聚乙二醇修饰对仅α-苦瓜素抗肿瘤活性的影响

目的 探讨苦瓜籽核糖体失活蛋白α-苦瓜素(α-MMC)经聚乙二醇(PEG)修饰后,其体外细胞毒性和体内抗肿瘤活性的变化.方法 用MTT法测定α-MMC和PEG-α-MMC结合物对小鼠乳腺癌细胞EMT-6的抑制率;通过BALB/C小鼠模型研究药物对EMT-6细胞嫁接瘤生长的抑制作用.结果 在相同的条件下,PEG-α-MM...     

莲必治注射液的过敏性研究

目的:研究两种不同纯度的莲必治注射液在被动皮肤过敏试脸(passive cutaneous anaphylaxis,PCA)和全身主动过敏试验(active systemic anaphylaxis,ASA)中是否有过敏反应。方法:按照《中药、天然药物免疫毒性(过敏性、光变态反应)研究的技术指导原则》的试验方法对两种不同纯度的莲必治注射液进行被动皮肤过敏试验和全身主动过敏试验研究。结果:被动皮肤过敏试验中两种莲必治液均有过敏反应。在全身主动过敏试验中,莲必治A高剂量组有2只动物出现弱阳性,而莲必治B高剂量组1只出现弱阳性,5只出现阳性反应,2只出现过敏反应的极强阳性反应,其他未见过敏反应。结论:莲必治注射液所引发的过敏反应可能与其所含的杂质有关。     

莲必治注射液的过敏性研究

摘 要 目的: 研究两种不同纯度的莲必治注射液在被动皮肤过敏试脸(passive cutaneous anaphylaxis,PCA)和全身主动过敏试验(active systemic anaphylaxis,ASA)中是否有过敏反应。方法: 按照《中药、天然药物免疫毒性(过敏性、光变态反应)研究的技术指导原则》的试验方法对两种不同纯度的莲必治注射液进行被动皮肤过敏试验和全身主动过敏试验研究。结果:被动皮肤过敏试验中两种莲必治液均有过敏反应。在全身主动过敏试验中,莲必治A 高剂量组有2只动物出现弱阳性,而莲必治B 高剂量组1只出现弱阳性,5只出现阳性反应,2只出现过敏反应的极强阳性反应,其他未见过敏反应。结论:莲必治注射液所引发的过敏反应可能与其所含的杂质有关。     

苦瓜籽核糖体失活蛋白的分离纯化及抗氧化活性的研究

目的改进苦瓜籽核糖体失活蛋白的提取工艺 ,并对其抗氧化活性进行研究。方法苦瓜籽经粉碎 ,50mmol/L乙酸抽提 ,硫酸铵沉淀 ,经阳离子交换及凝胶柱色谱等步骤进一步纯化后 ,测定所得两种核糖体失活蛋白的理化性质。结果纯化后得到一种分子量为 2 9.6kD的蛋白质和一种小分子量蛋白质 ,两者在无细胞系统中抑制50 %蛋白质合成浓度分别为 4 .3× 1 0 - 6 、1 .4× 1 0 - 6 mol/L ,含糖量分别为 4 .83 %、1 .82 % ,类超氧化物歧化酶 (SOD)活性分别为 79.0 5、1 7.2 5u/mg。阳性对照纯品SOD活性为 1 2 67u/mg。结论从苦瓜籽中分离纯化出两种不同分子量的核糖体失活蛋白均为糖蛋白质 ,且具有一定的抗氧化活性     

聚乙二醇修饰的蓖麻毒蛋白A链的特性研究

目的：研究两种不同相对分子质量（Mr）的单甲氧聚乙二醇（Monomethoxy polyethylene glycol，mPEG）与蓖麻毒蛋白A链（ricin A-chain，RTA）偶联后三者的免疫原性和毒性的不同。方法：从天然蓖麻籽中提取纯化的RTA，并分别与相对分子质量为5KD和10KD的mPEG反应偶联，得到两种不同的RTA-mPEG偶联物。用蛋白质印迹方法比较RTA和不同的RTA-mPEG偶联物之间的免疫原性的变化，此外通过用噻唑蓝比色法（MTT）对RTA及不同偶联物的体外细胞毒性进行评价，并通过测定半数致死量（LD50）的方法比较它们的体内毒性。结果：经聚乙二醇修饰后的RTA，其毒性有明显的下降。此外，对其免疫原性的研究表明，RTA的PEG化也能降低RTA的免疫原性。结论：聚乙二醇能遮蔽RTA，使其免疫原性和毒性有很大的降低。且下降的程度同与RTA偶联的聚乙二醇的相对分子量成正相关。     

