岩藻多糖对氧糖剥夺诱导的新生大鼠海马脑神经元的影响

目的:探讨岩藻多糖对氧糖剥夺(OGD)诱导的新生大鼠海马神经元的影响。方法:分离新生大鼠原代海马神经元后,分4组处理。空白组不做任何处理;Fuc组用100μg/mL岩藻多糖培养7 d; OGD组按OGD方法培养;OGD+Fuc组首先进行OGD诱导,然后用100μg/mL岩藻多糖培养7 d。分组处理后,MTT法检测细胞活力,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达;使用试剂盒测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1、P62,Cleaved Caspase-3和9,磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化Akt(p-Akt)的表达。结果:OGD可降低神经元活力,增加凋亡率和Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达水平(P<0.05);升高SOD活性,降低M...     

甘氨酸对氧糖剥夺诱导大鼠神经元损伤的抗凋亡作用

目的 探讨甘氨酸对氧糖剥夺诱导神经元损伤的作用及机制。方法 采用体外培养的大鼠原代神经元建立氧糖剥夺模型,随机分为正常对照组、氧糖剥夺组和甘氨酸处理组,应用MTT、流式细胞术等方法检测甘氨酸对神经元活性、生存率、细胞凋亡的影响; 应用蛋白质印迹测定甘氨酸对凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL、Bad、Bax的影响。结果 甘氨酸能够提高大鼠原代神经元活力和存活率,减少细胞凋亡,并且能够增加抗凋亡因子Bcl-2,降低促凋亡因子Bax的表达(P<0.05或P<0.01)。结论 甘氨酸对氧糖剥夺神经元有明显的保护作用,该作用可能与促进抗凋亡因子、抑制促凋亡因子释放有关。     

莱菔硫烷对神经元氧糖剥夺/复氧损伤的保护作用

目的 探讨莱菔硫烷(SFN)对体外培养皮质神经元氧糖剥夺(OGD)/复氧(R)损伤的保护作用。方法出生O～1d的SD乳大鼠皮质神经元原代培养5～6d后,随机分为正常对照组、OGD组及SFN组。建立皮质神经元的OGD模型,1h后复氧,模拟再灌注模型,OGD/R期间给予0.1、0.5、1、2.5μmol/L SFN,复氧2...     

体外培养大鼠海马神经元糖氧剥夺/复氧轴突损伤模型的建立

目的 建立体外培养大鼠海马神经元糖氧剥夺/复氧轴突损伤模型.方法 取体外培养7 d的海马神经元,分为正常对照组和糖氧剥夺/复氧组.后者分别在糖氧剥夺0.5、1.0、1.5 h再复糖复氧.常氧状态下检测各组复氧后1、5、24、48、72 h培养液中的LDH活性,并观察神经元形态和轴突长度的变化.结果 糖氧剥夺/复氧后的神经元折光性降低,胞体肿胀,并且轴突逐渐变短,同时LDH水平随时间延长增加.其中糖氧剥夺0.5 h再复氧组效果最佳,其轴突缩短明显且神经元存活率较高.结论 成功建立了体外培养SD大鼠海马神经元糖氧剥夺/复氧轴突损伤模型.     

