紫杉醇诱导胰腺癌细胞凋亡Survivin表达的变化及意义

目的 研究紫杉醇(PA)体外化疗对胰腺癌细胞凋亡抑制蛋白Survivin基因表达的影响.方法 培养人胰腺癌细胞株SW1990,加入低浓度的PA,用流式细胞仪分别检测加药前和加药后24、48 h的细胞凋亡率,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blot)检测Survivin mRNA和蛋白的表达.结果 SW1990细胞给予低浓度的PA后,加药前和加药后24、48 h的细胞凋亡率分别为(2.59±0.35)%、(14.75±1.29)%、(22.65±2.80)%;其Survivin mRNA的表达则分别比加药前提高了1.1倍和2.9倍;Survivin蛋白的表达分别增加了1.3倍和3.6倍.结论 应用PA化疗可促使胰腺癌细胞内Survivin表达的增加,抵抗化疗诱导的细胞凋亡.     

化疗诱导胰腺癌细胞凋亡survivin mRNA表达的变化的研究

目的研究紫杉醇体外化疗对胰腺癌细胞凋亡抑制蛋白Survivin基因表达的影响。方法培养人胰腺癌细胞株SW1990,加入不同浓度的紫杉醇(PA),在各时间段MTT法测细胞抑制率,根据结果选择低浓度的PA,分别在加药后24 h、48 h、72h用流式细胞仪检测细胞凋亡率和PT-PCR检测survivin mRNA表达。结果SW1990胰腺癌的抑制率随着紫杉醇的药物浓度和作用时间的增加而增高。给予低浓度的PA诱导后,在加药后24 h、48 h和72 h胰腺癌细胞凋亡率分别是(14.73±1.09)%,(18.36±0.86)%,(23.85±0.96)%;其survivin mRNA则分别提高了1.1倍、2.6倍和4.1倍。结论紫杉醇化疗可促使胰腺癌细胞内Survivin的表达增加,抵抗化疗诱导的细胞凋亡。     

紫杉醇诱导胰腺癌细胞凋亡Survivin表达的变化及意义

目的研究紫杉醇（PA）体外化疗对胰腺癌细胞凋亡抑制蛋白Survivin基因表达的影响。方法培养人胰腺癌细胞株SW1990，加入低浓度的PA，用流式细胞仪分别检测加药前和加药后24、48h的细胞凋亡率，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹技术（Western blot）检测Survivin mRNA和蛋白的表达。结果SW1990细胞给予低浓度的PA后，加药前和加药后24、48h的细胞凋亡率分别为（2．59±0．35）％、（14．75±1．29）％、（22．65±2．80）％；其Survivin mRNA的表达则分别比加药前提高了1．1倍和2．9倍；Survivin蛋白的表达分别增加了1．3倍和3．6倍。结论应用PA化疗可促使胰腺癌细胞内Survivin表达的增加，抵抗化疗诱导的细胞凋亡。     

RNA干扰技术沉默Livin基因联合顺铂对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响

目的:采用RNA干扰技术阻断Livin基因的表达,并加入不同浓度的顺铂,研究其抑制Hela细胞Livin基因的效果及增强顺铂诱导宫颈癌细胞凋亡的效应。方法:采用脂质体转染法将pGenesil-1-BIRC71、pGenesil-1-BIRC72、pGenesil-1-HK转染宫颈癌Hela细胞,采用荧光定量RT-PCR、Western-blot检测转染前后宫颈癌Hela细胞Livin基因mRNA和蛋白表达的变化,并加入不同浓度的顺铂(3μg/ml、6μg/ml、9.9μg/ml),采用流式细胞术检测不同时间(24 h、48 h)的细胞凋亡率。结果:转染pGenesil-1-BIRC71、pGenesil-1-BIRC72后Hela细胞中Livin mRNA拷贝数明显减少,蛋白质表达水平显著降低;流式细胞术检测24h、48h凋亡率,干扰组细胞显著高于对照组,并随时间延长凋亡率增加;加入顺铂(3μg/ml、6μg/ml、9.9μg/ml)后流式细胞术检测24 h、48 h凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05),呈时间及剂量依赖性。结论:以Livin基因为靶向的RNA干扰技术可有效地抑制宫颈癌Hela细胞的Livin基因表达,并可增强顺铂诱导凋亡的效应,且具有时间和剂量依赖性。     

