止泻退热片治疗轮状病毒感染性腹泻的实验研究

目的 评价止泻退热片治疗轮状病毒感染性腹泻的药理作用.方法 建立人轮状病毒A组G3型709株感染昆明小鼠乳鼠的动物模型,比较药物治疗前后乳鼠的腹泻率、腹泻程度,以及药物治疗后粪便中病毒感染率等指标.结果 止泻退热片能够减少乳鼠的腹泻率、腹泻程度、粪便染毒阳性率.结论 止泻退热片能够治疗轮状病毒感染性腹泻.是具有潜力的抗轮状病毒感染性中成药.     

人轮状病毒感染昆明小鼠乳鼠模型的建立

目的 建立人轮状病毒G3型709株感染4 d龄昆明小鼠乳鼠模型.方法 通过灌胃病毒的方式造模,观察乳鼠被病毒攻击后不同时间其临床表现、小肠组织病理改变、小肠组织上皮细胞超微结构改变.酶联免疫吸附法检测轮状病毒抗原在乳鼠粪便中的表达,免疫荧光法检测轮状病毒在乳鼠小肠组织中的表达.结果 4 d龄昆明小鼠乳鼠被轮状病毒攻击24 h后出现腹泻表现和小肠组织病理改变,72 h最严重,之后腹泻率下降,病理改变减轻,第7天腹泻停止,病理改变消失.乳鼠小肠上皮细胞出现糖、脂肪代谢紊乱,其粪便和小肠组织中都可以检测出轮状病毒抗原表达.结论 4 d龄昆明小鼠乳鼠被人轮状病毒A组G3型709株经口攻击后病毒能够在其体内复制,出现腹泻表现.该病毒感染腹泻过程具有自愈特点.     

轮状病毒感染成年小鼠的研究

目的研究成年昆明种小鼠对实验感染人轮状病毒(rotavirus,RV)的敏感性。方法在实验条件下,用A组人Wa和恒河猴SA11株RV感染成年昆明种小鼠,观察小鼠的临床反应和排毒情况。结果成年昆明种小鼠感染Wa和SA11RV第二天后出现明显的临床腹泻症状,第四天达到高峰;至少在感染后连续6天的动物大便中可检测到较高滴度的RV抗原。结论成年昆明种小鼠对RV感染有很高的敏感性,可做为动物模型,在RV感染的药物治疗效果评价和疫苗保护性效果评价中具有重要价值。     

乳凝集素抗独特型抗体Ab2β在人轮状病毒腹泻乳鼠模型治疗中的作用

目的 探讨乳凝集素抗独特型抗体Ab2β在新生乳鼠感染人轮状病毒（human rotavirus, HRV）的预防与治疗中的作用，并分析其作用机制。方法 采用杂交瘤技术制备乳凝集素抗独特型抗体；选取120只7日龄昆明小鼠乳鼠作为研究对象，采用随机数字表法将其分为A、B、C组以及对照组，每组30只，A、B、C三组均采用灌胃病毒方式造模，其中A组造模后不进行任何处理，B组在造模前连续7 d喂服乳凝集素，C组在造模后连续7 d喂服乳凝集素，对照组灌胃不含病毒的细胞培养液。观察各组乳鼠感染病毒后不同时间点的临床表现（腹泻、体重）并采用酶联免疫分析法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）检测乳鼠粪便中轮状病毒抗原含量；HRV感染7 d后，采用免疫组化法检测各组乳鼠小肠组织细胞间粘附分子1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)的表达水平。结果 对照组新生乳鼠各时间点均未非发生腹泻，A、B、C 3组乳鼠在HRV攻击1 d后出现腹泻症状，B、C组腹泻程度在HRV攻击后2～4 d低于A组，差异有统计学意义（P&l...     

