青海省手足口病实验室监测结果分析

[目的]了解2008年青海省手足口病(HFMD)的主要致病病原体及基因特征和儿童人肠道病毒71型(HEV71)的抗体水平及自然感染状况。[方法]用RT-PCR进行病毒核酸检测,病毒核酸阳性标本进行病毒分离,阳性分离株病毒进行肠道病毒血清型别的分子定型。对分离到的HEV71阳性分离株进行VP1编码区基因扩增,核苷酸序列测定和同源进化分析。对181名1~6岁儿童血清标本,用中和试验检测HEV71中和抗体,并对检测结果进行统计学分析。[结果]517份标本经RT-PCR检测,HEV71核酸阳性50例、CoxA16核酸阳性13例,阳性率为12.2%。分离到45株病毒,其中HEV7130株(占66.7%),是主要病原体。经VP1区核苷酸序列测定后,它们在VP1区核苷酸水平和氨基酸水平上同源性分别在95.2%~100.0%和96.6%~100%之间,与1998年以来在我国分离的HEV71在核苷酸和氨基酸水平上的同源性都较高。与HEV71代表株构建的亲缘进化树中显示,青海省HEV71分离株属于C4基因亚型C4a进化分支。181名1~6岁儿童中HEV71中和抗体阳性率为37.6%,HEV71中和抗体几何平均滴度(GMT)水平为1︰16.12。随着年龄的增大,抗体阳性率及GMT升高,各年龄组抗体阳性率、GMT差异有统计学意义(χ2=41.89,P﹤0.05;r=0.95,P﹤0.05)。[结论]青海省2008年HFMD主要病原为HEV71,其基因型为C4基因型中的C4a进化分支,并且存在多个传播链。1~6岁儿童尤其是≤3岁儿童HEV71中和抗体阳性率低,是HEV71导致HFMD的易感者,是目前手足口病防控的重点人群,加强对HEV71的分子流行病学和血清流行病学监测,对预防和控制HFMD暴发具有重要意义。     

不同类型肠道病毒感染所致手足口病流行病学调查

目的调查不同肠道病毒感染所致手足口病(hand foot mouth disease,HFMD)患儿家庭密切接触者肠道病毒感染情况及其传播因素分析。方法选取杭州市儿童医院2016年4～7月住院的HFMD患儿。对患儿及密切接触的家庭成员进行临床状况评估及病毒学检测,并进行问卷调查。同期收集杭州某医院体检中心体检的正常成人粪便68份及杭州某幼儿园正常幼托儿童粪便400份;采用实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)法进行病毒检测及分型。结果 150例肠道病毒检测阳性的HFMD患儿年龄以1～3岁为主(57.33%)。人肠道病毒71型(HEV71)75例,阳性率50.00%,柯萨奇病毒A16型(CA16)16例,阳性率为10.67%,其他肠道病毒59例,阳性率为39.33%。与75例EV71阳性患儿有密切接触的家庭成员108例,31份粪便样本中EV71病毒核酸阳性,占28.70%(31/108);与16例CA16阳性患儿有密切接触的家庭成员28例,9份粪便样本CA16病毒核酸阳性,占32.14%(9/28);与59例肠道病毒通用型阳性患儿有密切接触的家庭成员81例,21份粪便样本肠道病毒通用型病毒核酸阳性,占25.93%(21/81);同期检测的正常成人粪便肠道病毒核酸均阴性;检测的正常幼托儿童粪便1份肠道病毒阳性。而家庭成员中有幼托儿童且该幼托儿童近期有患病,是引起HFMD家庭聚集性传播的危险因素。结论不同类型肠道病毒感染所致HFMD家庭传播率差异无统计学意义;家庭因素只是HFMD传播中的一种因素。     

