人结直肠癌组织中肿瘤相关巨噬细胞的检测

目的:肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)在人结直肠癌组织中的定量与分布检测。方法:采用Real-timePCR对30例人结直肠癌手术切除标本及15例内镜取材的正常结直肠标本中TAMs标记物CD68mRNA表达水平进行定量检测,应用免疫组织化学方法检测标本中TAMs的组织分布。分析结直肠癌手术切除标本中CD68mRNA的表达与临床病理参数之间的关系。结果:CD68mRNA在结直肠癌组织中的表达高于正常结直肠组织(t=2.720,P<0.001)。不同临床病理参数的结直肠癌组织中CD68mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05)。TAMs分布于结直肠癌组织间质和肿瘤上皮细胞中。结论:TAMs高水平分布于结直肠癌组织间质和肿瘤上皮细胞中。     

子宫颈鳞癌组织中MMP-9的表达与间质中TAMs浸润的临床意义

目的：探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达与肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）浸润与子宫颈鳞状细胞癌(squamous carcinoma of cervix,SCC)临床病理特征的关系。方法：选取50例SCC组织、30例宫颈上皮内肿瘤Ⅲ级组织(CINⅢ)及20例正常宫颈组织,采用免疫组化SP法检测MMP-9、CD68（标记TAMs）的表达。结果：SCC组织中MMP-9、CD68 阳性细胞数明显多于CINⅢ组织和正常宫颈组织;SCC组织中MMP-9、CD68的表达与SCC的浸润深度、淋巴结转移和临床分期均呈正相关;SCC组织中MMP-9与CD68的表达呈正相关。结论：TAMs的浸润数量和MMP-9的表达与SCC的浸润深度、淋巴结转移和临床分期有关,TAMs浸润数量与MMP-9的表达呈正相关,MMP-9可能参与TAMs募集,而TAMs又通过分泌更多的MMP-9促进SCC的浸润、转移。     

槲皮素抑制LPS诱导的大鼠急性肺损伤和巨噬细胞的促炎表型

目的 探究槲皮素对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤大鼠的保护作用,探讨其作用机制。方法 30只SD大鼠随机分成对照组、脂多糖组,脂多糖+槲皮素组。大鼠气管滴注给予LPS (5 mg/kg)溶液24 h,诱导急性肺损伤,对照组气管滴注等体积PBS溶液,治疗组给予LPS和腹腔注射槲皮素(50 mg/kg)溶液。HE染色观察肺组织的病理变化、肺组织湿干比检测水肿程度qRT-PCR方法检测肺组织炎症因子TNF-α和IL-1β的表达。免疫组织化学法检测肺组织中巨噬细胞标志蛋白CD68的表达与分布。Western blot法检测肺组织中巨噬细胞表型促炎标志蛋白IRF5和抑炎标志蛋白Arg1的表达及Notch1蛋白表达变化。结果 LPS刺激大鼠肺组织后呈现炎症损伤,肺组织湿干比增加,炎症因子TNF-α和IL-1β的mRNA水平显著增加(P<0.05);给予槲皮素后,肺组织湿干比降低,炎症因子表达下调,抑制了肺组织炎症损伤。LPS刺激肺组织后,CD68蛋白和促炎标志蛋白IRF5表达上调(P<0.05),肺组织巨噬细胞发生浸润和呈现促炎表型;而槲皮素抑制了LPS诱导的CD68和IRF5表达(...     

诱导型一氧化氮合酶在哮喘大鼠肺组织的表达

目的　观察哮喘大鼠肺组织中诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)活性的表达 ,探讨一氧化氮在哮喘大鼠气道炎症中的作用。方法　用卵白蛋白作为致敏原制备哮喘大鼠模型 ,用 SP免疫组化染色方法检测肺组织 i NOS的表达并观察 i NOS在气道组织分布的改变。结果　哮喘大鼠肺组织 i NOS的表达阳性率 (90 % )明显高于正常对照组 (2 0 % ) (P<0 .0 0 1)。哮喘大鼠气道组织 i NOS表达阳性细胞主要位于气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、血管内皮和平滑肌细胞、浸润的中性粒细胞和巨噬细胞 ,而淋巴细胞表达不明显。用甲基强的松龙处理后哮喘大鼠肺组织i NOS表达阳性率 (30 % )明显降低。结论　以上结果提示一氧化氮在哮喘气道炎症中起重要作用 ,用甲基强的松龙治疗哮喘可以使哮喘大鼠肺组织中 i NOS表达阳性率降低 ,提示哮喘时产生过多的一氧化氮可能有加重气道炎症的作用     

