唑来膦酸对乳腺癌细胞系MCF-7的凋亡作用及其机制

目的:研究唑来膦酸对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡作用和途径.方法:培养乳腺癌MCF-7细胞株,用不同浓度梯度的唑来膦酸进行处理,MTT、Annexin V-PI双染法进行生长抑制和凋亡情况的检测和分析,Western blot检测相关蛋白表达情况.结果:唑来膦酸作用于MCF-7细胞后,MTT、Annexin V-PI双染法检测发现药物对细胞呈明显的生长抑制作用,且有明显的剂量依赖性.当作用时间为48h时抑制作用最为明显.Western blot检测发现,使用唑来膦酸后,Bcl-2、Bcl-XL和Survivin 3个凋亡抑制蛋白表达水平相较于未处理组(NM)表达降低,促凋亡蛋白Bax表达明显升高.同时,Caspase-3和Caspase-9相较于未处理组,表达水平也有明显的升高,并都呈现剂量相关性.结论:唑来膦酸通过线粒体凋亡途径促进乳腺癌MCF-7细胞凋亡,且具有剂量依赖性.     

贝母素乙通过调控PI3K/Akt信号通路诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的：探究贝母素乙（Peiminine）对乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡的影响及其可能作用机制。方法：采用不同浓度贝母素乙或联合PI3K抑制剂LY294002干预MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖能力;Hoechst33258染色和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化;Western blotting检测细胞中PI3K(p110α)、Akt、p-Akt(ser473)、Bad、Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3以及线粒体和胞浆中细胞色素C(Cyt C)等蛋白表达水平。结果：贝母素乙可呈时间-浓度依赖性抑制MCF-7细胞增殖,诱导细胞出现凋亡形态改变,促进细胞凋亡,并降低线粒体膜电位,上调细胞中Bad、Bax、cleaved-Caspase-3及胞浆中Cyt C蛋白表达水平,下调PI3K(p110α)、p-Akt、Bcl-2和线粒体中Cyt C蛋白表达水平,而Akt蛋白表达水平无显著变化。然而,联合LY294002干预可增强贝母素乙对MCF-7细胞凋亡的促进作用。结论：贝母素乙可诱导乳腺癌MCF-7细胞凋...     

新藤黄酸抑制人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的实验研究

目的 探讨新藤黄酸对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖抑制情况及其作用机制。方法 0.5～20μg／ml新藤黄酸处理MCF-7细胞72h,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测MCF 7细胞增殖抑制率;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡率;线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）检测线粒体跨膜电位变化;Western blotting检测Fas、FasL、caspase-3、caspase-8、caspase-9、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果 0.5～20μg／ml新藤黄酸均能够抑制MCF-7细胞增殖,且增殖抑制作用呈浓度依赖,半数抑制浓度（IC₅₀）为1763 μg／ml。0.5～3.0μg／ml新藤黄酸即可诱导MCF-7细胞凋亡,凋亡作用呈时间和浓度依赖。0.5μg／ml新藤黄酸处理MCF 7细胞48h后早期凋亡率为3.7％,总凋亡率为7.2％,72h早期凋亡率为6.7％,总凋亡率为13.7％;3μg／ml新藤黄酸48h后早期凋亡率为69.5％,总凋亡率为71.7％,72h早期凋亡率为76.9％,总凋亡率为81.5％。0.5、1.0、1.5 μg／ml新藤黄酸导致线粒体跨膜电位下降的细胞比例升高,促凋亡相关蛋白 FasL、caspase-3、caspase-8、caspase-9表达水平呈浓度依赖性上升,Fas和Bax蛋白表达水平变化不大,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平则呈浓度依赖性下降。结论 新藤黄酸通过诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡,抑制细胞增殖,其诱导凋亡的分子机制与死亡受体及线粒体凋亡途径密切相关。     

毛蕊异黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞作用的体外研究

目的:观察毛蕊异黄酮在体外对雌激素受体阳性细胞人乳腺癌MCF-7细胞的作用及其机制。方法:用不同浓度毛蕊异黄酮作用MCF-7细胞,并设未处理阴性对照组及17-雌二醇(17-estradiol,E2)阳性对照组。MTT法测定细胞增殖抑制的情况,FCM检测细胞凋亡率影响,并通过RT-PCR和免疫细胞化学法分别测定细胞中Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白水平变化。结果:低浓度的毛蕊异黄酮(2、4和8μmol/L)促进MCF-7细胞增殖,而高浓度毛蕊异黄酮(16和32μmol/L)抑制MCF-7细胞增殖,并且呈剂量依赖性。同时,低浓度的毛蕊异黄酮能减少MCF-7细胞凋亡率(P<0.05),并且显著降低Bax表达水平,增加Bcl-2表达水平(P<0.05)。结论:毛蕊异黄酮在低浓度时能促进MCF-7细胞增殖,减少细胞凋亡,其机制可能与毛蕊异黄酮的雌激素作用有关。     