威海市504例手足口病标本核酸检测结果分析

目的:对威海市504例手足口病(HFMD)患儿粪便样本实验室检测结果进行分析,了解威海地区HFMD病原特征,为今后制定HFMD防治措施提供依据。方法:对送检的504例临床诊断为HFMD患者标本,应用实时荧光(Real-time)RT-PCR法检测标本中的人肠道病毒(HEV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CVA16)特异性核酸。结果:504例HFMD患者标本中,EV71阳性率为50.99%,CVA16阳性率为18.25%,其它HEV阳性率为17.26%;46例HFMD重症病例中,EV71阳性率84.78%,CVA16阳性率6.52%。结论:威海地区手足口病病原体以EV71和CVA16为主。EV71型是引起重症病例的优势病毒型,应加强监测,特别是4岁以下婴幼儿的监测。     

衡阳市2010年手足口病实验室检测结果分析

目的对衡阳市2010年4-12月手足口病（HFMD）实验室检测结果进行分析,了解衡阳市HFMD流行特征,为今后制定或调整HFMD防治措施提供参考。方法对2010年4-12月衡阳市各县区疾病预防控制中心（CDC）及各类医疗机构送检的625例临床诊断为HFMD患者标本,应用实时荧光（Real-time）RT-PCR法检测标本中的人肠道病毒（HEV）、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CVA16）特异性核酸。结果 625例HFMD患者标本中,EV71阳性率为26.08%（163/625）,CVA16阳性率为8.80%（55/625）,其它HEV阳性率为19.84%（124/625）;95例HFMD重症病例中,EV71阳性率（67.80%,40/95）最高,并且男性阳性率（50.85%）略高于女性（27.78%）,未检出CVA16型;9例HFMD重症死亡病例中,6例为EV71型,阳性率为66.67%。4-7月为HFMD高发期,3岁以下为高风险年龄组,重症病例及重症死亡病例比其它年龄组高。结论衡阳市2010年HFMD发病率较高,EV71型是引起重症及重症死亡病例的优势病毒型,应加强监测,特别是3岁以下婴幼儿的监测。     

北京市2008年肠道病毒71型VP1编码区基因特征分析

目的了解北京市2008年手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease,HFMD）流行期间,人肠道病毒71型（Human Enterovirus71,HEV71）分离株的VP1编码区基因特征。方法采集发病1～3d的咽拭子标本33份,采用人横纹肌肉瘤（Human Rhabdomyosarcoma,RD）细胞进行EV分离,用特异引物通过逆转录-聚合酶链反应扩增进行毒株鉴定。对分离到的HEV71进行VP1编码区全长扩增,并对扩增产物采用双脱氧链终止法进行序列测定,Bioedit7.0.5和Mega3.1软件进行序列比对和系统进化树分析。结果从33份咽拭子标本中共分离到16株病毒,经鉴定：HEV7114株,柯萨奇病毒（Coxsackie Virus,CV）A组16型（CVA16）2株,其中1例为HEV71和CVA16混合感染。对10株HEV71进行了VP1编码区全序列测定,10株病毒的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为95.5%～100%和98.9%～100%;与安徽省阜阳市2008年流行株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为95.4%～99.1%;与C4基因型代表株的核苷酸序列同源性〉92%。基于HEV71的VP1编码区核苷酸序列构建亲缘性关系树,北京市2008年流行株与C4亚型代表株聚为一簇,属于C4基因亚型中的C4a分支;且10株病毒处于四个相对独立的进化分支。结论北京市2008年从HFMD患儿分离的HEV71均为C4亚型,且属于2004年以来我国的优势分支——C4a。亲缘性分析提示,此次流行中至少存在4个HEV71传播链。由于近年来HEV71在中国持续大规模流行,迫切需要对HEV71进行连续的分子流行病学监测,及时阐明现阶段流行毒株的基因特征,为疾病预防控制提供病毒学依据。     

大连市2010年手足口病实验室检测结果分析

目的 对大连市2010年检测的手足口病(HFMD)结果进行分析,了解大连市手足口病流行特征.方法 应用Real time RT-PCR法对363份临床诊断为(HFMD)的患者标本进行人肠道病毒(HEV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16)核酸检测.结果 363份标本中EV71阳性率为71.35％,CA16阳性率为0.28％,其它HEV阳性率为9.92％,重症病例占总数的89.81％,8月为HFMD高发期,1～3岁婴幼儿为易感人群,男性明显高于女性.结论 EV71是引起大连市2010年HFMD的主要病原体,重症发病率较往年明显升高.     