粪肠球菌在体外细胞模型和乳鼠轮状病毒感染模型中对轮状病毒SA11株复制的抑制作用

目的 探讨加入粪肠球菌后轮状病毒SA11株在体内和体外的复制情况,为阐明粪肠球菌影响轮状病毒感染提供依据。 方法 体外实验,将10⁸~10¹² CFU·mL^－1粪肠球菌进行10倍浓度梯度稀释,与Caco-2细胞共培养12、18、24、30和48 h,同时设对照组（Caco-2细胞感染轮状病毒后不加入粪肠球菌）,采用CCK-8法检测不同浓度粪肠球菌作用后各组Caco-2细胞存活率;感染复数（MIO）值为0.1的轮状病毒作用于Caco-2细胞1 h后加入10⁸~10¹² CFU·mL^－1粪肠球菌培养18 h,同时设对照组,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组Caco-2细胞中轮状病毒VP6基因拷贝数,免疫荧光灶法检测各组Caco-2细胞中轮状病毒滴度。体内实验,采用18窝4~5日龄SPF级昆明系乳鼠,相同窝数随机分为对照组、抗生素处理组和粪肠球菌移植组,抗生素处理组和粪肠球菌移植组乳鼠先用四联抗生素灌胃3 d耗竭其肠道菌群,然后3组乳鼠开始每日灌胃10⁷ FFU·mL^－1轮状病毒100 μL,持续8 d,粪肠球菌移植组乳鼠在灌胃病毒同时灌胃10¹⁰ CFU·mL^－1粪肠球菌100 μL,收取病毒感染第2、4、6和8天各组乳鼠粪便,RT-qPCR法检测各组乳鼠粪便中轮状病毒拷贝数。 结果 体外实验, CCK-8法检测,与对照组比较,不同浓度粪肠球菌作用48 h内各组Caco-2细胞存活率均有不同程度升高,表明粪肠球菌在该浓度范围内对Caco-2细胞无毒性;RT-qPCR法检测,与对照组比较,10¹⁰、10¹¹和10¹² CFU·mL^－1粪肠球菌组Caco-2细胞中轮状病毒VP6基因拷贝数分别降低了75.8%、99.9%和99.9%（P<0.05）;免疫荧光灶法检测,与对照组比较,10⁸、10¹⁰和10¹² CFU·mL^－1粪肠球菌组Caco-2细胞中轮状病毒滴度分别降低13%、77%和100%（P<0.05）。体内实验,与对照组比较,粪肠球菌移植组乳鼠粪便中病毒基因拷贝数明显减少（P<0.05）。 结论 在体外细胞模型和乳鼠感染轮状病毒模型中粪肠球菌对轮状病毒的复制均发挥抑制作用。     

秦香止泻方对HRV腹泻乳鼠小肠黏膜一氧化氮浓度的影响

目的研究秦香止泻方对人轮状病毒(HRV)腹泻乳鼠小肠黏膜一氧化氮(NO)浓度的影响,探讨该方干预HRV腹泻的作用机制。方法将192只出生3～5 d的乳鼠随机分为空白组,模型组,病毒唑组,秦香止泻方低、中、高剂量组,每组32只,空白组经口灌入不含HRV的培养液,其余各组经口灌入50μL(3.0×108PFU/mL)的Wa株HRV培养液。接种病毒12 h后,各给药组每只乳鼠经口给予相应的秦香止泻方药液50μL,病毒唑组给予同体积的病毒唑,空白组和模型组分别给予同体积的蒸馏水。连续给药8 d后用金胶体试纸方法检测粪便HRV抗原,观察一般情况和腹泻评分,采用微板法测定小肠黏膜NO浓度,并对腹泻评分与NO浓度进行相关性分析。结果接种病毒后第2天开始出现不同程度的腹泻,与模型组和病毒唑组比秦香止泻方能明显缩短腹泻病程,减轻腹泻程度,呈现一定的量效关系,差异有统计学意义(P<0.05);模型组与空白组比较,NO浓度明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01),秦香中、高剂量组与模型组比较,第1～6天,NO浓度均显著降低(P<0.01),秦香高、中剂量组与病毒唑组比,第1～5天NO浓度均显著下降,差异有统计学意义(P<0.01);相关性分析显示腹泻评分与NO浓度存在正相关(r=0.8012)。结论秦香止泻方能明显缩短HRV感染乳鼠腹泻病程,减轻腹泻程度;对小肠黏膜NO浓度的影响可能是该方发挥作用的相关作用机制之一。     

轮状病毒肠道外感染乳鼠模型的建立

目的:建立轮状病毒(rotavirus,RV)肠道外感染乳鼠模型。方法:实验动物选用10~11日龄的清洁级ICR乳鼠,将32只乳鼠随机分为2组,每组16只,即RV肠道外感染组:乳鼠经腹腔注射150μl猴RVSAl1(病毒滴度TCID₅₀为10-4);对照组:乳鼠经腹腔注射150μl生理盐水。接种后每天观察乳鼠的活动状况、饮食情况、毛色、体型、大便变化等,4天后处死,留取心、肝、肾、脾、肠进行病理学切片和匀浆培养。结果:感染组在接种RV后第2天开始出现食欲不振,体毛蓬松、无光泽,活动减少,呆滞、嗜睡,对刺激反应淡漠,大便量少,上述症状逐渐加重,到第4天症状最明显,并有3只乳鼠出现腹泻,观察中累积腹泻率和发病率分别为18.75%和100.00%。光镜下肝、肾、脾、小肠有病理改变,且肝、肾、小肠组织匀浆培养72 h后出现不同程度细胞病变,余阴性。对照组乳鼠无明显变化。结论:该方法初步建立了RV肠道外感染乳鼠模型。     

