慢传输型便秘模型的建立及其机制探讨

目的 :建立实验型慢传输型便秘模型。　方法 :实验组小鼠皮下注射吗啡建立慢传输型便秘模型 ,记录小鼠粪便重量 ,利用炭沫推进试验比较实验组与对照组小鼠结肠传输功能 ;利用免疫组化技术比较两组小鼠结肠组织中Cajal细胞数量。　结果 :实验组小鼠粪便重量减轻 (P <0 .0 1) ,结肠推进率较对照组明显延长 (P <0 .0 1) ,Ca jal细胞数量较对照组明显减少 (P <0 .0 1)。　结论 :吗啡皮下注射诱导小鼠结肠慢传输型便秘模型符合疾病的基本特点 ,其发病机制可能与内源性阿片肽增多和 (或 )肠道Cajal细胞异常改变有关     

益气健脾通便方对慢传输型便秘大鼠PI3K/Akt/eNOS信号途径作用机制研究

目的:观察益气健脾通便方对慢传输型便秘大鼠磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K/Akt/eNOS)信号通路的影响,探讨其治疗慢传输型便秘的作用机制。方法:共纳入60只SPF级8周龄wister大鼠,将50只大鼠运用"复方地芬诺酯灌胃法"造成慢传输型便秘模型后,随机分成模型组、莫沙必利组、益气健脾通便方低、中、高剂量组,每组各10只,其余10只大鼠设成正常对照组。各组大鼠连续给药4周,以大鼠一般情况、首粒黑便排出时间、粪便含水率、结肠组织一氧化氮(NO)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)含量、磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)阳性细胞面积及蛋白水平表达为观察指标。结果:益气健脾通便方各组均能明显提高大鼠粪便含水率(P0.05),缩短首粒黑便排出时间(P0.05),减少结肠组织NO及eNOS含量(P0.05),提高结肠组织P-Akt阳性细胞面积及蛋白表达量(P0.05),从而改善模型大鼠便秘症状,以中、高剂量疗效最为显著。结论:益气健脾通便方对慢传输型便秘大鼠具有治疗作用,其作用机制可能与其调控PI3K/Akt/eNOS信号途径有关。     

益气健脾通便方对慢传输型便秘大鼠Cajal间质细胞及一氧化氮、一氧化氮合酶的影

目的 通过观察益气健脾通便方对慢传输型便秘（slow transit constipation,STC）大鼠Cajal间质细胞（Cajal interstitial cells,ICC）和一氧化氮（nitric oxide, NO）、一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）的影响,探讨其作用机制。方法 将60只SPF级雄性8周龄Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,益气健脾通便方低、中、高剂量组和莫沙必利组,每组10只。采用“复方地芬诺酯灌胃法”复制STC大鼠模型。模型复制后,各组大鼠连续给药4周,观察每组大鼠的一般情况,测定粪便粒数、粪便含水率、肠道推进率和结肠组织ICC表达量及NO、NOS含量。结果 益气健脾通便方能改善大鼠的一般情况,提高大鼠的粪便粒数、粪便含水率和肠道推进率（P<0.05）,提高结肠组织ICC表达量（P<0.05）,减少神经递质NO、NOS的含量（P<0.05）。结论 STC的发病机制可能与ICC表达量降低及NO、NOS水平升高有关。     

益气开秘方对慢输型便秘疗效和生存质量的影响

目的：探讨益气开秘方对结肠慢输型便秘患者临床症状及生存质量的影响。方法：采用前瞻性、随机、阳性药物平行对照的临床试验方法，以莫沙必利为阳性对照药，治疗组和对照组各纳入30例患者，疗程为28d。结果：益气开秘方中药治疗组总有效率为63．33％，莫沙必利组总有效率为46．67％。经治两组临床症状总积分和各项积分较治疗前均有所下降。其中治疗组对于粪便性状和腹胀主症的改善程度明显优于对照组（P〈0．01），对于一次排便持续时间的改善优于对照组（P〈0．05）。两组治疗后较治疗前各项生命质量评分均有所提高，而两组治疗前后各项生命质量评分组间均无明显差异。结论：益气开秘方治疗结肠慢传输型便秘有较好的临床疗效，能明显改善便秘临床症状，提高生活质量。     