手足口病患儿密切接触者肠道病毒携带情况调查

目的了解手足口病密切接触者肠道病毒携带情况,探讨手足口病密切接触者在手足口病传播中的作用。方法 2016年3月~2016年10月采集手足口病密切接触人群咽拭子标本200份。咽拭子提取核酸后应用实时荧光RT-PCR技术检测人肠道病毒(HEV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16),按照医务人员与家属进行病毒检测情况分析。结果 200份标本中,HEV通用引物阳性104份(52.0%),其中EV71、CA16和其他肠道病毒阳性标本分别为43份(21.5%)、46份(23.0%)和15份(7.5%)。家属肠道病毒携带率高于医务人员,差异有统计学意义(P0.01)。结论手足口病患儿密切接触者肠道病毒携毒率较高,其在手足口病的传播中意义更大。     

2010年湖南省郴州市手足口病病原学和人肠道病毒71型基因特征研究

目的:了解2010年湖南省郴州市手足口病的病原学特征,为手足口病的防控工作提供依据。方法:采集2010年郴州市手足口病患者的咽拭子、肛拭子或粪便标本,采用Real time-RT-PCR方法检测HEV71、CVA16和HEV的核酸,选择HEV71阳性的标本使用RD、Vero细胞进行病毒分离,使用RT-PCR法扩增HEV71分离株的VP1区片段,进行VP1区核苷酸序列测定和分析。结果:2010年共检测手足口病患者临床标本665份,HEV阳性率72.78%,其中HEV71占55.17%、CVA16占18.59%、其它HEV占26.24%。不同月份、年龄、地区以及不同类型病例HEV型别构成比差异有统计学意义。分离出4株HEV71,其VP1区核苷酸序列分析表明为C4基因亚型。结论:HEV71为郴州市2010年手足口病流行的主要病原体,属于C4基因亚型。HEV71和CVA16的分布在病例发病时间,发病年龄和地域上有所不同。     

一起急性呼吸道感染症暴发疫情的病原学和流行病学研究

目的：对一起急性呼吸道感染症暴发疫情进行流行病学和病原学研究，以明确诊断，控制疫情。方法：通过流行病学调查描述疫情流行特征；采用病例对照研究分析流行因素；患者的咽拭子标本中提取核酸；PCR法检测病毒特异性基因片段；组织培养法（Hep-2细胞）分离病毒；电子显微镜观察病毒形态；型特异血清及型特异引物鉴定分离毒株型别；中和实验检测患者急性期和恢复期血清抗体效价。结果：疫情报告病例871例，波及10个乡镇，主要为在校中小学及幼儿园学生（占94．37oA），具有班级聚集性。病例对照研究显示危险因素为与病人的接触、与鸡接触及家庭内共用毛巾等。35份咽拭子标本分离出15株病毒，分离阳性率42．9％。分离病毒经鉴定为腺病毒3型。PCR法检测腺病毒DNA，112份咽拭子标本中68份阳性，阳性率60．7％。18例双份血清中13例中和效价呈4倍以上增长或转阳，阳性率72．2％。对病毒进行全基因序列测定，确定为腺病毒3型。结论：本起急性呼吸道感染症暴发疫情由腺病毒3型引起，传播途径以呼吸道传播和密切接触为主。     