轮状病毒感染对乳鼠肠道菌群及小肠屏障功能的影响

目的 探讨轮状病毒感染后乳鼠肠道菌群结构、小肠上皮细胞紧密连接蛋白及小肠通透性的改变。方法 构建轮状病毒感染乳鼠腹泻模型,收集结肠和直肠混合肠道内容物,利用16S rDNA测序技术检测乳鼠感染轮状病毒后肠道菌群结构及组成;采用实时荧光定量PCR检测轮状病毒感染后乳鼠粪便中病毒拷贝数及乳鼠肠道细胞紧密连接蛋白1 (TJP-1)、紧密连接蛋白4 (claudin-4)、链接黏附分子（F11R）基因的表达。采用FITC-葡聚糖检测乳鼠肠道上皮细胞的渗透性。结果 连续灌胃4 d后轮状病毒感染（RV）组乳鼠出现黄色水样粪便。16S rDNA测序结果显示,RV组与对照（NC）组的菌群分类组成有显著差异,筛选出10个显著差异菌属。NC组的优势菌属为Lactobacillus、Paenibacillus、Brevundimonas、Parabacteroides、Bacteroides和Alloprevotella,而RV组的富集菌属为Enterococcus和Shigella。实时荧光定量PCR结果显示,与NC组相比,RV组claudin-4及F11R基因表达水平显著升高（P <0.001）,...     

犀角地黄汤合银翘散对流感病毒性肺炎小鼠肺病毒滴度和肺组织病理改变的影响

目的观察经典合方犀角地黄汤合银翘散对流感病毒感染致病毒性肺炎小鼠的治疗作用,分析病毒滴度与肺组织病理改变的关系。方法 ICR小鼠120只随机分为6组:正常组,模型组,犀角地黄汤合银翘散中药高、中、低剂量组,利巴韦林组,25μL 50LD50病毒液滴鼻建立流感病毒鼠肺适应株感染的小鼠肺炎模型(除正常组外),感染后1 h,正常组和模型组予以双蒸水灌胃;中药高、中、低剂量组分别给予中药46、23、11.5 g/(kg.d)灌胃;利巴韦林组腹腔注射利巴韦林注射液0.1 g/(kg.d);各组均给药2次/d,连续给药7 d。每日观察小鼠的生存率、平均存活天数,体重、体温的变化至感染后14 d。BALB/c小鼠72只随机分为4组,正常组、模型组、中药中剂量组和利巴韦林组,在感染后的24、6、d分别取材,动态观察小鼠肺匀浆中病毒血凝滴度、肺组织切片在光镜和电镜下的病理改变。结果临床等效剂量(中剂量)的犀角地黄汤合银翘散可明显降低感染小鼠的死亡率,延长生存时间,增加体重和升高体温。感染组肺病毒滴度在第2天最高,随后显著下降,而肺组织病理改变在第6天达高峰,二者不同步。犀角地黄汤合银翘散在第2天可降低肺匀浆中的病毒滴度,第4天、第6天与模型组比无差异;在第6天可明显减轻感染小鼠肺组织炎症病变。结论犀角地黄汤合银翘散对小鼠流感病毒性肺炎有明显的治疗作用,直接的抗病毒增殖非其主要作用,可能主要通过抑制机体的炎症级联反应发挥作用。     

抗人轮状病毒牛血丙球蛋白的研制

目的通过牛源抗人轮状病毒免疫球蛋白的研究,并经胃肠道给药观察其对人丁感染仔猪腹泻的治疗效果。方法以人轮状病毒（HRV“Wa”株）为抗原免疫接种健康育肥黄牛,制备成牛血丙球蛋白口服液。结果丙球蛋白含量达52mg／ml,纯度达80％,中和抗体效达1：16384,初步研究表明对人工感染HRV“Wa”毒株发生腹泻的仔猪治疗有效率达92．3％．．结论牛源抗人轮状病毒免疫球蛋白可能成为新型治疗轮状病毒引起腹泻的有效新药。     

昆明市幼儿病毒性腹泻病原学监测分析

目的 了解云南省昆明市病毒性腹泻的病原谱特征,探索其流行规律,以期为病毒性腹泻患儿临床治疗及制定有针对性的防控措施提供参考.方法 采集2018年1月至2019年12月因腹泻就诊的昆明市5岁以下患儿粪便标本,用实时荧光定量PCR方法进行核酸检测,检测轮状病毒、诺如病毒、腺病毒、星状病毒及札如病毒,并分析各种病毒的流行病学...     