葡萄糖调节蛋白78抵抗宫颈癌细胞衰老的相关机制研究

目的:探讨顺铂诱导宫颈癌细胞衰老过程中葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein,GRP78)的作用及相关机制。方法:用亚凋亡剂量顺铂诱导宫颈癌细胞衰老;β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况;GRP78诱导剂A23187诱导Hela细胞高表达GRP78;siRNA反义抑制GRP78表达;Western blot检测相关蛋白表达情况。结果:亚凋亡剂量顺铂诱导绝大多数宫颈癌细胞发生衰老;A23187上调GRP78表达后顺铂诱导Hela细胞衰老率降低,GRP78表达被反义抑制后顺铂可重新诱导Hela细胞衰老;P53表达被抑制及Cdc2表达增多与GRP78抗衰老作用有关。结论:GRP78蛋白高表达能够抵抗顺铂诱导宫颈癌细胞发生衰老,可作为逆转肿瘤细胞化疗耐药的新靶点。     

塞来昔布联合顺铂对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP生长和凋亡的影响

目的探讨塞来昔布联合顺铂对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP生长和凋亡的影响及其机制。方法采用MTT法检测不同浓度(0、0. 625、12. 5、25、50及100μmol/L)塞来昔布对COC1/DDP细胞生长的影响,计算出24、48及72h的IC50。将对数生长期的COC1/DDP细胞随机分为对照组(未做处理)、顺铂组(给予2μg/ml顺铂)、塞来昔布组(给予25μg/ml塞来昔布)及联合组(给予25μg/ml塞来昔布+2μg/ml顺铂)。MTT法检测各组细胞的生长情况,FCM检测各组细胞的凋亡情况,Western blot检测各组细胞中增殖细胞核抗原(Ki67)、细胞周期素D1 (Cyclin D1)、生存素(Survivin)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白的表达。结果塞来昔布能够呈时间-浓度依赖性抑制COC1/DDP细胞生长,其在24、48和72 h的IC50分别为47. 05、25. 86和16. 11μmol/L。与对照组相比,顺铂组、塞来昔布组和联合组中COC1/DDP细胞的OD值以及Ki67、Cyclin D1、Survivin及Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低,凋亡率均显著升高;但顺铂对COC1/DDP细胞的作用较弱,塞来昔布对COC1/DDP细胞的作用较强,联合用药能够增强两者对COC1/DDP细胞的作用且高于两者之和。结论塞来昔布联合顺铂能够协调抑制COC1/DDP细胞生长并诱导细胞凋亡,降低COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性,其分子机制可能与下调Ki67、Cyclin D1、Survivin及Bcl-2蛋白表达有关。     

Caspase-2与caspase-3蛋白在顺铂诱导卵巢癌细胞系A2780和A2780/DDP凋亡中的表达

目的　探讨Caspase -2和caspase -3蛋白在顺铂诱导卵巢癌细胞系A2 780和A2 780 /DDP凋亡中的作用和对A2 780 /DDP细胞系顺铂耐药形成的可能影响。方法　用细胞培养方法 ,加入不同浓度 (分别为 0、5、10、2 0、40 μM)顺铂共同培养卵巢癌细胞系A2 780和A2 780 /DDP 2 4h、48h和 72h ,原位末端标记法 (TUNEL)检测卵巢癌细胞系凋亡情况 ,用免疫组化SABC法观察此过程中Caspase -2和caspase -3蛋白表达。结果　随顺铂作用时间延长和剂量增加 ,卵巢癌细胞系A2 780和A2 780 /DDP中凋亡逐渐增强(P <0 0 1) ,caspase -2和caspase -3蛋白表达呈现出对顺铂作用时间和剂量的依从性 (P <0 0 1) ,两种蛋白在A2 780细胞中表达明显强于A2 780 /DDP( P <0 0 1)。结论　Caspase -2和caspase -3蛋白活化促进顺铂诱导的卵巢癌细胞系A2 780和A2 780 /DDP凋亡 ,其表达抑制可能是影响顺铂耐药的A2 780 /DDP细胞凋亡的原因。     

顺铂诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其对细胞周期影响的研究

目的:观察顺铂对人宫颈癌Hela细胞凋亡及细胞周期的影响,以揭示顺铂治疗宫颈癌的机理。方法:运用体外细胞培养技术,以不同浓度的顺铂作用于培养的人Hela细胞72 h,用流式细胞仪分析其凋亡率及细胞周期。结果:顺铂能以浓度依赖的方式诱导Hela细胞凋亡,并呈现出G0/G1期阻滞作用。结论:顺铂能诱导Hela细胞凋亡并改变其细胞周期分布,阻滞Hela细胞于G0/G1期,这可能是顺铂抗宫颈癌作用的重要机制之一。     