腹部手术影响小肠平滑肌细胞收缩的细胞内信号转导机制研究

目的:探讨腹部手术操作对小肠平滑肌细胞收缩功能的影响及细胞内信号转导途径。方法:采用Wistar大鼠制作腹部手术动物模型,酶解法获取小肠游离环行平滑肌细胞,检测平滑肌细胞在乙酰胆碱作用下的收缩反应和胞浆游离钙离子浓度([Ca2 ]i)的变化,然后将细胞分别与一氧化氮合酶抑制剂L-NNA、钙活化的K 通道阻滞剂A-pamin、蛋白激酶A抑制剂H89和蛋白激酶G抑制剂KT5823等一同孵育,重复以上实验过程。测定小肠环行平滑肌细胞培养24 h后培养基中一氧化氮(NO)的含量。结果:培养24 h后,实验组小肠环行平滑肌细胞产生的NO量明显高于对照组(P<0.05),L-NNA可明显降低实验组NO的产量,而对照组NO产量没有明显影响;L-NNA和KT5823可明显提高实验组小肠环行平滑肌细胞的收缩能力及乙酰胆碱刺激的[Ca2 ]i升高的水平(P<0.05),而Apamin和H89没有明显的影响。结论:腹部手术操作导致小肠肌层大量生成NO,激活鸟苷酸环化酶产生cGMP,通过PKG途径降低细胞内[Ca2 ]i的水平,抑制小肠平滑肌细胞的收缩能力。     

白术破壁饮片对慢传输型便秘小鼠肠神经递质及ICC的影响

目的:探究白术破壁饮片对慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)小鼠肠神经递质、Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)的干细胞因子(stem cell factor,SCF)/干细胞生长因子受体(c-kit)信号通路的影响。方法:采用皮下注射2.5 mg/(kg·d)盐酸吗啡注射液法复制STC小鼠模型,选取48只雌雄各半昆明小鼠随机分为正常组,模型组,白术破壁饮片低、中、高剂量组(25、50、100 mg/kg)和莫沙必利组(1.5 mg/kg),每组8只。各组予以不同药物干预1周后,检测造模后和给药后各组小鼠粪便性状、肠道推进率;采用酶联免疫反应(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组小鼠结肠神经递质P物质(substance P,SP)、乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)、血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)、一氧化氮(nitric oxide,NO)和5-羟色胺(5-hydroxytrytami...     

Cajal间质细胞与慢传输型便秘的关系

胃肠壁内Cajal间质细胞是胃肠运动的起搏细胞,具有产生、传导电慢波,调节胃肠道平滑肌运动的功能。近年研究发现,Cajal间质细胞与慢传输型便秘有密切的关系。     

豚鼠膀胱Cajal样间质细胞钙震荡特性

目的:探讨正常成年豚鼠膀胱Cajal样间质细胞(Cajal-like interstitial cells)是否有自发周期性钙震荡(calcium oscillation),以期为膀胱兴奋性起搏细胞为Cajal样间质细胞这一学说提供实验依据。方法:运用胶原酶V消化法,获得原代豚鼠膀胱Cajal样间质细胞进行培养,采用激光共聚焦显微镜成像技术,Fluo-4AM负载后的Cajal样间质细胞内钙离子荧光强度的变化采用激光共聚焦显微镜成像技术进行记录,荧光强度的改变代表细胞内钙离子浓度的变化。结果:培养后的Cajal样间质细胞保持其固有特征,可见胞体为梭形且胞体两极有两个细长突起;培养的Cajal样间质细胞有两类不同的钙震荡:一类震幅小而频率不规则,另一类震幅大而频率慢。第二类钙震荡与膀胱逼尿肌细胞的钙震荡显著不同。结论:与消化道起搏细胞Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)自发性钙震荡类似,成年豚鼠膀胱Cajal样间质细胞亦存在自发钙震荡,提示膀胱收缩活动的起搏细胞可能为其中一种类型的膀胱Cajal样间质细胞。     