雌激素对氧糖剥夺诱导神经元损伤的保护作用

目的 探讨雌激素对氧糖剥夺诱导新生大鼠皮质神经元损伤的保护作用.方法 将培养7 d的大鼠皮质神经元随机分为3组,A组为正常对照组,B组采用氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)处理,C组采用雌激素预处理加OGD/R处理,各组在OGD/R后0、1、6、12、24 h各时间点,以MTT法检测细胞活性,采用TUNEL法检测神经元凋亡情况,采用细胞免疫组化方法检测生长相关蛋白(GAP-43)、脑源性神经营养因子(BDNF)的表达.结果 ①B组的神经元细胞活性较A组明显下降,C组细胞活性明显高于B组,三组比较差异有统计学意义(P<0.05).②B组凋亡神经元细胞明显多于正常对照组,OGD/R后6、12、24 h,C组凋亡细胞数目显著少于B组,三组比较差异有统计学意义(P<0.05).③B组GAP-43、BDNF的表达较正常对照组明显增加,OGD/R后6、12、24 h,C组GAP-43、BDNF表达较B组明显增加.结论 雌激素可明显提高OGD/R后神经元的存活率,使GAP-43、BDNF表达增加,抑制神经元凋亡,实现神经元损伤的保护作用. Abstract： Objective To explore the protective effects of estrogen on injury induced by OGD/R(oxygen-glucose deprivation/rehabilitation of oxygen-glucose) in neonatal rats.Methods Cortical neurons cultured for 7 days were randomly divided into group A (normal control group),group B (OGD/R, alone) and group C (pretreatment with estrogen-17βE2,and OGD/R). Then detect cell survival rate by MTT colorimetry, count the apoptotic neurons by TUNEL, observe the expression of growth associated protein(GAP-43), brain-derived neurotrophic factor (BDNF) using immunocytochemical on each time point after OGD/R 0,1, 6, 12, 24 h of each group. Results ①Compared with group A, the cell survival rate in group B decreased, the survival rate was increased in group C due to pretreatment of estrogen. ②The apoptotic neurons in group B were more than those in group A, and it was less in the group C than in group B after OGD/R 6,12,24 h. ③The expression of GAP-43, BDNF was increased in group B,and it was higher in group C than group B after OGD/R 6,12,24 h. Conclusions The study indicated that estrogen could improve the survival rate of neurons after OGD/R, increase expressions of GAP-43, BDNF,inhabit neurocyte apoptosis,and these mechanisms play neuroprotective effects.     

内皮祖细胞对氧糖剥夺／复氧损伤神经元的保护作用

目的:研究内皮祖细胞(EPCs)共培养对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤神经元是否有保护作用。方法:分离培养新生小鼠的海马神经元,利用缺氧培养室建立神经元OGD/R模型。分离培养小鼠骨髓源性EPCs,采用Transwell小室建立EPCs与OGD/R损伤神经元的共培养系统。将神经元随机分为4组,即对照组、OGD/R组、EPCs共培养组及EPCs共培养并加入一氧化氮合酶(e NOS)抑制剂(L-NAME)组。神经元凋亡率用TUNEL荧光法检测。用Western blot法检测神经元caspase 3及内皮型e NOS活性。结果:OGD/R组神经元的细胞凋亡率和caspase 3活性较对照组显著增加。与OGD/R组相比,EPCs共培养组神经元凋亡情况显著降低(P<0.05),且e NOS磷酸化水平明显增高(P<0.05)。而与EPCs共培养组相比,EPCs+LNAME组神经元凋亡情况明显增加(P<0.05),且e NOS磷酸化水平也明显下降(P<0.05)。结论:与EPCs共培养可以通过提高神经元e NOS的活性来保护OGD/R损伤的神经元。     

黄芩苷对氧糖剥夺再复氧损伤大鼠海马神经干细胞的保护作用

目的：探讨黄芩苷对氧糖剥夺再复氧(OGD/R)损伤大鼠海马神经干细胞(NSCs)的保护作用。方法：体外悬浮培养新生大鼠海马NSCs,将培养的海马NSCs分为对照组、OGD/R组、黄芩苷组。OGD/R组用无糖Earle’s液于缺氧后正常培养,黄芩苷组在OGD/R基础上加用黄芩苷培养。四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定NSCs细胞的存活率,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,4",6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色检测NSCs细胞的凋亡,巢蛋白(Nestin)/5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)染色检测NSCs细胞的增殖。结果：悬浮培养细胞呈Nestin阳性表达；与对照组相比,OGD/R组细胞的OD值、存活率、Nestin/BrdU阳性表达显著降低,LDH漏出率显著增加(P＜0.01),DAPI核染提示OGD可诱导细胞凋亡。与OGD/R组相比,黄芩苷组细胞的OD值、存活率、Nestin/BrdU阳性表达的面密度及细胞数明显增多,LDH漏出率明显减少(P＜0.01),DAPI核染显示黄芩苷可减轻OGD/R所引起的细胞凋亡。结论：黄芩苷能减轻OGD/R对大鼠海马NSCs的损伤,并促进其增殖。     