一起EV71肠道病毒引起的社区手足口病暴发流行调查

目的 了解深圳市龙岗区手足口病暴发疫情的流行病学与病原学特征,为手足口病的预防控制策略提供科学依据.方法 采用描述流行病学方法对龙岗区某社区手足口病暴发疫情的流行病学资料进行统计分析,采集手足口病患儿发病3日内、疫点周围健康人群及密切接触者、疫区3岁以下易感儿童的粪便、肛拭子或疱疹液标本以及外环境涂抹棉拭子标本,采取实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法进行EV71和CoxA16核酸检测.结果 流行期6月30日-7月27日,持续28 d.发病以4岁以下儿童为主,占88.46％;男性多于女性,男女性别比1.36∶1;职业以散居儿童和托幼儿童为主,占73.08％和19.23％.病原学检测结果显示,手足口病患儿标本EV71病毒核酸阳性率为87.50％ (7/8).2名死亡病例及其中1名死亡病例的密切接触者均检出EV71病毒核酸阳性.疫点周围健康人群及密切接触者EV71病毒核酸阳性率为4.17％(1/24).外环境标本EV71病毒核酸阳性率为零(0/25).疫区3岁以下易感儿童EV71病毒核酸阳性率1.92％(12/262).结论 该起手足口病暴发疫情病原体为EV71病毒引起.手足口病暴发流行已经成为我国南方城市重要的公共卫生问题.     

北京市2007年手足口病暴发疫情的病原学分析

目的 对北京市2007年5-7月间发生并收集到的8起手足口病暴发疫情进行病原学分析及鉴定.方法 采用RT-PCR技术,对手足口病患儿的疱疹液或咽拭子标本,直接进行肠道病毒(EV)分型;采用RD传代细胞,对标本进行病毒分离培养,再对其阳性培养物进行EV分型.对其中部分原始标本和阳性分离物中的EV VP1区进行核苷酸序列及预测的氨基酸序列分析.结果 北京市2007年发生在大兴区的2起疫情由EV71引起,其他4个区的6起疫情均由柯萨奇病毒A16型(Cox A16)引起.大兴区2起疫情的EV71都属于C基因型的C4亚型,但分别处于VP1基因亲缘性系统发生树的不同分支,其核苷酸和氨基酸分别存在3.7%和0.8%的差异;来源于顺义区的Cox A16与其他病毒分别处于不同分支,其核苷酸和氨基酸分别存在3.7%和0%的差异.结论 北京市2007年手足口病疫情主要由EV71和Cox A16两种病原引起,而每种病原都存在2个或2个以上流行株病毒;且Cox A16的传播似乎较EV71更为广泛.     

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2008年广东省儿童手足口病病原学监测

目的监测手足口病的病原体,为预防和控制肠道病毒感染提供依据。方法采集手足口病患儿的粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液进行RT-PCR定性,肠道病毒通用引物阳性的标本进行病毒分离;分离株用EV71和CA16的VP1基因的特异性引物进行RT-PCR鉴定。结果共收集患儿标本443份,肠道病毒通用引物阳性259份;做病毒分离256份,阳性150份,其中粪便158份,病毒分离阳性112份,阳性率为70.89%;肛拭子21份,病毒分离阳性10份,阳性率为47.62%;咽拭子65份,病毒分离阳性26份,阳性率为40.00%;疱疹液10份,病毒分离阳性2份,阳性率为20.00%。结论粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液的分离率有显著差异,粪便分离率最高;EV71和CA16是引起小儿手足口病的主要病原体,死亡病例全部是由EV71病毒引起。     

2011-2012年自贡市187例手足口病例监测结果分析

目的对自贡市2011-2012年187份手足口病例标本进行实验室核酸检测结果分析,了解手足口病在自贡地区的流行趋势以及流行特征。方法收集全市各区县所采集的手足口病例疱疹液和咽拭子标本及其流行病学资料,运用实时荧光PCR法对所采集标本进行EV通用型、EV71以及Cox A16型的核酸检测。结果 2011-2012年自贡市共检测手足口病例187份,EV71核酸阳性率为5.88%、Cox A16核酸阳性率为36.90%、EV通用型核酸阳性率为3.21%;在核酸检测阳性病例中,男性占51.25%,女性48.75%;3-6月及11月的阳性率较高;5岁以下的阳性病例占所有阳性病例的95%;贡井和荣县的送检病例标本数及阳性率明显高于其它区县。结论 2011-2012年自贡地区手足口病流行病原以EV71和Cox A16型为主,流行特征在各区县存在一定差异,3-6月及11月可能为为自贡市手足口病发病高峰期。     