助阳通便汤对慢传输型便秘模型小鼠结肠组织中5-HT受体、VIP分布和表达的影响

目的:本课题是为了深入研究采用助阳通便汤治疗便秘的作用机理,进而揭示助阳通便汤治疗便秘的可能作用机制,为中医治疗慢传输型便秘提供实验依据。方法:将112只小鼠随机分成正常组、模型组、助阳通便汤低剂量组、助阳通便汤中剂量组、助阳通便汤高剂量组、麻仁软胶囊组、西沙比利组,共7组,每组16只,雌雄各半。除正常组外,其余各组均采用皮下注射盐酸吗啡的方法,复制出慢传输型便秘小鼠模型,给予相应的药物灌胃,观察助阳通便汤对便秘模型小鼠的通便作用,应用免疫组化的方法研究本复方对便秘模型小鼠结肠肌间神经丛血管活性肠肽(VIP)和5-羟色胺(5-HT)受体含量的影响。结果:助阳通便汤治疗组小鼠结肠组织中5-HT受体和VIP阳性表达细胞分布相对较密集。平均光密度值增高。结论:助阳通便汤能增加便秘小鼠结肠5-HT受体和VIP阳性细胞数量。助阳通便汤治疗慢传输型便秘的作用机制之一是通过调节结肠组织中神经递质(5-HT受体和VIP)的含量来实现的。     

精氨酸酶对异丙肾上腺素诱导心肌细胞内钙浓度的影响

目的 探讨精氨酸酶对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的心肌细胞内游离钙浓度变化的影响及其机制.方法 培养乳鼠心肌细胞,分别给予精氨酸酶抑制剂S-(2-boronoethyl)-L-cysteine(BEC)及神经元型一氧化氮合酶(nNOS)抑制剂vinyl-L-N-5-(1-imino-3-butenyl)-L-ornithine(L-VNIO),钙离子荧光指示剂Fluo-3/AM及激光共聚焦显微镜(LSCM)检测ISO诱导的心肌细胞内游离钙浓度的变化.结果 BEC明显升高心肌中NO浓度和ISO诱导的心肌细胞内钙离子浓度.L-VNIO可以逆转这一过程.结论抑制精氨酸酶能够通过nNOS/NO途径升高ISO诱导的心肌细胞内钙浓度.     

甲氧氯普胺对吗啡依赖小鼠血清一氧化氮和cGMP的影响

目的 观察甲氧氯普胺(Meto)对吗啡依赖小鼠血清一氧化氮(NO)和cGMP含量的影响。方法 建立小鼠吗啡身体依赖模型，分别以紫外分光光度法和放射免疫法测定小鼠血清NO和cGMP含量。结果 吗啡依赖小鼠血清cGMP显著升高，NO含量轻度下降；Meto(20mg／kg，腹腔注射急性给药可使吗啡依赖小鼠血清cGMP降低至正常水平；Meto(40～80mg／kg，腹腔注射)可使吗啡依赖小鼠血清NO显著升高。结论 NO在吗啡依赖中的作用可能不通过cGMP信号机制；Meto可降低吗啡依赖小鼠血清的cGMP含量。     

Balb/c小鼠小肠慢波活力及肠肌间丛Cajal间质细胞的观察

目的测定Balb/c小鼠小肠慢波活动,并观察慢波的起搏细胞肠肌间丛Cajal间质细胞的分布特征.方法选取成年Balb/c小鼠,在体记录小肠慢波活动的频率与振幅;通过小肠肌条切片和铺片,以c-kit作为其标记,采用免疫组化法观察肠肌间丛Cajal间质细胞的分布情况.结果 Balb/c小鼠小肠慢波频率为(7.8±2)次/min,振幅为0.4±0.07mV;肠肌间丛Cajal间质细胞分布在小肠环肌层纵肌层间,呈网状分布特征.结论 Balb/c小鼠小肠存在慢波活动,肠肌间丛Cajal间质细胞的网络状分布特征可能与其产生和传导肠道慢波有重要关系.     

芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞NO生成和iNOS酶活性的影响

目的探讨芦荟多糖(AloePolysaccharides,AP)对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(nitricox-ide,NO)生成和诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)酶活性的影响。方法体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,分别用0～400mg/L浓度的AP刺激24h,采用Griess反应测定NO生成量,荧光法检测iNOS活性。结果AP在25～400mg/L浓度范围内作用于小鼠腹腔巨噬细胞24h后,NO生成量增加、iNOS活性增高,除低浓度AP组(25mg/L)外,其余各浓度组差别均具有非常显著性意义(P<0.01),并呈显著正相关(r=0.7523,P<0.01);转录抑制剂放线菌素D、蛋白质合成抑制剂放线菌酮和NOS竞争性抑制剂L-NMA,均能有效抑制AP所诱导的巨噬细胞NO生成和细胞内iNOS活性(P<0.01)。结论AP能促进细胞内iNOS基因表达,以从头合成方式促进细胞NO合成和释放,所释放的NO可能参与AP的免疫调节过程。     

电针对吗啡戒断后焦虑小鼠血浆NO水平的影响

目的：观察电针对吗啡戒断后焦虑小鼠血浆一氧化氮（nitrous oxide,NO）的影响,探讨电针抗吗啡戒断后焦虑的部分作用机理。方法：以小鼠热板法镇痛ED50,即吗啡2.95 mg/kg为基础,按照逐日递增原则进行吗啡戒断后焦虑小鼠模型塑造。针刺＂三阴交＂穴,治疗3天,采用分光光度法测定血浆NO的含量。结果：模型组血浆NO含量较空白组明显升高（P〈0.05）,模针组较模型组有显著降低（P〈0.01）。结论：电针抗吗啡戒断后焦虑效应与改善血浆NO的水平相关。     

新精氨酸类似物对异丙肾上腺素诱导心肌细胞钙浓度改变的影响

目的 探讨新精氨酸类似物对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导心肌细胞内游离钙变化的影响.方法 培养乳鼠心肌细胞,白介素-6(IL-6)联合内毒素(LPS)诱导心肌细胞表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS),钙离子荧光指示剂Fluo-3/AM及激光共聚焦显微镜检测精氨酸类似物对ISO诱导的心肌细胞内游离钙变化的影响.结果 IL-6联合LPS可以明显诱导心肌细胞表达iNOS,增加心肌中一氧化氮(NO)浓度;新精氨酸类似物可以降低炎症凶子刺激的心肌细胞中NO浓度,明显升高ISO诱导的心肌细胞内游离钙浓度.结论 新精氨酸类似物可以通过抑制心肌iNOS/NO途径,提高心肌对β受体激动剂的反应.     

大黄素收缩大鼠结肠平滑肌细胞的信号转异机制研究

目的：研究大黄素对大鼠结肠平滑肌细胞收缩的影响及发挥作用的信号机制。方法：用酶解法分离大鼠结肠平滑肌细胞。用图像分析系统测量平滑肌细胞的长度。采用Fluo-3钙标记和激光扫描共聚焦显微镜技术测定胞浆游离钙水平([Ca^2 ]i)。采用激光扫描共聚焦显微镜和免疫荧光技术分析PK Cα在细胞内的空间分布变化。结果：大黄素剂量依赖性收缩结肠平滑肌细胞，并可升高[Ca^2 ]i水平。ML-7(MLCK抑制剂)和Calphostinc(PKC抑制剂)均可明显抑制大黄素的收缩作用。大黄素可激活PKCα，使PKCα由胞浆向胞膜移位。结论：大黄素可通过MLCK和PKCα信号途径收缩大鼠结肠平滑肌细胞。     

