深低温长期保存角膜技术的研究——Capella法及其改良

用自行研制的“简易深低温角膜降温仪”冻存兔及人尸角膜。对冷冻保护剂、降温冷冻及复温方法3项关键技术做了62项比较性研究、简化和改进。发现角膜复温后的处理是影响冻贮效果的重要因素。优选总结了“二步法”冻贮技术,冻贮9～473天的兔及人尸角膜经电镜、酶组织化学及47只兔和20只人尸角膜移植术后观察2～18个月验证,技术简便,保存价格低廉,长期冻贮效果良好。     

深低温冷冻保存角膜的实验研究

[目的 ]验证二甲基亚砜 (DMSO)是否是目前最好的角膜冷冻保护剂 ,探讨乙醇可否替代DM SA。 [方法 ]16只新鲜兔角膜随机分为DMSO组和乙醇组。将角膜于 4℃分别浸入浓度递增的两组保护液中 ,冷平衡后 ,按 1.5～ 2℃ /min的速度降温至 - 30℃后 ,再以 5℃ /min的速度降温至 -80℃ ,然后 ,将标本瓶投入液氮中冷冻保存角膜 5d。取出后置于 5 0℃流动的热水中快速复温 ,脱保护剂。每组各取 6只角膜 ,经锥兰 -茜素红染色后 ,用光学显微镜计数并计算每只角膜平均内皮细胞存活率 (ESR)。另 2只角膜 ,用 2 .5 %戊二醛溶液固定 ,分别用扫描电镜和透射电镜观察内皮细胞超微结构。 [结果 ]DMSO组和乙醇组平均ESR分别为 (96 .18± 2 .4 9) %和 (92 .5 5± 6 .2 4 ) %(P <0 .0 5 )。扫描电镜下 ,DMSO组角膜内皮细胞呈六角形 ,细胞完整似新鲜角膜 ,细胞间隙稍宽。乙醇组角膜内皮亦呈六角形 ,但细胞间隙明显增宽。透射电镜显示两组角膜内皮细胞均有线粒体肿胀 ,内质网扩张及胞质内空泡形成 ,但乙醇组改变更明显。 [结论 ]本研究提示乙醇对角膜冷冻保存有一定效果 ,但尚不如DMSO。     

深低温长期保存角膜技术的研究——冷冻保护剂的筛选

对冷冻保护液中二甲基亚砜(DWSO)、甘油和蔗糖的用量、配伍及使用方法做了20项比较性研究。对用15%甘油保护液冻存205天的兔角膜做了观察,结果与冻贮14天相比,角膜内皮活率(ESR)仅低0.3%(P>0.05)。兔角膜移植效果较好,但酶组织化学及临床移植效果不满意。本文还对等渗弱碱性标准卵子培养液(BWW)及其它晶体溶液的效果及使用做了比较,发现用晶体溶液冷冻兔角膜也可获得较高的ESR,但内皮欠清晰,罕能见到典型的内皮细胞。     

深低温长期保存角膜穿通性移植的临床研究

用自行研制的简易深低温角膜降温仪,对角膜深低温长期保存技术进行了系统的研究和改进。将深低温保存9～473天的人尸角膜行临床穿通性移植19例20眼,经2～18个月观察效果满意。研究结果表明,深低温长期保存角膜穿通性移植成功的关键取决于植片内皮细胞的存活,简化的二甲基亚砜二步法适合于临床应用。     

不同浓度牛磺酸对兔角膜内皮细胞的影响

目的 探讨牛磺酸对兔眼角膜内皮细胞的毒副作用.方法 取家兔6只(共12眼),每只眼制取6片组织片,用组织块培养法培养兔角膜内皮细胞,细胞接种于12孔培养板,分别加入2%、4%、6%、8%、10%的牛磺酸液(同一动物的左右眼加同一浓度牛磺酸溶液),设立空白对照.倒置显微镜观察角膜内皮细胞的生长情况;在培养的第1、2、4、6、8天,将部分培养细胞用Wright染色后观察细胞形态.结果 空白对照和加入2%、4%、6%牛磺酸溶液培养的角膜内皮细胞,1周后均形成内皮细胞层,细胞形态呈六角形或类圆形.加入8%牛磺酸液培养的角膜内皮细胞,在第4天时生长不良,细胞胞体小;第8天时培养细胞死亡.加入10%牛磺酸液培养的角膜内皮细胞,在第2天时出现生长不良,细胞胞体小,部分细胞已死亡.同一动物的左右眼角膜内皮细胞生长速度和细胞形态相似.结论 2%～6%牛磺酸对兔角膜内皮细胞的生长无不良影响,提示该浓度范围的牛磺酸对角膜内皮细胞无毒副作用.     