肿瘤相关巨噬细胞对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响

目的 研究肿瘤相关巨噬细胞(TAM)对人结肠癌SW620细胞生物学功能的影响.方法 采用白细胞介素(IL)- 4体外诱导人M2型巨噬细胞,Western blot检测其标志分子CD68、巨噬细胞甘露糖受体(MMR)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达情况.Transwell非接触式共培养TAM和SW620细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测TAM分泌的细胞因子IL-10、IL-12、IL-23和转化生长因子-β(TGF-β)水平;活性凝胶电泳迁移分析法(EMSA)检测SW620细胞中核因子-κB(NF-κB)活性;四氮甲唑蓝法(XTT)和荧光激活细胞分选术(FACS)双标记法分别检测培养后SW620细胞的增殖和凋亡情况.结果 IL- 4诱导的人M2型巨噬细胞可表达CD68和MMR,不表达iNOS.SW620与M2型巨噬细胞共培养24、48h后,培养上清液中M2型巨噬细胞分泌的IL-10和TGF-β水平较培养前明显升高(P均＜0.01),IL-12和IL-23水平与培养前差异无统计学意义(P均＞0.05).与M2型巨噬细胞共培养24、48h后,SW620的NF-κB DNA结合活性较培养前分别降低了72%和75%(P均＜0.01),细胞增殖活性分别下降了48%和59%(P均＜0.01);凋亡率分别为6.37%和7.68%,明显高于对照组的0.37%(P均＜0.01).结论 TAM可能通过抑制SW620细胞的NF-κB活性,抑制SW620细胞增殖,促进SW620细胞凋亡.     

肿瘤相关巨噬细胞PKM2表达对食管癌细胞恶性表型的影响

目的 探讨肿瘤相关巨噬细胞(Tumor associated macrophages, TAMs)中M2型丙酮酸激酶(Pyruvate kinase M2,PKM2)表达对食管癌细胞迁移、侵袭恶性表型的影响。方法 慢病毒转染PKM2敲低/过表达质粒至THP-1细胞并诱导分化为TAMs,随机分为PKM2敲低组(PKM2 KD组)、PKM2敲低对照组(PKM2 KD NC组)、PKM2过表达组(PKM2 OE组)和PKM2过表达对照组(PKM2 OE NC组)。qRT-PCR检测PKM2及巨噬细胞表型标志物的表达;进一步与食管癌KYSE150细胞共培养后,Transwell实验检测食管癌细胞迁移和侵袭能力变化。将共培养细胞混合接种裸鼠皮下构建裸鼠荷瘤模型,免疫组化检测PKM2和CD163的表达,ELISA检测葡萄糖和乳酸水平。结果 与PKM2 KD NC组相比,PKM2 KD组TAMs细胞内PKM2表达水平显著降低,NOS2表达上调(P均<0.05),CD163轻微下调(P>0.05),CCL5表达下调(P<0.05);与PKM2 OE NC组相比,PKM2 OE组TAM...     