线粒体融合素基因-2对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的研究外源性线粒体融合素基因-2(mfn2)对乳腺癌细胞(MCF-7)凋亡的影响。方法在阳离子聚合物的介导下将含有mfn2 cDNA的质粒在体外转染MCF-7,蛋白印记法(Western blot)检测绿色荧光蛋白(GFP),MTT法检测mfn2对MCi-7细胞增殖的影响。采用Annexin-V/PI双标记法检测转染前后细胞凋亡的变化,JC-1标记细胞线粒体,在流式细胞仪上检测线粒体跨膜电位(△ψm)的变化,电镜观察超微结构的变化。结果转染mfn2基因的MCF-7细胞可以稳定高表达GFP蛋白。MTT实验提示,转染mfn2 cDNA后,MCF-7细胞增殖明显受到抑制,转染mfn2 cDNA后48 h,△ψm下降。与转染pEGFlP组和空白对照组相比,转染pEGFP mfn2组明显促进凋亡,其凋亡率分别为:转染组16.0%,转染空质粒组3.6%,空白对照组4.8%(P<0.05)。电镜观察显示,mfn2使线粒体嵴断裂、消失、基质疏松,肿胀的线粒体围绕在核周呈密集排列。结论mfn2基因在体外转染MCF-7细胞,细胞线粒体膜电位降低,线粒体嵴断裂、消失,细胞凋亡明显增加。     

ERK1/2 MAPK在赖氨匹林对MCF-7细胞增殖抑制中的作用

背景与目的:探讨赖氨匹林(Aspisol)在抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖过程中,对ERK1/2 MAPK信号转导通路的影响.材料与方法:采用免疫细胞化学方法测定MCF-7细胞中环氧合酶-2(COX-2)的表达.采用噻唑蓝(MTY)比色法检测Aspisol对MCF-7增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;应用Western blot分别检测ERKl/2、p-ERK]/2蛋白和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果:在MCF-7细胞中未检测到COX-2的表达.Aspisol对MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,且具有剂量和时间依赖性(P＜0.01).Aspisol可诱导MCF-7细胞凋亡,并随着剂量的增大细胞的凋亡率升高(P＜0.05).Aspisol抑制MCF-7细胞pERK蛋白的表达(P＜0.05),但不影响总ERKI/2蛋白的表达(P＞0.05);Aspisol可促进Bax蛋白表达(P＜0.05),但抑制Beb2的表达(P＜0.05).结论:Aspisol影响ERKI/2 MAPK信号转导通路,调节凋亡相关蛋白表达是其抑制MCF-7细胞增殖的作用之一.     

基因转染LL-37/hCAP-18对人乳腺癌细胞凋亡的影响

目的：探讨基因转染人源抗菌肽LL-37/hCAP-18对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响。方法：将含人LL-37/hCAP-18的真核表达质粒瞬时转染人MCF-7细胞,48h后,MTT比色检测MCF-7细胞的增殖,流式细胞术检测MCF-7细胞周期及凋亡,细胞免疫组化染色检测MCF-7细胞中Bax、Bcl-2的表达。结果：重组基因瞬时转染MCF-7细胞48h后,与各对照组相比,肿瘤细胞的生长增殖受到显著抑制（P〈0.05）;转染重组基因组肿瘤细胞凋亡率显著高于各对照组（P〈0.05）,但细胞周期无明显变化;与对照组相比,转染重组基因pEGFP-c1-LL-37的MCF-7细胞中Bcl-2表达显著下降（P〈0.05）,Bax由阴性表达转为表达明显升高。结论：LL-37/hCAP-18可以通过上调促凋亡因子Bax、下调抗凋亡因子Bcl-2诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖。     