氧糖剥夺条件下神经细胞损伤机制研究进展

氧糖剥夺（oxygen glucose deprivation,OGD）通过对细胞培养条件的改变,模拟细胞在缺血/缺氧情况下的损伤,是在细胞层面上模拟缺血/缺氧常用的一种刺激模型。神经系统的细胞主要由神经元和神经胶质细胞组成,缺血缺氧后细胞会产生坏死、凋亡、自噬等现象,中枢神经系统的OGD往往导致不可逆的、毁灭性的后果,最终导致神经功能受损。OGD诱导的神经细胞损伤机制非常复杂,主要有细胞凋亡、钙离子超载、氧化应激、兴奋性氨基酸增多、能量代谢障碍等,这些要素并不是独立的,而是相互影响、互为因果的。因此,该文拟对OGD条件下神经细胞损伤机制研究进展进行综述。     

3,4-二羟基苯甲醛作用星形胶质细胞减轻脑微血管内皮细胞和神经元氧糖剥夺/再灌注损伤

目的:从神经血管单元(NVU)细胞间相互联系的角度,探讨天麻活性成分3,4-二羟基苯甲醛(3,4-DD)作用星形胶质细胞(Ast)对脑微血管内皮细胞(BMEC)和神经元氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤的保护作用.方法:从乳鼠分离、培养BMEC和Ast.采用Transwell小室分别构建Ast与BMEC、Ast与PC1...     

腺苷预处理对氧糖剥夺星形胶质细胞的胶质源性神经营养因子的影响

目的探讨腺苷预处理对氧糖剥夺星形胶质细胞的胶质源性神经营养因子(GDNF)的影响。方法体外培养SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞,将培养至第3代或第4代的星形胶质细胞传代至96孔板内,细胞贴壁并长出突起后,随机分为正常对照组、氧糖剥夺组和腺苷预处理组。观察氧糖剥夺8 h复氧糖24 h后星形胶质细胞形态,检测细胞培养液中GDNF水平。结果氧糖剥夺组GDNF水平显著高于对照组(P<0.05);腺苷预处理组GDNF水平显著高于氧糖剥夺组(P<0.05)。结论腺苷预处理能进一步增强缺氧缺糖后GDNF的表达,GDNF的表达上调可能是腺苷预处理诱导缺血耐受,产生神经保护作用的分子机制之一。     

丁苯酞对缺氧/复氧诱导大鼠皮层神经元损伤的保护作用

目的观察丁苯酞对缺氧／复氧诱导的大鼠原代培养皮层神经元损伤的干预作用。方法原代培养Wistar大鼠皮层神经元,建立缺影复氧损伤的皮层神经元模型。实验分为5组：正常对照组、缺氧／复氧模型组、0．01μmol／L丁苯酞组、0．1μmol／L丁苯酞组、1．0μmol／L丁苯酞组。各组细胞进行相应的干预并孵育后,用CCK-8比色法观察神经元细胞活力,用激光共聚焦显微镜观察标记有荧光染料Fluo-3／AM的神经元细胞内游离钙离子浓度的变化。结果丁苯酞可抑制缺氧／复氧诱导引起的神经元细胞活力下降,且呈一定的浓度依赖;丁苯酞还可抑制细胞内游离钙离子浓度的升高,丁苯酞0．01,0．1,1．0μmol／L组与模型组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。结论丁苯酞可部分拮抗缺氧／复氧诱导的大鼠原代培养皮层神经元的钙超载,可能是丁苯酞对神经毒作用发挥保护作用的重要机制。     