肿瘤相关巨噬细胞和幽门螺杆菌感染在各部位Ⅲ期胃腺癌患者预后中的意义

目的:分析肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)标志物(抗原CD68和CD163)表达和幽门螺杆菌(Hp)感染对不同部位Ⅲ期胃腺癌患者预后的影响。方法:收集2012年1月—2014年12月天津医科大学肿瘤医院胃部肿瘤科300例确诊为Ⅲ期胃腺癌患者的病例资料（根据发生部位的不同,分为胃底贲门癌组、胃体癌组和胃窦癌组,各100例）。比较3组患者一般资料;免疫组化染色法检测患者的肿瘤组织中有无Hp感染、CD68+TAMs以及CD163+TAMs的分布情况;根据CD68+TAMs的浸润情况将胃腺癌分为Ⅰ型（癌巢边缘浸润数量多于癌巢）和Ⅱ型（癌巢浸润数量多于癌巢边缘）,利用Kaplan-Meier法分析Ⅰ型和Ⅱ型胃腺癌患者预后的关系。然后分析Ⅰ型和Ⅱ型胃腺癌患者的Hp阳性表达率以及两组临床病理特征的关系;分析部位、年龄、饮酒、中性粒细胞、分型和Hp感染之间的相关性;利用Kaplan-Meier法分析Ⅰ型和Ⅱ型不同部位胃腺癌患者Hp与预后的关系。结果:胃底贲门癌组患者肿瘤显著大于胃窦癌组和胃体癌组（t=5.972,P<0.05）;胃窦癌组患者饮酒人数多于胃体癌组（χ2=6.742,P<0.05）;CD68+和CD163+TAMs在胃窦癌癌巢的相对表达水平高于癌巢浸润边缘;在胃底贲门癌癌巢浸润边缘的相对表达高于癌巢;在胃体癌癌巢浸润边缘的相对表达高于癌巢,差异均有统计学意义（H=136.06、124.99、142.17、91.16,均P<0.01）;CD68+和CD163+TAMs在癌巢浸润边缘多者预后不良（χ2=6.289、4.153、5.979,均P<0.05）;Ⅱ型胃腺癌患者累计生存率和无病生存率较Ⅰ型高（χ2=4.950、5.601,均P<0.05）;肿瘤大小与年龄、发生部位有关系（r=-0.162、-0.115,均P<0.05）;分型与发生部位、中性粒细胞显著相关（r=0.745、0.231,均P<0.01）;Hp与发生部位、分型有关（r=0.141、0.110,均P<0.05）;发生在胃体和胃窦部、肿瘤<4 cm、无淋巴结转移、中性粒细胞水平高的Ⅱ型胃腺癌患者Hp阳性表达率高,且预后较好（χ2=20.168、2.365、19.247、18.972,均P<0.05）。结论:TAMs标志物（抗原CD68和CD163）在癌巢浸润数量多对不同部位的Ⅲ期胃腺癌均是有利因素,另外,Hp阳性也是预测胃体癌和胃窦癌的良好指标。     

IL-18诱导的肿瘤相关巨噬细胞对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭作用的影响

目的 探讨外源性IL-18对单核细胞(THP-1)的活化作用以及白介素18(IL-18)激活诱导的肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages,TAMs)对肺癌A549细胞增殖、转移和侵袭作用的影响。方法 外源性IL-18刺激THP-1细胞后检测M1、M2型TAMs的比例;IL-18激活诱导的TAMs和肺癌细胞A549共培养,平板克隆形成实验检测共培养后A549细胞增殖作用的变化;细胞划痕实验检测共培养后A549细胞迁移作用的变化;细胞侵袭实验观察共培养后A549细胞体外侵袭作用的变化;扫描电镜观察共培养后A549细胞形态的变化;qRT-PCR和western blot检测共培养后A549细胞EMT标志蛋白E-cadherin和N-cadherin、 Snail以及Slug的表达。结果 外源性IL-18刺激THP-1细胞表型由M2向TAMs方向分化;IL-18诱导TAMs促进了A549细胞增殖、迁移和侵袭能力;扫描电镜观察发现TAMs促进A549细胞尾足生长;qRT-PCR和western blot检测结果表明TAMs抑制A549细胞E-cadherin的表达,促进了N-cadherin、 Snail以及Slug的表达,说明TAMs激活了A549细胞发生EMT。结论 在肺癌中,IL-18可以激活诱导TAMs并促进其活化,活化后的TAMs通过激活EMT机制促进肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭作用。     

