论 Aβ25-35杏仁核单侧注射可诱导大鼠P38MAPK活性增加,并进一步促进Caspase-3等凋亡蛋白的过度表达,促使神经细胞凋亡的发生.     

低浓度Aβ1-42单体/寡聚体及一氧化碳供体对SN56细胞存活率的影响

目的 观察低浓度Aβ1-42单体/寡聚体对胆碱能SN56细胞存活率的影响以及不同浓度CORM-2的作用.方法 将相同细胞浓度的SN56细胞培养在96-孔细胞培养板中并将细胞分为对照组、Aβ1-42组、Aβ1-42+CORM-2 50μM组及Aβ1-42+CORM-2 100μM组.Aβ1-42组三列细胞分别在10nM、100nM及1μM Aβ1-42单体/寡聚体的环境中培养.Aβ1-42+CORM-2 50μM组和Aβ1-42+CORM-2 100μM组细胞除每孔L分别含50μM及100μM CORM-2外,其余培养条件与Aβ1-42组相同.对照组不加任何处理因素.培养3d后,用MTT法比较不同组别细胞存活率.结果 Aβ1-42组细胞存活率分别为(79.73±0.94)%、(67.99±0.79)%、(60.42 ±0.62)%,随Aβ1-42浓度增加而下降.Aβ1-42+CORM-2 50μM/100μM组细胞存活率分别为(75.15±0.096)%、(63.20±0.17)%、(55.33±0.19)%;(73.20±0.27)%、(64.34±0.11)%、(54.17 ±0.12)%,均低于单纯Aβ1-42组;并且不同CORM-2浓度之间,降低细胞存活率的作用存在差异.结论 低浓度Aβ1-42单体/寡聚体可降低SN56细胞的存活率,并且浓度越高,效果越明显;不同浓度CORM-2均可使SN56细胞的存活率下降,且作用强度存在差异.     

炎性细胞因子对大鼠小胶质细胞整合素表达的影响

目的 探讨炎性细胞因子对大鼠小胶质细胞整合素表达的影响.方法 体外分离培养和纯化大鼠小胶质细胞,在无血清培养基培养加入不同的炎性细胞因子,应用流式细胞术检测炎性细胞因子对大鼠小胶质细胞MHC I类分子和整合素表达的影响.结果 在培养基中加入TNF、IFN-α和IFN-γ后,大鼠小胶质细胞MHC I类分子的表达较对照组均显著增加(P＜0.001);小胶质细胞α4亚基的表达较对照组分别增加(37.0%±4.1%)(P＜0.01)、(56.3%±5.3%)(P＜0.005)和(54.0%±6.1%)(P＜0.01);Mac-1(即αMβ 2)表达较对照组分别增加(34.3%±3.4%)(P＜0.01).(43.3%±5.9%)(P＜0.05)和(46.0%±3.1%)(P＜0.05).在培养基中加入TGF-β1后,MHC I类分子的表达相对于对照组显著下降(P＜0.001);小胶质细胞α4亚基的表达较对照组下降显著(P＜0.005);Mac-1较对照组下降(28.0%+5.0%)(P＜0.05).在培养基中加入TGF-β1、TNF、IFN-α和IFN-γ后,LFA-1(即αLβ2)表达均显著增加(P＜0.01).在培养基中联合加入TNF+TGF-β1、IFN-α+TGF-β1、IFN-γ+TGF-β1后,LFA-1(即αLβ2)表达均增加(P＜0.001).结论 炎性细胞因子TNF、IFN-α和IFN-γ可以促进小胺质细胞的活化,促进小肢质细胞表达α4αβ1,和Mac-1.而TGF-β1抑制小胺质细胞活化,抑制小胶质细胞表达α4β1和Mac-1.并且TGF-β1的抑制作用强于TNF、IFN-α的促进作用.炎性细胞因子(TGF-β1、TNF、IFN-α和IFN-γ)均可上调LFA-1的表达.     

