旋毛虫不同地理株冷冻耐力的观察

目的观察旋毛虫不同地理株的冷冻耐力。方法将75只雄性昆明小鼠随机分为3组（每组25只）,每组分别感染-18℃保存不同时间的旋毛虫河南株、云南株及乡土旋毛虫,每只小鼠经口接种300条肌幼虫。感染后42d剖杀,将全身骨骼肌消化后收集肌幼虫,测定其生殖力指数（Reproductivecapacityindex,RCI）。结果旋毛虫河南株-18℃保存0、6、12h后的RCl分别为91．4、0．03及0（X2=26．453,P〈0．05）,云南株-18℃保存0、6、12、24h后的RCl分别为235．6、0．04、0．01及0（x≮21．115,P〈0．05）;乡土旋毛虫-18℃保存0、6、12、24、48h后的RCl分别为34．6、26．8、21．9、10．8及7．4（F=8．505,P〈0．05）。结论旋毛虫河南株与云南株对低温的抵抗力较低,-18℃分别保存12、24h感染性已完全丧失;乡土旋毛虫对低温抵抗力较强,一18℃保存48h仍有较强的感染性。     

银染单链构象多态性分析——一种快速检测基因点突变的新方法

银染单链构象多态性分析──一种快速检测基因点突变的新方法Ｓｉｌｖｅｒｓｔａｉｎｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ──Ａｒａｐｉｄａｎｄｓｉｍｐｌｅｍｅｔｈｏｄｔｏｄｅｔｅｃｔｇｅｎｅｐｏｉｎｔｍｕｔａｔｉｏｎｓ王...     

细胞色素氧化酶CYP2C9基因多态性与个体化治疗

细胞色素氧化酶2C9(CYP2C9)是人类肝脏中一种重要药物代谢酶,代谢约10%的临床常用药物及一些重要的内源性物质。CYP2C9具有高度多态性,迄今为止已发现30个等位基因的单碱基突变。其中具有功能意义的基因突变会影响CYP2C9酶的活性,导致CYP2C9酶底物药物清除率改变,有致药物不良反应或毒性的危险。用药前对CYP2C9基因进行分型,根据患者的基因型调整CYP2C9底物药物的剂量,能提高药物疗效、降低不良反应发生率,实现个体化药物治疗。     

多聚酶链反应-单链构象多态性分析基因点突变

单链构象多态性(single strand conformation polymorphism,SSCP)是一种简便、敏感有效的鉴定扩增DNA序列变化的技术.相同长度的单链DNA因其序列不同(甚至单个碱基不同),形成的构象相异,电泳时泳动速度不一.PCR产物经变性后进行单链DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳时,靶DNA中若有单个碱基替换等改变时,会出现泳动变位(mobility shift).PCR-SSCP的最主要优点是简单,在不同的系统中突变检出率达70%～95%以上,其主要不足可能是漏检一些突变.作者根据本实验室对多抑癌基因(tumor suppressor gene,TSG)p53突变的检测,介绍PCR-SSCP的实验过程.     

毛细管电泳单链构象多态性分析检测质粒中基因突变

目的 建立一种检测基因点突变的方法。基因的点突变在癌症的发生中起重要的作用,检测基因点突变成为分析癌症发生的重要手段。方法 采用以一对引物PCR法扩增出的pBR322和pUC19c氨苄抗性基因为点基因突变模型,建立了一种简便快速的毛细管电泳单链构象多态性分析方法,用于分离基因单点突变模型。结果以6％线性聚丙烯酰胺为分离介质,分离温度为19℃,分离电压为13kV,可分离出模型中的4个单链DNA构象。结论 建立的模型是可靠的,分析方法具有快速、灵敏度高的优点。     

中华按蚊不同地理株基因组DNA的多态性

目的：研究中华按蚊不同地理株基因组ＤＮＡ的多态性。方法：应用ＲＡＰＤ技术，用２０个随机引物（ＯＰＥ０１￣ＯＰＥ２０）对江苏，福建，海南，贵州，陕西５个省区中华按蚊的基因组ＤＮＡ进行了ＰＣＲ扩增。     

应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析检测散发性乳腺癌EMSY基因的突变

目的了解EMSY基因在散发性乳腺癌组织中的突变情况,探讨EMSY基因突变与散发性乳腺癌的关系。方法收集72例散发性乳腺癌组织及18例乳腺良性肿瘤患者的肿瘤组织,常规酚-氯法抽提组织DNA,并应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR—SSCP）的方法,扩增其EMSY基因的20个外显子,然后根据构象改变来分析此基因突变情况。结果72例散发性乳腺癌组织以及18例乳腺良性肿瘤组织中,6例样本存在第9外显子SSCP条带的异常改变,测序结果为第9外显子区GCA（丙氨酸）中的A杂合性缺失,突变率为8．3％（6／72）。结论本课题研究提示广西散发性乳腺癌中存在着EMSY基因第9外显子的缺失突变,并且在乳腺癌患者中突变率高于乳腺良性肿瘤患者。     