大鼠输血相关性急性肺损伤后活化巨噬细胞表面TLR4及CD40的表达情况

目的:研究大鼠输血相关性急性肺损伤后活化巨噬细胞表面TLR4及CD40的表达情况。方法:选择SD大鼠作为实验动物,依次输注脂多糖和血浆,建立输血相关性急性肺损伤(TRALI)动物模型,取肺组织测定湿干比以及TLR4、NF-κB、CD40、TNF-α、IL-1β、MIP-2、GRP78的mRNA表达量,取血清检测TNF-α、IL-1β、MIP-2的含量,取外周血巨噬细胞检测TLR4、NF-κB、CD40的mRNA表达量。结果:TRALI组大鼠肺组织湿干比显著高于Sham组;TRALI组大鼠巨噬细胞中TLR4、NF-kB、CD40的mRNA表达量均显著高于Sham组;TRALI组大鼠肺组织中TLR4、NF-kB、CD40、TNF-α、IL-1β、MIP-2、GRP78的mRNA表达量均显著高于Sham组;TRALI组大鼠血清中、TNF-α、IL-1β、MIP-2的含量显著高于Sham组;TRALI组大鼠肺脏组织中SOD、GSH的含量低于Sham组,MDA、8-OhdG含量高于Sham组。结论:大鼠输血相关性急性肺损伤后活化巨噬细胞表面TLR4及CD40的表达量显著升高,进而会通过炎症反应、氧化应激反应、内质网应激等环节来造成肺损伤。     

直肠癌患者肿瘤相关巨噬细胞与VEGF表达间的关系

目的 探讨直肠癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)表达强度与肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)计数的相关性.方法 采用免疫组化方法,分别用CD31和CD68标记微血管(MVD)和TAMs,光镜下对TAMs、MVD进行计数,半定量分析VEGF表达强度.结果 直肠癌组织中,淋巴结转移组VEGF表达强度明显高于无淋巴结转移组(P＜...     

甲状腺乳头状癌中肿瘤相关巨噬细胞浸润及CD47表达的意义

目的 探讨肿瘤相关巨噬细胞浸润及CD47蛋白表达与甲状腺乳头状癌患者临床病理特征间的关系及意义.方法 收集大连市友谊医院2015—2019年间甲状腺乳头状癌手术切除标本65例,应用免疫组织化学方法检测所有标本中CD68+和CD163+肿瘤相关巨噬细胞浸润和CD47蛋白表达情况,分析肿瘤相关巨噬细胞浸润、CD47蛋白表达...     

CD68+和CD163+巨噬细胞在口腔鳞状细胞癌中的浸润及作用

目的 了解CD68+、CD163+巨噬细胞的浸润数量与口腔鳞状细胞癌(OSCC)临床特征的相关性,探讨CD68+、CD163+巨噬细胞在OSCC中的作用及意义.方法 选取贵州医科大学附属口腔医院和贵阳市口腔医院2013-2016年手术切除的,经术后病理确诊,且有完整临床资料的OSCC患者42例,另设12例口腔颌面部正常组织作对照.应用免疫组织化学法检测CD68+、CD163+巨噬细胞在OSCC中的浸润数量,并分析其与OSCC临床特征的相关性.结果 OSCC中CD68+、CD163+巨噬细胞的浸润数量明显高于对照组(P<0.05);CD68+、CD163+巨噬细胞在中低分化的浸润数量明显高于高分化的浸润数量(P<0.05);CD68+巨噬细胞在有淋巴结转移的浸润数量明显低于无淋巴结转移的数量(P<0.05),在有淋巴结转移中CD163+巨噬细胞的浸润数量明显高于CD68+(P<0.05).CD68+和CD163+巨噬细胞在OSCC中的浸润数量呈正相关(r=0.48,P=0.00).结论 肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)、M2型巨噬细胞对OSCC具有一定的作用,TAMs可能抑制OSCC的淋巴结转移,而M2型巨噬细胞可能促进OSCC的淋巴结转移.     

