孕妇血浆DYS19位点巢式PCR法检测

目的：探讨使用巢式PCR检测孕妇外刷血浆中男性胎儿DNA的可能性并评估其在早期判定胎儿性别方面的准确性。方法：采取20例正常孕妇外周血（孕10～38周）各2mL，枸橼酸钠抗凝后提取血浆，经蛋白酶K及十二烷基磺酸钠消化后直接作为模板，以巢式PCR对其中的胎儿DyS19基因位点进行检测，并将实验结果与娩出后的新生儿实际性别比较。结果：20例孕妇中有8例经2轮PCR后扩增出DYS19基因，后均证实为男胎；未扩增出DYS19基因的12例中有10例证实为女性，2例证实为男性。男胎性别预测符合率为80．0％（8／10）。结论：应用巢式PCR能够直接从母体外周血中检测到男性胎儿基因，且预测胎儿性别有较高的准确度。     

DYS19,DYS391和DYS439基因座多态性研究

目的 :研究Y 染色体STR基因座在法医学实践中的应用价值 ,对 118名河南汉族男性无关个体的DYS19,DYS3 91,DYS43 9Y STR基因座多态性进行调查。方法 :应用荧光标记引物多重PCR技术和毛细管电泳技术。结果 :DYS19,DYS3 91,DYS43 9三个Y STR基因座分别检出 6,4,3个等位基因 ,三个基因座的基因多样性 (genediversity ,GD)分别为 0 72 17,0 475 4,0 5 780。 118名无关个体中发现 2 8种单倍型 ,其单倍型GD为 0 93 42。结论 :应用荧光标记Y STR复合扩增检验技术在实际检案中具有良好效果。     

孕妇血浆Amelogenin基因6bp差异检测对产前胎儿性别的鉴定价值

目的 建立一种可靠性强的非创伤性鉴别胎儿性别的方法。方法 根据Amelogenin基因第3内含子在X-Y染色体上6bp的差异，采用PCR技术扩增孕妇血浆游离DNA，运用聚丙烯酰胺凝胶电泳、溴化乙锭染色鉴定其基因型，从而判断胎儿性别。结果 32例孕妇血浆DNA标本中，19例被诊断为男性，13例被诊断为女性，所得结果与产后胎儿实际性别相比较，符合率为96、88％。结论 通过检测孕妇血浆DNA Amelogenin基因6bp差异产前诊断胎儿性别方法可行，结果可靠。     

孕妇血浆中胎儿DNA的SRY基因检测

目的:探索一种孕期、快速、非创伤性的胎儿性别的产前诊断方法.方法:应用DNA-PCR扩增技术,检测妊娠5～40周的正常孕妇游离在血浆内的无细胞胎儿DNA的SRY基因.结果:90例孕妇血浆中游离DNA检则SRY基因阳性结果32例,其中早孕11例,中孕9例,晚孕12例.最后经绒毛、羊水、脐带血和出生胎儿证实均为男性胎儿,符合率为100%.结论:PCR扩增技术,检测游离在孕妇血浆内的无细胞胎儿DNA能在孕期鉴别胎儿性别,尤其是对早期某些选择性遗传性疾病的非创伤性产前诊断意义重大.     

四川省汉族群体Y染色体DYS19位点的基因组扫描研究

目的对中国四川省汉族代表性人群的DYS19(DNA Y chromosome microsatellite 19)位点进行遗传多态性研究。方法基因组DNA的提取采用传统的酚一氯仿抽提法。DYS19位点的遗传多样性分析采用ABI Prism^TM 310遗传分析仪及扫描分析系统的微卫星基因组扫描分析。结果在四川省汉族群体中共发现拷贝数13～17五种等位基因型,其等位基因频率分布为4．9％,26．2％,47．6％,16．4％,4．9％。经统计学软件分析显示四川省汉族群体总的基因多样性(GD)值为0．6811。结论研究结果证实四川省汉族群体内部呈现非常显著的遗传异质性,探讨中国不同人群间遗传变异的分布特征和追溯各人群间遗传进化的关系奠定基础。     