聚乙二醇-脂质衍生物修饰对脂质体稳定性的影响

聚乙二醇-脂质(polyethylene glycol-lipid,PEG-lipid)衍生物具有增加脂质体的稳定性、延长其血液循环半衰期、提高其肿瘤靶向效率及增强药物疗效等优势。深入研究不同PEG-lipid衍生物修饰对脂质体的物理、化学和生物学稳定性的影响,有利于解决目前PEG化脂质体存在的问题,如静脉重复注射时引起的加速血液消除(accelerated blood clearance,ABC)现象,为开发新型靶向制剂奠定基础。本文主要综述了PEG与脂质之间的连接键如酰胺键、醚键、酯键和二硫键,脂质种类如常用的磷脂酰乙醇胺、胆固醇和二酰甘油,脂质的性质即脂肪链长度与饱和度,PEG的端基如甲氧基、羧基、氨基,PEG的相对分子质量和PEG-lipid的摩尔比对PEG化脂质体在体内外稳定性的影响。     

甲氧基聚乙二醇-聚乳酸胶束载体对丝裂霉素的抑瘤活性及局部组织损伤的影响

目的探讨甲氧基聚乙二醇-聚乳酸(mPEG-PLA)胶束是否可以提高丝裂霉素(MMC)的抗肿瘤活性及降低MMC的局部组织损伤作用。方法采用腹腔种植方法分别制备昆明小鼠肉瘤180(S180)实体瘤模型及H22肝癌腹水瘤模型,每个模型小鼠均分为模型组(生理盐水0.1ml·kg-1),mPEG-PLA组,MCC1mg·kg-1组,胶束MMC2,6和18mg·kg-1组。分别观察S180实体瘤的抑瘤率及H22腹水瘤的生命延长率。BALB/C小鼠分别右后肢im给予生理盐水组(正常对照),mPEG-PLA,胶束MMC0.02,0.04,0.08,0.1,0.16,0.2和0.4mg·kg-1组,MMC0.02,0.04,0.08,0.1,0.16,0.2和0.4mg·kg-1组,观察小鼠局部组织损伤情况。结果在S180实体瘤模型上,mPEG-PLA无肿瘤抑制作用;MMC1mg·kg-1的肿瘤抑制率为34.8%,胶束MMC2,6和18mg·kg-1的肿瘤抑制率分别为31.23%,51.8%,66.8%,胶束MMC6和18mg·kg-1的肿瘤抑制率明显高于MMC组(P<0.01)。在H22腹水癌模型上,mPEG-PLA对肿瘤小鼠的生命延长率无影响;MMC1mg·kg-1的生命延长率为123.4%,胶束MMC2,6和18mg·kg-1的生命延长率分别为76.6%,171.0%和206.5%,胶束MMC2mg·kg-1组生命延长率显著低于MMC组(P<0.01),但高于模型组(P<0.01),胶束MMC6和18mg·kg-1的生命延长率明显好于MMC组(P<0.05)。在组织损伤模型上,胶束MMC组损伤发生时间和损伤面积明显低于相同剂量的MMC组(P<0.05)。结论 mPEG-PLA胶束能够提高MMC体内抗肿瘤作用,降低MMC的毒性作用。     

聚乙二醇修饰对蛋白质类药物药代动力学的影响及相关的药动学研究方法

聚乙二醇（PEG）修饰在改善蛋白质类药物的理化性质的同时也会导致其体内药代动力学行为发生变化。而PEG修饰剂的分子大小、分子结构和修饰位点对蛋白质类药物的体内药代动力学行为和活性具有一定影响。根据有关文献报道,讨论这些影响因素,并介绍在对PEG修饰药物进行药代动力学研究时采用的新方法,如：群体药代动力学预测法及体内测定修饰物含量的电化学发光法和PEG特异性抗体法等。     

