微流控芯片精子分选法对精子常规参数及DNA完整性的影响

目的:研究微流控芯片精子优选技术对精子常规参数及DNA完整性的影响。方法:自行设计制作微流控芯片,利用芯片处理技术和上游法对40例精液标本进行精子优选,通过计算机辅助精液分析系统及染色质扩散试验从精子常规参数及DNA完整性两个方面评价精液体外处理对精子的影响。结果:精液经微流控芯片法和上游法处理后,精子活力、精子正常形态率以及精子尾部肿胀率均有显著提高(P<0.01),精子的DNA损伤率明显降低(P<0.01)。微流控芯片法与上游法相比,优选后前者精子DNA损伤率明显低于后者[(8.4±5.8)%vs(16.4±9.2)%,P<0.01],而其他参数差异无显著性。结论:微流控芯片技术在精子优选中能获得精子DNA损伤程度小的高质量精子。     

微流控芯片在人类精子优选中的应用

目的 研究自制微流控芯片优选人类精子的效果.方法 自行构建微流控芯片装置.收集男性不育患者的精液样本:①分别置于无毒灭菌离心管与微流控芯片中1h、2h、3h、4h,比较各时间点两组精子活力的变化;②分别用微流控芯片优选精子40min、60min、80min,比较各时间点优选前后各项精子参数的变化;③分别用微流控芯片、上...     

不液化精液的体外处理及其临床运用

运用BWW液洗涤不液化的精液,使精子从粘稠的精浆中释放出来,而提高精子的运动速度,在临床上已成功地用于配偶间的人工授精。洗涤前,精子前向运动速度和直线运动速度分别为25.83±7.02μm/s,29.20±8.49μm/s。洗涤后,二者分别为40.63±5.80μm/s,43.23±6.91μm/s。我们认为本疗法步骤简单并能避免运用药物在体外处理中对精子的可能损伤。     

不同海拔高度成年男性精子参数的比较

目的:了解不同海拔长期缺氧暴露对男性精子功能的影响。方法:以驻留海拔5340m1～3年的28例健康男性青年为高海拔组,以34例现驻平均海拔3800m2～5年的健康男性青年为中海拔组,对照组为31例常年生活在1300m海拔地区的成年男性。收集精液标本,采用计算机辅助精液分析系统(CASA)对精子参数进行分析。结果:高海拔组的精子密度、精子曲线运动速度(VCL)、直线运动速度(VSL)、平均路径速度(VAP)和直线性(LIN)分别为(51.12±14.61)×106/ml、(48.17±13.52)μm/s、(32.64±6.70)μm/s、(41.21±9.32)μm/s和(52.24±8.14)%,均明显低于对照组(P<0.01或P<0.05)。中海拔组的精子密度、精子活率、VSL、VCL、LIN、VAP和ALH等参数较对照组亦有不同程度的下降,但差异无显著性(P>0.05)。结论:随着海拔高度的增加,高原缺氧暴露对成年男性的精子参数的负面影响愈明显。     

肾移植对尿毒症患者生精功能的影响

目的:探讨尿毒症患者肾移植后睾丸生精功能的改变。方法:比较30例男性尿毒症患者,肾移植前后精液参数变化及精子超微结构改变。结果:肾移植术后3个月精子活力与移植前比较显著升高[(70.08±2.86)%vs(36.04±8.01)%,P<0.01],活率显著增加[(76.15±3.75)%vs(39.27±4.14)%,P<0.01],运动速度显著加快[(16.80±1.11)μm/svs(8.43±2.01)μm/s,P<0.01]。精子超微结构发现,肾移植后支持细胞、顶体及线粒体的结构趋向正常。结论:肾移植可显著改善尿毒症患者的生精功能。     

精索静脉曲张对精子染色质结构及运动能力的影响

目的:探讨精索静脉曲张对精子染色质结构及运动能力的影响。方法:对精索静脉曲张组(无慢性疾病及生殖系统病史者,n=74)和对照组(n=89)进行精子染色质结构分析(SCSA)和精液常规分析(精液量、粘稠度、pH值、精子顶体完整率、精子存活率、畸形率、精子密度、活动率及各运动参数)。结果:精索静脉曲张组精子密度、a+b级精子百分率和精子存活率[分别为(41.4±38.7)×106/ml,(31.7±16.9)%,(62.8±22.2)%]显著低于对照组[分别为(80.9±63.1)×106/ml,(46.8±20.5)%,(77.2±17.5)%],P均<0.05;精子运动参数VCL、VSL、VAP精索静脉曲张组分别为(37.4±12.5)、(23.4±7.8)、(26.5±8.2)μm/s,对照组分别为(42.4±10.7)、(27.3±7.3)、(30.7±7.8)μm/s,精索静脉曲张组与对照组相比显著降低(P均<0.05),而MAD显著增加(P<0.01),SCSACOMPαt值精索静脉曲张组(为23.2±16.2)明显高于对照组(为14.1±11.8)(P<0.05)。结论:精索静脉曲张引起精子DNA损伤和精子运动能力的改变,可能是导致男性不育的主要原因之一。     