母血浆胎儿游离DNA检测SRY基因

【目的】建立一种比较稳定可靠的无创性获取胎儿遗传物质的方法。【方法】从孕妇外周血血浆中提取胎儿游离DNA,以Y染色体上的SRY区域为靶序列进行扩增,扩增产物经DNA测序进行确认,由此来确定我们获得的胎儿DNA。【结果】我们利用获取胎儿游离DNA的方法对16例孕妇进行检测,10例获得了成功,除1例未随访到结果之外,其他9例的随访结果和我们实验判断结果一致。【结论】我们初步建立的这种获得胎儿游离DNA的方法具有可靠性,胎儿游离DNA可以用于性连锁遗传病和单基因疾病的产前诊断。     

母血浆胎儿游离DNA检测SRY基因

 【目的】 建立一种比较稳定可靠的无创性获取胎儿遗传物质的方法｡【方法】 从孕妇外周血血浆中提取胎儿游离DNA,以Y染色体上的SRY区域为靶序列进行扩增,扩增产物经DNA测序进行确认,由此来确定我们获得的胎儿DNA｡【结果】 我们利用获取胎儿游离DNA的方法对16例孕妇进行检测,10例获得了成功,除1例未随访到结果之外,其他9例的随访结果和我们实验判断结果一致｡【结论】 我们初步建立的这种获得胎儿游离DNA的方法具有可靠性,胎儿游离DNA可以用于性连锁遗传病和单基因疾病的产前诊断｡     

１０例孕妇血浆中胎儿游离ＤＮＡ-ＳＴＲ位点检测分析

目的:探索短串连重复序列(STR)多位点检测孕妇血浆中胎儿游离DNA的可行性.方法:改进QIAamp离心柱型DNA提取方法提取10例孕中期孕妇血浆中总游离DNA,进行D3S1358、D13S317、CSFlPO、D12S391、D6S477、VWA 6个STR位点扩增,并以孕妇与胎儿羊水细胞基因组DNA为对照,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析胎儿游离DNA提取效果及检测效率.结果:10例孕中期孕妇血浆样本共检测位点60个,检出有结果位点44个,除去母体与胎儿DNA基因型完全一致的14个位点,剩余的30个位点中,18个位点成功检出胎儿DNA基因型,检出率30%.检出率最高的位点是D13S317和D12S391.结论:STR多位点的扩增可以检测得出胎儿特异性DNA序列,有望应用于无创伤性产前遗传性疾病的诊断和法医学亲子鉴定中.     

利用孕妇血浆中胎儿DNA检测胎儿血型的意义

目的:探讨利用孕妇血浆中胎儿DNA检测胎儿ABO血型的临床意义。方法:从33例13-40周可疑母儿血型不合的孕妇血浆中提取胎儿DNA,利用复合PCR-RFLP技术检测胎儿ABO血型。通过出生后脐带血血清学检测证实。结果:33例样本中,检出22例(22/33),出生后证实20例诊断正确(20/22);14例孕中期检出9例(9/14),8例正确(8/9);19例孕晚期检出13例(13/19)),12例正确(12/13)。结论:利用孕妇血浆中的胎儿DNA诊断胎儿ABO血型简便无损伤,对于诊断和预防新生儿溶血病的发生具有重要意义。     