应用酶组织细胞化学技术对真空冷冻干燥保存兔角膜内皮细胞的研究

目的:探讨真空冷冻干燥保存法对于兔角膜内皮细胞活性的影响.方法:将冷冻及冻干保存兔角膜片分别复水及复温后,与新鲜角膜同时行内皮细胞三磷酸腺苷酶(ATPase)、琥珀酸脱氢酶(SDH)的酶组织细胞化学染色,观察3组酶活性的差异.结果:3组样本ATPase及SDH酶组化染色均呈阳性反应.实验组与对照组间ATPase和SDH酶的平均积分光密度值(IOD)差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:真空冷冻干燥保存法可使离体角膜组织保持一定的活性.与新鲜及冷冻角膜相比,冻于法有望成为一种新的角膜长期保存方法.     

不同浓度牛磺酸对兔角膜内皮细胞的影响

目的 探讨牛磺酸对兔眼角膜内皮细胞的毒副作用。方法 取家兔6只（共12眼）,每只眼制取6片组织片,用组织块培养法培养兔角膜内皮细胞,细胞接种于12孔培养板,分别加入2%、4%、6%、8%、10%的牛磺酸液（同一动物的左右眼加同一浓度牛磺酸溶液）,设立空白对照。倒置显微镜观察角膜内皮细胞的生长情况;在培养的第1、2、4、6、8天,将部分培养细胞用Wright染色后观察细胞形态。结果 空白对照和加入2%、4%、6%牛磺酸溶液培养的角膜内皮细胞,1周后均形成内皮细胞层,细胞形态呈六角形或类圆形。加入8%牛磺酸液培养的角膜内皮细胞,在第4天时生长不良,细胞胞体小;第8天时培养细胞死亡。加入10%牛磺酸液培养的角膜内皮细胞,在第2天时出现生长不良,细胞胞体小,部分细胞已死亡。同一动物的左右眼角膜内皮细胞生长速度和细胞形态相似。结论 2%~6%牛磺酸对兔角膜内皮细胞的生长无不良影响,提示该浓度范围的牛磺酸对角膜内皮细胞无毒副作用。     

自制人血清中期角膜保存液对兔角膜的保存效果

目的 研制一种适合我国国情的人血清角膜中期保存液.方法 配制人血清浓度分别为10%(A组)、20%(B组)、30%(C组)、0%(D组)的角膜保存液保存兔角膜,用Optisol-GS角膜保存液作对照组,分别在保存第3、7、10、14天进行角膜内皮细胞活性率检测、HE染色、扫描电镜超微结构观察,并检测角膜保存液的理化性质...     

真空冷冻干燥和保存兔角膜内皮细胞活性的实验研究

目的 :观察真空冷冻干燥和保存的兔角膜的内皮细胞活性。方法 :真空冷冻干燥和保存兔角膜后 ,检测内皮细胞密度 ,存活率。结果 :真空冷冻干燥和保存的兔角膜复水后 ,角膜内皮细胞密度为 (2 339± 2 0 5 .73)个 /mm2 ,存活率 78.5 7%。结论 :真空冷冻干燥和保存的兔角膜经过复水后可以保持角膜内皮细胞的活性     

脱细胞异种角膜基质的制备及细胞相容性

目的用牛角膜制备脱细胞基质,作为组织工程角膜的载体,为细胞提供贴附生长的支持物.方法选取新鲜牛角膜9个,每个分层剥离为2片组织.用0.25%胰蛋白酶,37℃下分为20、40、60min消化,漂洗.每组取样本分别做扫描电镜观察和HE染色观察.其余冻干处理后消毒备用.将消毒后冻干牛角膜基质常规培养基浸泡24 h,取浸提液原液,稀释101、102、103倍培养人成纤维细胞,观察细胞生长情况.将冻干牛角膜基质复水,常规培养基浸泡24 h,以2×l05个/cm2接种兔角膜缘细胞,培养7 d后,标本扫描电镜检查、HE染色观察.结果电镜观察各组牛角膜片表层细胞均被脱去,60min组基质胶原间细胞碎片残留较少,20 min组较多,胶原纤维有序排列以60 min组破坏最大.浸提液的各稀释倍数及原液所培养人成纤维细胞生长良好,各组间差异无显著性.电镜及HE染色观察复合材料培养的兔角膜缘干细胞,均见细胞在材料表面贴附生长,材料部分表面呈多层生长.结论以酶消化法和冻干处理的脱细胞牛角膜基质可以作为细胞的载体在体外与细胞复合培养.     

THE VALUE OF "H" AND "0" AGGLUTINATION IN THE SEROLOGICAL DIAGNOSIS OF TYPHOID FEVER

The Widal test as commonly used for the diagnosis of the typhoid group of fevers has for a number of years been looked upon with a certain degree of suspicion by clinicians. This has been on account of the difficulty of interpreting results and the frequent anomalies which are apparent when the test is either repeated on the same individual patient or performed by a different laboratory.     