0~5岁小儿急性腹泻病原微生物检验结果分析

目的：了解5岁以下小儿腹泻病原微生物的构成情况,为采取合理有效的治疗措施提供依据。方法：收集2011年4月至2013年3月5岁以下住院腹泻患儿的粪便标本310份,进行常规细菌培养,筛检致病菌;同时采用ELISA法检测病毒,利用聚合酶链反应方法进行病毒分型。结果：病毒检测阳性121例（39.03%）,其中人轮状病毒为主要致病病毒;检出致病菌24例（7.74%）,以沙门菌为主;未发现病毒和细菌同时感染,男女性患儿感染性腹泻检出率差异无统计学意义（P〉0.05）。人轮状病毒感染主要流行于秋冬季,流行型为G2、G3和P[8],18~23周龄儿童多发;而细菌性和杯状病毒性腹泻主要流行于夏季。结论：永川地区人轮状病毒感染是导致5岁以下婴幼儿感染性腹泻的主要原因,同时细菌性感染也占了一定比例,需要加强病原体监测,为临床治疗提供依据。     

鼠李糖乳杆菌对感染人轮状病毒乳鼠空肠黏膜上皮细胞的保护作用

目的观察鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)对感染人轮状病毒(human rotavirus,HRV)乳鼠空肠黏膜上皮细胞的保护作用。方法将60只昆明种乳鼠均分为4组:灌服HRV作为感染组;灌服HRV前和后灌服LGG作为预处理组和治疗组;正常对照组灌服细胞培养液。从第4天开始,连续5d观察各组乳鼠的临床症状,每天2次检测乳鼠大便HRV抗原。在实验的第9天随机处死每组中的8只乳鼠,取出空肠段苏木精-伊红染色,利用Image-Pro Plus 5.1图像软件分析各组乳鼠空肠黏膜厚度、绒毛高度和隐窝深度。利用光学显微镜和透射电子显微镜观察乳鼠空肠黏膜上皮细胞的病理变化。结果至第9天,对照组乳鼠无腹泻、无死亡。HRV感染组、预处理组、治疗组乳鼠腹泻率和死亡率分别为100.00%、46.67%,13.33%、0%,26.66%、6.67%。对照组、HRV感染组、预处理组、治疗组乳鼠空肠黏膜隐窝深度分别为(35.2±2.4)、(45.9±3.6)、(35.8±5.6)和(38.9±2.9)μm,HRV感染组明显高于其它3组(均P<0.01)。病理检测发现HRV感染组乳鼠空肠黏膜上皮细胞出现广泛的空泡样变性,而预处理组和治疗组乳鼠空肠黏膜上皮细胞空泡样变性的情况均有减少。预处理组与治疗组相比,前者对乳鼠空肠黏膜上皮细胞的保护效果更好。结论 LGG对感染HRV的乳鼠空肠黏膜上皮细胞有一定的保护作用,感染前灌服LGG的保护效果好于感染后灌服。     

婴幼儿腹泻病原微生物检验结果探析

目的：探析诱发婴幼儿腹泻问题的病原微生物的类型,总结不同的感染在年龄方面的差异,为预防婴幼儿感染提供临床经验。方法：以本院收治的235例婴幼儿腹泻患者为研究对象,对其实施病原微生物检测,通过分析检验结果,掌握病原微生物类型与感染年龄特征。结果：婴幼儿由于受到病原微生物的感染而产生的腹泻问题,最为首要的致病微生物种类为轮状病毒,其感染与年龄之间存在着显著的相关性（P〈0.05）。结论：通过为腹泻的婴幼儿患者开展病原微生物检测,可以及时精准地找到致病因素,并根据感染状况选择相应的药物,给予患者有效治疗。     

