二甲基甲酰胺致心肌细胞损伤及维生素C保护作用的实验研究

目的 探讨二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)致H9c2心肌细胞损伤及维生素C(vitamin C,VC)对此损伤是否有保护作用.方法 观察DMF染毒及VC干预后心肌细胞及核形态改变;活性氧(reactive oxygen species,ROS)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)试剂盒检测不同浓度DMF染毒不同时间、特定浓度DMF合并不同浓度VC干预后细胞氧化应激水平变化.结果 DMF染毒后细胞及核形态出现不同程度异常,低浓度VC干预后有所改善;100、140、180、220、250 mM DMF染毒24h,100、140、180、200、220 mM DMF染毒48 h,100、125、140、180、200 mM DMF染毒72 h后,同时间不同剂量染毒,细胞ROS、T-AOC水平差异有统计学意义;同剂量不同时间染毒,细胞ROS、T-AOC水平差异有统计学意义(ROS:24 h:F=5 763.00,P＜0.001;48 h:F=5 861.00,P＜0.001;72 h:F =9 188.00,P＜0.001;T-AOC:24 h:F=6.25,P=0.004;48 h:F=11.48,P＜0.001;72 h:F=14.13,P＜0.001).VC (0.025、0.05、0.10、0.25 mM)干预后ROS、T-AOC水平与对照相比差异均有统计学意义(均有P＜0.05).结论 氧化损伤可能是DMF发挥毒性的重要机制;低剂量VC可缓解DMF产生的氧化损伤,对细胞产生保护效应.     

二甲基甲酰胺致心肌细胞凋亡线粒体通路的体外实验研究

目的 探讨二甲基甲酰胺（dimethylformamide,DMF）致H9c2心肌细胞凋亡线粒体通路相关蛋白的影响。方法 采用蛋白免疫印迹法（western blot,WB）检测不同剂量DMF（0 mM、50 mM、100 mM、200 mM）染毒24 h后胞浆内活化的Caspase-3（cleaved caspase-3）、Bax、Bcl-2以及细胞色素C（Cyt-c）水平的改变。结果 不同剂量DMF（0 mM,50 mM,100 mM,200 mM）染毒24 h后胞浆Cleaved caspase-3、Bax和Cyt-c水平升高,Bcl-2水平降低,组间差异均有统计学意义（Cleaved caspase-3：F=23.33,P<0.001;Bax：F=60.31,P<0.001;Bcl-2：F=577.8,P<0.001;Cyt-c：F=104.0,P<0.001）。Cleaved caspase-3和Cyt-c水平在100 mM、200 mM染毒组较对照组升高,差异均有统计学意义（均有P<0.05）。Bax在50 mM、100 mM染毒组较对照组升高,差异均有统计学意义（均有P<0.05）,200 mM染毒组与对照组相比差异无统计学意义（P=1.000）。Bcl-2水平在50 mM、100 mM、200 mM染毒组较对照组均降低,差异均有统计学意义（均有P<0.05）。Bax/Bcl-2比值增加,100 mM,200 mM组较对照组差异均有统计学意义（均有P<0.05）。结论 DMF染毒后可上调H9c2心肌细胞Cleaved caspase-3、Cyt-c以及Bax/Bcl-2水平,下调Bcl-2水平。线粒体通路参与了DMF诱导的H9c2心肌细胞凋亡的过程。     

二甲基甲酰胺对心肌细胞的毒性作用

目的探讨二甲基甲酰胺（dimethylformamide,DMF）对正常心肌细胞（H9C2）的细胞毒性作用。方法采用CCK-8法检测不同浓度梯度（0 mmol/L,50 mmol/L,100 mmol/L,150 mmol/L,200 mmol/L,250 mmol/L,300 mmol/L）DMF作用心肌细胞24 h、48 h、72 h后的细胞毒性,并用Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测不同时间（24 h、48 h、72 h）和浓度（24 h的染毒剂量为0 mmol/L,100 mmol/L,140 mmol/L,180 mmol/L,220 mmol/L,250 mmol/L;48 h的染毒剂量为0 mmol/L,100 mmol/L,140 mmol/L,180 mmol/L,200 mmol/L,220 mmol/L;72 h的染毒剂量为0 mmol/L,100 mmol/L,125 mmol/L,140 mmol/L,180 mmol/L,200 mmol/L）的细胞凋亡率。结果不同浓度DMF作用于心肌细胞24 h,48 h和72 h后产生了明显的细胞毒性。同一...     