STAT5基因对人膀胱癌细胞顺铂化疗敏感性的影响及作用机制

目的研究STAT5基因高表达及沉默对人膀胱癌细胞系5637和T24顺铂化疗敏感性的影响及分子机制。方法冲击诱导方法构建顺铂耐药细胞株T24-cisplatin和5637-cisplatin,Western bolt法检测STAT5的表达;构建STAT5过表达载体,应用脂质体转染5637和5637-cisplatin细胞,用针对STAT5基因的特异性sh RNA转染T24和T24-cisplatin细胞,MTT法和流式细胞凋亡法检测转染前后膀胱癌细胞顺铂化疗的细胞生存率和凋亡率,及Western blot法检测细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3表达。结果顺铂耐药细胞株5637-cisplatin和T24-cisplatin STAT5表达明显高于顺铂敏感株5637和T24(P=0.004;P=0.001),而5637-cisplatin和T24-cisplatin细胞沉默STAT5其化疗敏感性显著升高(P=0.003,P=0.001)。5637细胞过表达STAT5其化疗敏感性显著下降(P=0.021),顺铂化疗的细胞凋亡率明显下降(P=0.002),Bax、Caspase-3表达水平显著降低(P=0.014;P=0.033),Bcl-2表达水平显著升高(P=0.001)。T24细胞STAT5被沉默后其化疗敏感性显著增强(P=0.011),顺铂化疗的细胞凋亡率明显上升(P=0.001),Bax、Caspase-3表达水平显著升高(P=0.001;P=0.007),Bcl-2表达水平显著降低(P=0.020)。结论STAT5表达情况与膀胱癌细胞顺铂化疗敏感性具有相关性,其可能分子机制为调控凋亡基因Bax、Bcl-2、Caspase-3介导细胞顺铂耐药。     

内质网应激途径在天花粉蛋白诱导的Hela细胞凋亡中的作用

目的:探讨内质网应激在天花粉蛋白诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡过程中的作用,进一步分析天花粉蛋白诱导凋亡的作用机制。方法:以不同浓度天花粉蛋白分别处理Hela细胞24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡,并用RT-PCR及实时荧光定量PCR分析天花粉蛋白对内质网应激标志分子GRP78和CALPAIN基因表达的影响。结果:天花粉蛋白对HeLa细胞的生长具有抑制作用,对照组Hela细胞体外生长活跃,实验组分别经20、40、80μg/ml TCS处理24、48、72 h后,细胞生长均不同程度地受到抑制,呈时间-浓度依赖性。流式细胞直方图上亦出现特征性的亚二倍体峰(sub-G1 peak),随着天花粉蛋白浓度的增加,内质网应激分子GRP78和CALPAIN的表达逐渐增强。结论:天花粉蛋白可诱导宫颈癌HeLa细胞发生凋亡,内质网应激作为细胞凋亡的重要途径参与了天花粉蛋白诱导的HeLa细胞凋亡。     

幽门螺杆菌感染对胃癌细胞株增殖及凋亡影响的研究

目的探讨幽门螺杆菌感染对胃癌细胞株SGC7901增殖和凋亡的影响和机制。方法体外培养的SGC7901细胞与1×10^8、5×10^7、1×10^7、5×10^6cfu／ml浓度梯度的HPNCTC11637标准菌株共孵育,分别在24、48、72h时观察细胞形态学变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞和TUNEL分析细胞凋亡,RT-PCR检测survivin在mRNA的表达情况,Western blot检测细胞survivin在蛋白水平的表达。结果1×10^8、5×10^7、1×10^7、5×10^6cfu／ml浓度梯度的HP菌对SGC7901细胞作用72h的细胞增殖抑制率分别为54．5％、58．9％、67．6％、72．9％。流式细胞仪和TUNEL法检测不同浓度梯度的HP菌处理72h后细胞凋亡率分别为42．51％、45．67％、48．57％、54．61％与49．51％、51．26％、59．41％、62．46。幽门螺杆菌可以明显降低survivin的mRNA和蛋白水平的表达。这些作用均随幽门螺杆菌浓度和作用时间的延长而增强。结论幽门螺杆菌感染可能通过降低survivin的表达,在体外抑制SGC7901细胞增殖,并促进其凋亡。并且,这种作用呈时间剂量效应。     