药载比对和厚朴酚-分枝状聚乙二醇聚合物G2纳米粒形态及体外抗肿瘤活性的影响

目的 采用分支状聚乙二醇化聚合物G2制备不同药载比的和厚朴酚（HK）纳米粒,考察其稳定性、体外释放及细胞毒等体外表征,以期丰富现有的纳米载药系统并筛选合适的药载比。方法 采用超声-蒸发法将有机相（HK和G2的丙酮溶液的混合相）缓慢注入到去离子水中,减压旋蒸除去有机溶剂即得HK-G2纳米粒（HK-G2-Nps）,分别制备药载比为1∶1、2∶1、4∶1、8∶1的纳米粒。利用马尔文粒度分析仪测定HK-G2-Nps粒径、Zeta电位及聚合物分散性指数（PDI）值;高效液相色谱（HPLC）法测定各药载比载药量;用扫描电镜观察其形态;动态膜透析法进行体外释药试验;以乳腺癌4T1细胞为模型用MTT法评价质量浓度为50.0、10.0、5.0、2.5、1.0、0.5、0.1 μg/mL的各药载比HK-G2-Nps细胞毒作用。结果 各药载比HK-G2-Nps的粒径分布较为集中,分散较为均匀;载体G2的用量影响HK-G2-Nps的粒径大小,随着药载比的增加,粒径逐渐减小,载药量提高。稳定性结果显示,纳米粒室温下放置稳定;纳米粒在0.9% NaCl中粒径明显增大,在5%葡萄糖溶液、PBS缓冲液和血浆中可稳定存在。电镜结果显示,药载比为1∶1时,纳米粒没有均一的形态;药载比为2∶1时,纳米粒呈现出不规则的类球状;药载比为4∶1时,呈现出规则均一的球形;药载比达到8∶1时,纳米粒呈现出明显的立方柱状形态同时存在不规则球状。体外释放试验结果显示,在前24 h,纳米粒能够迅速释放,药载比为4：1时累计释放最高,可达70%左右;24 h之后,4个药载比均缓慢释放至120 h,药载比1∶1和2∶1的累计释放率均在60%左右,药载比4∶1和8∶1的累计释放率可达80%、89%。HK-G2-Nps各药载比4T1细胞增殖抑制率均大于游离组HK,药载比为4∶1时作用最显著,其中质量浓度50.0、10.0、2.5、1.0、0.5、0.1 μg/mL显著高于HK组（P<0.05）,半数抑制浓度（IC₅₀）值为3.83 μg/mL。结论 成功筛选并制备药载比为4∶1的HK-G2-Nps,其对乳腺癌4T1细胞增殖抑制率大于HK。     

DAB2IP过表达对人胃癌细胞SGC7901增殖、迁移及对E-cad-herin、Snail、Twist表达的影响

摘要：目的:研究失活蛋白-2相互作用蛋白基因(DAB2IP)过表达对人胃癌细胞SGC7901增殖、迁移及对上皮间质转化(EMT)相关上皮细胞-钙黏蛋白基因(E-cadherin)、Snail、Twist蛋白表达的影响。方法:采用慢病毒介导DAB2IP过表达转染并筛选稳定人胃癌细胞SGC7901细胞株(过表达组),另设慢病组对照液转染的人胃癌细胞SGC7901作为慢病毒对照组,无转染人胃癌细胞SGC7901为空白对照组,采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测各组人胃癌细胞SGC7901 DAB2IP基因表达水平,采用噻唑蓝法(MTT)及平板克隆形成试验检测过表达DAB2IP对人胃癌细胞SGC7901增殖的影响采用细胞划痕试验检测过表达DAB2IP对人胃癌细胞SGC7901迁移的影响,采用免疫印迹(Western Blot,WB)法检测过表达DAB2IP对人胃癌细胞SGC7901中EMT相关蛋白表达水平。结果:同一时间及不同时间,空白对照组和慢病毒对照组人胃癌细胞SGC7901中DAB2IP mRNA表达水平、细胞增殖抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组和慢病毒对照组比较,24,48,72 h过表达组人胃癌细胞SGC7901中DAB2IP mRNA表达水平、细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.05)。与24 h比较,48和72 h过表达组人胃癌细胞SGC7901中DAB2IP mRNA表达水平、细胞增值抑制率显著升高(P<0.05),与48 h比较,72 h过表达组人胃癌细胞SGC7901中DAB2IP mRNA表达水平、细胞增殖抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。提示48 h过表达效果最佳,可用于下游试验。空白对照组和慢病毒对照组平板克隆形成率、细胞迁移距离、E-cadherin、Snail、Twist蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组和慢病毒对照组比较,过表达组人胃癌细胞SGC7901平板克隆形成率、细胞迁移距离、Snail、Twist蛋白水平显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白水平显著增加(P<0.05)。结论:DAB2IP过表达可抑制人胃癌细胞SGC7901增殖、迁移,可能与上调E-cadherin蛋白表达,下调Snail、Twist蛋白表达有关。     