血小板生成素抑制阿霉素大鼠心肌细胞氧化损伤的实验研究

目的研究血小板生成素（TPO）对大鼠阿霉素（ADM）心肌细胞损伤的拮抗作用并探讨其机制。方法32只Wistar大鼠被随机分成4组,分别为对照组、ADM组、ADM＋TPOL组、ADM＋TPOH组。对照组给予生理盐水,其余各组给予ADM20mg／kg腹腔内注射,TPO干预组则加用不同剂量的TPO（10μg／kg或30μg/kg,隔天1次,共3次）。采用ELISA法测大鼠血清CK—MB及cTNI;观察电子显微镜下心肌细胞超微结构的变化;利用免疫组织化学染色观察心肌细胞组织学改变及DNA氧化损伤产物8-羟基脱氧乌苷（8-OHdG）表达情况,应用IPP6．0软件,计算累积光密度（IOD）及8-OHdG index。结果加用TPO干预后CK—MB、cTN1的活力较ADM组明显下降（P〈0．01）;电子显微镜下ADM组心肌细胞超微结构损害较TPO干预组严重;TPO干预组心肌组织病理损伤减轻,IOD、8-OHdG index值较其他各组明显降低（P〈0．01）上述指标在ADM＋TPOL组及ADM＋TPOH组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论TPO通过拮抗阿霉素对心肌的氧化损伤来发挥心脏保护作用。     

二甲基甲酰胺通过活性氧介导线粒体通路诱导H9c2心肌细胞凋亡研究

目的 初步探讨二甲基甲酰胺（dimethylformamide,DMF）是否通过线粒体通路致H9c2心肌细胞凋亡及可能机制。方法 H9c2心肌细胞体外培养,分组给予不同处理：正常对照组,N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）（4 mmol/L）组,DMF（200 mmol/L）组,NAC（4 mmol/L）+DMF（200 mmol/L）组,24 h后使用免疫荧光细胞化学法（immune-fluorescence cytochemistry,IFC）检测细胞内细胞色素C（cytochrome C,Cyt-c）定位,蛋白免疫印迹法检测胞浆Cyt-c、Bcl-2、Cleaved caspse-3水平。结果 IFC观察发现,正常对照及NAC组Cyt-c呈点状或斑块状分布于胞浆,DMF作用24 h导致Cyt-c弥散分布于胞浆,而NAC可抑制DMF的这种作用;蛋白免疫印迹结果表明,Cyt-c蛋白水平组间差异具有统计学意义（F=26.14,P<0.001）,与对照组相比,DMF组Cyt-c水平升高,NAC+DMF组较DMF组Cyt-c水平降低,差异均有统计学意义（均有P<0.001）;Bcl-2蛋白水平组间差异具有统计学意义（F=28.92,P<0.001）,与对照组相比,DMF组Bcl-2蛋白水平降低,与DMF组相比,NAC+DMF组Bcl-2蛋白水平升高,差异均有统计学意义（均有P<0.001）;Cleaved caspase-3蛋白水平组间差异具有统计学意义（F=28.98,P<0.001））,与对照组相比,DMF组Cleaved caspase-3水平上升,NAC+DMF组较DMF组Cleaved caspase-3水平降低,差异均具有统计学意义（均有P<0.001）。结论 DMF可以通过线粒体通路诱导H9c2心肌细胞凋亡,氧化应激可能参与该通路的发生。     

二甲基甲酰胺致人肝细胞DNA的损伤效应

目的 探讨不同染毒剂量二甲基甲酰胺(DMF)在不同染毒时间下对人正常离体肝细胞DNA损伤的影响.方法 肝细胞染毒分别以PBS阴性对照组、1.56、6.25、25.00、100.00 mmol/L的DMF和100μmol/L的H2O2,染毒时间为0.5、3.0、6.0、12.0和24.0 h,用γH2AX免疫荧光法观察肝细胞DNA的损伤情况.结果 不同剂量的DMF和H2O2诱导形成γH2AX焦点的细胞数量多于PBS阴性组,差异有统计学意义(P＜0.01),并且随着DMF染毒剂量的增加,形成γH2AX焦点细胞数有增多趋势;在不同染毒时间处理后,γH2AX焦点细胞数的形成除3.0 h组和0.5 h组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),余处理时间组与0.5 h比较,差异均有统计学意义(P＜0.01),并且形成γH2AX焦点细胞数有减少趋势.结论 不同剂量DMF可引起DNA的损伤,并且损伤程度与剂量呈正相关,与染毒时间呈负相关,γH2AX可作为检测细胞DNA损伤程度的良好指标.     