肿瘤相关巨噬细胞与MMP-9在肝细胞癌中表达与门脉癌栓的关系

目的检测肝细胞癌(简称肝癌)组织中肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平,并探讨与肝癌门脉癌栓的关系。方法选取72例肝癌手术切除标本按有无门脉癌栓分为2组,采用免疫组化法分别检测组织中CD68(TAMs标记物)和MMP-9表达,光镜下对TAMs计数及MMP-9阳性表达评分进行分析,并分析其与肝癌临床病理特征和肝癌转移间的关系。结果免疫组织化学方法显示CD68和MMP-9主要表达在细胞质中,两者在肝癌患者门脉癌栓组中的表达阳性率(68.6%和82.6%)均高于无门脉癌栓组(37.8%和43.2%),差异有统计学意义(P<0.05);且MMP-9表达与TAMs计数呈正相关(r=0.474,P<0.01)。结论 TAMs浸润和MMP-9表达与肝癌侵袭转移特性尤其门脉癌栓有密切关系,提示TAMs与MMP-9可作为肝癌辅助治疗和改善预后的潜在靶点。     

肿瘤相关巨噬细胞在乳腺浸润性微乳头状癌中的浸润及意义

目的 研究肿瘤相关巨噬细胞（tumor associated macrophages,TAMs）在乳腺浸润性微乳头状癌（invasive micropapillary carcinoma,IMPC）中的浸润及意义.方法 采用免疫组织化学链霉亲和素生物素法（laballad streptavidin biotin method,LSAB）检测68例IMPC和72例浸润性导管癌非特殊型（invasive ductal carcinoma,not otherwise specified,IDC-NOS）中TAMs标记物CD68、CD163的表达,并探讨其与临床病理学特征的关系.结果 CD68、CD163主要表达于IMPC及IDC-NOS间质中浸润的巨噬细胞的胞膜或胞质内,癌巢内偶有表达.IMPC组瘤内间质CD68的表达率（47/68,69.1％）明显高于IDC-NOS组（37/72,51.5％）,差异具有统计学意义（P =0.022）.而瘤内间质CD163在2组间的表达无统计学意义（P =0.682）.IMPC中瘤内间质CD68的表达与病理学分期、组织学分级、淋巴结转移、脉管侵犯及Ki67的表达呈正相关（P＜0.05）,而与ER的表达呈负相关（P =0.037）.Kaplan-Meier单因素生存曲线分析显示,IMPC中瘤内间质CD68表达与无进展生存期（progression free survival,PFS）呈负相关（P =0.027）.结论 IMPC间质中CD68标记的TAMs可能在IMPC高侵袭、高转移的恶性生物学行为中发挥了重要的作用.     

口腔鳞癌中TF的表达与巨噬细胞的关系

目的:探讨人类口腔鳞状细胞癌(oral squanous cell carcinoma,OSCC)中组织因子(tissue factor,TF)的表达与肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)间的关系.方法:采用免疫组化SABC法分别检测TF和CD68(标记巨噬细胞)在42...     

Overexpression of interleukin-17 in tumor-associated macrophages is correlated with the differentiation and angiogenesis of laryngeal squamous cell carcinoma

Background Interleukin-17 (IL-17),which exerts strong pro-inflammatory effects,has emerged as an important mediator in inflammation-associated cancer.The aim of this study was to clarify the relationship between IL-17 and tumor associated macrophages (TAMs),and the correlation of the microvessel density in the development of laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC).Methods Histopathological observations and immunohistochemistry staining for IL-17,CD68,and CD34 were performed on 72 specimens (32 cases of LSCC,20 cases of adjacent tissues of carcinoma as controls,and 20 cases of chronic hypertrophic laryngitis).Double immunohistochemical staining was done to determine which cells expressed IL-17.Real-time quantitative PCR determined the mRNA expression of IL-17.ELISA was used to detect the expression of the serum level of IL-17 in the three groups.Results The inflammation response had increased in LSCC.Overexpression of IL-17 and CD68 protein were seen in LSCC (P ＜0.01).The expression of IL-17 was different between well and poorly differentiated LSCC (P ＜0.01).The IL-17expressing cells were mainly located in macrophages (CD68+/IL17+) as demonstrated by double immunohistochemical staining.IL-17 expression significantly correlated with high microvessel density (CD34+) in LSCC (P ＜0.05).Relatively higher mRNA expression levels of IL-17 were seen in LSCC compared to the controls (P ＜0.05).The serum expression of IL-17 was similar among the three groups (P ＞0.05).Conclusion IL-17 was expressed by TAMs,and IL-17 may significantly correlate to the differentiation and angiogenesis in the development of LSCC.     