双囊三腔前列腺灌注引流对慢性前列腺炎患者精子质量的影响

目的:观察双囊三腔前列腺灌注引流导管技术治疗慢性前列腺炎患者后精子质量的改善情况。方法:采用双囊三腔前列腺灌注引流导管技术辅助毫米波理疗及抗生素静脉输液方法治疗58例慢性前列腺炎患者,通过计算机辅助精液分析系统分析患者治疗前后的精子质量参数,并进行统计学分析。结果:患者治疗前后精子质量参数比较,活动精子百分率分别为(42.66±17.12)%和(55.23±14.79)%,a级精子百分率为(12.63±12.50)%和(29.84±14.86)%、(a+b)级精子百分率为(29.14±15.04)%和(42.28±12.67)%,精子头部侧摆幅值分别为(3.04±1.55)μm和(2.69±1.67)μm。上述精子质量参数治疗前后的差异均有显著性(P<0.01),其他参数差异无显著性(P>0.05)。结论:采用前列腺灌注引流导管技术治疗慢性前列腺炎可明显改善患者的精子质量,但不能在短时间内完全恢复精子的运动功能。     

辅助生殖中的精子优选研究进展

精子优选是辅助生殖技术中的重要环节。精子活力和形态等常规参数是评估精子的重要内容,近年来精子超微结构、DNA完整性、凋亡和膜成熟度等特征逐渐受到关注,针对这些特征筛选精子成为精子优选技术发展的方向。本文介绍了近年来发展起来的电泳法、电动电位法、透明质酸结合法、膜联蛋白V选择法、形态选择性单精子注射技术(IMSI)和微流控芯片法的技术原理,除微流控芯片法外其它技术均已应用于IVF或ICSI治疗中,同时对各种技术的优缺点和应用效果等方面做一综述。     

Percoll梯度离心前后精子功能指标分析

目的 :通过分析Percoll梯度离心法处理前后精子相关功能指标 ,评价该法在精子体外处理中的作用。　方法 :采用多次曝光摄影技术、瑞 姬氏染色法、低渗肿胀实验 ,观察处理前后精子运动速度、顶体完整率和低渗肿胀率的变化。　结果 :2 5例不育病人精液标本经Percoll梯度离心法处理前后 ,精子运动速度 (2 0 .5 6± 8.13μm/s和 2 5 .18± 8.30 μm/s ,P <0 .0 5 )、顶体完整率 (6 1.2 0 %± 2 1.11%和 70 .36 %± 17.70 % ,P <0 .0 1)和低渗肿胀率 (6 8.2 8%±17.33%和 76 .76 %± 17.10 % ,P <0 .0 5 )均有显著差异。　结论 :精液标本经Percoll梯度离心法处理后 ,各项精子功能指标均较处理前有明显改善 ,该法可广泛应用于辅助生殖医学中。     