母源性／胎源性基因组 DNA 中的甲基化特异性鉴定及其在唐氏综合征诊断 中的 价值

目的：研究3号染色体上 RASSF1A 基因、21号染色体上的 AIRE 基因在母源性／胎源性基因组DNA 中的甲基化特异性及产前诊断价值。方法收集30例孕妇（早、中、晚孕期各10例）外周血及胎儿组织,离心分离血浆和血细胞;所有血细胞和胎儿组织基因组 DNA 样本经过甲基化修饰后进行目的基因 PCR,即同时进行3号染色体 RASSF1A、21号染色体 AIRE 基因的甲基化引物和非甲基化引物的扩增;30例血浆基因组 DNA 甲基化修饰后进行 RASSF1A、AIRE 基因的甲基化引物扩增;1例唐氏综合征胎儿和 1例正常胎儿母血浆基因组DNA 甲基化修饰后,进行 AIRE 和 RASSF1A 基因的甲基化引物扩增,电泳后的目的条带进行 Gel －pro analyzer 软件光密度值分析。结果30例胎儿组织标本和30例母血细胞标本,均提取出基因组 DNA。胎盘组织 AIRE、RASSF1A 基因甲基化引物扩增出目的条带;母血细胞 AIRE、RASSF1A 基因非甲基化引物扩增出目的条带。RASSF1A、AIRE 基因存在母源性／胎源性的甲基化差异（P ＜0．05）;此差异性不受年龄、孕产史、妊娠阶段等妊娠状态的影响（均 P ＞0．05）。在保证30例血浆标本存在基因组 DNA 的前提下,进行 AIRE、RASSF1A 基因的 MS －PCR 扩增,阳性率分别为73％、77％。通过3号染色体上 RASSF1A 基因的对比消除误差因素影响,唐氏综合征胎儿和正常胎儿母血浆游离胎儿 DNA 进行21号染色体上的 AIRE 基因浓度对比,的确存在3∶2的数量关系。结论人类3、21号染色体上存在母源性／胎源性甲基化表观遗传学差异（即母体是非甲基化的而胎儿阶段是甲基化的修饰状态）,并且不受妊娠阶段、年龄和孕产史等妊娠状态的影响,是一种很好的胎儿遗传学标记;利用母源性／胎源性甲基化差异可以进行母血浆中胎儿 DNA 的鉴定,甲基化引物扩增出来的目的基因一定是胎儿基因,可以保证胎儿 DNA 的纯度和可信度;待检测标本的母血浆基因组 DNA 和正常胎儿母血浆基因组 DNA 甲基化修饰后,进行 AIRE 基因甲基化引物扩增,两者的 AIRE 基因定量对比代表着21号染色体数量之间的对比,可以作为一种无创性产前诊断唐氏综合征的确诊方法进行下一步探讨。     

用母体外周血中胎儿游离DNA检测胎儿SRY基因的研究

目的探索从孕妇外周血浆中检测胎儿躲y基因的高灵敏性及高准确性方法。方法应用PcR、实时荧光定量PcR、PEP—PcR技术,检测33例妊娠8～14周的正常孕妇血浆中游离胎儿DNA的脓y基因。组织标本躲y基因检测结果作为性别判定的标准。结果33例孕妇血浆标本检测职y基因,普通PcR检出的灵敏性为58．82％,特异性100％。PEP—PCR的灵敏性为88．24％,特异性100％。荧光定量PCR的灵敏性为88．24％,特异性100％。结论PEP—PCR技术和荧光定量PcR技术均可以提高胎儿游离DNA检测的灵敏度及准确性．可用于进一步染色体疾病的无创性产前筛查研究。     

从孕妇外周血中捕获胎儿遗传信息的方法学探讨

目的:探讨从孕妇外周血细胞中检测胎儿基因组和血浆中捕获胎儿游离核酸方法的实用性。DNA方法:在基SRY因高保守区设计两对性别特异性引物,利用巢式聚合酶链反应分别对例孕妇外周血胎儿基因组和血浆中游(nest-PCR)50DNA离核酸进行特异性扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,测序验证扩增产物的准确性。(PAGE)DNA结果:名孕妇中名分娩男5028婴,名分娩女婴。基因片段阳性检出率:基因组为();游离核酸组为()。名分娩女婴者除例22SRY75!/2832%9/28221基因组检测结果阳性外,其余均为阴性结果。本研究检测系统灵敏度为52.8pg/μ。l结论:孕妇外周血中胎儿基因组和游DNA核酸检测可作为产前基因诊断的途径,两者联合应用有助于提高胎儿遗传信息的检出率。     