Ki67、Survivin、P16表达在宫颈癌和宫颈癌前病变诊断中的意义

目的:研究Ki67、Survivin、P16在宫颈癌和宫颈癌前病变中的表达及生物学意义和早期诊断价值。方法:对160例高危病人行阴道镜检并在镜下活检宫颈组织,采用免疫组织化学SP法检测Ki67、Survivin、P16,并结合临床病理特点分析。结果:160例患者中有96例宫颈炎、40例宫颈内瘤样变、24例宫颈癌,Ki67阳性表达率分别为45.83%、95.00%、100.00%;Survivin阳性表达率分别为25.00%、90.00%、100.00%;P16阳性表达率分别为12.50%、60.00%、100.00%。Ki67、Survivin、P163种蛋白在宫颈内瘤样变、宫颈癌中的表达与宫颈炎相比有显著性差异(P<0.0001);Survivin、P16与Ki67蛋白表达间存在正相关(r=0.599;P<0.01;r=0.540,P<0.01)。结论:Ki67、Survivin、P16联合检测可作为早期诊断宫颈癌前病变及宫颈癌的标记物,可提高宫颈癌的早期诊断率。     

宫颈鳞癌组织中Survivin和Smac蛋白的表达

目的:探讨宫颈鳞癌组织中凋亡调控因子生存素(Survivin)和第二线粒体衍生的半胱天冬酶激活蛋白(Sec-ond mitochondrial activator of caspase,Smac)的表达及其意义。方法:采用免疫组织化学技术检测70例宫颈鳞癌和11例正常宫颈组织中survivin和Smac蛋白的表达情况。结果:①Survivin和Smac蛋白在宫颈鳞癌中表达水平高于正常宫颈组织(P<0.01);②Survivin蛋白在宫颈鳞癌中的阳性表达率与临床分期和肿瘤分化程度有关,Smac蛋白的阳性表达率与临床分期有关。结论:Survivin和Smac蛋白的异常表达与宫颈鳞癌的发展有关,它们可能参与了细胞异常增殖和凋亡并使之失衡。     

异甘草素对小儿脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及相关机制研究

目的 研究异甘草素对脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其相关分子机制.方法 取对数生长期人脑胶质瘤U251细胞,用不同浓度(0、10、20、40、60、80μmol/L)异甘草素处理,每个浓度设5个复孔.异甘草素处理24h、48h、72h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡的变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测FoxM1 mRNA的表达水平.结果 U251细胞经过浓度为0、10、20、40、60、80μmol/L的异甘草素处理24h、48h及72h后,细胞增殖均不同程度地受到抑制.在相同作用时间,不同浓度之间细胞增殖情况比较差异有统计学意义(F值分别为38.5、98.9、108.1,均P＜0.05);在相同异甘草素浓度,不同作用时间(24h、48h、72h)细胞增殖情况比较差异均有统计学意义(F值分别为11.4、20.8、43.1、53.9、30.4,均P＜0.05).不同浓度异甘草素作用于U251细胞24h后,随着异甘草素浓度的增加,细胞凋亡率增加(F=120.3,P＜0.05).不同浓度异甘草素处理U251细胞48h后,FoxM1 mRNA相对表达量分别为(71.2±5.1)％、(54.6±3.3)％、(35.4±4.1)％、(20.8±4.0)％,比较差异有统计学意义(F=83.5,P＜0.05).结论 异甘草素体外可有效抑制U251细胞的增殖并诱导其凋亡,其分子机制可能与下FoxM1基因的表达有关.     

人宫颈癌组织中survivin的表达与临床分析

目的：检测人宫颈正常组织、宫颈上皮内瘤变（Cervical intraepithelial neoplasia,CIN）以及宫颈癌组织中survivin蛋白的表达定位,研究该因子与宫颈癌发生发展的关系和临床应用价值。方法：收集2年间某医院97例患者的石蜡组织标本,其中正常宫颈组织20例、CIN25例、宫颈癌52例。采用免疫组化方法检测组织切片中的survivin蛋白,研究该因子在组织中的蛋白表达定位。结果：在宫颈组织中,survivin蛋白在胞核以及胞浆内均可见阳性染色,主要定位于细胞核。正常组survivin阳性率为5.0%,CIN组阳性率为56.0%,宫颈癌组阳性率为82.7%。survivin在宫颈癌组织中的高表达,与宫颈癌的临床分期、病理分化以及淋巴结转移均呈正相关。结论：survivin与宫颈癌的发生发展密切相关,可能成为对人宫颈癌的预防、诊治,以及判断预后有价值的临床肿瘤相关指标。     