季节因素对供精志愿者精液冷冻前后相关参数的影响

目的:本研究旨在了解季节因素对供精志愿者冷冻前后精液参数及前向运动精子冷冻复苏率的影响。方法:6414份精液样本均来自2006年9月～2008年6月在浙江省人类精子库捐精的1135例供精志愿者,年龄22～32岁;按取精时间划分为春、夏、秋、冬季组;对所有精液标本均进行精液常规分析,对其中达到精子库冷冻标准的精液进行分装、冷冻,并进行复苏后的精液常规分析。结果:精液量春季最多[(2.92±1.17)ml],明显高于夏、秋、冬3个季节[(2.71±1.07)、(2.74±1.15)、(2.83±1.15)ml],有显著性差异(P均<0.05);精子密度秋季最高[(105.60±39.76)×106/ml],明显高于春、夏、冬3个季节[(101.18±40.16)×106/ml、(93.54±35.10)×106/ml、(101.29±38.37)×106/ml],有显著性差异(P均<0.05);前向运动精子百分率春季最高[(58.49±10.04)%],明显高于夏、秋、冬3个季节[(57.60±8.97)%、(56.76±9.63)%、(56.60±8.56)%],有显著性差异(P均<0.05);夏季精液的前向运动精子冷冻复苏率最低[(66.98±15.68)%],明显低于春、秋、冬3个季节[(69.04±14.26)%、(69.35±13.42)%、(69.31±15.11)%],有显著性差异(P均<0.05);春季精液冷冻复苏后前向运动精子密度最高[(28.82±11.29)×106/ml],明显高于夏、秋、冬3个季节[(25.57±10.08)×106/ml、(26.97±9.68)×106/ml、(26.21±9.47)×106/ml],有显著性差异(P均<0.05);夏季精液冷冻复苏后前向运动精子百分率最低[(39.75±9.48)%],明显低于春、秋、冬3个季节[(41.87±9.28)%、(41.44±8.45)%、(41.03±9.13)%],有显著性差异(P均<0.05)。结论:季节因素对供精志愿者精液参数及前向运动精子冷冻复苏率有影响,春季精液量多、前向运动精子百分率高、冷冻复苏率高、冷冻复苏后前向运动精子密度高,是捐精的最佳季节。     

上游处理前后正常形态精子百分率与体外受精-胚胎移植结局的关系

目的:探讨取卵当日上游处理前后精子形态与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗结局的关系。方法:选取因单纯输卵管因素不孕而拟行IVF-ET治疗的夫妇94对。使用Kruger标准评价取卵当日上游处理前后的精子形态。以正常精子形态百分率10%为界,分别将上游处理前后的精子分成两组:B1组上游处理前正常形态≥10%,B2组<10%;A1组上游处理后正常形态≥10%,A2组<10%。分别比较B1和B2组以及A1和A2组的IVF-ET治疗结局。结果:上游处理前,B1组的受精率、卵裂率、优质胚胎率、妊娠率和胚胎种植率分别为(72.90±4.23)%、(95.20±2.61)%、(23.35±5.19)%、39.58%、18.35%;B2组分别为(71.33±5.10)%、(95.71±2.88)%、(20.18±6.15)%、41.86%、21.28%;各项指标两组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。上游处理后,A1组受精率、卵裂率、优质胚胎率、妊娠率、胚胎种植率分别为(72.72±3.35)%、(95.64±2.04)%、(24.39±4.57)%、50.00%、23.87%;A2组分别为(70.27±8.82)%、(94.82±4.94)%、(13.45±7.39)%、9.52%、6.25%;两组之间受精率及卵裂率差别无统计学意义(P>0.05),但A1组的优质胚胎率、妊娠率及种植率明显高于A2组(P<0.05)。结论:取卵当日经上游处理后的正常精子形态百分率对IVF-ET结局有较好的预测价值。     

大鼠精子在附睾成熟中精子膜变化的研究

我们运用Ｐｅｒｃｏｌｌ离心技术对ＳＤ大鼠附睾头、体、尾各段的精子分离纯化后，再用硫代巴比妥酸法、酶法、ＳＤＳ－ＰＡＧＬ电泳技术等对精手膜依次进行唾液酸、甘油－３－磷酸胆碱（ＧＰＣ）及蛋白质含量变化的检测。结果显示：精子膜唾液酸、ＧＰＣ量不断降低且有显著统计学意义（Ｐ＜０．０１）。附睾头、体、尾各段精子膜唾液酸和ＧＰＣ量分别为１０．１８±２．８２、８．４２±３．０７、７．８３±２．７９μｇ／１０８精子；１１２．３１±２８．１４、１０９．３３±３７．１６、７４．５０±２５．１３ｎｍｏｌ／１０８精子（－ｘ±ｓ）。膜蛋白变化主要是由大分子蛋白转变成较小分工的蛋白。大鼠精子附睾转运中精子膜的变化与精子成熟具有十分密切的关系。     

Effect of sperm washing and swim-up on antibodies bound to sperm membrane: use of immunobead/sperm cervical mucus contact tests

The direct immunobead test (IBT) and the sperm cervical mucus contact (SCMC) test were used to evaluate the effect of sperm washes and swim-up on antibodies bound to the sperm membrane in 11 patients with autosperm antibodies (30-100% IgA and 30-100% IgG) but otherwise normal semen measurements. The tests were performed on semen samples before and after a wash/swim-up procedure in Ham F10 + 10% human blood serum. Sperm-bound antibodies in washed spermatozoa that were able to swim into a layer of medium did not differ from those in unwashed samples. The IBT and the SCMC test on unwashed and washed spermatozoa were also not significantly different. However, all other washed semen parameters were improved. Correct washing of semen samples is important when performing the IBT to prevent false negative results. Eight of the 11 partners (73%) of the patients tested became pregnant after treatment with washed sperm. The ongoing pregnancy rate was 64%.     