变性梯度凝胶电泳和单链构象多态性分析检测肺癌p53基因8号外显子突变

目的：检测ｐ５３基因８号外显子突变。方法：分别采用变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）和单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ），对３５例肺癌病人手术切除组织的ｐ５３基因８号外显子（Ｅｘｏｎ８）进行突变检测。结果：采用ＤＧＧＥ检测的突变率为２０％，而ＳＳＣＰ检测的突变率为１１％。ｐ５３基因Ｅｘｏｎ８的总突变率为２３％。结论：ＤＧＧＥ检测ｐ５３基因突变的敏感性高于ＳＳＣＰ。     

变性梯度凝胶电泳和单链构象多态性分析检测皮肤癌p53基因突变的比较

目的：检测皮肤癌p53基因5－8外显子的突变频率,比较变性和梯度凝胶电泳（DGGE）和单链构象多态性分析（SSCP）检测p53基因突变的敏感性,方法：分别采用DGGE和SSCP,对40例皮肤癌患者手术切除组织的p53基因5－8外显子进行突变检测。结果：皮肤癌p53基因5－8外显子的总突变率为35％,其中鳞状细胞癌（SCC）的突变率为36％,基底细胞癌（BCC）为33％,采用GGE和SSCP检测的突变率分别为33％和25％。结论35％的皮肤癌组织存在p53基因5－8外显子突变。GGE检测p53基因突变的敏感性高于SSCP。DGGE结合SSCP有助于提高突变检出率。     

细胞色素氧化酶CYP2D6的研究进展

细胞色素氧化酶CYP450是药物代谢中的一个重要酶系.近年来,对CYP450与药物代谢多态性的关系进行了诸多方面的研究.现已明确CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6在表型和基因型水平上均存在遗传多态性,且对其分子机制有了较为深入的了解;而CYP1A2等其他酶可能存在多态性,但各人群研究结果不甚一致.本文着重综述CYP2D6的研究进展情况.     

我国4个旋毛虫分离株DNA限制性酶切片断长度差异的比较研究

报告我国云南、河南、沈阳（猪）以及长春（犬）４个旋毛虫分离株，用１０种限制性内切酶分析比较其基因组ＤＮＡ酶切片断长度差异。结果表明：来自猪体与来自犬体的旋毛虫酶切图谱不同，显示宿主的不同比地理位置、气候条件差异在旋毛虫的分类上更有意义。     

幽门螺杆菌对食管癌COXI表达的影响

目的 观察幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)作用于食管癌细胞后细胞色素氧化酶I(cytochrome oxidase I,COX I)mRNA及其蛋白表达的变化,探讨Hp在肿瘤发生发展中可能的作用机制.方法 将Hp与食管癌细胞分别作用4、8、24 h.收集细胞,应用Real-Time PCR和Western blot法检测各时间点COX I mRNA及其蛋白表达.结果 Hp与食管癌细胞共培养4、8、24 h后,COX I mRNA表达量逐渐减少,4 h的表达量显著低于对照组,其后下降速度减慢,24 h后表达量不再有明显改变.COX I蛋白表达呈现相似的趋势.结论 Hp与食管癌细胞共培养后,可导致线粒体编码基因COX I mRNA及其蛋白表达障碍,从而影响线粒体功能.     

PCR-SSCP分析Q热立克次体中国分离株16S-23S rDNA基因间区

目的 建立快速分析Q热立克次体分离株16S-23S rDNA基因间区株间差异的PCR-SSCP方法。方法 用半套式PCR扩增7株中国分离株（七医、新桥、雅安、李、YS-8、YS-9和YH-11）和3株国际参考株（九里、Henzerling和Grita）的16S-23S rDNA基因间区,对扩增产物进行PCR-SSCP分析。结果 3株云南分离株（YS-8,YS-9和YH-11）与其它7株之间的差异较大。与此区域的序列分析结果一致。结论 Q热立克次体分离株的16S-23S rRNA基因间区由于适应不同的地理环境可发生变异,PCR-SSCP是快速分析这些变异的有效方法。     