QPCR技术检测孕妇外周血中胎儿DNA方法的建立

目的:建立QPCR技术检测孕妇外周血中胎儿DNA的方法,并探讨其方法的稳定性、灵敏性与可靠性.方法:通过prime5.0设计出SRY与β-globin的TapMan探针,并对其QPCR反应体系进行优化.结果:分别得到了SRY与β-globin的引物及探针的反应最适浓度比,建立了其最佳QPCR反应体系,并得出所需外周血的最少量.结论:成功建立了QPCR技术检测孕妇外周血中胎儿DNA的方法,该方法将可用于无创性相关产前诊断.     

Comparison of three methods for the gene analysis of fetal cells from maternal peripheral blood

Background Although great advances in techniques for noninvasive prenatal diagnosis using fetal cells from maternal peripheral blood have achieved, current technology does not meet the demand srequired for clinical use. In this study, we aimed to establish reliable methods for the gene analysis of fetal cells from maternal peripheral blood.Methods Primed extension preamplification (PEP)-polymerase chain reaction (PCR), multiple primed in situ labeling (PRINS), and nested PCR were individually applied to detect the sex determining region Y (SRY) gene in single fetal cells collected from maternal peripheral blood.Results The sensitivity and specificity of the detection of the SRY gene by PEP-PCR were 97. 39%(149/153) and 99. 17% ( 119/120 ), respectively. The sensitivity and specificity of PRINS were 97. 56% (40/41) and 100% (35/35), respectively. The sensitivity and specificity of nested-PCR were 80. 00% (24/30) and 87. 50% (14/16), respectively.Conclusions PEP-PCR and PRINS are reliable techniques for the gene analysis of single fetal cells from maternal peripheral blood because of their high sensitivity and specificity. PEP-PCR and PRINS can be used as standard methods of noninvasive prenatal diagnosis using single fetal cells from maternal peripheral blood.     

早产孕妇血浆中游离胎儿DNA-SRY基因片段的定量检测

目的建立实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测早产孕妇血浆中游离胎儿DNA的男性性别决定基因(SRY)的方法。方法利用RQ-PCR技术检测25例正常孕妇和102例早产孕妇血浆中游离胎儿DNA-SRY基因,用一系列稀释的标准品建立此检测方法的标准曲线。结果RQ-PCR检测到早产孕妇血浆中游离胎儿DNA-SRY基因的存在,其特异性为100%,灵敏度92.7%,准确率96.1%。早产孕妇血浆中游离胎儿DNA-SRY的中位浓度为321.8拷贝数/mL,较正常孕妇高(P<0.05)。结论RQ-PCR能简单、快速、方便地对孕妇血浆的游离胎儿DNA-SRY基因进行检测,其灵敏度高,特异性好,能定量分析,对进一步了解早产的病理生理情况可能有一定的应用价值。     

应用巢式PCR扩增孕妇血浆中胎儿SRY基因

目的:利用孕妇血浆中胎儿DNA进行无创产前诊断.方法:对包括10例X连锁隐性遗传病携带者的60例14～22孕周孕妇的血浆DNA进行巢式PCR,扩增胎儿来源的Y染色体特异性SRY基因.结果:38例妊娠男胎的孕妇中32例出现SRY基因扩增带,灵敏度为84.2%.22例妊娠女胎的孕妇中4例出现SRY扩增带,特异性为81.8%,总符合率为83.3%(50/60).10例X连锁隐性遗传病携带者中7例妊娠男胎的孕妇中6例检出SRY基因,3例妊娠女胎的孕妇均未检出SRY基因.结论:采用巢式PCR技术检测母体血浆中的胎儿DNA进行产前性别鉴定具有较高的灵敏度和特异性,在遗传病的产前诊断中具有很大的应用前景.     