运脾安神法干预慢传输型便秘小鼠的实验研究

目的 观察慢传输型便秘小鼠的焦虑和抑郁状况及运脾安神法对慢传输型便秘小鼠排便功能及情绪状况的干预作用.方法 将清洁级ICR小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、运脾安神法组、莫沙必利组、盐酸氟西汀组、地西泮组.通过高架十字迷宫测验和强迫游泳实验观察模型小鼠的焦虑和抑郁情绪状况,并观察不同药物灌胃给药后小鼠的排便情况.结果 慢传输型便秘小鼠伴有焦虑和抑郁情绪;运脾安神法干预便秘小鼠,首粒黑便时间缩短,6h排便总粒数增加,与模型对照组比较有统计学意义(P<0.01);小肠碳末推进率高,与模型对照组及莫沙必利组比较均有统计学意义(P<0.01);同时运脾安神法能增加小鼠进入开臂次数百分比和开臂滞留时间百分比,而莫沙必利组则无明显该作用;运脾安神法和莫沙必利均能缩短便秘小鼠的游泳不动时间(P<0.01),但与阳性药物盐酸氟西汀比较运脾安神法无明显差别,而莫沙必利则有显著统计学意义(P<0.01).结论 运脾安神法既能促进肠蠕动,又能缓解便秘动物焦虑和抑郁情绪,对慢传输型便秘疗效确切.     

流式细胞术测定参附注射液对吗啡依赖神经细胞内Ca2+浓度的影响

目的观察参附注射液对吗啡依赖人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH胞内Ca2+浓度的影响,探讨其戒毒作用的细胞机制.方法建立吗啡依赖神经细胞模型,Fluo-3着染细胞后,应用流式细胞仪测定参附注射液对神经细胞内Ca2+浓度的影响.结果参附注射液中、高剂量组神经细胞内Ca2+浓度显著升高,纳洛酮催促引起的细胞内Ca2+的降低抑制.结论参附注射液可能通过调节细胞内Ca2+浓度发挥其戒毒作用.     

GCaMP基因工程化的C17.2神经干细胞的钙离子成像研究

目的 研究GCaMP(属于基因编码钙指示剂/蛋白钙指示剂)基因工程化的C17.2神经干细胞的钙离子成像.方法 用慢病毒转染C17.2细胞,获得稳定表达GCaMP基因的C17.2-GCaMP细胞.Real-time PCR定量检测C17.2细胞及C17.2-GCaMP细胞中神经干细胞标志物巢蛋白(nestin)的表达情况.将C17.2细胞(Fluo-4 AM染色后)和C17.2-GCaMP细胞置于定制数字荧光显微镜下进行钙离子荧光检测.结果 Real-time PCR检测结果提示C17.2细胞及C17.2-GCaMP细胞中nestin表达差异无统计学意义(P＞0.05).C17.2-GCaMP细胞较Fluo-4 AM染色C17.2细胞钙离子荧光锐波(spike)波形持续时间长且相对荧光强度强(P＜0.05),在Fluo-4 AM染色C17.2细胞中能观察到钙离子荧光慢波(wave)波形,而C17.2-GCaMP wave波形不典型.结论 C17.2-GCaMP细胞在保持神经干细胞干性的同时能够监测细胞内钙离子变化,能够运用于神经干细胞移植治疗视网膜色素变性功能整合的研究.     

gp96肽复合物免疫脾巨噬细胞对细胞内钙离子动态变化及形态学观察

目的：通过研究gp96-肽复合物免疫小鼠脾巨噬细胞细胞内Ca^2 的变化及其形态学的改变，进一步探讨肿瘤细胞中提纯的热休克蛋白gp96-肽复合物的抗肿瘤免疫作用和机制。方法：以gp96-肽复合物免疫的小鼠脾巨噬细胞作为研究对象，用Fluo-3／AM负载细胞．激光扫描共聚焦显微镜检测其细胞内的Ca^2 浓度及观察Con A刺激对细胞内Ca^2 影响；扫描电镜观察细胞的形态学变化。结果：与对照组相比。经gp96-肽复合物致敏的小鼠脾巨噬细胞内的Ca^2 浓度显著增加；其细胞内的Ca^2 变化对Con A刺激更加敏感；免疫后的小鼠脾巨噬细胞呈典型的激活状态。结论：gp96-肽复合物可在体内激活脾巨噬细胞；活化的脾巨噬细胞在Con A刺激时Ca^2 浓度的变化敏感。gp96-肽复合物的抗肿瘤免疫过程中促进小鼠脾巨噬细胞活化起着重要的作用。