非综合征耳聋患者线粒体DNA 12S rRNA及tRNASer(UCN)基因序列分析

目的:探讨线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)12S rRNA基因及tRNASer(UCN)基因突变与非综合征耳聋的相关性,以及常见致聋突变携带频率?方法:收集非综合征耳聋患者135例和听力正常对照人群126例的外周血样本,常规方法提取基因组DNA,PCR扩增mtDNA 12S rRNA基因及tRNASer(UCN)基因,扩增产物经直接测序进行耳聋相关突变的鉴定?结果:135例非综合征耳聋患者中共检测到11种mtDNA 12S rRNA碱基变异,其中4种已知致病突变的携带率分别为:A827G,4.4%;T961C,1.5%;T1095C,0.7%;A1555G,1.5%?两组人群均未检测到12S rRNA C1494T突变以及tRNASer(UCN)基因任何形式的致聋突变?结论:mtDNA 12S rRNA是南京地区汉族非综合征耳聋人群的突变热点基因,其常见致聋突变总携带率约为8.1%?     

基于mtDNA-COI基因序列分析我国中华按蚊种群的遗传结构

目的探讨我国中华按蚊种群遗传多样性、遗传分化及种群系统发育关系。方法本实验采用2010-2012年间在我国山东,
安徽,江苏,贵州,广西和云南等6个不同地理环境采集的中华按蚊样品,进行线粒体COI基因扩增并测序。采用Bioedit 7.0软
件对测序结果进行比对分析;运用DnaSP 5.0软件确定种群遗传结构特点;应用Arlequin 3.1软件计算种群的遗传距离及遗传分
化系数;通过IBDWS在线软件来明确遗传距离与地理距离的相关性;使用PHYLIP 3.6软件构建种群系统发育进化树。结果
六个中华按蚊种群共123个雌蚊个体的PCR产物成功扩增和测序。PCR扩增中华按蚊线粒体COI基因序列大小为814 bp,平
均A+T含量（71.2%）>平均G+C含量（28.8%）。线粒体COI序列分析结果显示,种群具有丰富的遗传多样性;分子变异等级分析
表明中华按蚊遗传分化主要来自于种群内部;种群间存在一定的地理隔离现象。中性检验,错配分析及聚类进化树结果显示：
中华按蚊种群发展经历扩张状态,而云南种群相对其他种群较独立,在系统树中为孤立一支。结论线粒体COI基因可以作为
研究中华按蚊种群遗传结构和系统进化的理想分子标志。云南种群遗传发育较其他地理种群具有一定特殊性。
     

华北地区阴道毛滴虫同工酶分析

目的：研究我国华北地区（北京，河北唐山、河北承德）阴道毛滴虫4个分离株的同工酶类型。（2）方法：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）与同工酶染色法进行分析。（3）结果：检测MDH，LDH，G6PD，PGM5种 同工酶。在G6PD，PGI酶谱中，4株完全相同，在MDH，LDH，PGM酶谱中，北京1株，北京1株与承德株，唐山株不同。（4）结论：承德株，唐山株与北京1株，北京2株大多数同工酶谱存在显性差异，说明华北地区阴道毛滴虫虫株可能至少存在2种不同的酶谱类型。     

部分生化项目不同检测系统测定结果的比对分析和偏倚评估

目的:通过对同一实验室不同检测系统测定结果的比对分析和偏倚评估,探讨各检测系统之间检测结果是否具有可比性.方法:按照NCCLS EP9-A2文件的要求,以检测系统1(X):日立7600全自动生化分析仪P1模块,迈克试剂,c.f.a.s.校准品和BIO RAD质控品作为目标检测系统,检测系统2(Y1)和检测系统3(Y2)作为比较检测系统,在各自系统中通过检测病人新鲜血清天门冬氨酸转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(Alamine aminotransferase,ALT)、γ-谷氨酰转移酶(Gamma-glutamyl transferase     

黑斑蛙不同器官超微结构扫描电镜观察( I)

目的探讨黑斑蛙（Ｒａｎａｎｉｇｒｏｍａｃｕｌａｔａ）肺、胃及肝的超微结构特点,为两栖类的进化地位提供部分超微水平上的依据。方法将蛙麻醉后,于０．９％Ｎａｃｌ中取蛙肺、胃及肝组织。组织块大小约１ｍｍ×１ｍｍ×５ｍｍ,即刻投入１％锇酸内,４℃固定。而后依照ＤＭＳＯ冷冻割断法进行洗涤、割断、软化、导电、脱水、干燥等处理,金属镀膜,ＳＥＭ观察。结果蛙肺、胃及肝的超微结构类似于陆生脊椎动物,结构特点增强了机体陆地生活能力。结论两栖类超微结构特点是与其进化地位相适应的