精子与宫颈粘液相互作用在预测宫颈性不育的价值

为了解精子与宫颈粘液相互作用预测生育的价值，对２７例不明原因不孕妇女进行性交后试验（ＰＣＴ）和精子穿透试验（ＳＭＰＴ）。１年后按有无妊娠分为妊娠组（ｎ＝１４）和非妊娠组（ｎ＝１３）。两组宫颈粘液评分无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；妊娠组在性交后２和４小时精子数（１９．３±３．３及２２．２±４．４个／Ｈｐ）明显高于非妊娠组（５．０±２２及２．９±１．４个／Ｈｐ）（Ｐ＜０．０１）；妊娠组ＰＣＴ正常率（７１％）明显高于非妊娠组（０％），（Ｐ＜０．０１）；ＳＭＰＴ结果与ＰＣＴ结果基本一致。提示ＰＣＴ是有价值的预测生育指标，ＰＣＴ正常可排除男方因素及宫颈性不孕，ＰＣＴ异常则可选择人工授精提高妊娠率     

短程补肾疗法对肾虚型弱精子症患者近期精液质量的影响研究

目的:评估短程补肾疗法对肾虚型弱精子症患者近期精液质量的影响。方法:2010年7月至2011年3月在我院男科门诊就诊的弱精子症患者121例,根据中医辨证分型分为3组,即肾阴亏虚型组(A组)、肾阳不足型组(B组)以及脾肾两虚型组(C组),予口服中药辨证施治,A组予左归饮合五子衍宗丸加减,B组予金匮肾气丸合五子衍宗丸加减,C组予十子汤合六君子汤加减。每日1剂,共4周。分别于治疗前及治疗4周后行计算机辅助精液分析,比较每组治疗前后精子浓度、a级精子百分率、a+b级精子百分率、精子活动率等精液参数的变化。结果:3组治疗前精子浓度分别为:(70.4±38.6)、(73.5±40.2)和(56.0±34.4)×106/ml,治疗后分别为:(74.4±32.6)、(67.0±30.8)和(58.6±24.6)×106/ml,各组治疗前后差异无显著性(P>0.05);3组治疗前a级精子百分率分别为:(9.9±6.7)%、(9.3±5.4)%和(9.0±6.8)%,治疗后分别为:(12.9±5.3)%、(13.7±7.7)%和(12.9±6.4)%,各组治疗前后差异有显著性(P<0.05);3组治疗前a+b级精子百分率分别为:(29.6±13.2)%、(27.5±10.4)%和(28.3±12.1)%,治疗后分别为:(37.4±10.2)%、(35.7±13.7)%和(35.9±12.3)%,各组治疗前后差异有显著性(P<0.05);3组治疗前精子活动率分别为:(44.3±14.0)%、(43.5±15.0)%和(42.4±14.9)%,治疗后分别为:(53.8±10.5)%、(52.6±15.2)%和(51.1±13.1)%,各组治疗前后差异有显著性(P<0.05)。A、B两组比较,B组治愈率和总有效率显著高于A组(P<0.05)。而B、C两组及A、C两组比较,治愈率和总有效率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:短程补肾疗法可以显著改善肾虚型患者近期精液质量,尤其对肾阳不足型患者疗效更佳,且无明显不良反应。     

Does a microfluidic chip for sperm sorting have a positive add‐on effect on laboratory and clinical outcomes of intracytoplasmic sperm injection cycles? A sibling oocyte study

The most recent technologies for sperm sorting involve microfluidics. However, the most important question whether their use is of any advantage in terms of laboratory and clinical IVF/ICSI outcomes still remains controversy. In this study, we aimed to investigate whether a microfluidic sperm sorting device (Fertile Plus^®) has a positive add‐on effect on laboratory and clinical outcomes. Sibling oocytes of 81 patients were assigned to two sperm sorting groups including swim up and Fertile Plus^®. All embryos were cultured until day 5/6. Fertilisation, embryo quality and blastocyst development were assessed as primary outcomes among 81 patients; clinical pregnancy, implantation and live birth rates were analysed as secondary outcomes as a subgroup analysis due to transfer cancellations. No statistically significant differences were found between groups in terms of all outcomes analysed in laboratory and clinical terms (p > .05 for all). The results of this study suggest that sorting spermatozoa through Fertile chip does not improve laboratory outcomes significantly and does not seem to have a positive contribution to clinical outcomes.     