丹参和黄芪治疗气虚血瘀型心力衰竭的作用

本文报道91例气虚血瘀型心力衰竭(心衰)病人选用丹参和黄芪治疗作用。16例作气囊漂浮导管监测,发现黄芪明显增加心排出量、每搏量及心脏指数,而丹参无此作用,提示黄芪有正性肌力作用;30例给黄芪加党参,治疗后心功能分级及某些异常的血液流变学指标均有改善;44例先丹参,继之丹参加黄芪,治疗后心功能分级有明显改善,且能改善异常的血液流变学指标,明显抑制血小板聚集功能。提示丹参具有活血化瘀改善血液流变学及抑制血小板的聚集性,黄芪有补气强心改善心功能的作用。     

"脑先行型"肺癌26例CT分析

目的：探讨“脑先行型”原发肺癌的特殊CT征象。方法：26例病例首先做CT、MRI平扫或增强检查诊为脑转移瘤,肺部CT检查诊为肺癌,经病理证实。结果：26例病例中腺癌,未分化占88％,病变多为孤立肿块,径经较小,阻塞性肺炎或肺不张少见,一般无胸腔积液。结论“脑先行型”肺癌,脑转移早,神经系统症状早于肺内症状,原发灶易漏 ,颅脑影像检查发现肿瘤,肺部CT检查是必要的。     

《临床检验基础》课程教学改革与实践

目的 探讨<临床检验基础>课程教学改革的内容与意义.方法 通过丰富、创新和模块化设计教学内容.改革教学手段和教学方法.建设立体化教材体系和多媒体教学资源库,构建有利于培养学生创新意识和实践能力的实践教学模式,强化师资队伍建设,提高教师教学水平和加强师生沟通等措施,对临床检验基础课程教学进行了改革,并经过6年的教学实践....     

静滴消栓灵注射液治疗脑梗塞的临床观察

对69例脑梗塞患者静滴消栓灵注射液与66例脑梗塞患者静滴低分子右旋糖酐加丹参进行对比观察。结果显示:消栓灵组总有效率92.7％,低分子右旋糖酐加丹参组总有效率80.3％,两组相比差异显著(p<0.05),消栓灵未见明显副作用。     

“少阳主骨”学说的架构与验证

目的：验证《黄帝内经》中提出的＂少阳主骨＂学说的科学性和适用性。方法：通过前期文献发掘中发现的《黄帝内经》中有关＂少阳主骨＂的记载,来架构＂少阳主骨＂的理论原型,以各个分支课题为依托,从不同的侧面,不同的阶段,探索其相关的生理、病理原型以及相应的预防和治疗干预措施来对该学说进行验证。结果：前期研究发现《黄帝内经》中所论＂骨繇＂与骨质疏松症正好对应,骨组织HE切片可见电针胆经组骨微结构较其他组明显改善。骨形成指标显示电针胆经组大鼠骨重建的成骨活动较其他组更活跃,差异有统计学意义（P〈0.05）;骨吸收指标亦提示非经穴组、模型组较其他组破骨活动强烈,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：电针足少阳经穴确有抗骨质疏松效应,为＂少阳主骨＂学说提供了实验支持,也为该学说的进一步研究奠定了基础。从已经得到的部分理论和实验结果该学说的科学性和适用性。     

“茵陈胆道汤”制剂对胆石症病人T管胆汁成石性影响的初步观察

在28例已行胆囊切除带T管引流的胆石症病人中,静脉滴注我院中药制剂“茵陈胆道汤”。发现,在胆酸丢失、胆汁成石指数增高、胆汁成石性增高的情况下,应用该制剂时,胆汁成石指数无明显变化;并且胆汁中总胆红素、非结合胆红素浓度及胆汁UCB/T Bil％值等均较注药前明显降低。提示该制剂具有阻止胆固醇过饱和之成石性胆汁生成和阻止胆色素性成石性胆汁的生成作用。     

穴位注射胰岛素后小鼠血清cAMP、cGMP含量变化及微量元素预处理对其的影响

检测小鼠＂内关＂、＂足三里＂穴位注射胰岛素后５ｍｉｎ、１５ｍｉｎ、３０ｍｉｎ时血清ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ水平变化。结果发现，＂内关＂穴注药后ｃＡＭＰ、ＣＧＭＰ水平明显下降，＂足三里＂穴注药后ｃＡＭＰ水平明显上升而ｃＧＭＰ水平明显下降；用微量元素Ｃｒ￣（３＋）、Ｖ￣（５＋）穴位预处理后１０ｍｉｎ再注胰岛素，则发现＂内关＂注药后ｃＡＭＰ呈明显上升，＂足三里＂穴位注药后ｃＡＭＰ明显下降，而ｃＧＭＰ仍呈明显下降。结合作者以前的研究提示，ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ部分参与了穴位注射胰岛素的信息传递，其变化的差异可能是穴位相对特异性的原因之一。