2010一2011年湖南省郴州市手足口病EV71型VP1区基因序列分析

目的了解2010-2011年湖南省郴州市手足口病EV71病毒的基因特征,为手足口病的预防控制提供科学依据。方法从2010-2011年郴州市各县（市、区）送检的手足口病肛拭子标本中随机挑选60份标本采用RD细胞进行病毒分离,采用Realtime—RT—PCR方法检测肠道病毒核酸,挑选14株致细胞病变阳性且EV71核酸检测阳性的标本（其中2010年的4株均为郴州市手足口流行夏季高峰期分离株,2011年的毒株主要为冬季高峰期分离株）,采用RT—PCR法扩增出EV71分离株的VP1区片段,随后进行VP1区核苷酸序列测定和分析,并使用生物信息学方法作基因特性分析。结果郴州市14株EV71毒株在生物进化树上与CAa亚型的代表株属同一分支。14株EV71毒株之间核苷酸序列的同源性在96．1％～100．0％之间,氨基酸序列的同源性在99．3％～100．0％之间;与A、B、C各基因型和亚型代表株EV71VP1编码区核苷酸和氨基酸序列同源性分析表明,郴州各分离株与安徽阜阳2008年毒株C4a亚型代表株（EU703812）的同源性最高,其中核苷酸同源性在91．8％-93．3％之间,氨基酸同源性均为99．3％。14株分离株与安徽阜阳2008年毒株（C4a亚型代表株）VP1区段的氨基酸编码序列进行比较,发现K98E、S283T和A293S3处位点变异,重症病例与普通病例的EV71病毒VPI氨基酸变异无明显差异。结论2010-2011年郴州市手足口病的优势毒株EV71属于C4a基因亚型。郴州市各县（市、区）的EV71亲缘关系近,毒株基因较稳定,未发现氨基酸突变位点与病例类型有关联。     

一起引发手足口病流行的肠道病毒71型的分子特征

上海市某幼儿园 2 0 0 0年 10～ 11月发生手足口病 (HFMD)流行 ,从患儿粪便标本中分离到 13株肠道病毒 71型 (EV71) ,血清学实验证明 ,所分离的病毒为此次HFMD流行的病因。对其中的 4株病毒 (SHANGHAI EV71 H2 5、SHANGHAI EV71 H2 6、SHANGHAI EV71 F1和SHANGHAI EV71 F2 )进行了VP1区全基因核苷酸序列测定 ,并做了比较分析。 4株EV71VP1区全基因均为 891个核苷酸 ,编码 2 97个氨基酸 ,与检索到的广东省深圳市和台湾省HFMD病人EV71分离株同源性较高 (>94 % ) ,与脑炎EV71分离株 (BrCr株 )同源性低 (<83% )。种系发生树分析亦表明 ,上海市的 4株EV71与深圳株 (AF30 2 996 EV71 SHZH98)和台湾株 (AF2 86 5 31 FV71 TW 98)亲缘关系较近 ,与BrCr株亲缘关系较远。因此上海市HFMD 4株EV71分离株为本地流行株。     

19份手足口病临床标本的病原学分离与鉴定

目的：为探索手足口病的病原并为该病的防治提供科学依据,对本省徐州地区采集的19份手足口病临床标本进行病原学分离与鉴定。方法：采集的患者咽拭子（6份）和肛拭子（13份）标本,接种Hep-2细胞进行病毒分离,经培养3代,对有明显致细胞病变效应并能连续传代的毒株,用肠道病毒通用引物real-time-RT-PCR方法鉴定确认为肠道病毒后,用肠道病毒分子分型引物（E187/E222）对肠道病毒VP1区进行扩增,将扩增产物测序获得的序列与GeneBank中肠道病毒核苷酸序列进行比对,确定毒株血清型别。结果：19份标本中分离到9株病毒,均为肠道病毒。对其VP1区部分核苷酸序列测定和比较分析后,鉴定出其中有6株为CoxB5,1株为CoxB3,2株为Echo6。结论：虽然肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16（CoxA16）是引起手足口病暴发流行的主要病原,但引起手足口病的肠道病毒存在多种血清型,CoxB5、CoxB3和Echo6等均能引起手足口病。因此,对手足口病的病原学检测,除EV71和CoxA16外,不能忽视对其他肠道病毒的病原学检测和鉴定。     