武汉地区腹泻患儿轮状病毒感染的检测分析

目的：了解武汉地区腹泻患儿轮状病毒（RV）感染特点,为临床诊治提供参考依据。方法：采用胶体金免疫层析法对腹泻患儿粪便标本进行RV检测,分析结果。结果：2 037例腹泻患儿粪便标本中RV阳性率为29.5%（601/2 037）,〈1个月、1～5个月、6～11个月、1～2岁、〉2岁且≤3岁、〉3岁且≤5岁年龄组患儿中,感染率分别为21.55%（25/116）、18.51%（77/416）、32.79%（319/973）、35.32%（160/453）、30.61%（15/49）、16.67%（5/30）;RV感染全年均可发生,高峰期在9～11月,检出率分别为34.29%、47.47%和39.67%。结论：武汉地区腹泻患儿RV感染普遍,以6个月～2岁年龄组最多,新生儿感染情况不容忽视,流行高峰期应尽早对腹泻患儿进行RV检测,采取积极有效的预防措施,并及时进行合理治疗,防止疾病传播。     

200例急性腹泻患儿血锌检测结果分析

目的：探讨急性腹泻患儿血锌变化情况,为临床使用锌剂治疗急性腹泻提供依据。方法：对200例急性腹泻伴中、重度脱水患儿使用LK98B微量元素仪进行血中微量元素锌检测,并用正常儿童进行对照。结果：急性腹泻患儿血锌值为82．46±17．39μmol／L,正常儿童血锌值为126±11．27μmol／L。两组比较P〈0．01,有显著差异。结论：急性腹泻患儿存在锌元素缺乏,治疗时应补充锌元素。     

钨酸钠对泊洛沙姆407诱导高血脂昆明小鼠模型血脂的影响

【目的】研究钨酸钠对泊洛沙姆407诱导的高血脂昆明小鼠模型血脂的影响。【方法】昆明小鼠给予钨酸钠（100或200mg/kg）灌胃,连续3 d,末次给药1 h后,腹腔注射泊洛沙姆407 0.3 g/kg,于注射后的4、24及48 h,取血测定甘油三酯和胆固醇含量,注射泊洛沙姆407后24 h血样同时测定高密度脂蛋白-胆固醇的含量。【结果】与正常组的甘油三酯（6.30±0.87）mmol/L相比,泊洛沙姆407腹腔注射4 h后,诱导昆明小鼠出现明显的高甘油三酯血症（233.99±37.94）mmol/L,预先给予钨酸钠处理,能明显降低血清甘油三酯水平[低剂量钨酸钠组：（207.13±29.85）mmol/L;高剂量钨酸钠组：（131.50±46.07）mmol/L,P〈0.05],此作用可持续到造模后的48 h。造模后的24 h,钨酸钠的降血清胆固醇的作用最明显[对照组：（6.07±0.70）mmol/L;低剂量钨酸钠组：（3.04±0.40）mmol/L;高剂量钨酸钠组：（1.81±0.40）mmol/L,P〈0.05]。造模后的24 h,预处理钨酸钠能明显升高血清高密度脂蛋白-胆固醇水平[对照组：（1.97±0.40）mmol/L;低剂量钨酸钠组：（2.70±0.42）mmol/L;高剂量钨酸钠组：（3.73±0.81）mmol/L,P〈0.05]。【结论】钨酸钠对于泊洛沙姆407诱导的高血脂昆明小鼠模型具有降脂作用。     

鼠疟原虫引起血小板减少药物干预效果的观察

目的了解退烧药、抗生素及激素对感染鼠疟原虫引起的血小板减少是否具有恢复的效果。方法健康昆明小鼠腹腔接种感染伯氏鼠疟原虫,当感染鼠血小板明显低于正常值后,分别采用临床常用的大环内酯类、β内酰胺类和喹诺酮类抗生素、退烧药及激素类药物按照人体治疗量的10倍灌服或肌注方法给药3d,每12h采血1次做血小板计数观察。每5只小鼠为一个观察试验组,每种药物采用一组小鼠试验观察取平均数据,并设正常对照组。结果正常鼠血小板平均计数为256×109/L。健康鼠感染鼠疟原虫后第8d,各组感染鼠血小板计数平均降至90×109/L后,开始灌服各类抗生素和肌注氨基比林及地塞米松,除阿奇霉素观察组治疗3d后血小板计数平均恢复至201×109/L水平外,其它抗生素和退烧药及激素均对感染鼠疟原虫所引起的血小板明显减少恢复无影响。结论除阿奇霉素外,复方氨基比林、阿莫西林、左氧氟沙星、地塞米松对鼠疟原虫感染小鼠血小板减少无明显效果。