补脑软胶囊对Aβ1-42诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响

目的探讨补脑软胶囊对Aβ_(1-42)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法采用不同剂量的补脑软胶囊作用于经Aβ_(1-42)诱导损伤的SH-SY5Y细胞24 h,采用Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测SH-SY5Y细胞的凋亡情况。结果与空白组比较,模型组SH-SY5Y细胞平均凋亡率明显升高,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,多奈哌齐阳性对照组及补脑软胶囊内容物中、低剂量组SH-SY5Y细胞平均凋亡率均明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论补脑软胶囊可减少经Aβ_(1-42)诱导损伤引起的SH-SY5Y细胞凋亡,降低细胞凋亡率。     

转化生长因子-β1对新生大鼠星形胶质细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的:研究转化生长因子;GAAB2;β1;(TGF;GAAB2;β1)对新生大鼠大脑皮层星形胶质细胞表达结缔组织生长因子(CTGF) 的影响.方法:体外培养的新生SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞分为对照组:无血清培养基(FSM) 培养; 实验组:分别用含1 μg /L,2 μg /L,4 μg /L TGF-β1的FSM培养,24 h后,分别用RT-PCR和Western Blot检测2组细胞中CTGF mRNA和蛋白的表达.结果:对照组CTGF mRNA和蛋白表达均为阴性;实验组CTGF mRNA和蛋白表达皆呈阳性,且随着TGF-β1质量浓度的增加,2者的表达量有增高的趋势(F=80.889和200.300,P均＜0.01).结论:TGF-β1 能上调星形胶质细胞中CTGF的表达.     

血管内注射可溶性Aβ1-40对鼠脑神经胶质细胞的影响

[目的]探讨血液内较高浓度的可溶性 Aβ 1- 40在阿尔茨海默病发病中的作用.[方法] 15只大鼠随机分为 3组,实验组、生理盐水组和空白对照组,每组 5只,通过大鼠颈部血管插管至心脏并留置的方法,向实验组大鼠血液中每日 2次注射 10 μ g的可溶性 Aβ 1- 40,对照组注射同样剂量的生理盐水,而空白对照组不作任何处理.连续 14日后,采用免疫组化方法观察各组大鼠大脑皮质及海马的星形胶质细胞、小胶质细胞.[结果]与生理盐水组和空白对照组相比,实验组注射 Aβ 1- 40以后,皮层、海马的脑实质以及毛细血管周围星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白表达明显增多;小胶质细胞呈明显的激活状态.统计学分析表明,胶质纤维酸性蛋白和 OX 42阳性表达明显高于其余两组(P< 0.01),而生理盐水组和空白对照组无明显差异(P >0.05).[结论]血管内连续注射 Aβ 1- 40以后,可以激活小胶质细胞和星形胶质细胞,提示 Aβ 1- 40在阿尔茨海默病发病中起到很重要的作用.     

芦荟多糖对脑缺血大鼠Caspase-3蛋白表达的影响芦荟多糖对脑缺血大鼠Caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨芦荟多糖对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用机制。方法采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉（MCAO）,制备局灶性脑缺血模型,观察芦荟多糖对MCAO模型大鼠脑缺血后神经功能缺损导致的行为变化,用免疫组化法检测大脑皮质细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果芦荟多糖能抑制MCAO模型大鼠大脑皮质Caspase-3蛋白的表达。结论芦荟多糖对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用．其机理与其影响、抑制Caspase-3的表达有关。     

ALA-PDT对皮肤鳞状细胞癌A431细胞Caspase-3及Caspase-7表达的影响

目的观察盐酸氨酮戊酸散(ALA)-光动力疗法(PDT)对皮肤鳞状细胞癌A431细胞中Caspase-3及Caspase-7表达的影响。方法体外培养A431细胞,应用M TT法检测不同ALA浓度、不同培养时间、不同PDT光照剂量以及单独加药和单独光照对A431细胞增殖与凋亡的影响,并设Hacat作为对照;应用实时荧光定量PCR及Western blotting检测A431细胞及Hacat细胞中Caspase-3及Caspase-7 mRNA和蛋白的表达水平。结果A431细胞中Caspase-3及Caspase-7 mRNA和蛋白的表达量低于Hacat细胞,其表达强弱差异有统计学意义(P<0.05)。ALA-PDT对A431细胞的增殖具有一定的抑制作用,并引起Caspase-3及Caspase-7 mRNA和蛋白的表达量升高(P<0.01)。当光照剂量为80 J/cm2时,Caspase-3、Caspase-7 mRNA及蛋白的表达量均达到峰值。结论ALA-PDT对皮肤鳞状细胞癌A431细胞的增殖抑制可能是通过诱导Caspase-3及Caspase-7的表达,引起细胞的凋亡从而发挥作用。