术前减黄治疗肝门部胆管癌的临床研究

目的 探讨术前减黄治疗肝门部胆管癌的临床价值.方法 选取2005年1月-2015年12月在武汉大学人民医院接受手术治疗的肝门部胆管癌患者52例,按照术前是否行减黄治疗分为两组:减黄组24例,术前行减黄治疗;未减黄组28例,直接行手术治疗.比较两组患者手术时间,术中出血量,住院时间,围手术期肝功能变化情况,术后并发症发病率,肿瘤复发率,1、3、5年生存率等指标.采用SPSS 19.0软件进行统计学分析.对两组患者术后采用电话、门诊检查或住院复查等随访方式,随访时间8 ～ 60个月.结果 减黄组住院时间较未减黄组延长,差异有统计学意义(P＜0.05).两组手术时间、术中出血量、术后复发率、术后并发症发病率(包括胆瘘、出血、发热、胸腔积液、腹腔感染、伤口感染、肺部感染、肝功能衰竭等),差异无统计学意义(P＞0.05).减黄组减黄前丙氨酸氨基转移酶为(98.0±51.7) U/L、天门冬氨酸氨基转移酶为(94.2 ±44.2) U/L、总胆红素为(177.5 ±64.1) μmol/L、直接胆红素为(160.2 ±61.9) μmol/L;减黄后丙氨酸氨基转移酶为(71.2±13.8) U/L、天门冬氨酸氨基转移酶为(60.0±12.1) U/L、总胆红素为(93.5±20.7) μmol/L、直接胆红素为(76.3±18.1) μmol/L,差异有统计学意义(P＜0.05).减黄前后白蛋白差异无统计学意义(P＞0.05).减黄组随访患者21例,未减黄组随访患者25例,其他失访.两组患者术后1、3、5年生存率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 术前减黄可在一定程度上改善肝门部胆管癌患者肝功能情况.但对于一般情况较好的患者,术前减黄并不能改善患者的预后,故不推荐常规术前减黄.     

不同浓度的蔗糖溶液快速冻存人类精子的实验研究

目的:探讨使用非渗透性冷冻保护剂蔗糖快速冻存人类精子的可行性。方法:收集正常精液标本40份,经上游法处理后,收集上游精子悬液,分成6份,1份作为对照,其余5份分别用常规精子冷冻法,0.15、0.20、0.25、0.30 mol/L蔗糖溶液冷冻精子,复苏后比较6组精子活动率、前向运动精子活动率及精子质膜完整性。结果:所有冷冻组复苏后精子活动率、前向运动精子活动率及膜完整率与冷冻前上游组(96.2±1.8)%,(93.8±2.8)%,(99.0±0.8)%比较均显著下降,差异有显著性(P<0.05)。精子活动率结果:蔗糖冷冻组之间比较,0.20 mol/L组解冻后精子活动率高于0.15、0.25、0.30 mol/L组,分别为(55.5±6.3)%、(45.9±6.6)%、(50.4±9.4)%、(45.5±11.2)%,差异有显著性(P<0.05)。0.20、0.25 mol/L蔗糖冷冻组与常规慢速冷冻组(53.6±5.0)%比较,差异均无显著性(P>0.05);0.15、0.30 mol/L蔗糖组均低于常规慢速冷冻组(P<0.05)。前向运动精子活动率结果:0.20 mol/L蔗糖冷冻组与常规冷冻组比较差异无显著性[(44.4±7.4)%vs(42.3±8.1)%,P>0.05];以上两组均高于0.15、0.25、0.30 mol/L蔗糖冷冻组,分别为(37.1±8.3)%、(33.1±9.2)%、(22.0±9.1)%,差异有显著性(P<0.05)。精子膜完整率结果:0.20 mol/L蔗糖冷冻组(70.1±6.9)%高于常规冷冻组、0.15、0.25、0.30 mol/L蔗糖冷冻组,分别为(63.1±6.8)%、(57.7±8.3)%、(63.5±10.7)%、(57.8±12.9)%,差异有显著性(P<0.05);常规冷冻组与0.15、0.25、0.30 mol/L蔗糖冷冻组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:终浓度为0.20 mol/L的蔗糖溶液作为人类精子冷冻保护剂是可行的,快速冷冻方法简便、快速、经济、安全有效。