应用孕妇外周血胎儿有核红细胞数量及胎儿脐动脉血流变化预测胎儿慢性缺氧

目的探讨母血中胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cells,FNRBC)数量及胎儿脐动脉血流改变与胎儿慢性缺氧的关系。方法对78例孕妇(正常妊娠组30例、胎儿急性缺氧组18例、胎儿慢性缺氧组30例)的外周血分别进行单密度梯度离心、FNRBC计数;同时行彩色多普勒超声检测胎儿脐动脉血流搏动指数(pulsatility indexes,PI)、阻力指数(resistance indexes,RI)及收缩期最大血流速度与舒张末期血流速度的比值(systolic/diastolic,S/D);比较单法检测及二法联检的灵敏度、特异度及诊断正确率等。并通过病理证实胎盘变化。结果胎儿慢性缺氧组、急性缺氧组、正常妊娠组孕妇外周血中FNRBC计数分别为(15.42±4.11)、(6.92±2.17)、(5.95±1.76)个/6ml,慢性缺氧组FNRBC计数明显高于其他2组(P<0.05),而后两组间比较无显著性差异(P>0.05)。慢性缺氧组脐血流S/D、PI、RI值分别为(3.27±0.66)、(1.12±0.15)和(0.71±0.07),均显著高于正常妊娠组的(2.16±0.25)、(...     

早产孕妇血浆中游离胎儿DNA-SRY基因片段的定量检测

目的 建立实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测早产孕妇血浆中游离胎儿DNA的男性性别决定基因(SRY)的方法. 方法 利用RQ-PCR技术检测25例正常孕妇和102例早产孕妇血浆中游离胎儿DNA-SRY基因,用一系列稀释的标准品建立此检测方法的标准曲线. 结果 RQ-PCR检测到早产孕妇血浆中游离胎儿DNA-SRY基因的存在,其特异性为100%,灵敏度92.7%,准确率96.1%.早产孕妇血浆中游离胎儿DNA-SRY的中位浓度为321.8拷贝数/mL,较正常孕妇高(P＜0.05). 结论 RQ-PCR能简单、快速、方便地对孕妇血浆的游离胎儿DNA-SRY基因进行检测,其灵敏度高,特异性好,能定量分析,对进一步了解早产的病理生理情况可能有一定的应用价值.     

朝鲜族男性人群DYS19基因座遗传多态性研究

[目的]探讨Y染色体特异性STR基因座DYS 19的遗传多态性在朝鲜族男性人群中的分布情况．[方法]应用PCR，PAGE技术分离扩增产物，结合应用银染显带技术对延边地区朝鲜族男性居民DYS 19基因座进行调查．[结果]在DYS 19基因座中检测出5个等位基因，其频率分别为0．06，0．08，0．48，0．32，0．06，个人识别率为66．7％．[结论]所得到的等位基因频率可为朝鲜族人群法医学个人识别、亲子鉴定及遗传学研究提供依据．     

HCMV感染孕妇外周血胎儿细胞的分离及HCMV—DNA检测

目的运用不连续密度梯度离心及免疫磁珠分离法分选孕妇外周血中的胎儿有核红细胞以进行人巨细胞病毒-DNA（HCMV—DNA）的检测。方法取20名人巨细胞病毒抗原血症（pp65）阳性的孕妇外周EDTA抗凝血,经不连续密度梯度离心初步富集、免疫磁珠法分选及胎儿细胞特异性抗体-HbF标记、识别的胎儿有核红细胞经全基因组扩增后,对产物进行HCMV—DNA的检测。结果20名PP65阳性孕妇外周血中分选到胎儿有核红细胞的有16例,将此16例胎儿有核红细胞进行HCMV—DNA的检测,检出阳性2例,10份未妊娠妇女外周血细胞涂片中均未发现胎儿有核红细胞;10份正常妊娠妇女外周血细胞涂片中发现胎儿有核红细胞数9例,其量不等。结论不连续密度梯度离心及免疫磁珠分离法结合特异性抗体-HbF标记、识别能有效地分选出母血中胎儿有核红细胞,应用于进一步的无创性产前诊断,将有着良好的应用前景。