体外诱导成人脂肪干细胞向心肌细胞分化的研究

目的 诱导成人脂肪干细胞（ADMSCs）分化为心肌细胞,为心肌再生提供良好的干细胞来源.方法 培养人脂肪来源的间充质干细胞,采用10 μmol/L的5-氮杂胞苷（5-Aza）诱导ADM-SCs 24 h,分别在第7、14、21天用免疫细胞荧光染色鉴定心肌细胞α-横纹肌肌动蛋白、MHC表达,PT-PCR法检测心肌相关基因心房钠尿肽（ANP）的表达.结果 10μmol/L 5-Aza诱导后7 d进行免疫细胞荧光染色,未见有α-横纹肌和MHC表达.14 d少量细胞α-横纹肌和MHC阳性表达,21 d表达α-横纹肌和MHC的细胞数量增多,并且RT-PCR结果显示ANP呈阳性表达.结论 经过5-Aza的诱导可以分化为心肌细胞,为心肌再生提供了更多的选择.     

二甲基甲酰胺吸入致大鼠急性胃损伤的研究

目的通过动物实验探讨二甲基甲酰胺（DMF）对大鼠胃黏膜急性损伤的机制。方法大鼠静式吸入不同浓度（1446．2mg／m^3,3212．3mg／m^3,6524．0mg／m^3）的二甲基甲酰胺气体,观测胃黏膜大体损伤情况、胃黏膜的病理改变及胃黏膜血流（GMBF）、黏膜结合黏液量、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、前列腺素E2（PGE2）、胃泌素（Gas）等指标。结果3个浓度组均见胃黏膜出血、糜烂等明显损伤,黏膜结合黏液量降低;低浓度组胃黏膜内谷胱甘肽降低,低、中浓度组胃泌素降低（P〈0．05）;光镜下各浓度组均可见黏液减少,黏膜出血、充血明显,黏膜紊乱。透射电镜可见颈黏液细胞与壁细胞核破裂,核内物质溢出核外。结论二甲基甲酰胺使胃黏膜出血糜烂,可能是损害了颈黏液细胞,使其分泌黏液的能力降低,影响胃的黏液一黏膜屏障系统,并且使胃泌素分泌减少使其营养胃黏膜的作用减弱。     

二甲基甲酰胺致肝硬化1例报告

某患者因接触二甲基甲酰胺作业致肝硬化，现将其临床表现、治疗与转归报告如下。     

心肌细胞条件培养液对肺癌细胞生长抑制作用体外实验研究

目的恶性肿瘤可转移至机体所有器官,但在心肌中罕见。本实验拟通过研究心肌细胞微环境因素对肺癌细胞的影响,探讨心肌内转移瘤罕见的机制。方法原代培养新生Wistar大鼠心肌细胞,用MTT法分析和比较心肌细胞条件性上清液（CMCM）对肺癌细胞（L9981）的体外抑制作用。以顺铂（DDP）作为CMCM的阳性对照,以正常细胞鼠肾小球系膜细胞（MCs）为阴性对照。采用胰酶消化法,热灭活法初步探讨心肌细胞培养液的理化性质。结果L9981与CMCM共同培养后,细胞存活率明显下降为45．90％,与DMEM相比差异有统计学意义（P〈0．05）,而对正常细胞的细胞存活率无明显影响（P〉0．05）。DDP对L9981和正常细胞均具有显著性抑制作用（P〈0．05）。心肌细胞培养液经胰酶消化后活性仍然存在,而经热灭活后活性消失。结论新生大鼠心肌细胞上清液可选择性的抑制L9981的增殖;此抑制作用与化疗药物顺铂作用机制不同。心肌微环境中可能存在某种抑瘤物质,是心肌转移瘤罕见性的主要机制。     