2010年合肥儿童手足口病病例肠道病毒血清基因型分析

目的:对合肥地区2010年5~7月儿童手足口病流行期间的手足口病患儿进行病原学调查。方法:采集手足口病患儿的疱疹液、粪便、咽拭子进行病毒分离;分离的病毒接种非洲绿猴肾细胞(Vero)后待细胞病变(CPE)达到++++以上后提取RNA。分别用EV71和CA16的VP1基因的特异性引物进行RT-PCR鉴定,并根据血清型不同比较其临床特征。结果:77例患儿采集的标本中65例分离到病毒;经RT-PCR检测发现其中47例CA16阳性,18例为EV71,比例为2.6∶1。CA16感染和EV71感染在患者的年龄大小、症状轻重等方面无显著统计学差异。结论:手足口病患儿检测到的主要病原是CA16和EV71,两者感染对临床的影响无显著差异。     

手足口病患者不同标本中肠道病毒检测结果比较

目的 对手足口病患者不同类型标本进行病原学检测和分析,了解手足口病患者肠道病毒的感染状况,探讨不同类型标本对检测结果的影响.方法 对临床诊断为手足口病的病例同时取粪便及咽拭子标本,用实时荧光定量逆转录多聚酶链反应检测总肠道病毒(enterovirus,EV)、肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A group 16 strain,CA16).比较两种标本的肠道病毒检测阳性率并进行一致性检验.结果 粪便标本的肠道病毒的总体阳性率为90.9％,EV71的阳性率为41.9％,CA16的阳性率为29.5％;咽拭子标本的肠道病毒的总体阳性率为87.5％,EV71的阳性率为37.4％,CA16的阳性率为26.9％,粪便标本的EV,EV71,CA16检出率均高于咽拭子标本,但差异均无统计学意义(x2分别为3.18,3.75,3.37,P值分别为0.073,0.052.0.064).结论 手足口病患者粪便标本和咽拭子标本的肠道病毒检出阳性率差异无统计学意义,考虑到粪便标本采集具有一定的局限性,临床上可选择咽拭子标本用于手足口病的检测.     

2007-2010年上海市静安区儿童手足口病情况分析和病原学研究

目的 分析上海市静安区2007 -2009年手足口病发病情况,并分析2009-2010年静安区监测点儿童手足口病病原型别及肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71) VP1区基因特征.方法 分析上海市静安区2007 -2009年手足口病流行概况;收集2009年4月～2010年12月辖区内儿童医院、幼托机构手足口病患儿咽拭标本,并进行实时荧光RT-PCR检测,确定手足口病病原型别.选择2010年不同月份共19份(含1份重症病例)EV71 PCR阳性标本,接种Vero细胞进行病毒分离培养,并设计特异引物对EV71 VP1全序列进行核苷酸序列测定、比对,构建系统发生树.结果 2008年静安区手足口病发病率明显增高,2009年发病数稳中略降,病例以发生在幼托机构为主.2009年病例咽拭标本实时荧光RT-PCR检测结果显示,柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CoxA16)阳性率为51.0％ (52/102),EV71阳性率为15.7％ (16/102),其他肠道病毒属阳性率2.9％ (3/102);2010年CoxA16和EV71阳性率均为31.3％ (36/115),其他肠道病毒属阳性率10.4％( 12/115).19株EV71分离株与2008年安徽阜阳EV71分离株同属C基因型中的C4a亚型,核苷酸同源性达95.0％ ～97.1％,氨基酸同源性为95.1％ ～98.3％.结论 静安区手足口病发病率2008年明显增高,2009年发病数稳中略降.2009-2010年静安区手足口病主要病原体为EV71和CoxA16,其他肠道病毒属引起的手足口病有所增加,需加强对其他肠道病毒属的鉴定.