顺铂对A549细胞DNA损伤修复生物标记物表达的影响

目的　研究顺铂对肺癌A5 49细胞中切除修复鼠缺陷交叉互补基因 2 (ERCC2 )蛋白、尿嘧啶DNA糖基化酶 (UDG)、细胞增殖核抗原 (PCNA)在肺癌和食管癌组织中表达水平的影响。方法　通过彗星试验、RT PCR和蛋白印记法研究 3种生物标记物在顺铂处理和未处理A5 49细胞之间的表达水平。分为染毒前、染毒 12h、染毒 2 4h、停止染毒 12h、停止染毒 2 4h 5个不同时间段组 ,每组细胞数均为 1× 10 6个 /ml。结果　在低浓度顺铂 (IC2 0 剂量 )作用下 ,染毒 2 4h内DNA损伤程度的变化与作用时间成正比 ,染毒 12h、2 4h尾相 (单位 :mm)分别为 5 0 2± 0 6 8和 7 2 2± 0 5 3,与阴性对照的尾相2 73± 0 2 9比较有明显差异。停止染毒 2 4h尾相为 3 6 4± 0 70 ,与阴性对照比较无明显差异。ERCC2、UDG和PCNA的mRNA水平和蛋白质水平在细胞染毒后均明显升高 ,染毒 2 4h后mRNA水平分别为 0 71± 0 0 8、0 74± 0 0 6和 0 82± 0 0 9,均明显高于阴性对照 (分别为 0 2 8± 0 0 5、0 31± 0 0 5和 0 37± 0 0 6 ) ;蛋白质表达水平分别为 4 37± 0 5 7、5 47± 0 46和 2 2 1± 0 47,均明显高于阴性对照(分别为 2 2 1± 0 47、2 5 4± 0 38和 3 2 1± 0 47)。停止染毒后 3种酶的mRNA分别为 0 31± 0     

紫草素对大肠癌SW480细胞增殖的影响

目的研究紫草素对大肠癌SW480细胞增殖和表达增殖诱导配体（APRIL）水平的影响,同时与传统化疗药氟尿嘧啶、顺铂进行对比。方法MTT法检测紫草素对大肠癌SW480细胞的增殖抑制作用,采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测SW480细胞上APRIL的表达,实时荧光定量PCR法检测加入不同终浓度的紫草素、氟尿嘧啶和顺铂后24h,48h和72h SW480细胞表达APRIL mRNA的水平。结果紫草素对SW480细胞有明显的增殖抑制作用,呈时间和剂量依赖性。SW480细胞上有A—PRIL的表达;紫草素与氟尿嘧啶相似,以不同浓度作用SW480细胞后,细胞APRIL mRNA的水平均逐渐升高,至72h表达最高并与空白对照相比,差异有统计学意义（P〈0．05）,而顺铂不会引起SW480细胞APRIL mRNA水平的升高甚至有所降低。结论紫草素有抑制大肠癌增殖的作用,有望作为化疗的辅助用药之一;同时,它与氟尿嘧啶或顺铂合用时,在用药同时辅予抗APRIL治疗以对抗残存癌细胞增殖能力升高可能具有潜在的重要作用。     

无机砷对Chang肝细胞株血红素单加氧酶-1 mRNA和蛋白表达的诱导作用

[目的]观察亚砷酸钠（sodium arsenite,NaAsO2）对Chang肝细胞株血红素单加氧酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）mRNA和蛋白表达的诱导作用。[方法]以5μmol／L和10μmol／L的NaAsO2作用Chang肝细胞株2、6、12h和24h,分别用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western Blot法检测细胞内HO-1的mRNA和蛋白表达情况。[结果]5μmol／L和10μmol／LNaAs02暴露2h开始出现HO-1mRNA的诱导表达;6h的表达水平明显高于对照组和2h暴露组（P〈0．01）。其中,10μmol／LNaAsO2暴露12h和24h的mRNA表达均明显高于该浓度的6h暴露组（P〈0．01）;但24h的HO-1 mRNA表达水平与12h组相比没有明显升高。NaAsO2暴露诱导的HO-1蛋白表达则从6h开始出现,12h组明显高于6h组,24h组明显高于12h组（均P〈0．01）;5μmol／L和10μmol／L NaAsO2分别暴露6、12h和24h的HO-1蛋白表达量分别是对照组的2．80、9．34、18．15和3．97、12．92、23．29倍;此外,10μmol/LNaAsO2暴露12h和24h的HO-1 mRNA和蛋白表达均明显高于对应时间的5μmol／L组（P〈0．01）。[结论]NaAsO2暴露能够有效和持续性诱导Chang肝细胞株HO-1的mRNA和蛋白表达,是无机砷暴露的一种细胞保护性适应性反应。