辛伐他汀对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用及机制研究

目的 探讨辛伐他汀（SVA）体外对乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用及其可能的机制。 方法 选用人乳腺癌MCF-7细胞进行体外培养,采用四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度SVA（0、3.25、6.25、12.5、25、50和100 μmol／L）处理MCF-7细胞24、48、72 h后的增殖抑制作用,荧光染色法观察SVA（0、2和4 μmol／L）处理MCF-7细胞48 h后的凋亡形态学变化,流式细胞仪测定SVA（0和4 μmol／L）处理MCF-7细胞48 h后的细胞周期变化,免疫印迹法分析SVA（0、2、4和8 μmol／L）处理MCF-7细胞72 h后细胞内Bcl-2和Bax蛋白水平的表达。结果 不同浓度SVA处理不同时间后,MCF-7细胞的增殖明显受到抑制,且增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性;荧光显微镜观察发现SVA能够诱导MCF-7细胞出现核固缩、染色质凝集等凋亡形态学改变。流式细胞仪检测细胞周期显示,SVA阻滞MCF-7细胞于G0／G1期。免疫印迹 结果 显示,SVA处理组的Bcl-2蛋白表达水平低于对照组,Bax蛋白表达水平明显高于对照组,且随SVA浓度的增高,Bcl-2蛋白水平逐渐降低,Bax蛋白水平逐渐升高。结论 SVA对人乳腺癌MCF-7细胞具有增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖性,其抗肿瘤机制可能与诱导细胞周期阻滞、下调Bcl-2蛋白及上调Bax蛋白表达有关。     

线粒体凋亡途径在TA2小鼠自发性乳腺癌中的作用

比较TA2小鼠正常乳腺、乳腺癌前病变和乳腺癌组织中细胞增殖和凋亡的情况,通过检测线粒体凋亡途径中Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9在乳腺组织中的表达,初步确定线粒体凋亡途径在TA2小鼠自发乳腺癌中可能发挥的作用。方法:收集正常TA2成年雌鼠的乳腺组织（NC组）和TA2自发性乳腺癌癌前病变组织（SBC-b组）和乳腺癌组织（SBC-t组）,采用免疫组化方法检测各组乳腺上皮细胞中PCNA、Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达并计算增殖指数（PI）;采用TUNEL方法检测细胞凋亡并计算凋亡指数（AI）;采用Real-time PCR和Western blot方法检测组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达及mRNA相对表达水平。结果:免疫组化染色,Real-time PCR以及Western blot结果一致显示,SBC-b组Bcl-2,Bax,Caspase-3和Caspase-9表达均明显高于NC（P<0.01或P<0.05）;SBC-t组中除Bcl-2高于NC外,其余蛋白表达均明显低于NC（P<0.01）,但bcl-2,bax和Caspase-3 mRNA表达均显著高于NC（P<0.01）,Caspase-9 mRNA略高于NC,但无统计学意义（P>0.05）。结论:线粒体途径可能参与了TA2鼠自发性乳腺癌的发生,其通过刺激部分乳腺上皮细胞凋亡,破坏了TA2小鼠乳腺上皮细胞增殖和凋亡的平衡,以致乳腺癌发生。      

lncRNASNHG15靶向miR-153对乳腺癌细胞线粒体途径凋亡的影响

目的：探讨lncRNASNHG15靶向miR-153对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其凋亡机制。方法: 用实时荧光定量 PCR（qPCR）检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231、BT-549 和 MCF-7中SNHG15表达水平。将MDA-MB-231 细胞分为对照（Ctrl） 组、si-NC组、si-SNHG15组、si-SNHG15+anti-NC组及si-SNHG15+anti-miR-153组, 用MTT法及流式细胞术分别检测细胞的增殖 活力和凋亡率。用双荧光素酶报告基因实验验证SNHG15和miR-153的靶向关系。用线粒体膜电位荧光探针（JC-1）染色法检测 细胞线粒体膜电位, 用Western blotting检测线粒体途径凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase3、cleaved caspase3（c-caspase3）和Cyt-C 的表达水平。结果:SNHG15在3种乳腺癌细胞中的表达水平均明显高于人正常乳腺上皮细胞MCF10A（均P<0.01）。SNHG15与 miR-153存在靶向关系。沉默SNHG15后,与对照组比较,si-SNHG15组MDA-MB-231细胞增殖活力明显降低、凋亡率升高、线 粒体膜电位降低（均P<0.01）;细胞中Bcl-2和caspase3表达降低,Bax、c-caspase3和Cyt-C表达升高（均P<0.01）。si-SNHG15与 anti-miR-153共同转染 MDA-MB-231 细胞后,可减弱 si-SNHG15 对细胞增殖、凋亡、线粒体膜电位及 Bcl-2、Bax、caspase3、 c-caspase3和Cyt-C表达的影响（均P<0.01）。结论: lncRNASNHG15可靶向调控miR-153诱导MDA-MB-231细胞凋亡,其机制 可能与调控细胞线粒体途径凋亡有关。