Anti-inflammatory activity of hexane extracts from bones and internal organs of Anguilla japonica suppresses cyclooxygenase-2-dependent prostaglandin D2 generation in mast cells and anaphylaxis in mice

The purpose of this study is to investigate the effects of n-hexane extracts from bones and internal organs of Japanese eel, Anguilla japonica (HEE), on cyclooxygenase-2 (COX-2)-dependent prostaglandin D₂ (PGD₂) generation in stem cell factor (SCF), IL-10, plus LPS-induced mouse bone marrow-derived mast cells (BMMCs) and on passive cutaneous anaphylaxis (PCA) in mice. HEE suppressed SCF/IL-10/LPS-induced PGD₂ generation, and concomitantly reduced COX-2 protein expression dose-dependently. To understand the mechanistic basis for the inhibition of PGD₂ generation by HEE, we examined the effects of HEE on upstream signaling pathways essential for COX-2 induction. HEE was found to inhibit the translocation of nuclear factor-κB (NF-κB) p65 subunit to the nucleus and its DNA-binding ability through the inhibition of TAK1, IKK and IκB phosphorylation.Furthermore, HEE also attenuated mitogen-activated protein kinase (MAPK)-mediated regulation of DNA binding of activator protein-1 (AP-1). Moreover, oral administration of HEE inhibited anti-dinitrophenyl (DNP) IgE-induced PCA in a dose dependent manner. Taken together, the present study provides new insights into the anti-inflammatory activity of HEE, which could be a promising candidate to be used for an inflammatory therapy.     

Inhibitory mechanism of saponins derived from roots of Platycodon grandiflorum on anaphylactic reaction and IgE-mediated allergic response in mast cells

The purpose of this study was to investigate the protective effects of saponins isolated from the root of Platycodi Radix (Changkil saponins: CKS) anti-allergic effects in mice and mast cells. Oral administration of CKS inhibited the dinitrophenyl (DNP)–IgE antibody-induced systemic PCA reaction in mice. CKS reduced the β-hexosaminidase and histamine release from anti-DNP–IgE-sensitized RBL–2H3 cells. In addition, CKS inhibited the IgE antibody-induced increases in IL-4 and TNF-α production and expression in RBL-2H3 cells. In order to explore the inhibitory mechanism of CKS in PCA and mast cell degranulation, we examined the activation of intracellular signaling molecules. CKS suppressed DNP–IgE antibody-induced Syk phosphorylation. Further downstream, CKS also inhibited the phosphorylation of Akt and MAP kinases. Taken together, the in vivo/in vitro anti-allergic effects of CKS suggest possible therapeutic applications for this agent in allergic diseases through the inhibition of inflammatory cytokines and Syk-dependent signaling cascades.     

小叶锦鸡儿中异黄酮及其苷类化合物的体外抗肿瘤活性研究

目的研究小叶锦鸡儿中异黄酮及其苷类化合物的体外抗肿瘤细胞增殖作用。方法利用四唑盐比色法检测,观察小叶锦鸡儿中分离出的3种异黄酮及其苷类化合物:雁靛黄素(Ⅰ)、高丽槐树-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅱ)和芒柄花素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅲ)对人乳腺癌细胞株、宫颈癌细胞株、人肝癌细胞株生长的影响。结果化合物Ⅰ对人乳腺癌细胞株、宫颈癌细胞株的增殖均有明显的抑制作用,IC50分别为20.2、16.9μg.mL-1;化合物Ⅱ对乳腺癌细胞株、肝癌细胞株均有不同强度的抑制作用,IC50分别为17.9、18.8μg.mL-1;化合物Ⅲ对乳腺癌细胞株的增殖有抑制作用,但不呈现浓度依赖关系,对其他两个细胞株的增殖不显示抑制活性。结论化合物Ⅰ、Ⅱ对两种细胞株有不同程度的抗肿瘤活性,化合物Ⅲ不具抗肿瘤活性。     

苄丙咯、尼莫地平和尼卡地平对小鼠脑钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活力的影响

体外实验发现,苄丙咯(bepridil.Bep)能显著抑制提纯的鼠脑钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaM—PKⅠ)的活力,其半抑制浓度约为0.3mmol·L~(-1),而尼莫地平(nimodinine,Nim)和尼卡地平(nicardipine;Nic)对该酶活力均无明显影响。实验结果表明,Bep对CaM—PKⅡ的抑制是通过擂抗CaM而实现的。