亚低温对OGD/R模型新生大鼠海马神经元损伤的保护分子机制研究

目的 观察亚低温（MH）对新生大鼠海马神经元氧糖剥夺/复糖复氧（OGD/R）损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法 体外培养新生大鼠海马神经元,将实验细胞随机分为对照组、OGD/R组、OGD/R+MH组和OGD/R+MH+Chl组;OGD/R组神经元给予OGD处理6 h,再于37℃复糖复氧处理24 h建立OGD/R模型。OGD/R+MH组和OGD/R+MH+Chl组神经元均给予OGD处理6 h,再分别于32℃不加或加氯喹（Chl）条件下复糖复氧处理24 h。收集各组复糖复氧处理24 h后的细胞及细胞培养上清液;采用电镜观察神经元超微结构变化,MTT法检测神经元活力,ELISA法检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出率,TUENL染色法检测神经元凋亡情况,Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3剪切体（Cleaved caspase-3）、聚ADP核糖聚合酶剪切体（Cleaved PARP）、溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)、泛素结合蛋白P62、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3Ⅱ）表达水平。结果 与对照组比较,OGD/R组出现明显的细胞器损伤、降解、线粒体肿胀等神经元损伤表现,神经元活...     

体外培养大鼠脑皮层神经元机械性损伤模型的建立

目的: 建立体外培养大鼠脑皮层神经元机械性损伤模型. 方法: SD胎鼠脑皮层神经元体外培养7 d,微量移液器塑料滴头于培养孔内机械性划割培养之神经元,依划割程度不同分为轻、中、重3组,对照组除不进行机械性划割,其余处理同损伤组,伤后不同时间点(10, 30 min, 1, 3, 6, 12, 24 h)检测细胞存活率及培养液上清乳酸脱氢酶(LDH)含量. 结果: 伤后30 min起,损伤轻、中、重组细胞存活率较对照组明显降低,且随损伤程度加重,细胞存活率下降(P<0.05),24 h达高峰,伤后30 min起LDH含量较对照组增加(P<0.05). 结论: 微量移液器塑料滴头机械性划伤操作简便,能较好模拟脑损伤后神经元损伤机制,造成神经元不同程度损伤,利于观察和研究神经元损伤及周围神经细胞反应,是一种较好的体外神经元损伤模型.     

基于microRNA-92a-3p靶向SIRT1调控氧糖剥夺再灌注诱导脑微血管内皮细胞炎症反应的作用机制研究

目的 探讨基于microRNA-92a-3p（miR-92a-3p）靶向调控SIRT1氧糖剥夺再灌注（OGD/R）诱导小鼠脑微血管内皮细胞（bEnd.3）炎症反应的作用机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定miR-92a-3p、SIRT1、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）mRNA的表达；Western blotting明确SIRT1、核转录因子-κB（NF-κB）p65、磷酸化NF-κB（p-NF-κB）p65、TNF-α和IL-1β蛋白的表达；双荧光素酶报告基因验证miR-92a-3p与SIRT1靶向关系；划痕实验检测bEnd.3细胞的迁移能力。结果 OGD/R组miR-92a-3p相对表达量较对照组升高（P <0.05）。M_SIRT1 WT+mimics+TK组荧光素酶活性较M_SIRT1 WT+mimics NC+TK组低（P <0.05）。OGD/R组SIRT1蛋白和mRNA相对表达量较对照组降低（P <0.05），OGD+92a抑制剂组较OGD+92a抑制剂内参组升高（P <0.05）。miR-92a-3p模拟物组NF-κBp65/p-NF-κBp65蛋白较模拟物内参组高，SIRT1蛋白和mRNA表达较模拟物内参组低（P <0.05）。miR-92a-3p模拟物组IL-1β、TNF-α蛋白和mRNA相对表达量较模拟物内参组高（P <0.05）。miR-92a-3p模拟物组伤口愈合率较模拟物内参组低（P <0.05）。结论 miR-92a-3p通过靶向抑制SIRT1表达，促进OGD/R诱导的脑微血管内皮细胞炎症反应。     