某企业二甲基甲酰胺接触人群肝功能损伤的流行病学分析

目的通过分析某企业接触二甲基甲酰胺(DMF)人群肝功能损伤的流行病学情况,为预防职业病的发生提供对策和依据。方法采集某企业职工空腹静脉血测定肝功能各项指标,并对2010—2011年某企业接触二甲基甲酰胺工人健康检查资料进行统计分析。结果 2010年和2011年肝功能异常率分别为40.25%和32.17%,接触二甲基甲酰胺人群在性别、年龄组之间肝功能异常率差异无统计学意义,但工作年限之间差异有统计学意义。结论应加强二甲基甲酰胺接触人群的管理,定期进行职业健康检查,早发现、早治疗,预防职业病的发生。     

丹参酮ⅡA对阿霉素所致体外心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨丹参酮ⅡA对阿霉素所致心肌氧化损伤的保护作用.方法 选择出生1～3 d的SD大鼠,进行心肌细胞培养.培养4d后心肌细胞随机分为5组:正常对照组、阿霉素损伤组(阿霉素1.72× 10-6 mol/L)、丹参酮ⅡA低剂量组(阿霉素1.72×10-6 mol/L+丹参酮ⅡA10×l0-6 mol/L)、丹参酮ⅡA中剂量组(阿霉素1.72×10-6 mol/L+丹参酮ⅡA20×l0-6 mol/L)、丹参酮ⅡA高剂量组(阿霉素1.72×10-6 mol/L+丹参酮ⅡA40×10-6 mol/L).作用48 h后测定心肌细胞活力、乳酸脱氢酶活性、超氧化物歧化酶、丙二醛含量、一氧化氮含量.结果 ①阿霉素损伤组心肌细胞活力显著低于正常对照组(P＜0.01);丹参酮ⅡA低、中、高剂量组心肌细胞活力分别高于阿霉素损伤组(P＜0.05).②阿霉素损伤组心肌细胞乳酸脱氢酶活性显著高于正常对照组(P＜0.01);丹参酮ⅡA低、中、高剂量组心肌细胞乳酸脱氢酶活力显著低于阿霉素损伤组(P＜0.05).③阿霉素损伤组心肌细胞内丙二醛含量显著高于正常对照组(P＜0.01);丹参酮ⅡA低、中、高剂量组心肌细胞内丙二醛含量显著低于阿霉素损伤组(P＜0.05).④阿霉素损伤组心肌细胞超氧化物歧化酶活性显著低于正常对照组(P＜0.01);丹参酮ⅡA低、中、高剂量组心肌细胞超氧化物歧化酶活性显著高于阿霉素损伤组(P＜0.05).⑤阿霉素损伤组心肌细胞内一氧化氮含量显著高于正常对照组(P＜0.01);丹参酮ⅡA低、中、高剂量组心肌细胞内一氧化氮含量显著低于阿霉素损伤组(P＜0.05).结论 丹参酮ⅡA对阿霉素所致心肌细胞氧化损伤有保护作用,可能与丹参酮ⅡA的抗氧化作用有关.     

二甲基甲酰胺对大鼠肾脏线粒体和微粒体~(45)Ca转运的影响

目的　研究二甲基甲酰胺 (DMF)对大鼠肾脏线粒体和微粒体4 5Ca转运的影响 ,探讨其肾脏损害的作用机制。方法　采用超速冷冻离心技术分离大鼠肾脏线粒体及微粒体 ,应用放射性同位素技术测定DMF对线粒体和微粒体4 5Ca主动摄取及释放的影响。结果　 (1) 45Ca的摄取 :孵育 10min时 ,DMF 130、195 μmol/L组大鼠肾线粒体4 5Ca摄取量分别为 (4 .2 0± 0 .2 9)、(3.81± 0 .42 )nmol/mgpro,对照组为(5 .18± 0 .40 )nmol/mgpro;微粒体4 5Ca摄取量分别为 (2 .10± 0 .42 )、(2 .0 1± 0 .38)nmol/mgpro ,对照组为(2 .96± 0 .38)nmol/mgpro。DMF两个剂量组与对照组的差异均有显著性 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。 (2 ) 45Ca的释放 :孵育 2min时 ,DMF 6 5、130、195 μmol/L组大鼠肾线粒体4 5Ca残留量分别为 (5 .40± 0 .39)、(5 .0 3±0 .32 )、(4 .70± 0 .5 0 )nmol/mgpro,对照组为 (6 .0 1± 0 .40 )nmol/mgpro ;微粒体4 5Ca残留量分别为 (3.43±0 .2 6 )、(3.18± 0 .31)、(3.0 6± 0 .2 7)nmol/mgpro ,对照组为 (4 .0 6± 0 .32 )nmol/mgpro。DMF两个剂量组与对照组的差异均有显著性 (P <0 .0 1)。(3)DMF与鼠肾线粒体和微粒体4 5Ca的摄取、释放均存在剂量 -效应关系 (前者 :r=0 .918,r=0 .895 ;后者 :r=0 .886     