结肠癌组织肿瘤相关巨噬细胞VEGF-C/D的表达及与淋巴结转移的关系

目的 了解结肠癌肿瘤相关巨噬细胞中VEGF-C/D的表达,探讨其对结肠癌淋巴结转移的影响及可能机制.方法 采用特异的巨噬细胞标记物CD68等抗体以免疫组化染色的方法,并用双染、连续切片对比等对45例结肠癌标本中巨噬细胞VEGF-C/D的表达进行检测,同时行巨噬细胞计数,并统计分析两者间存在的关系.结果 在结肠癌相关巨噬细胞中检测到两种淋巴管生成因子的表达.统计分析显示VEGF-C表达与巨噬细胞计数具有相关性.有淋巴结转移者VEGF-C阳性细胞率高于无转移组.结论 结肠癌肿瘤组织中,不仅肿瘤细胞可分泌表达VEGF-C/D,肿瘤相关巨噬细胞也可表达VEGF-C/D.肿瘤相关巨噬细胞可通过诱导结肠癌局部淋巴管生成,对肿瘤的转移可起到一定的作用.     

基于肿瘤相关巨噬细胞靶向调控的抗肿瘤策略

肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)是肿瘤中最丰富的固有免疫细胞,TAMs常表现出抗炎性M2表型,是肿瘤发展、转移和耐药性的关键诱导因素,已经成为肿瘤免疫治疗领域的热门靶标.纳米载体的研究与应用优化了以TAMs为靶点的肿瘤治疗策略,本文根据TAMs的特性与功能,详细阐述...     

偶联 CD206 抗体载 Fe3O4的 PLGA 纳米微球促进巨噬细胞 M1型极化

目的 通过构建纳米微球靶向性地提高巨噬细胞中的铁浓度来增强抗肿瘤免疫。方法 采用W/O/W复乳化溶剂扩散法制备CD206单克隆抗体表面修饰的载Fe3O4聚乳酸羟基乙酸（PLGA）纳米微球。使用马尔文粒径检测仪测定微粒直径,Zeta电位 法测定Zeta电位。用铁测定试剂盒测定Fe3O4的包封率。采用免疫荧光实验检测CD206抗体与巨噬细胞的结合及靶向性。Western blot、qRT-PCR检测巨噬细胞的极化指数。并用BALB/C-57小鼠皮下肿瘤模型验证纳米微球促进肿瘤相关巨噬细胞（TAM）的极化状态。结果 纳米微球的平均直径在260~95 nm范围内,Zeta电位值在-19~-33 MV。Fe3O4的包封率在65%~75%。流式细胞术检测CD206单克隆抗体与PLGA微球偶联率为65%~70%,免疫荧光实验证实了PLGA微球与CD206高表达巨噬细胞的靶向结合能力。Western blot和qRT-PCR证实了偶联CD206抗体载Fe3O4的PLGA纳米微球（CD206-Fe3O4-PLGA）和载Fe3O4的PLGA纳米微球（Fe3O4-PLGA）促进TNF-α、iNOS和IL-1β的表达（P<0.05）。小鼠肿瘤模型研究证实CD206-Fe3O4-PLGA纳米颗粒促进TAMs中CD86的表达。结论 PLGA纳米微球具有均匀的粒子的大小及Zeta电位,以及较好的抗体偶联效率及纳米铁包封率,同时偶联CD206的PLGA微球能够较好的靶向结M2型巨噬细胞,并通过释放包被的Fe3O4促进巨噬细胞的M1型极化。本研究为肿瘤的免疫治疗提供了一种潜在的方法。