米诺环素对机械性损伤大鼠脑皮质神经元的保护作用

目的 通过大鼠脑皮质神经元的体外培养,观察遭受机械性离心损伤时,米诺环素对神经元的保护作用.方法 通过变速离心培养板,造成神经元损伤的作用.使用倒置相差显微镜观察损伤后神经元的形态改变,并测量损伤前后不同时间段损伤组与损伤加米诺环素组乳酸脱氢酶(LDH)含量变化.结果 光镜见轴索肿胀、轴索和神经元崩解. 损伤组与对照组神经细胞损伤后LDH值比较差异有显著性(P<0 01);损伤后30 min损伤加米诺环素各组LDH的水平与损伤组比较均明显上升(P<0 05;P<0 01);损伤后24 h、48 h损伤加米诺环素中、低浓度组LDH的水平与损伤组比较均明显下降(P<0 05;P<0 01),高浓度组则无明显影响.结论 米诺环素对机械性损伤大鼠脑皮质神经元有双重作用,高、中、低浓度不能减轻神经元膜的原发性损伤,但中、低浓度能减轻神经元膜的继发性损伤.     

榭皮素对皮层神经元细胞氧化应激的保护作用

目的 探讨榭皮素对皮层神经元细胞氧化应激的保护作用.方法 原代培养皮层神经元细胞,随机分成对照组、H2O2(100 μmol/L)组、榭皮素组(Qu组)、AMPK抑制剂Compound C组(CC组)、H2O2+Qu组、H2O2+Qu+CC组,采用CCK8法检测细胞存活率,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧,ELISA试剂盒检测βA表达水平,Western blot检测AMPK、p-AMPK及BACE1蛋白表达水平.结果 CCK8结果显示,榭皮素可明显降低H2O2对皮层神经元细胞存活率的抑制作用,并可显著降低H2O2诱导细胞内ROS及βA的表达;进一步研究发现,榭皮素可通过激活AMPK,上调p-AMPK的表达水平来达到抑制BACE1酶的表达.结论 H2O2刺激神经元细胞可上调氧化应激水平,榭皮素可通过促进AMPK的磷酸化,降低βA在细胞中的沉积,进一步下调ROS在细胞中的表达,从而减缓了H2O2对神经元细胞造成的损伤.     

HPK1在缺糖缺氧诱导的大鼠海马神经元凋亡中的作用

目的观察造血祖细胞激酶1（HPK1）对缺糖缺氧（OGD）诱导的大鼠海马神经元凋亡的作用。方法采用细胞免疫荧光技术通过免疫荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察HPK1是否在大鼠脑细胞中存在;采用DAPI染色技术观察HPK1反义寡核苷酸对OGD诱导的海马神经元凋亡的作用。结果在体外培养的原代大鼠海马神经元中有HPK1的表达。HPK1反义寡核苷酸对OGD诱导的海马神经元凋亡具有保护作用,并有剂量依赖性。结论HPK1反义寡核苷酸对OGD诱导的海马神经元凋亡具有保护作用。     

西比灵对神经元损伤的保护作用

目的：探讨西比灵对神经元损伤的保护作用机制。 方法：采用H2O2建立离体培养大鼠皮层神经细胞损伤模型,利用八木法(TBA法)测定丙二醛（MDA）、二苯胺法测DNA断裂率,同时观察乳酸脱氢酶（LDH）泄漏率的变化、西比灵对上述指标的影响及其在体外与自由基的相互作用。 结果：与H2O2损伤组比较,西比灵可明显降低H2O2对神经元的过氧化损伤作用,LDH泄漏率、DNA断裂率明显降低(P<0.01,P<0.05),MDA含量明显下降(P<0.01),而且随着西比灵浓度的提高羟自由基清除率明显升高。 结论：西比灵不但可防止Ca²⁺过量跨膜进入细胞内,而且对神经元过氧化损伤具有明显保护作用。