前列腺素F2α诱导心肌细胞肥大效应的实验研究

目的观察前列腺素F2α（PGF2α）对心肌细胞内活性氧（ROS）的产生及其促心肌细胞肥大的作用，探讨ROS在PGF2α诱导的心肌细胞肥大的信号通路中的作用。方法细胞内ROS水平用ROS敏感的荧光探针（DCFH—DA）反映，心肌细胞肥大通过细胞内蛋白含量及细胞的直径大小来确定。结果用1nmol／LPGF2α、10nmol／LPGF2α、100nmol／LPGF2α诱导心肌细胞，其细胞内DCF—DA荧光强度值分别比对照组增加38、99％、61．76％、93．55％（F=195．69，P〈0．01），表明PGF2α可剂量依赖地诱导培养大鼠心肌细胞内ROS的产生；其蛋白含量分别比对照组增加39．51％、69．93％、139．06％（F=74．014，P〈0．01），其细胞直径分别比对照组增加29．02％、60．79％、127．40％（F=721．02，P〈0．01），表明PGF2α可剂量依赖地诱导培养大鼠心肌细胞的肥大。讨论PGF2α可剂量依赖地诱导培养大鼠心肌细胞内ROS的产生与心肌细胞的肥大。     

GSTT1及GSTM1和CYP2E1基因多态性与二甲基甲酰胺所致肝脏损害的关系

目的 探讨GSTT1、GSTM1和CYP2E1基因多态性与二甲基甲酰胺(DMF)作业人员肝脏损害的关系.方法 以某皮革厂69名肝功能异常的DMF作业人员为病例组,选取与病例组相似岗位、DMF接触水平相近而肝功能正常的125名工人为对照组,应用聚合酶链反应(PCR)、PCR-RFLP方法分别对GSIT1、GSTM1和CYP2E1 PstI位点基因进行分型.结果 病例组和对照组中GSTM1阳性和GSTM1阴性的分布频率分别为59.42%、38.40%和40.58%、61.60%,两组间分布的差异有统计学意义(P=0.005),携带GSTM1阳性基因型个体发生肝功能异常的风险是GSTM1阴性基因型个体的2.34倍(OR=2.34,95%CI:1.29～4.29).而GSTT1和CYP2E1 PstI位点不同基因型在病例组和对照组中没有明显差异.结论 携带GSTM1阳性基因型个体的DMF作业人员发生肝功能异常的风险性可能增加.     

抗坏血酸(VC)对氯化锂诱导的腹腔巨噬细胞氧化损伤的保护作用

目的观察抗坏血酸(VC)对氯化锂诱导的腹腔巨噬细胞氧化损伤的保护作用。方法采用体外细胞培养法测定在VC(10、20、40、60、80、100μg//L)和氯化锂(50μg//L)作用下,测定体外VC和氯化锂对腹腔巨噬细胞的细胞抑制率、NO、H2O2及O2-指标。结果在各剂量VC和氯化锂作用下,巨噬细胞吞噬功能受到明显抑制,细胞抑制率分别为83.9%、87.5%、92.2%、96.9%,且呈现剂量-反应关系。巨噬细胞产生NO、H2O2及O2-的含量也受到明显抑制,呈现剂量-反应关系。结论 VC对巨噬细胞的吞噬功能,NO、H2O2及O2-等生物分子的产生均有明显促进作用,因此认为VC可影响巨噬细胞的非特异性防御功能。